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Taqman MGB荧光PCR检测生殖支原体
目的 参照文献建立一种快速、灵敏、准确的生殖支原体(Mg)的检测方法,并应用该方法调查生殖支原体在广西贺州暗娼中的流行情况.方法 参考文献中以生殖支原体Pa基因为靶基因设计的引物和Taqman MGB探针进行实时定量PCR,以生殖支原体标准菌株G37制备标准品,对广西贺州暗娼人群的宫颈拭子标本进行生殖支原体的检测.结果 建立的Taqman MGB实时定量PCR方法检测的线性范围好(1×10～106拷贝/μl),R2=0.993,重复性好,(批内变异系数=0.7％,批间变异系数=1.09％),敏感性高,检测限(LOD)为10拷贝/μl,定量限(LOQ)为50拷贝/μl.采用该方法检测404份拭子标本,生殖支原体的检出率为12.1％.结论 针对生殖支原体Pa基因的Taqman MGB实时PCR可以快速、灵敏地对生殖支原体进行定性及定量的检测.
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1213株G-杆菌的分离鉴定和药敏分析
近二年来,我科对临床检验的1213株G-杆菌,在本地区感染分布情况和对常用抗生素的耐药性进行分析,为临床合理使用抗生素,减少细菌的耐药性和医院感染的发生率提供科学的依据.材料与方法一、菌株来源:1213株G-杆菌均来源本院门诊和住院病人的血、尿、痰、粪、脓液和脑脊液等.二、方法:分离鉴定,根据常规进行分离、培养、鉴定.药敏试验,用M-H培养基,按K-B纸扩散法进行测定.并每月用ATCC标准菌株测定抗生素抑菌情况,均符合NCCLS规定的范围.
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菌种的保存方法介绍
临床微生物实验室经常能够分离到一些有意义的菌种,但接种在平板上的细菌置4℃冰箱只能保存数天,并且细菌在培养基上移种3次后,其形态、菌落、毒力等均易发生变异[1],监测日常工作的室内质控用标准菌株也需要长期留存.尽可能长期有效地留存菌种对于系统地分析当前流行株的生物学、分子生物学特征及耐药性变迁,医院感染病原学调查、新药临床研究等都有十分重要的意义.本文介绍几种常用的菌种保存方法.
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吸水树脂类妇幼卫生用品检测时取样方法的探讨
吸水树脂类材料的妇幼卫生用品,在国标中采用无菌湿棉签涂表面100 cm2(与人体接触部位)的方法检测菌落总数,检测结果与实际情况偏差太大.现采用剪取表层100cm2面积的方法检测同一样品的细菌菌落总数和真菌菌落总数,并进行了实验结果的比较.同时,在样品的表层加上标准菌株,用以上两种取样方法进行菌落计数,对回收率进行了比较.
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一种含氯制剂杀灭标准菌与地方菌的研究
二氯异氰尿酸钠是一种常用广谱、高效杀菌的消毒剂,使用方便、安全、易溶于水,性质稳定性强,杀菌效果良好[1].为了解某厂提供的二氯异氰尿酸钠的杀菌效果,为外环境或疫源地消毒处理提供科学依据,2000年11月应用几种标准菌株与地方菌株进行了实验室研究.
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葡萄籽提取物对医院临床分离菌株的抑菌作用及毒性试验分析
目的：分析葡萄籽乙醇提取液对医院临床分离菌株的体外抑菌作用和毒性。方法以临床标本分离菌株为对象，采用抑菌环试验和营养肉汤稀释法对其抑菌效果进行了试验观察；采用动物试验对其进行了毒性试验观察。结果含葡萄籽生药125 g/ L 的乙醇提取液对临床分离菌株和标准菌株的抑菌环直径均大于7 mm。葡萄籽乙醇提取物对白色念球菌的低抑菌浓度（MIC）为25.0 g/ L。小鼠急性经口 LD50值大于5000 mg/ kg，葡萄籽提取原液对家兔皮肤刺激试验指数为0.13，属于轻度刺激性。结论葡萄籽乙醇提取液具有良好的抑菌作用，属无毒、低刺激性物质。
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2种弧菌显色检测平板性能比较研究
目的 研究国产弧菌显色平板性能,用于临床弧菌检测的可行性评估.方法 将霍乱弧菌、创伤弧菌、副溶血性弧菌、溶藻弧菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和粪肠球菌等标准菌株以及来自郑州七里河的24份水样和来自郑州红旗路农贸市场的108份水产品样本,分别接种科玛嘉弧菌显色平板和安图弧菌显色平板,比较目的菌的生长和显色差异以及杂菌的生长和显色的差异等.结果 2种显色平板检测弧菌的性能完全一致,但在对粪肠球菌的抑制性能方面,安图弧菌显色平板优于科玛嘉.24份水样样本中,2种显色平板均未检出弧菌,但108份水产品样本中科玛嘉显色平板出现一份副溶血性弧菌假阳性,2种显色平板对临床样本中副溶血弧菌的鉴别差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 安图弧菌显色平板作为国产试剂,整体性能优于科玛嘉,结合到成本优势,有较大的临床应用价值.
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10株沙门菌保存15年的观察研究
为解决基层卫生检验工作用对照标准菌株的保存,加强质量控制,提高检测质量,方便检测工作人员,本人用湖北省卫生防疫站所推荐的加富半固体培养基配方,自配加富半固体,保存了湖北省站索取的10株沙门菌标准菌株,进行了长达15年的观察研究.现将研究情况报告如下:
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临床分离角膜致病曲霉菌的生长特性研究
目的 通过体外培养方法比较眼部临床分离曲霉菌与曲霉菌标准菌株生长特性的异同,研究真菌致病的关键点.方法 配制液态和固态形式的3种培养基:综合马铃薯葡萄糖(PDA)培养基、沙氏培养基和酵母浸膏(YG)培养基,分别接种临床分离的曲霉菌株L和菌株W以及曲霉菌标准菌株,在29℃下培养96 h,分别于培养后0、4、8、12、24、36、48、60、72和96 h测定液态培养基上的吸光度(0D),绘制生长曲线,并在固态培养基上观察记录真菌生长情况.结果 在综合PDA液体培养基上,菌株L和菌株W的生长曲线与标准菌株比较,差异均无统计学意义(均P＜0.05);在YG和沙氏液体培养基上,临床分离菌株L和菌株W生长曲线与标准菌比较,差异均有统计学意义(均P＜0.05),临床分离的2株曲霉菌更早进入显著生长期,生长速率明显快于标准菌株.固体培养基上,同一菌株在综合PDA培养基上菌落范围大、菌丝密度高;在沙氏培养基上菌落范围小、菌丝密度低;YG培养基上菌落介于另外2种培养基之间,菌落颜色变化晚.同种固体培养基上,临床分离曲霉菌较标准菌株菌落范围更大、颜色变化更早、颜色变化范围更广.结论 较标准菌株而言,临床分离曲霉菌在营养条件较差时表现出更强的环境适应能力,使得临床分离菌株在复杂的临床环境中得以生存,进而致病.
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白假丝酵母菌不同菌株对动物致病性的对比性观察
目的 观察白假丝酵母菌标准菌株(CCCMC1a、ATCC 14053)与临床分离菌株(C1-1,C1-2,C1-3 ,C1-4)对小鼠与家兔的致病情况,并探讨不同菌株对动物致病性与荚膜厚薄的关系.方法 小鼠及健康成年家兔按上述菌株不同分为CCCMC1a,ATCC 14053, C1-1,C1-2, C1-3 ,C1-4共6组,每组小鼠20只,家兔12只;将实验菌种沙保氏琼脂36 h培养物用生理盐水配成约含1×109个/ ml的菌悬液,家兔耳缘静脉注射,1～1.5 ml /只;对BALB/c小鼠腹腔注射,0.5 ml /只,于注射后6 h开始密切观察动物的反应,连续观察7 d,记录动物发病情况:发病天数、死亡天数及死亡动物数、动物死亡率、存活动物数等,比较不同菌株对动物的致病性.待实验动物死亡后,分别取家兔肾组织印片及小鼠腹腔液涂片进行Hiss荚膜染色镜检,用显微测微计测量荚膜层的厚度,各菌株随机计数40个酵母细胞的荚膜层的厚度值,取各菌株荚膜层厚度的均值进行比较,并且与菌株的动物致病性相联系,观察是否具有一定的规律性.结果 C1-2和C1-4相对于C1-1,C1-3,CCCMC1a,ATCC 14053来说,具有很强的动物致病性.标准菌株和临床分离菌株在家兔及小白鼠体内均可形成荚膜,荚膜层的厚度可因不同菌株和不同动物体内形成而有显著差异,P＜0.01或P＜0.05.结果 显示,兔肾感染灶的菌细胞较小鼠腹腔内菌细胞的荚膜明显宽厚,C1-1,C1-2, C1-3 ,C1-4组的兔肾感染灶的菌细胞及鼠腹腔内菌细胞的荚膜比CCCMC1a,ATCC 14053明显宽厚,其中对动物高致病性的C1-2和 C1-4的兔肾感染灶的菌细胞及鼠腹腔内菌细胞的荚膜为宽厚.结论 C1-2和C1-4具有很强的动物致病性,它们的荚膜与其它菌株相比较也更宽厚.荚膜可能是白假丝酵母菌的毒力因子,荚膜的宽厚与动物的致病性有着密切的联系.
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清开灵口服液体外抑菌效果的实验研究
目的:探讨清开灵口服液的体外抑菌效果.方法:运用K-B纸片琼脂扩散法测定不同浓度的清开灵口服液及抗生素阳性对照组和生理盐水阴性对照组对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌、肺炎克雷伯杆菌标准菌株的体外抑菌效果.结果:不同浓度的清开灵口服液在体外对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌、肺炎克雷伯杆菌标准菌株的抑菌效果与阳性对照组、阴性对照组相比有显著的统计学差异(P<0.05).结论:清开灵口服液在体外对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌、肺炎克雷伯杆菌标准菌株均有轻度的抑菌作用.
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宣肺解毒颗粒剂体内外抗菌试验
目的:探讨宣肺解毒颗粒剂(宣肺)的杀菌作用.方法:体外抗菌试验用试管二倍稀释法.用金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、甲型溶血性链球菌、大肠杆菌和肺炎克雷伯氏杆菌等能引起呼吸道感染的标准菌株和临床分离菌株为被测试菌,以抗病毒口服液、青霉素钠和硫酸链霉素作为对照,测定各试验用药的小杀菌浓度(MBC); 体内抗菌试验用金黄色葡萄球菌感染小鼠的死亡率以评价药物的预防和治疗效果,即先分别对小鼠灌胃给宣肺大、小剂量5 d,并以无菌蒸馏水为阴性对照、腹腔注射青霉素为阳性对照,于第5 d给药1 h后用5%胃膜素液稀释的10-2金黄色葡萄球菌悬液进行腹腔感染(0.5 mL/只鼠,菌数:4×1010),计算24～48 h内小鼠的死亡率,以示药物的保护作用.结果:体外试验表明宣肺解毒颗粒剂对金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、甲型溶血性链球菌、大肠杆菌和肺炎克雷伯氏杆菌标准菌株和临床分离菌株均有一定的抗菌作用,其MBC依次为1.25%、 1.25%、 5%～10%、 5%～10% 和5%; 而体内试验各组平均死亡率为:宣肺小剂量组87.5%、宣肺大剂量组91.67%、阴性对照组79.17%、青霉素对照组37.92%, 经t检验,青霉素对照组与阴性对照组相比较P>0.05, 其余各组均为P>0.05,表明肺解毒颗粒剂对金黄色葡萄球菌感染小鼠的死亡无明显保护作用,体内抗菌作用不明显.结论:宣肺解毒颗粒剂体外试验有一定的抗菌作用,而对体内感染的死亡无明显的拮抗作用.
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显色培养基在微生物检验初筛中的应用
目前，国内检查沙门氏菌、变形杆菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、链球菌、假单胞菌属等都按照国标方法进行常规的检测，但对一些突发事件的紧急检验，却争取不了时间。我们应用CHROMagarParisFrance显色培养基分离致病菌，并同时与标准菌株、地方株(食物中毒菌株)作对比试验，获得较为满意的效果，现将方法介绍如下。1材料与方法1.1样品来源显色培养基购自郑州博赛科技有限责任公司，由法国进口分装成品；实验用沙门氏菌、大肠埃希氏菌、蜡样芽胞杆菌、金黄色葡萄球菌购自中国药品生物制品检定所，其余为地方株及盲样考核中的未知菌株。1.2方法与步骤1.2.1显色培养基的配制将购置的干燥培养基成品沙门氏菌显色培养基、定位显色培养基按说明称取一定分量，分别放入盛有100ml无菌蒸馏水或纯净水的灭菌三角烧瓶内，搅拌均匀，然后在电炉上加热至琼脂完全溶解，待冷却至50℃左右，即可倒入直径为9cm无菌平皿内，100ml培养基约倒6～7个平皿，冷却凝固后翻转平板并包好置冰箱备用(避光，于4℃可保存两周)。肉汤等培养基按GB4789.28进行配制。1.2.2菌液制备从各种平板上挑选标本中可疑菌落及标准菌株的菌落、地方菌株菌落均转种到肉汤管中，于36±1℃培养18～24小时备用。1.2.3平板接种将各肉汤培养液，以无菌接种环挑取菌液，每个菌株分别接种沙门氏菌显色平板、定位显色平板，用分区划线法接种，分离出单个菌落，经36±1℃培养24及48小时，分别观察各平板上菌落生长后显色情况，并作详细记录。1.3评价依据将标准菌株、地方菌株、考核菌株(未知菌株)分别接种在两种显色培养基平板上(CHROMagar显色培养基)。在同一条件、同一环境内进行培养，然后以标准菌株为准，对比识别各种菌落在不同培养基上生长后的菌落色彩。2结果按使用说明制作好的显色平板，当天制作，当天使用，当天接种实验菌株，然后于24及48小时观察各种菌落的颜色，结果如表1。
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3种酵母样真菌鉴定方法的比较
为综合评价目前我国实验室常规手工发酵鉴定法(常规法)、生物梅里埃ATB Fugus卡鉴定法(仪器法)和近年国内开始应用的科玛嘉(CHRoMagar)酵母样真菌显色培养基鉴定法(显色法)等3种酵母样真菌鉴定方法的优劣.我们同时用这3种方法对实验室保存的122株酵母样真菌标准菌株进行了鉴定比较,报道如下.
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用ATB-reader细菌鉴定药敏分析仪检出鸡葡萄球菌的探讨
本研究应用 ATB-reader 细菌鉴定药敏分析仪检出鸡葡萄球菌，现报道如下。
1 材料与方法
1．1 材料
1．1．1 菌株来源 鸡葡萄球菌菌株来自患者血培养阳性。
1．1．2 仪器与试剂 ATB-reader 自动化微生物分析仪、3D60自动血培养仪，鉴定和药敏卡以及血培养瓶均由梅里埃公司提供，血平板、凝固酶、触酶以及革兰染液由天津金章科技发展有限公司提供，金黄色葡萄球菌标准菌株 ATCC25923来自天津临床检验中心。 -
喹诺酮类药物对分离菌株与标准菌株的抑菌效果实验
目的:通过抑菌试验为临床提供合理选用喹诺酮类药物的依据.方法:对所有标本均进行平行操作,采用K-B纸片扩散法.结果:环丙沙星敏感性好.结论:试验结果对临床用药有一定指导意义.
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产超广谱β-内酰胺酶细菌的检出及耐药性分析
随着新的广谱β-内酰胺类抗生素广泛大量的使用,产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的细菌也就不断增多,几乎在全球各地都有这类菌株的报道,但不同种类产酶株的地理分布差异很大,同时由于此类菌株具有较高的交叉耐药性和多重耐药性,对其病人感染的控制和流行病学常带来一系列问题.因此,快速准确地检测出产ESBLs菌株,研究其耐药性,对于临床治疗工作非常重要.1 材料和方法1.1 标本来源均为我院2000年1～8月住院患者和门诊患者标本中分离出的225株革兰氏阴性杆菌.分离鉴定和药敏试验用的培养基均为本室按<全国临床检验操作规程>自制的.API细菌鉴定系统来源于法国梅里埃生物公司.1.2 过筛试验及确证试验用的药敏纸片购自卫生部临检中心和北京天坛药物生物技术公司使用前每批平板及纸片用标准菌株进行测试按NCCLS标准定出R、I、S.
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关于标准菌株用于室内药敏质控代次的探讨
目的 探讨标准菌株用于室内药敏质控的代次.方法 采用纸片扩散法,制备MH琼脂平皿,同一厂家同一批号的药敏纸片,对3种标准菌株:金黄色葡萄球菌(ATCC 29213)、大肠埃希菌(ATCC 25922)、铜绿假单胞菌(ATCC 27853)的1～6代分别做药敏实验,测量抑菌圈直径.结果 随着标准菌株代次的增高,抑菌圈直径由小逐渐增大,低代次(1、2代)时,抑菌圈直径过小,高代次(6代)时,抑菌圈直径又过大.只有中间的代次(3～5代)时抑菌圈直径才在标准范围内,适用于室内药敏质控.结论 标准菌株传代至3～5代时适合用于室内药敏质控.6代以后细菌老化,不再适用于室内药敏质控.
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中性戊二醛杀菌效果及理化性能的实验观察
2%戊二醛是目前医院常用于胃、肠镜消毒的试剂.为探索不同时间内戊二醛对标准菌株和临床菌株消毒效果,我们对其进行了杀菌效果、稳定性及使用不同天数时浓度监测.现将结果报告如下.
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复方牙痛酊对口腔致病菌作用的实验研究
复方牙痛酊在临床上用于治疗牙龈炎引起的牙痛或牙龈肿痛,其对口腔常见致病菌有何作用尚未见报道.本研究观察了复方牙痛酊对口腔常见致病菌标准菌株的体外抑制作用,结果如下.
