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通窍活血方联合氟桂利嗪对气虚血瘀型缺血性卒中患者预后的改善作用
目的:评价应用通窍活血汤剂联合氟桂利嗪对气虚血瘀型缺血性脑卒中患者预后的改善作用,并探究钙调蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)水平预测治疗效果和远期预后的效能.方法:选择2015年1月至2016年6月于广西中医药大学附属瑞康医院就诊的100例缺血性脑卒中患者,随机分为对照组(30例),治疗组A(35例)和治疗组B(35例),并选择50例健康体检者作为健康组,对照组给予抗血小板和抗凝等治疗,在对照组的基础上,治疗组A和治疗组B分别给予通窍活血汤剂和通窍活血汤剂联合氟桂利嗪治疗,比较3组患者治疗前后的证候积分,美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分,梗死体积,临床疗效,检测缺血性脑卒中和健康人群的血小板大聚集率(MAR),血清钙离子和CaMKⅡ的水平;治疗后随访1年并绘制Kaplan-Meier生存曲线,比较两组患者预后情况(改良Rankin量表)、生活能力(IADL评分)和生活质量(脑卒中专门生活质量量表SS-QOL)间的差异,并探究治疗后CaMKⅡ水平预测治疗效果和远期预后的效能.结果:治疗2周后治疗A,B组患者的证候积分,NIHSS评分和梗死体积较治疗前均有明显降低,其中治疗B组在治疗4周后较治疗A组更为明显(P＜0.05).治疗2个月后治疗AB组的生活能力和生活质量明显升高(P＜0.05),其中治疗B组在治疗4个月后较治疗A组更为明显(P＜0.05).治疗A,B组治疗总有效率和预后良好率不存在明显差异,但均高于对照组.对照组和治疗组的CaMKⅡ和MAR较治疗前明显降低,Ca2+水平明显升高,其中治疗B组为明显(P＜0.05).结论:在缺血性脑卒中患者治疗中应用通窍活血汤剂联合氟桂利嗪能够显著改善患者的神经功能损伤,提高患者的生活能力和生活质量,具有较好的预后;应用血清CaMKⅡ水平预测缺血性脑卒中患者的治疗效果和远期预后的效能较高.
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黄芪对乳鼠肥大心肌细胞钙瞬变及钙调蛋白激酶Ⅱ的影响
目的:研究黄芪注射液对体外培养乳鼠肥大心肌细胞内钙瞬变及钙调蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)的影响.方法:原代培养乳鼠心肌细胞,分为对照组(不加任何干预因素)、模型组(AngⅡ刺激心肌细胞肥大)、黄芪组(AngⅡ+黄芪注射液).MTT法确定佳检测时间,激光共聚焦显微镜检测单个心肌细胞(给予KN-93前后)钙瞬变.Western blot法检测CaMKⅡδ蛋白含量.结果:①AngⅡ作用48h后乳鼠心肌细胞存活率下降(P＜0.05)；②与对照组相比,模型组总蛋白含量显著增加,黄芪组较模型组显著下降；③与对照组相比,模型组钙瞬变荧光强度变化率降低,达峰时间、峰回落时间显著增高,黄芪治疗后钙瞬变荧光强度变化率回升,并降低峰回落时间与迭峰时间；④与对照组相比,模型组CaMKⅡδ的蛋白含量显著增加,黄芪组较之模型组则显著下降.⑤与对照组相比,给予KN-93后模型组仅使峰回落时间显著增加,黄芪组较模型组可显著降低峰回落时间.结论:黄芪注射液可抑制心肌细胞肥大,其机制可能与抑制钙调蛋白激酶途径中CaMKⅡδ的表达改善收缩功能有关,并可能通过其他机制而改善舒张功能.
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CaMKⅡ-ryanodine受体信号途径在心肌肥厚兔触发性室性心律失常中的作用
目的 研究CaMKⅡ-ryanodine受体信号途径在心肌肥厚兔触发性室性心律失常中的作用.方法 将40只新西兰大白兔随机(随机数字法)分为4组:假手术组(Sham组)、心肌肥厚组(LVH组)、心肌肥厚+KN-93组(KN-93组)、心肌肥厚+兰尼碱组(兰尼碱组),每组10只.LVH组、KN-93组及兰尼碱组通过缩窄腹主动脉制备兔心肌肥厚模型,Sham组仅游离腹主动脉不进行缩窄.8周后制备兔左室楔形心肌块的灌注模型,同步记录心内、外膜动作电位及跨壁心电图,KN-93组和兰尼碱组首先给予各自药物预灌,然后观察在异丙肾上腺索(1μmol/L)灌注和快频率程序刺激条件下各组触发活动和室性心动过速的发生率.结果 Sham组、LVH组、KN-93组(1 μmol/L)和兰尼碱组(10μmol/L)触发活动的发生率分别为0/10、10/10、4/10和1/10,室性心动过速的发生率分别为0/10、9/10、3/10和1/10,多形性室速或室颤的发生率分别为0/10、7/10、2/10、1/10,KN-93组和兰尼碱组触发活动和室性心动过速的发生率较LVH组明显降低(P＜0.05).结论 KN-93和兰尼碱能够有效抑制心肌肥厚兔触发性室性心律失常的发生,CaMK Ⅱ-ryanodine受体信号途径可成为抗心律失常治疗的全新靶点.
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钙调蛋白激酶Ⅱ抑制剂对肥厚心肌细胞的影响
目的 观察钙调蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)抑制剂KN-93对肥厚心肌细胞L型钙电流(ICa,L)及细胞内钙离子浓度([Ca2+]i)的影响.方法 选取雌性新西兰大白兔48只,随机(随机数字法)分为4组:假手术组(sham组)、心肌肥厚组(LVH组)、心肌肥厚+KN-93组(KN-93组)、心肌肥厚+KN-92组(KN-92组),每组12只,通过缩窄腹主动脉制备兔心肌肥厚模型,Sham组仅游离腹主动脉未进行缩窄.8周后,采用胶原酶消化法分离单个心肌细胞,应用穿孔膜片钳技术记录L型钙电流(ICa,L)；应用钙荧光指示剂Fura-2/AM结合图像分析技术测定各组心肌细胞内[Ca2+]i.结果 8周后,心肌肥厚模型建立成功.在0 mV时LVH组、Sham组的峰值ICa.L分另为(1.38±0.3)nA、(0.87±0.1)nA(P＜0.01,n=12),电流密度分别为(6.7±1.0)pA/pF、(6.3 ±0.7)pA/pF(P＞0.05,n=12).当KN-92及KN-93在浓度为0.5μmol/L时,可分别使肥厚心肌细胞0 mV时的峰值ICa,L降低(9.4±2.8)％、(10.5±3)％(P＞0.05,n=12)；当浓度增至1 μmol/L时,其峰值ICa,L降低程度分别为(13.4±3.7)％、(40±4.9)％(P＜0.01,n=12).Sham组、LVH组、KN-92组及KN-93组中心肌细胞[Ca2+]i分别为(98.0±12.3)nmol/L、(154.0±26.2)nmol/L、(147.0±29.6)nmol/L和(108.0±21.2)nmol/L.结论 CaMKⅡ特异性抑制剂KN-93可有效抑制肥厚心肌细胞ICa.L,减轻细胞内钙超载,这可能是其抗肥厚心肌室性心律失常发生的主要细胞电生理机制.
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桑黄多糖P1对肝癌HepG2细胞周期和钙调蛋白信号通路的影响
目的 探讨桑黄多糖P1抑制人源性肝癌HepG2细胞增殖的作用机制.方法 桑黄多糖P16.25～200 mg· L-1与HepG2细胞作用48 h,MTT法检测细胞存活率.桑黄多糖P1 100和200 mg· L-1与HepG2细胞作用48 h,流式细胞术检测细胞周期和凋亡;荧光分光光度法测定细胞内Ca2+浓度;实时荧光定量PCR检测细胞内钙调蛋白(CaM)、钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)、表皮生长因子(EGF)及其受体(EGFR)、K-ras和c-fos基因表达;Western蛋白质印迹法检测细胞内CaMKⅡ和Kras蛋白表达.结果 桑黄多糖P1对HepG2细胞存活的抑制率随药物浓度的增大而显著提高,100和200 mg·L-1时抑制率高达44.0％和61.3％.桑黄多糖P1 200 mg· L-1处理48h S期细胞百分含量明显升高,由对照组的(23.3±3.4)％升高至(37.8±2.2)％(P＜0.01),而G2/M期细胞百分含量明显降低,由对照组的(15.3±1.2)％降至(3.4±1.9)％(P＜0.01);细胞凋亡率无明显变化.与对照组相比,桑黄多糖P1 100和200 mg·L-1处理48 h后CaM,CaMKⅡ,EGF,EGFR,K-ras和c-fos mRNA水平显著下降(P＜0.01);Western蛋白质印迹检测结果显示,桑黄多糖P1作用48 h后HepG2细胞内CaMK Ⅱ和K-ras蛋白水平与对照组相比显著下降(P＜0.01).桑黄多糖P1 200 mg·L-1处理细胞后,细胞内Ca2+荧光强度显著升高,0～20 min内分别由951增至1430(P＜0.01),而对照组一直维持在1 150左右.结论 桑黄多糖P1可能通过提高细胞内Ca2+浓度以及下调CaM,CaMKⅡ,EGF,EGFR,K-ras和c-fos基因的表达,诱导HepG2细胞S期阻滞,从而抑制HepG2细胞增殖.
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三七总皂甙对吗啡戒断大鼠海马组织CaMK Ⅱ活性及CaMK Ⅱα亚基蛋白表达的影响
目的:研究三七总皂甙(Panax notoginseng,PNS)对吗啡戒断大鼠海马组织CaMK Ⅱ活性及CaMK Ⅱα亚基蛋白表达的影响,探讨PNS抑制吗啡戒断症状的作用机制.方法:应用剂量递增法建立大鼠吗啡躯体依赖模型(MOR组),采用腹腔注射(ip)纳洛酮建立催促戒断模型(NAL组),大鼠在给予吗啡的同时,采用3 种不同剂量PNS(100、200、400 mg*kg-1)进行灌胃(ig).应用放射酶法测定 CaMK Ⅱ活性,Western blot方法检测 CaMK Ⅱα亚基蛋白表达.结果:(1) MOR组CaMK Ⅱ活性降低,CaMK Ⅱα亚基蛋白表达升高;(2)NAL组 CaMK Ⅱ活性和 CaMK Ⅱα亚基蛋白表达均显著升高;(3) PNS 可以剂量依赖性地抑制纳洛酮催促戒断所引起 CaMK Ⅱ活性和 CaMK Ⅱα亚基蛋白的升高.结论:PNS 可能通过抑制纳洛酮催促戒断所引起的CaMK Ⅱ活性和 CaMK Ⅱα亚基蛋白表达的升高来缓解大鼠吗啡戒断症状.
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CaMKⅡ与心肌肥厚
心肌肥厚是临床上许多心血管疾病共有的病理过程,它是心肌长期负荷过度引起的一种适应性病理改变.虽然初期心肌肥厚是一种有益的代偿反应,以求平衡心肌应激的增加,但长期应激所致的持续性心肌肥厚终可导致扩张性心肌病、心衰和猝死.因此对于心肌肥厚形成机制的探讨显得尤为重要.目前研究认为,信号转导通路在心肌肥厚形成中起着至关重要的作用,对其深入的认识,不仅有助于阐明心肌肥厚形成的分子机制,而且可能为药物干预防治心肌肥厚开拓全新的思路.近年来研究发现[1],在肥厚心肌中钙调蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)的活性和表达明显增高,Ca2+/CaM依赖的CaMKⅡ信号转导途径在心肌肥厚形成及肥厚心肌室性心律失常的发生中起着关键的作用.下面就CaMKⅡ及其在心肌肥厚中的作用作一综述.
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钙调蛋白激酶Ⅱ信号途径与肥厚心肌心律失常
多种心血管疾病均可引起心肌肥厚,严重者可导致恶性室性心律失常,引起心源性猝死.室性心律失常发生与肥厚心肌电重构有密切关系,肥厚心肌更易发生早期后除极(EAD)或延迟后除极(DAD).Ca2+作为第二信使,通过其浓度在空间和时间上的变化将信号转化为广泛多样的生物化学效应,如维持细胞电生理的稳定状态等.Ca2+/CaM依赖的CaMK Ⅱ途径可以通过多种方式调节胞内钙的浓度,其功能异常可能引起肥厚心肌胞内钙稳态失衡,进而引起心律失常.调整CaMK Ⅱ的异常活性为临床防治肥厚心肌心律失常提供了新的生物学靶向性治疗途径.
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钙调蛋白激酶Ⅱ抑制剂KN-93对大鼠离体肥厚心肌电生理特性的影响
目的 探讨钙调蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)抑制剂KN-93对大鼠离体肥厚心肌电生理特性的影响及其抗心律失常的特性.方法 雄性SD大鼠40只,随机分为假手术组(Sham组)和心肌肥厚组(Hypertrophy,HY组).缩窄腹主动脉制作心肌肥厚模型.手术6周后,超声心动图评价模型.运用Langendorff心脏离体灌流电生理技术检测整体心肌电生理特性,微电极阵列技术评价心脏传导情况.结果 手术6周后,左室后壁舒张末期厚度及室间隔舒张末期厚度明显增厚,提示心肌肥厚造模成功.与Sham组相比,HY组心室各部位的单向动作电位时程(APD90)显著延长(70.0±5.9比56.0±3.8,P＜0.01),有效不应期(ERP)也显著延长(52.0±5.4比39.0±6.3,P＜0.01);诱发动作电位电交替阈值中位数明显增大(130比90,P＜0.01);传导的时间离散度明显增大(31.9±3.8比5.8±0.32,P＜0.01),且室性心律失常的诱发率明显升高(RV 9/12比2/12,P＜0.05).HY组使用CaMKⅡ抑制剂KN-93后,APD90(70±5.9比71±4.5,P＞0.05)和ERP(52±5.4比53±4.4,P＞0.05)并无显著变化,APD电交替阈值也无明显改变(HY组130比HY+KN-93组130,P＞0.05),但传导的时间离散度明显减小(4.4±0.33比31.9±3.8,P＜0.01),室性心律失常的诱发率减少(RV HY组9/12比HY+KN-93组2/12,P＜0.05).结论 CaMKⅡ抑制剂KN-93对大鼠离体肥厚心肌APD90、ERP、APD电交替阈值均无明显影响,但能显著减小传导速度离散度;对传导的影响可能是KN-93抗心律失常的重要机制.
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异丙肾上腺素对大鼠心脏功能的动态影响
目的：观察异丙肾上腺素(ISO)对在体大鼠心脏功能、心室肌细胞功能以及胞内相关下游蛋白表达的动态影响。方法采用血流动力学方法及乳鼠心肌细胞培养,观察ISO对在体及离体大鼠心肌收缩能力的影响；通过Fura 2荧光探针法观察ISO对成鼠心肌细胞内游离钙水平的影响；Western blot 检测 ISO下游胞内相关蛋白表达水平的变化。结果(5~500)nmol/L ISO对成鼠在体心功能有一个剂量依赖性增强效应,100 nmol/L为其佳实验浓度：0.1μmoI/LISO作用大鼠心室肌细胞(1000~1200)s,胞内游离钙水平达高峰。0.1μmoI/LISO作用于乳鼠心肌细胞30 min可使其跳动频率达高峰,维持至60 min后开始下降,与胞内钙变化规律一致。心室肌细胞内钙调蛋白激酶Ⅱ(Calmodulin kinaseⅡ,CaMKⅡ)水平在ISO干预后3 h达高峰；G蛋白偶联受体激酶2(GRK2)和β arrestin也在 ISO作用后48 h达高峰。结论 ISO可通过兴奋胞内 Ca2+ CaMKⅡ信号通路参与心肌细胞功能活动的动态调节；同时,ISO长期作用可升高胞内 GRK2β arrestin水平,参与受体的脱敏调节。
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邓铁涛教授健脑1方对血管性痴呆大鼠海马NMDAR-CaMKⅡ通路的影响
目的:探讨邓铁涛教授健脑1方对血管性痴呆大鼠的海马NMDAR-CaMKⅡ通路的影响.方法:采用双侧颈总动脉永久性结扎建立VD动物模型,将60只SD雄性大鼠随机分为假手术组、VD模型组、高剂量组、低剂量组及尼莫地平组,给药30天后采用免疫组化方法测定大鼠海马CAl区NR2B及CaMKⅡ表达水平.结果:模型组大鼠海马CAl区NR2B及CaMKⅡ的表达水平与假手术组相比明显降低(P＜0.01).与模型组相比较,高剂量组大鼠海马CAl区NR2B及CaMKⅡ表达水平均显著提高(P＜0.05),尼莫地平组大鼠海马CAl区CaMKⅡ表达水平也明显提高(P＜0.05).结论:NMDAR-CaMKⅡ通路在VD的发生机制中发挥了重要作用.健脑1方可能通过上调VD大鼠海马NR2B及CaMKⅡ的表达,从而改善大鼠学习和记忆功能,起到治疗血管性痴呆的作用.
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无镁诱导培养大鼠海马神经元癫痫放电模型中电压门控性钙通道Cav1.2和钙调蛋白激酶Ⅱ的表达
目的 利用无镁细胞外液诱导原代培养大鼠海马神经元癫痫放电模型来检测电压门控性钙通道Ca,1.2和钙凋蛋白激酶Ⅱ的表达变化.方法 采用新生24h内Wistar大鼠,取海马进行神经元原代培养.体外培养至12d,无镁细胞外液处理一部分神经元3h后,应用全细胞膜片钳技术记录神经元的放电情况以及免疫印迹法检测电压门控性钙通道Ca,1.2和钙调蛋白激酶Ⅱ的蛋白表达.无镁细胞外液处理另一部分细胞12h后检测Ca,1.2和钙调蛋白激酶Ⅱ的蛋白表达.结果 在无镁细胞外液处理3h后,神经元存在自发的“癫痫样”放电,而神经元Ca,1.2和磷酸化钙调蛋白激酶Ⅱ表达不变；无镁诱导12h后,神经元电压门控性钙通道Ca,1.2表达下调,而磷酸化钙调蛋白激酶Ⅱ表达上调.结论 电压门控性钙通道Ca,1.2和钙调蛋白激酶Ⅱ的表达变化可能与无镁诱导体外培养大鼠海马神经元自发异常放电的基础病理机制相关.
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部分纯化的牛心细胞质提取物对心肌细胞膜“run-down”L-型钙通道活性的恢复作用
目的 研究牛心细胞质部分纯化提取物及钙调蛋白激酶Ⅱ (CaMKⅡ)对大鼠心肌细胞膜L-型钙通道活性的调节作用.方法 采用常规的蛋白提取方法制备牛心细胞质提取物,离子交换方法进行部分纯化.应用膜片钳制技术的细胞贴附和膜内向外记录模式记录大鼠心室肌细胞单通道钙电流,观察牛心细胞质部分纯化提取物和CaMKⅡ对“run-down”L-型钙通道活性的恢复作用.Western blot方法验证活性蛋白.结果 膜内向外记录模式下,L-型钙通道出现“run-down”现象,活性下降至细胞贴附记录模式的(0.46±0.15)％；牛心细胞质部分纯化提取物使“run-down”的通道活性恢复至细胞贴附记录模式的(44.29±13.51)％(P＜ 0.01),加入CaMKⅡ抑制剂KN-62(1 μmol/L)后活性仅恢复至(1.30±0.94)％,与未加抑制剂组相比差异有统计学意义(P ＜0.05)；Western blot方法验证牛心细胞质部分纯化提取物中含有CaMKⅡ；基因重组融合蛋白法制备的CaMKⅡ也可将“run-down”后的钙通道活性恢复至细胞贴附记录模式的(71.59±14.76)％ (P＜ 0.05).结论 牛心细胞质部分纯化提取物对“run-down”钙通道活性具有恢复作用,该作用可能与CaMKⅡ密切相关.
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CaMKⅡ在细胞代谢中作用的研究进展
CaMKⅡ（钙调蛋白激酶Ⅱ）是一种功能多样的丝氨酸／苏氨酸蛋白激酶，在体内广泛存在，可以介导多种具有重要生理功能蛋白质的磷酸化。CaMKⅡ具有五种亚型，分别为CaMKⅡα，CaMKⅡβ，CaMKⅡγ，CaMKⅡδ，其中 CaMKⅡγ和δ是存在于心肌细胞中的主要亚型［1］。现有研究表明， CaMKⅡ在拮抗 Fas／FasL（Fas／Fas 配体）介导的细胞凋亡通路及影响肌细胞兴奋收缩偶联等生理过程中发挥重要作用。改变靶细胞内 CaMKⅡ的表达或活性可能达到抑制心肌重塑过程，抑制肿瘤生长，增强记忆等作用。
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温针灸对吗啡戒断大鼠学习记忆能力及前额叶皮质区 CaMKⅡ含量的影响
目的：观察温针灸对吗啡成瘾戒断后大鼠学习记忆能力及前额叶皮质区钙调蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)含量的影响，并进一步探讨其作用机制。方法将40只清洁级雄性SD大鼠随机分为对照组、模型组、手针组和温针组，每组10只。模型组、手针组和温针组大鼠背部皮下注射吗啡，逐日递增吗啡的注射剂量，成瘾后给予纳洛酮快速戒断，建立吗啡成瘾戒断后 SD 大鼠模型。采用水迷宫试验测定各组大鼠的学习记忆能力，并采用免疫组化法测定各组大鼠前额叶皮质区 CaMKⅡ含量。结果对照组、手针组及温针组大鼠平台逃避平均潜伏期、穿越平台次数及PFC区CaMKⅡ含量与模型组比较，差异均具有统计学意义(P＜0.01)。温针组大鼠平台逃避平均潜伏期、穿越平台次数及PFC区CaMKⅡ含量与手针组比较，差异均具有统计学意义(P＜0.05)。结论温针灸治疗可以恢复吗啡戒断后大鼠的学习记忆能力，其作用机制可能与吗啡戒断后前额叶皮质区CaMKⅡ含量增加有关。
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艾灸百会穴对AD大鼠学习记忆能力及 海马区CaMKⅡmRNA表达的影响
目的:观察艾灸百会穴对阿尔茨海默氏病(AD)大鼠学习记忆能力和海马区钙调蛋白激酶Ⅱ( CaMKⅡ)mRNA表达的影响.方法:用Morris水迷宫进行筛选建立AD大鼠模型.将符合模型标准的20只AD大鼠随机分模型组、艾灸组,每组10只.另外随机选取10只正常老年大鼠为对照组.艾灸组用特制艾条在百会穴施温和灸,共治疗6个疗程.治疗结束后进行Morris水迷宫测试大鼠学习记忆能力,并用RT-PCR法检测大鼠左侧海马组织CaMKⅡ表达水平.结果:模型组平均逃避潜伏期较对照组和艾灸组明显延长(P＜0.05,P＜0.01),有效区停留时间较对照组和艾灸组明显缩短(P＜0.05,P＜0.01)；上述二指标艾灸组与对照组比较均无显著性差异(P＞0.05).三组之间平台停留次数无显著性差异(P＞0.05).模型组左侧海马区CaMKⅡmRNA相对表达量较对照组和艾灸组显著下降(P＜0.05,P＜0.01),艾灸组与对照组比较无显著性差异(P＞0.05).结论:艾灸百会穴可通过上调海马区CaMKⅡmRNA表达以提高AD大鼠学习记忆能力.
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雌激素的心脏保护作用——与β1-肾上腺素受体的相互作用及其信号通路
雌激素是女性体内主要的类固醇性激素.对于心肌缺血性伤害,切除卵巢的成年雌性大鼠在β-肾上腺素受体激动时,比正常雌性大鼠呈现更严重的心肌损伤;而去卵巢后的雌激素替补组大鼠对β-肾上腺素受体激动时心肌缺血性伤害的反应则又回复到正常雌性大鼠水平,这为雌激素对抗缺血性伤害的心脏保护作用提供了证据.雌激素的这种保护作用是通过下调β1-肾上腺素受体的表达来实现的.也有研究证明,雌激素能抑制蛋白激酶A(protein kinase A,PKA)的表达和活性,PKA是Gs蛋白/腺苷酸环化酶(adenylyl cyclase,AC)/cAMP/PKA通路的第二信使,而该通路终影响心肌的收缩功能.有初步证据表明雌激素还能抑制β1-肾上腺素受体通路下游的另一种第二信使钙调蛋白激酶Ⅱ-δc(Ca2+/calmodulin kinase Ⅱ-δc,CaMKⅡ-δc)的活性,而CaMKⅡ-δc参与PKA非依赖性的细胞凋亡.即时给予生理浓度雌激素可不通过雌激素受体而直接抑制心肌β1-肾上腺素受体并减弱Ca2+内流.此外,脑研究也显示雌激素能抑制负责调节动脉血压脑区的β广肾上腺素受体活性.因此,雌激素和β1-肾上腺素受体之间的相互作用及其信号通路十分复杂.雌激素不仅主导性别决定,在机体其它功能例如心脏保护方面也具有重要作用.
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β1-AR对心衰心室肌细胞快激活延迟整流钾电流的调控机制
目的：探讨β1-肾上腺受体(β1-AR)激活对慢性心衰( CHF)豚鼠心室肌细胞快激活延迟整流钾电流( IKr )的影响及机制。方法制备豚鼠CHF模型,采用全细胞膜片钳技术记录心室肌细胞IKr ,观察选择性β1-AR激动剂对CHF心室肌细胞IKr的影响,并采用蛋白激酶A( PKA)及钙调蛋白激酶Ⅱ( CaMKⅡ)抑制剂干预研究其机制。结果β1-AR激动剂扎莫特罗使CHF心室肌细胞IKr减少了(52±8)%,延长动作电位时程。β1-AR阻滞剂CGP20712A完全抑制扎莫特罗对CHF心室肌细胞IKr的减弱作用。应用PKA抑制剂KT5720预处理,扎莫特罗仅使CHF心室肌细胞IKr减少了(28±3)%。应用CaMKⅡ抑制剂KN93预处理,KN93不能减弱扎莫特罗对CHF心室肌细胞IKr的抑制作用。结论β1-AR激活抑制 CHF 心室肌细胞 IKr；心衰时β1-AR 通过PKA通路抑制心室肌细胞IKr ,与CaMKⅡ通路无关。
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电磁辐射对大鼠海马神经元钙调蛋白激酶Ⅱ和环磷腺苷反应元件结合蛋白表达的影响
目的 探讨2000 μW/cm2电磁辐射后钙调蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)和环磷腺苷反应元件结合蛋白(CREB)在元代培养海马神经元中表达的变化和意义.方法 体外培养新生大鼠大脑海马神经元,实验分为空白对照组,假辐射组和1 h/d、2 h/d、3 h/d辐射组.辐射组接受功率密度为2000 μW/cm2的近场辐射,连续辐射5d.采用Western-Blot法检测海马神经元CaMKⅡ和CREB蛋白的表达,RT-PCR法检测CaMKⅡ和CREB mRNA表达的变化.结果 电磁辐射后,1h/d、2h/d、3h/d辐射组大鼠海马神经元CaMKⅡ蛋白[分别为(0.59 ±0.05)、(0.44±0.08)、(0.18±0.04)]及其mRNA[分别为(0.41±0.08)、(0.34±0.04)、(0.24 ±0.02)]表达水平较空白对照组[(0.78±0.07)、(0.62±0.12)]明显降低(P＜0.05)；CREB蛋白[分别为(0.49±0.05)、(0.40±0.04)、(0.17 ±0.03)]及其mRNA[分别为(0.68±0.11)、(0.53±0.08)、(0.30 ±0.03)]表达水平较空白对照组[(0.69±0.10)、(0.80 ±0.12)]明显降低(P＜0.05).结论 海马神经元CaMKⅡ和CREB的表达变化可能参与了电磁辐射致大鼠学习记忆功能改变的病理生理过程.
关键词： 电磁辐射 海马神经元 钙调蛋白激酶Ⅱ 环磷腺苷反应元件结合蛋白 -
阻断Ryanodine受体对兔心肌肥厚触发性室性心律失常发生的影响
目的:研究阻断Ryanodine受体对兔心肌肥厚触发性室性心律失常发生的影响.方法:选择日本长耳兔,通过缩窄腹主动脉建立心肌肥厚模型(LVH组),并设立假手术组(仅游离腹主动脉,不进行缩窄)作为对照.8周后应用超声心动图证实心肌肥厚形成,采用酶解法分离左室心肌细胞,应用全细胞膜片钳技术记录动作电位,观察在异丙肾上腺素(1μmol/L)灌流和快频率(5 Hz)电刺激条件下,单个心肌细胞晚期后除极(DAD)和触发活动的发生率,以及预先分别灌流钙调蛋白激酶Ⅱ抑制剂KN-93(1μmol/L)和Ryanodine受体阻滞剂兰尼碱(10 μmol/L)对肥厚心肌细胞DAD和触发活动发生率的影响.结果:假手术组、LVH组、KN-93组和兰尼碱组DAD的发生率分别为0、85％、35％和20％,触发活动的发生率分别为0、60％、20％和10％,KN-93组和兰尼碱组DAD和触发活动的发生率较LVH组显著降低(P＜0.05).结论:阻断Ryanodine受体能够有效抑制兔心肌肥厚触发性室性心律失常的发生,Ryanodine受体有望成为防治该类心律失常的新靶点.
