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参芪复方调控差异基因对血管内皮保护作用的实验研究
目的:利用生物信息学方法,从分子水平探讨参芪复方对血管内皮细胞的保护作用和机制.方法:60只雄性KKAy小鼠随机分成4组:KKAy组、模型组、参芪复方组和罗格列酮组各15只;另设15只正常C57BL/6J小鼠为正常组.采用L-NAME加入无菌水并配合高脂饲料造模,同时给予药物治疗.8周后处死小鼠,检测血糖、TC、TG水平;取腹主动脉行HE染色,胸主动脉行基因表达谱检测,筛选出差异基因,并进行GO注释及pathway分析.结果:参芪复方组第5周血糖及8周TC、TG明显低于模型组(P＜0.05,P＜0.01),血管内皮状况较模型组明显改善,参芪复方与模型组比较差异基因与细胞命运确定、细胞定位以及大分子代谢过程有关(P＜0.05),调控通路包括胰岛素信号通路、脂肪细胞因子信号通路、半胱氨酸和蛋氨酸代谢通路(P＜0.05),涉及VEGFR2和Met基因.结论:参芪复方保护血管内皮的作用可能与调控差异基因及相关信号通路有关,涉及的VEGFR2基因可能是其作用的重要靶点之一.
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藤黄酸对人结肠癌SW480细胞增殖及VEGFR2表达的影响
目的:观察藤黄酸对人结肠癌SW480细胞增殖和血管内皮细胞受体2(VEGFR2)表达的影响,探讨其可能抗肿瘤的作用机制.方法:以不同浓度的藤黄酸干预体外培养的人结肠癌细胞株SW480,分别于24、36、48h后,应用MTT法检测细胞增殖活性,流式细胞仪检测细胞周期分布和细胞凋亡率,Western-blot分析VEGFR2蛋白的变化.结果:藤黄酸对结肠癌细胞株SW480生长增殖具有明显抑制作用,其效应呈浓度和时间依赖性.流式细胞仪分析显示SW480细胞呈G2/M期阻滞；SW480细胞的凋亡率随藤黄酸浓度增加逐步上升.用不同浓度的藤黄酸处理SW480细胞株24h,VEGFR2蛋白的表达随药物浓度的增加而减少(P＜0.01).结论:藤黄酸能够明显抑制人结肠癌细胞株SW480的增殖,诱导SW480细胞发生G2/M期阻滞,其作用机制可能与抑制VEGFR2表达有关.
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莪术醇对斑马鱼的血管生成活性及作用机制研究
目的:初步研究莪术醇促进血管生成的活性及作用机制,为临床用药提供依据.方法:采用斑马鱼生物模式,观察莪术醇对斑马鱼胚胎体节间血管生长、成鱼剪尾后血管再生和仔鱼切尾后组织再生情况.采用相对荧光定量PCR法检测仔鱼切尾后体内血管内皮生长因子(VEGFA)及受体(VEGFR2)基因的表达.结果:莪术醇能使斑马鱼胚胎体节间血管侧生出新的血管,使成鱼剪尾后血管再生加快,使仔鱼切尾后尾部再生加快.且莪术醇能提高仔鱼体内VEGFA及VEGFR2基因的表达量,促进仔鱼切尾后的尾部再生.结论:莪术醇能促进斑马鱼的血管生成,提高仔鱼切尾后体内VEGFA及VEGFR2基因的表达量,促进尾部再生.
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血管祖细胞研究进展
干/祖细胞是当今医学研究的热点.在小鼠胚胎干细胞分化模型中的研究已经证实,心肌细胞、内皮细胞和血管平滑肌细胞,这三种细胞亚系均来源于一种血管内皮生长因子受体-2(vascular endothelial growth factor receptor-2,VEGFR2又称KDR,Flt-1)阳性的心血管祖细胞,这一类祖细胞是带有中胚层标志的向心血管亚系分化过程中的早阶段的细胞[1].
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CD147及相关因子在食管癌中的表达及意义研究
目的：探讨食管癌中细胞外基质金属蛋白酶诱导因子（EMMPRIN/CD147）在食管癌血管生成通路中的作用。方法随机抽取41例食管癌患者，其中淋巴结转移17例，应用免疫组化方法检测食管癌病理标本中CD147、血管内皮生长因子（VEGF）、血管内皮细胞生长因子受体2（VEGFR2）的表达及微血管密度（MVD）的计数。结果41例食管癌肿瘤组织中CD147、VEGF、VEGFR2阳性率分别为83%、54%及71%，明显高于正常组织。CD147、VEGFR2、MVD在淋巴结转移阳性与阴性患者之间存在显著差异（Z=-2.857，P=0.004；Z=-2.018，P=0.044；Z=-4.239，P﹤0.001）。食管造影下食管病变的长度与VEGF、CD147及MVD显著相关（r=0.486，P=0.01；r=0.588，P﹤0.001；r=0.604，P﹤0.001）。CD147与VEGF、VEGFR2、MVD之间均存在显著相关（r=0.976，P﹤0.001；r=0.588，P=0.01；r=0.604，P﹤0.001）。结论 CD147与VEGF、VEGFR2、MVD之间均存在显著相关，与食管病变长度密切相关，提示CD147在食管癌血管生成通路中有重要作用，且可能是通过调控VEGF通路实现的，但尚需进一步研究。
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亲水突变法提高抗VEGFR2单链抗体的体外亲和力
为了提高抗VEGFR2单链抗体AK404R的亲和力,本研究采用亲水突变法将AK404R的重链CDR3区进行突变,建立次级突变单链抗体库.利用噬菌体展示技术从次级突变库中筛选具有抗VEGFR2特异性、高亲和力抗体,获得的抗体突变株经大肠杆菌HB2151分泌表达,镍亲和色谱柱纯化,并采用竞争性ELISA法、生物信息学方法分别对其亲和力和结构进行了分析.本研究终建立了6.4×105的次级突变单链抗体库,其中两株突变株的亲和力有明显提高,两株突变株经分离纯化得到电泳纯的蛋白,竞争性ELISA结果显示突变体WZ01和WZ02的亲和力比亲本提高了3倍;生物信息学方法分析突变体与抗原的作用面增大、契合紧密,这可能是亲和力提高的原因之一.研究结果表明,在重链CDR3区引入亲水性氨基酸构建抗体突变库,可有效提高scFv的亲和力.
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血清中VEGF,VEGFR1与VEGFR2在肺癌中的表达及其相互关系
目的 本研究为探讨肺癌患者血清及组织中VEGF,VEGFR1,VEGFR2的表达在肺癌发生发展中的变化,为肺癌的诊断、发病机制提供生物学指标.方法 选择山西省肿瘤医院胸外科2008年1月到2008年10月收治的初治原发性肺癌患者65例作为病例组,术后均经组织病理学证实.按照频数匹配的方法选择本院健康体检中20例正常人作为健康对照组.采集外周静脉血,用ELISA法检测病例组外周血中VEGF,VEGFR1,VEGFR2含量,并与健康对照组比较.采用SPSS12.0软件包进行统计学分析VEGF,VEGFR1和VEGFR2与患者病理类型、临床分期、性别、年龄之间的关联性及其三者之间的相关性.结果 ①肺癌患者血清VEGF、VEGFR2表达与健康对照组比较差异有显著性(均P<0.01);VEGFR1表达在两组之间比较差异无显著性(P>0.05);②血清VEGF、VEGFR1、VEGFR2表达在性别,年龄及临床分期之间比较差异均无显著性(均P>0.05).结论 ①肺癌血清中VEGF,VEGFR2的表达在腺癌,鳞癌及小细胞癌患者中明显高于正常对照,而VEGFR1的表达与对照组比较无显著性差异;②患者肺癌血清中VEGF,VEGFR1,VEGFR2的表达在性别,年龄,临床分期中差异均无显著性.
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G-CSF对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤后脑组织VEGF及VEGFR2的影响
新生儿缺氧缺血性脑损伤(HIBD)可导致新生儿死亡及新生儿期以后永久性神经系统损伤如脑性瘫痪、智力障碍、癫痫等.目前尚无有效的治疗方法.血管内皮生长因子(VEGF)对体内及体外培养的神经元及胶质细胞具有直接的神经营养及保护作用,并且这种作用是通过血管内皮生长因子受体2(VEGFR2)介导的.
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VEGFR2在血管新生与重塑中的调控作用
血管的新生与重塑作为血管发生,损伤与修复过程中的重要病理变化,在维护机体血管的结构与功能正常方面具有重要作用.尤其是在机体血管发生损伤情况下,血管的新生与重塑往往成为影响机体损伤发展及修复的重要影响因素.在机体损伤的急性期,相应损伤因子或炎症因子可通过促进损伤部位周围血管结构损伤或者重塑,从而改变局部的血液流变学特性,从而促进损伤组织炎症反应的发生,进而加重组织的损伤[1];而在恢复期,血管新生及新生血管结构重塑又是机体损伤修复的重要特征及必要过程[2].由此可见,血管新生与重塑的发生对机体的影响,在不同状态下,其具有完全不同的生理或病理作用.同时也说明血管新生及重塑在维持机体稳态,调控机体损伤发生及修复过程中具有重要的调控作用.
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以VEGF及VEGFR2为靶位的抗肿瘤血管生成主动免疫治疗的研究进展
肿瘤细胞通过刺激新生血管生成来满足对营养及供氧的不断增长的需求,因此,肿瘤组织生长对于新生血管形成的依赖性使得抗血肿瘤管生成已经成为肿瘤学基础研究与临床治疗领域中吸引人的策略之一.在众多的促血管生成因子中,血管内皮生长因子(VEGF)及其受体VEGFR2(鼠和人中也分别称为Flk-1和KDR)对于与肿瘤生长、转移及复发相关的血管生成是至关重要的.此外,通过打破肿瘤组织自身介导的免疫耐受与逃避,主动免疫治疗已成为一种崭新的抗肿瘤治疗方法.通过将这两种策略联合应用,抗血管生成主动免疫治疗使得更加有效地抑制肿瘤血管生成成为可能.这种免疫治疗与抗血管生成的联合应用有望成为一种有良好前景的研究方案.本文总结了通过打破VEGF/VEGFR2信号通路实现的抗肿瘤血管生成主动免疫治疗方面新研究进展.本文讨论了旨在抑制血管生成的三种不同形式的抗肿瘤疫苗-细胞疫苗、蛋白质/多肽疫苗及基因/DNA疫苗,以及这一领域未来的研究方向.
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电针对促排卵大鼠子宫VEGF、VEGFR2表达的影响
目的 观察电针刺激对激素促排卵大鼠子宫组织中 VEGF、VEGFR2表达的影响,并探讨其作用机制.方法 10周龄SD雌性大鼠30只,随机分为对照组、模型组及治疗组,每组各10只.模型组和治疗组腹腔注射孕马血清促性腺激素(PMSG)20 U,48 h后注射同等剂量的人绒毛膜促性腺激素(hCG),与种鼠合笼,次晨分笼造模,治疗组在与种鼠合笼前1周连续电针治疗7 d(刺激强度1 mA,疏密波2/15 Hz,持续刺激15 min).合笼后第3.5天处死实验动物,留取子宫组织,观察形态改变;采用免疫组化方法检测 VEGF、VEGFR2蛋白的表达;采用 qPCR技术测定子宫组织中 VEGF、VEGFR2 mRNA的表达,采用2-△△Ct方法计算.结果 肉眼观察对照组子宫形态规整,表面红润光滑;模型组子宫形态肿大扭曲,表面色泽暗红充血;治疗组子宫形态略微肿胀,表面红润,无充血现象.免疫组化可见 VEGF、VEGFR2蛋白在3组子宫内膜上均有表达,平均光密度没有明显差异,但表达分布部位有差异.模型组相比于对照组,在基质细胞和腺体上的表达分布较为广泛.VEG-FR2在子宫的肌层组织中表达有明显差异:对照组几乎没有表达,模型组表达则明显增高(P<0.05),治疗组比模型组表达有明显下降(P<0.05).模型组子宫内膜组织 VEGF mRNA的表达是对照组的0.68倍,下降趋势明显;治疗组是对照组的0.88倍,有上升趋势.模型组子宫内膜组织 VEGFR2 mRNA的表达是对照组的0.46倍,下降趋势明显;治疗组是对照组的0.82倍,有比较明显的上升趋势.结论 电针可以调整促排卵大鼠子宫组织中 VEGF及其受体的表达,从而调整激素促排卵导致的子宫内膜种植窗口期的同步性.
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LKB1 VEGFR2 ARK5在非小细胞肺癌中的表达及意义
目的：探讨LKB1、VEGFR2、ARK5在人非小细胞肺癌（NSCLC）发生、发展中的作用。方法应用免疫组化S-P法检测LKB1、VEGFR2、ARK5在50例非小细胞肺癌标本和10例癌旁正常肺组织标本中的表达。结果 LKB1在癌旁正常肺组织中的阳性表达率明显高于NSCLC组织（P<0.05）；VEGFR2、ARK5在NSCLC组织中的阳性表达率明显高于癌旁正常肺组织（P<0.05）。LKB1、VEGFR2、ARK5在NSCLC组织中的表达与患者的年龄、性别、组织学类型无关（P>0.05）；与临床分期存在相关性（P<0.05），与淋巴结转移有相关性（P<0.05）；在组织学分级中，NSCLC高分化组与低分化组比较，三者阳性表达率均有显著性差异（P<0.05）。结论 LKB1、VEGFR2、ARK5均在NSCLC中表达，与NSCLC临床病理特征密切相关，共同参与NSCLC的发生发展。
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阿帕替尼抑制胃癌细胞株MGC-803增殖的机制研究
目的 探讨阿帕替尼下调VEGFR2-PLC-ERK1/2通路关键蛋白表达,抑制胃癌细胞株MGC-803增殖及其可能机制.方法 CCK-8法测定不同浓度阿帕替尼对细胞的增殖抑制作用,碘化丙啶染色法测定阿帕替尼对细胞周期的作用,Annexin-V/PI双染法测定细胞凋亡情况,Western blot检测VEGFR2-PLC-ERK1/2通路上关键蛋白磷酸化.结果 阿帕替尼对胃癌细胞株MGC803生长具有直接抑制作用,IC50为(27.9±2.21)μM.阿帕替尼处理MGC-803细胞株24h后,阿帕替尼组明显被阻滞于G1期(P<0.01).而对细胞早期凋亡率改变不明显.不同剂量阿帕替尼处理后,tERK1/2、tPLC等蛋白表达水平不发生明显变化,而pERK1/2、pPLC等蛋白表达水平降低(P<0.05).结论 阿帕替尼可能主要通过将胃癌细胞株MGC803阻滞于G1期抑制其增殖,其机制与VEGFR2-PLC-ERK1/2通路上关键蛋白磷酸化抑制有关.
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反复自然流产小鼠蜕膜VEGF、VEGFR2的表达及中药干预研究
目的:观察反复自然流产小鼠蜕膜VEGF、VEGFR2的表达及补肾健脾中药(补肾安胎冲剂)的干预作用,探讨补肾健脾中药的保胎作用机理.方法:建立反复自然流产小鼠模型,随机分为模型组、阳性对照药组、中药组,进行不同的干预.观察各组流产率、蜕膜VEGF/VEGFR2的蛋白表达.结果:模型组的流产率高于正常妊娠组及中、西药对照组(P＜0.01)；与模型组比较,中药组蜕膜VEGF、VEGFR2表达升高(P＜0.01),与西药组无显著性差异.结论:反复自然流产小鼠蜕膜存在VEGF、VEGFR2表达不足,补肾安胎冲剂能上调VEGF、VEGFR2的表达,进而促进血管的形成,促进胚胎发育,降低流产率.
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大肠腺癌中Sema4D和VEGFR2的表达及意义
目的 探讨Sema4D和血管内皮生长因子受体2(VEGFR2)在大肠腺癌组织中的表达及其临床意义.方法 运用组织芯片和免疫组化SP法检测115例大肠腺癌组织、19例大肠腺瘤组织和12例正常大肠黏膜组织中Sema4D与VEGFR2的表达,并分析其与临床病理特征的关系.结果 Sema4D在正常大肠黏膜表达阳性率8.33%,在腺瘤和腺癌中阳性表达率为15.79%和39.13%,差异有统计学意义且与淋巴结转移、Dukes临床分期明显相关(P<0.05).VEGFR2在正常大肠黏膜中阳性率16.67%,在腺瘤和腺癌中表达率为21.05%和51.3%,差异有统计学意义其表达与淋巴结转移、浸润程度、Dukes临床分期明显相关(P<0.05).结论 大肠腺癌中Sema4D与VEGFR2的表达可能在大肠腺癌的发生、发展中发挥重要作用.
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LKB1和VEGFR2评价肺腺癌预后的意义
目的 探讨LKB1、VEGFR2在肺腺癌中的表达情况,分析其预后意义.方法应用免疫组化方法检测46例肺腺癌中LKB1、VEGFR2的表达情况.结果 LKB1在癌旁正常肺组织、淋巴结转移阴性组肺腺癌、Ⅰ~Ⅱ期肺腺癌中的表达阳性率明显高于肺腺癌组织、淋巴结转移阳性组肺腺癌和ⅢA期肺腺癌(82.61% vs 63.04%、75.00% vs 44.44%、75.00% vs 35.71%),差异有统计学意义(P <0.05).VEGFR2在癌旁正常肺组织、淋巴结转移阴性组肺腺癌、Ⅰ~Ⅱ期肺腺癌中的表达阳性率则明显低于肺腺癌组织、淋巴结转移阳性组肺腺癌和ⅢA期肺腺癌(34.78% vs 58.70%、46.43% vs 77.78%、46.88% vs 85.71%),差异有统计学意义(P<0.05).结论 LKB1、VEGFR2在肺腺癌中的表达情况可能与肺腺癌患者的预后有关,LKB1低表达、VEGFR2高表达可能提示预后不良.
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LKB1、VEGFR2在非小细胞肺癌组织中表达及临床意义的研究
目的：探究人 Liver kinase B1（LKB1）与血管内皮生长因子受体-2（VEGFR2）在非小细胞肺癌组织中的表达情况，并探究其临床意义。方法采用免疫组化方法测定65例非小细胞肺癌组织及40例癌旁组织 LKB1、VEGFR2表达情况。分析 LKB1、VEGFR2表达情况与临床病理特征的相关性。结果肺癌组织中 LKB1阳性率低于癌旁组织，VEGFR2阳性率高于癌旁组织。LKB1在腺癌中的表达阳性率高于鳞癌，VEG-FR2在腺癌中的表达阳性率低于鳞癌。在具有吸烟史、淋巴转移、临床低分期以及低分化程度中 LKB1阳性率更低，VEGFR2阳性率更高，差异均有统计学意义（均 P ＜0.05）。结论腺癌组织中 LKB1表达水平高于鳞癌组织；非小细胞肺癌组织中 LKB1、VEGFR2呈现相反的表达趋势。LKB1低表达与 VEGFR2高表达提示肺癌患者具有吸烟史、出现淋巴转移、高临床分期以及低分化程度。
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LKB1和VEGFR2在不同分期非小细胞肺癌中的表达
目的：检测LKB1、VEGFR2在不同TNM分期非小细胞肺癌( NSCLC)中的表达情况。方法选取88例经手术治疗的不同TNM分期的非小细胞肺癌患者,切取癌组织及癌周5 cm以上无转移的正常肺组织,应用免疫组化方法测定LKB1和VEGFR2的表达情况。结果 LKB1和VEGFR2在肺癌组织及正常肺组织中均有表达。 LKB1蛋白表达率在正常肺组织中明显高于癌组织(P<0.01),VEGFR2在癌组织的表达率显著高于正常肺组织(P<0.01)；LKB1和VEGFR2在不同分期肺癌组织中的表达有显著差异(P<0.05)。结论 LKB1和VEGFR2在非小细胞肺癌中的表达情况可能帮助判断非小细胞肺癌的分期及预后。
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干细胞样U87胶质瘤细胞向内皮细胞转分化及VEGFR2人源化单克隆抗体的干预作用
目的建立干细胞样U87胶质瘤细胞向内皮细胞的转分化模型,初步评价抗VEGFR2人源化单克隆抗体对转分化的影响。方法体外诱导培养获得干细胞样U87胶质瘤
细胞；流式细胞仪检测 CD133+细胞含量；定量 PCR 检测CD133、Nestin以及VEGFR2表达；观察干细胞样U87细胞的致瘤能力、肿瘤生长速度和CD31表达情况；观察干细胞样U87细胞在Matrigel上血管状结构形成和CD31、CD34、vWF表达情况；建立干细胞样U87细胞向内皮细胞的转分化模型,评价抗VEGFR2人源单抗对转分化的抑制作用。结果获得干细胞球样的 U87细胞,其肿瘤生长更快,且血管增多,接种在Matrigel上形成血管状结构,CD31、CD34、vWF表达增加；抗VEGFR2人源单抗使血管状结构和CD31、CD34、vWF表达均减少。结论成功建立干细胞样U8细胞向内皮细胞转分化模型,VEGFR2人源化单抗对转分化有抑制作用。 -
六味地黄汤辅助环磷酰胺对荷 H22小鼠肝癌组织 VEGF 及 VEGFR2蛋白表达的影响
目的：观察六味地黄汤辅助环磷酰胺对荷H22肝癌小鼠肝癌组织VEGF及VEGFR2蛋白表达的影响。方法：雄性昆明小鼠40只，随机分为模型组、化疗组、六味组、六味化疗联合组，每组10只。腋下注射H22细胞建立H22荷瘤模型，六味组造模前两周开始用药[剂量为22 g／（kg· d）]，化疗组[剂量为50mg／（kg· d），隔日1次]及六味化疗组造模后用药，造模14 d后处死小鼠称重，取瘤组织称重计算抑瘤率，取脾组织称重计算脾指数，免疫组化检测VEGF与VEGFR2蛋白的表达。结果：化疗组与六味化疗联合组有良好的抑瘤作用；六味组脾指数增大，与模型组比较差异具有统计学意义（P＜0．05），六味化疗联合组VEGF蛋白表达明显减少，与化疗组比较，差异有统计学意义（P＜0．05），与六味组相比较，差异有统计学意义（P＜0．05）；六味化疗联合组VEGFR2蛋白表达减少，与模型组比较，差异有统计学意义（P＜0．05）；与六味组比较，有显著性差异（P＜0.01）。结论：六味地黄汤辅助环磷酰胺可抑制荷H22肝癌小鼠组织VEGF与VEGFR2蛋白表达，减少肝癌组织血管增殖，从而发挥辅助化疗作用。
