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左归丸加减方对谷氨酸诱导的体外培养大鼠小脑颗粒神经元凋亡影响
目的:研究左归丸加减方对谷氨酸引起的体外培养的小脑颗粒神经元(CGNs)兴奋毒性死亡是否有抑制作用及其可能的分子机制.方法:采用二乙酸荧光素(PDA)和Hoechst 33258 DNA染色法,观察神经元存活率及形态学特征,用琼脂糖凝脉电泳分析神经元死亡的生化特征.结果:300μmol@L-1谷氨酸可引起体外培养的CGNs调亡,左归丸加减方水提物(ZGP)可以剂量依赖地阻断谷氨酸所致的CGNs调亡.PD98059可以阻断谷氨酸的诱导CGNs调亡作用,协同ZGP的抗谷氨酸诱导CGNs调亡作用.LY294002可以阻断ZGP的抗谷氨酸诱导CGNs调亡作用.结论:ZGP对谷氨酸诱导的体外培养的大鼠CGNs调亡有保护作用,PI3-K/Akt信号传导通路可能参与其作用.
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特异性p38 MAPK抑制剂SB203580对乳鼠小脑颗粒神经元的保护作用
目的研究p38丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)选择性抑制剂SB203580对乳鼠小脑颗粒神经元凋亡的保护作用.方法 SD乳鼠小脑颗粒神经元培养,琼脂糖凝胶电泳,SAPK/JNK分析试剂盒作激酶分析.结果 PI-3-K的特异性抑制剂LY294002诱导小脑颗粒神经元凋亡,但SB203580通过抑制细胞凋亡而促进小脑颗粒神经元的存活,且有浓度依赖性.LY294002诱导凋亡的颗粒神经元中c-Jun的表达量和磷酸化水平均升高,JNK被激活.但是,当小脑颗粒神经元生长在含SB203580的高钾培养基中,c-Jun的表达量、磷酸化水平和JNK的活性都明显的降低.结论 SB203580通过抑制JNK的活性,降低c-Jun的表达和磷酸化水平,对小脑颗粒神经元产生保护作用.
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银杏叶提取物对星形胶质细胞诱导型一氧化氮合酶基因表达的调控
目的研究银杏叶提取物(EGb761)对星形胶质细胞合成一氧化氮(NO)的作用以及对共培养的小脑颗粒神经元的作用.方法以脂多糖(LPS)和IFN-γ诱导体外培养的大鼠星形胶质细胞表达诱导型一氧化氮合酶(iNOS),产生NO作为病理条件下胶质细胞过度活化的实验模型,应用逆转录基因扩增技术和蛋白质印迹技术检测EGb761对星形胶质细胞中iNOS基因表达的影响,并探讨这一调控作用的分子机制.结果EGb761能明显降低星形胶质细胞中iNOS mRNA和蛋白质的表达、减少NO的生成、防止活化的胶质细胞损伤共培养神经元,抑制IκB-α的降解和阻止p65/RelA进入细胞核,提示EGb761对iNOS基因表达的抑制作用依赖于NF-κB信号通路.结论EGb761可能对与胶质细胞过度活化有关的神经系统疾病具有治疗、预防的作用.
关键词： 银杏叶提取物 可诱导型一氧化氮合酶 一氧化氮 星形胶质细胞 小脑颗粒神经元 -
三羟异黄酮对丙烯酰胺致大鼠小脑颗粒神经元凋亡的影响
目的 探讨不同浓度三羟异黄酮(GEN)对丙烯酰胺(ACR)诱导大鼠小脑颗粒神经元(CGNs)凋亡的影响.方法 取新生5-7 d SD大鼠小脑皮质细胞培养,采用神经元特异性烯醉化酶免疫细胞荧光技术鉴定神经元,将培养8d的神经元进行随机分组,正常对照组、ACR染毒组(浓度为10 mmol/L)、GEN预处理组Ⅰ、Ⅱ,Ⅲ,Ⅳ(浓度为10、25、50、100 μmol/L的GEN预先处理细胞12h,再予ACR作用 24 h).甲基噻唑基四唑(MTT)法检测神经元活性;相差显微镜及Hoechst33342染色分别观察细胞及其核形态学变化;原位细胞凋亡检测法(TUNEL)观察神经元凋亡细胞数.结果 10 μmol/L组及25 μmol/L组GEN可拮杭ACR所致的大鼠CGNs凋亡,提高神经元活性,降低TUNEL阳性细胞数,减少ACR所致的神经元胞体皱缩、细胞核固缩等特征;而50 μmol/L组及100 μmol/L组对ACR引起的神经元凋亡没有保护作用.给论一定浓度范围的三羟异黄酮可以保护丙烯酰胺所致的大鼠CGNs凋亡.
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α-环丙氨酸对缺血性脑神经损伤的保护作用
目的研究中药有效成分α-环丙氨酸(1-aminocyclopropanecarboxylic acid,ACPC)对缺血性脑神经损伤的保护作用.方法采用二乙酸荧光素(FDA)和Hoechst33258 DNA染色法,观察大鼠小脑颗粒神经元存活率及形态学特征,用琼脂糖凝胶电泳分析神经元凋亡的生化特征;采用小鼠断颅法和小鼠局灶性脑缺血法,观察ACPC对小鼠喘息时间和脑梗死体积的影响.结果在细胞水平上,ACPC(0.5、1 mmol/L)使小脑颗粒神经元的存活率明显提高;使200 μmol/L谷氨酸(Glu)引起的细胞核固缩、凝聚和断裂现象消失;Glu使神经元的DNA电泳图谱出现明显的"梯形"条带,ACPC使此现象消失.在组织水平上,ACPC(200、400 mg/kg)明显减小小鼠脑梗死体积,在整体水平上,ACPC(100、200、400 mg/kg)显著延长小鼠断颅后的喘息时间.结论ACPC对缺血性脑神经损伤具有显著保护作用.
关键词： α-环丙氨酸(ACPC) 小脑颗粒神经元 谷氨酸 -
白介素-6保护小脑颗粒神经元抗谷氨酸的神经毒性作用
目的:探讨白介素-6(IL-6)对谷氨酸诱导的神经元损伤的防治作用及其作用机制.方法:用IL-6慢性预处理培养的小脑颗粒神经元,然后后用谷氨酸急性刺激小脑颗粒神经元.用噻唑兰(MTT)比色法和末端脱氧核苷酸转移酶介导的原位缺口末端标记(TUNEL)法分别观察神经元的功能和凋亡的变化;用激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)和逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法分别检测神经元内Ca2+浓度的动态变化和IL-6信号转导蛋白gp130 mRNA的表达.结果:IL-6(2.5、5和10 ng/ml)慢性预处理培养的小脑颗粒神经元,可浓度依赖性地改善谷氨酸诱导的神经元活性降低;并可明显减少谷氨酸诱导的神经元凋亡;还可显著抑制谷氨酸激发的神经元内Ca2+超载.此外,经IL-6慢性预处理的小脑颗粒神经元表达gp130 mRNA明显低于未经IL-6预处理的神经元.结论:IL-6能保护神经元抵抗由谷氨酸诱导的兴奋毒性作用,IL-6的这种神经保护机制可能与它抑制神经元内Ca2+超载密切相关,而且可能由gp130细胞内信号转导途径介导.
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大鼠小脑颗粒神经元体外原代培养
目的 体外原代培养大鼠小脑颗粒神经元,为研究慢性砷暴露对小脑神经元的毒性作用提供实验方法.方法 取生后5～7天Wistar仔鼠,体式显微镜下分离小脑皮层,0.25％胰蛋白酶消化、DNA Ⅰ酶洗涤制成单细胞悬液,两次差速贴壁后接种在多聚赖氨酸包被的培养板内,相差镜下观察大鼠小脑颗粒神经元成长、发育变化及突触形成.采用神经元特异性烯醇化酶(NSE)免疫荧光技术鉴定神经元.结果 培养后第24小时,相差显微镜下可见大鼠小脑颗粒神经元贴壁,呈网状排列；第2～3天,神经元胞体由椭圆形变成圆形,轮廓逐渐清晰,细胞伸出突起,突起逐渐延长,细胞间通过突起连接,形成了稀疏的神经元突触网络；第4～6天,细胞体积进一步增大,细胞间通过广泛的突触联系,神经元清晰饱满,形成了复杂的神经元网络.共聚焦显微镜下,可见大量含NSE的神经元.结论 成功地进行了大鼠小脑颗粒神经元的原代培养,该方法可为今后研究慢性砷暴露对小脑细胞的毒性作用提供实验依据.
关键词： 大鼠 小脑颗粒神经元 原代培养 特异性神经元烯醇化酶 -
胞内cAMP对髓鞘膜蛋白抑制神经突起生长的影响
目的:探讨预先升高小脑颗粒神经元胞内cAMP是否可抵消髓鞘膜蛋白对神经再生的抑制作用.方法:用霍乱毒素、双丁酰环磷腺苷预先孵育小脑颗粒神经元以间接和直接提高胞内cAMP,培养神经元于髓鞘膜蛋白基质上,观察对神经元突起生长的影响.结果:未经霍乱毒素和双丁酰环磷腺苷预孵的小脑颗粒神经元在髓鞘膜蛋白基质上仅有较短的神经元突起生长,长长度均值为12.43μm;而经霍乱毒素、双丁酰环磷腺苷预孵后的神经元在髓鞘膜蛋白基质上有较长的神经突起生长,长长度均值分别为30.21μm和30.85μm.预孵前后差别明显(P<0.05).结论:预先间接和直接升高神经元胞内cAMP水平,均可有效抵消髓鞘膜蛋白抑制神经突起生长的作用.
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白介素-6保护小脑颗粒神经元抵抗NMDA的神经毒性作用
近来研究发现,细胞因子白介素-6(interleukin-6,IL-6)不仅是重要的免疫调节因子,而且也是重要的神经调节因子.中枢神经系统中IL-6的作用是复杂的,尤其是对脑损伤时IL-6所发挥的作用及其作用机制尚不十分清楚.为此,我们利用N-甲基-D-天门冬氨酸(N-methyl-D-aspartate,NMDA)处理小脑颗粒神经元引起急性损伤的细胞模型,探讨IL-6对神经元损伤的保护及其作用机制.取出生后8 d幼鼠的小脑,进行小脑颗粒神经元培养.将IL-6(5或10 ng/mL)加入到小脑颗粒神经元的培养液中孵育8 d,然后用NMDA(100μmol/L)刺激小脑颗粒神经元30 min以造成神经元损伤.用噻唑兰(methyl-thiazole-tetrazolium,MTT)比色法检测神经元的活性;用末端脱氧核苷酸转移酶介导的原位缺口末端标记(terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick endlabeling,TUNEL)法检测神经元的凋亡;用激光扫描共聚焦显微镜(confocal laser scanning microscope,CLSM)观察神经元内游离Ca2+浓度的动态变化.用抗gp130单克隆抗体(75 ng/mL)抑制IL-6的活性,然后观察IL-6抗NMDA神经毒性作用的变化;并利用Western blot法检测IL-6对小脑颗粒神经元表达IL-6的细胞内信号转导蛋白--信号转导子和转录激活子3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)和细胞外信号调节激酶(extracellular signal regulated kinase 1/2,ERK1/2)磷酸化水平的影响.NMDA刺激未经IL-6处理的小脑颗粒神经元,导致神经元活性降低、神经元凋亡增加和神经元内Ca2+超载.NMDA刺激经IL-6慢性预处理的小脑颗粒神经元,其损伤程度与未经IL-6处理的神经元相比明显减轻,包括神经元活性明显增强、神经元凋亡显著减少和神经元内Ca2+超载减轻.抗gp130抗体可阻断IL-6减轻NMDA激发的神经元内Ca2+超载的作用;经IL-6慢性处理的小脑颗粒神经元,其细胞内STAT3和ERK1/2的磷酸化水平显著增加.结果表明,IL-6能保护神经元抵抗由NMDA诱导的兴奋性神经毒性,此神经保护机制与IL-6减轻神经元内Ca2+超载密切相关,而且可能通过激活神经元内IL-6的信号转导路径调节细胞内的基因表达而实现.
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热应激抑制神经元凋亡与核因子kappa B活性之间的关系
实验采用低钾诱导大鼠小脑颗粒神经元凋亡模型,观察核因子kappa B (NF-kappa B)活性与热应激抑制神经元凋亡之间的关系.迁移率改变法(EMSA)检测结果显示:神经元经低钾处理16 h可见NF-kappa B活性明显升高,热应激处理可减弱低钾诱发的NF-kappa B激活,并呈时间依赖性.Hoechst 33258荧光素核染色、DNA琼脂糖凝胶电泳和流式细胞(FCM)检测均发现低钾16 h可诱发神经元凋亡,预先用热处理60或90 min可明显减弱低钾诱发的神经元凋亡.用佛波酯(PMA)激活NF-kappa B,可进一步增强60 min热应激抑制神经元凋亡的作用,而用吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(PDTC)选择性阻断NF-kappa B活性后,热应激抑制神经元凋亡的作用明显减弱.上述结果提示,热应激的神经保护作用与减弱NF-kappa B活性无关,而NF-kappa B激活可能参与了热应激抑制神经元凋亡的作用.
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白介素-6对NMDA损伤的小脑颗粒神经元NR1和IP3R1蛋白表达的影响
目的:观察白介素-6(IL-6)对N-甲基-D-天门冬氨酸(NMDA)损伤小脑颗粒神经元NMDA受体亚单位1(NR1)和三磷酸肌醇受体1(IP3R1)蛋白表达的影响.方法:取出生后8 d SD大鼠小脑进行小脑颗粒神经元(CGNs)体外培养.在培养液中加入IL-6(40或120 ng/mL),培养8 d后,用 NMDA (100 μmol/L)损伤神经元30 min,建立神经元损伤模型.Western Blot法检测NR1和IP3R1蛋白的表达.结果:IL-6下调NR1的蛋白表达,并抑制 NMDA诱导的IP3R1的蛋白表达增高.结论:IL-6通过抑制NMDA受体和IP3受体实现神经保护作用.
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白介素-6抗N-甲基-D-天门冬氨酸神经毒性作用的研究
目的:利用N-甲基-D-天门冬氨酸(NMDA)损伤小脑颗粒神经元的模型,探讨IL-6对神经损伤的保护作用,为临床上应用细胞因子防治脑损伤提供新思路.方法:取出生后8天幼鼠小脑的颗粒神经元做体外培养.用IL-6(10 ng/ml)慢性预处理培养的小脑颗粒神经元,孵育8天后用NMDA(10、100、1000和10000μmol/L)急性刺激小脑颗粒神经元30 min以造成神经元损伤.用CCK-8试剂盒(Cell Counting Kit-8)检测神经元的活性.结果:NMDA能呈浓度依赖性地抑制小脑颗粒神经元的活性.单纯IL-6慢性预处理小脑颗粒神经元,不能改变小脑颗粒神经元的活性.IL-6慢性预处理小脑颗粒神经元可明显改善NMDA对小脑颗粒神经元活性的抑制作用.结论:NMDA对神经元有浓度依赖性的神经毒性作用,IL-6具有抗NMDA神经毒性作用的效应.
关键词： 小脑颗粒神经元 白介素-6 N-甲基-D-天门冬氨酸 神经毒性 神经保护 -
NMDA受体和IP3受体介导NMDA诱导的小脑颗粒神经元内Ca2+超载
目的 探讨N-甲基-D-天门冬氨酸(NMDA)诱导的小脑颗粒神经元(CGNs)钙超载与NMDA受体(NMDAR)及细胞内钙库受体三磷酸肌醇受体(IP3R)和兰尼定受体( RyR)之间的关系.方法 取出生后8d SD大鼠小脑进行颗粒神经元体外培养.用NMDA( 100 μmol/L)急性损伤神经元,在激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)扫描开始前30 min,或扫描开始后4,9,14 min分别加入NMDAR、IP3R、RyR拮抗剂MK-80I、2-APB和DAN,检测神经元内Ca2+浓度的动态变化.结果 MK-80I预孵育神经元经NMDA急性刺激后,神经元内Ca2+的荧光强度不再升高,NMDA刺激后加入MK-801,上升的ca2+水平立即下降,终下降至基线水平；NMDA急性刺激2-APB预孵育神经元,神经元内Gf+的荧光强度升高,但升高幅度明显低于未经NMDA刺激组,NMDA刺激后加入2-APB,细胞内升高的Ca2+水平急剧下降,终下降至接近基线水平；DAN预孵育的神经元经NMDA急性刺激后,胞内Ca2+的荧光强度急剧升高,达到NMDA刺激组水平,NMDA刺激后加入DAN,神经元内Ca2+水平无明显下降.结论 NMDA诱导的神经元ca2+超载,主要由细胞膜钙通道NMDAR和细胞内钙释放通道IP3R介导,而细胞内钙释放通道RyR不起主导作用.
关键词： 小脑颗粒神经元 N-甲基-D-天门冬氨酸 三磷酸肌醇受体 兰尼定受体 钙超载 -
诱导型HSP70过表达对低钾诱导的小脑颗粒神经元凋亡的保护作用
目的 观察腺病毒介导的人诱导型HSP70过表达对低钾诱导的原代培养的大鼠小脑颗粒神经元(cerebellar granule neurons, CGN)凋亡的影响.方法 原代培养5 d的CGN共感染含人诱导型HSP70和绿色荧光蛋白(GFP)的腺病毒(AdTR5/HSP70-GFP)和四环素调控的启动子(AdCMV/tTA), 或共感染含GFP的腺病毒(AdTR5/GFP)和AdCMV/tTA(对照组).48 h后,采用细胞荧光免疫组织化学法、Western blot法检测HSP70的表达,或者换成无血清含5 mmol·L-1 KCl的培养基以诱导神经元凋亡.24 h后,采用相差显微镜观察细胞形态学变化,MTT法检测神经元存活率,Hoechst 33258核染色和DNA琼脂糖凝胶电泳分析神经元凋亡,以观察HSP70过表达对低钾诱导的CGN凋亡的影响.结果 共感染了AdCMV/tTA和AdTR5/HSP70-GFP的CGN过表达了HSP70,抑制了低钾诱导的CGN的凋亡：使神经元存活率由45.5%±5.2%提高至82.3%±5.2%(P＜0.01),核固缩减少,DNA的片段化减轻.结论 腺病毒介导的人诱导型HSP70的过表达抑制了低钾诱导的CGN凋亡.
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IGF-1经PI3K/Akt依赖性途径保护苯妥英诱导的小脑颗粒神经元凋亡
目的观察胰岛素样生长因子-1(insulin-like growth factor-1, IGF-1)对苯妥英(100 μmol·L-1)处理的大鼠小脑颗粒神经元(cerebellar granular neurons, CGNs)存活率的影响,并探讨其与PI3K/Akt通路的关系.方法体外培养8 d的小脑颗粒神经元,同时给予100 μmol·L-1苯妥英和1 μmol·L-1 IGF-1,48 h后行凋亡分析,观察 IGF-1对苯妥英诱导的小脑颗粒神经元的保护作用;采用PI3K/Akt通路特异性抑制剂LY294002(50 μmol·L-1)预先与小脑颗粒神经元孵育30 min,再加1 μmol·L-1 IGF-1和100 μmol·L-1苯妥英共孵育48 h,测定神经元存活率,观察 IGF-1与PI3K/Akt通路的关系;Western blot法检测苯妥因处理不同时间小脑颗粒神经元内磷酸化Akt水平及总Akt的表达量,并观察 IGF-1对磷酸化Akt水平的影响,进一步探讨 IGF-1的作用是否经PI3K/Akt通路.结果①1 μmol·L-1 IGF-1可明显抑制100 μmol·L-1苯妥英引起的小脑颗粒神经元的凋亡,明显提高小脑颗粒神经元的存活率,使其凋亡特征消失.②PI3K/Akt通路特异性抑制剂LY294002可取消 IGF-1的保护作用.③苯妥英使小脑颗粒神经元内磷酸化Akt水平明显降低,但不影响总Akt表达量.④IGF-1可明显恢复被苯妥英抑制的磷酸化Akt的水平.结论 IGF-1保护苯妥英诱导的小脑颗粒神经元凋亡,这种保护作用经PI3K/Akt通路依赖性机制,可能与恢复Akt的活性有关.
关键词： 胰岛素样生长因子1 苯妥因 PI3K/Akt通路 小脑颗粒神经元 凋亡 -
咖啡因对苯妥英诱导的小脑颗粒神经元凋亡的保护作用及机制
目的观察咖啡因(caffeine)对苯妥英(diphenylhydantoin, DPH)100 μmol ·L-1处理的大鼠小脑颗粒神经元(cerebellar granular neurons, CGNs)存活率的影响,并探讨其作用机制.方法体外培养8 d的CGNs,同时给予100 μmol·L-1 苯妥英和1.25～20 mmol·L-1咖啡因,48 h后行凋亡分析;采用dantrolene(20 μmol·L-1)、2APB(50 μmol·L-1)、nifedipine(100 μmol·L-1)和nimodipine(100 μmol·L-1)、MK801(4 μmol·L-1)、KN93(1 μmol·L-1)以及MEK1抑制剂PD98059(50 μmol·L-1)分别预先孵育30 min,再与10 mmol·L-1咖啡因和100 μmol·L-1苯妥英共孵育48 h,测定CGNs存活率,观察咖啡因的作用与[Ca2+]I的关系;Western blot法检测咖啡因对磷酸化c-Jun和磷酸化ERK水平的影响.结果① 1.25～20 mmol·L-1咖啡因可浓度依赖性抑制100 μmol·L-1 苯妥英引起的CGNs凋亡,显著提高CGNs存活率;② dantrolene、2APB、nifedipine和nimodipine、KN93、MK801和PD98059均不能取消10 mmol·L-1咖啡因对100 μmol·L-1 苯妥英引起的CGNs凋亡的保护作用.③咖啡因可明显抑制苯妥英诱导CGNs中c-Jun磷酸化水平的升高,但不影响被苯妥英抑制的ERK的活性.结论一定浓度的咖啡因可保护苯妥英诱导的CGNs凋亡,这种保护作用可能与咖啡因的胞内钙动员及促进钙内流无关,亦非ERK依赖性途径,而可能通过抑制c-Jun活性起作用.
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溶血磷脂酸诱导小脑颗粒细胞氧化性损伤与凋亡
目的研究溶血磷脂酸(LPA)对原代培养大鼠小脑颗粒细胞的细胞毒性作用及其损伤机制.方法将原代培养的大鼠小脑颗粒细胞暴露于不同剂量LPA中,测定噻唑蓝(MTT);应用流式细胞仪、透射电镜、激光共聚焦显微镜等技术观察细胞的凋亡率、凋亡细胞的核形态及细胞质和线粒体内活性氧(ROS)的形成.结果LPA对小脑颗粒细胞的损伤呈剂量依赖效应.经50μmol/LLPA作用后细胞生存率为正常细胞的(54.8±11.5)%,细胞凋亡率达(40.5±2.3)%,细胞染色质发生浓缩和形成凋亡小体,细胞质和线粒体内ROS形成增加,而经四甲基吡嗪(TMP)预处理后细胞生存率升至(84.7±8.8)%,细胞凋亡率减至(16.7±5.8)%,细胞核形态无明显改变,细胞质和线粒体内ROS形成被抑制.结论LPA具有神经毒性作用.通过增加线粒体内ROS形成,继而诱导神经元凋亡可能是其损伤机制之一.能减少内源性ROS形成的抗氧化剂可对抗LPA诱导的神经元凋亡.
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尼莫地平诱导小脑颗粒神经元凋亡及机制研究
目的 探讨尼莫地平能否诱导小脑颗粒神经元凋亡及可能机制.方法 取Sprague-Dawley(SD)大鼠小脑颗粒神经元,体外培养7 d,用含10μM尼莫地平培养基处理神经元24 h,对照组为含1‰二甲亚砜(DMSO)培养基处理细胞.Hoechst 33258染胞核检测凋亡率.Western blot检测c-Fos和c-Juo蛋白的表达水平;腺病毒作载体过表达c-Fos和负显性c-Jun突变体阻断c-Jun功能,检测能否抑制尼莫地平诱导的神经元凋亡,免疫细胞化学方法检测腺病毒感染率.结果 对照组神经元的凋亡率为(10±4)%,尼莫地平处理6、12、24 h后神经元的凋亡率分别为(13±4)%、(28±5)%、(45±3)%.尼莫地平处理使c-Fos表达下调,但c-Jun表达水平上调.腺病毒Ad-c-Fos和Ad-c-JunDN(负显性c-Jun突变体)对神经元感染率为85%以上,过表达c-Fos或负显性c-Jun突变体使尼莫地平诱导的神经元凋亡率从(42±6)%减少到(28±6)%或(20±3)%.结论 尼莫地平通过下调c-Fos和上调c-Jun表达诱导小脑颗粒神经元凋亡.
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表没食子儿茶素没食子酸酯对丙烯酰胺致小脑颗粒神经元凋亡的影响
目的:探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对丙烯酰胺(ACR)致小脑颗粒神经元(CGNs)凋亡的保护作用.方法:体外培养的CGNs经不同浓度EGCG(5,10,25,50,100μmol/L)预处理48h后,加入ACR(5 mmol/L)染毒24h,用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测细胞存活率,测定细胞内超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)的含量,Hochst33342荧光显微镜染色观察凋亡时细胞核形态的变化,RT-PCR检测细胞bcl-2 mRNA与bax mRNA表达情况.结果:同ACR损伤组比较,终浓度为10,25,50μmol/L的EGCG能减轻ACR引起的CGNs的损伤,明显提高细胞的存活率(P＜0.05),SOD活性增高,MDA含量降低.Hoechst33342染色发现细胞核固缩、致密浓染现象较ACR损伤组改善明显,bcl-2 mRNA表达增强,bax mRNA表达减弱,bcl-2/bax比值降低(P＜0.05),25μmol/L EGCG组保护效果佳(P＜0.01),而终浓度为100 μmol/L EGCG组无明显保护作用.结论:EGCG在一定剂量范围内对ACR引起的CGNs凋亡有保护作用.
关键词： 表没食子儿茶素没食子酸酯 丙烯酰胺 小脑颗粒神经元 细胞凋亡 神经保护 -
ATF2在低钾诱导小脑颗粒神经元凋亡中的作用
目的 探讨bZip家族蛋白ATF2在撤钾诱导小脑颗粒神经元凋亡时的作用及机制.方法 体外培养小脑颗粒神经元,用含5mM KCl的无血清培养基(简称为低钾或5K)处理诱导凋亡,Western blot检测ATF2和c-Jun蛋白的表达及磷酸化水平;免疫耗竭检测ATF2是否主要与c-Jun形成复合物;转染小分子干扰RNA检测沉默ATF2与c-Jun表达对神经元凋亡的影响.结果 低钾刺激使ATF2和c-Jun磷酸化水平增加;ATF2主要与c-Jun形成复合物.分别沉默ATF2或c-Jun表达能抑制神经元凋亡(P＜0.05),且抑制凋亡程度没有差异(P＞0.05).结论 低钾条件下,ATF2主要通过与c-Jun形成复合物促进小脑颗粒神经元凋亡.
