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Barret食管组织p53、COX-2基因表达与TNF-α、NF-κB水平的关系
目的 探讨Barrett食管(Barrett's esophagus,BE)患者病变组织中p53、COX-2基因表达与TNF-α、NF-κB水平的关系.方法 选取2016年3月-2017年3月确诊的BE患者19例,SSBE 13例(SSBE组)、LSBE 6例(LSBE组),另选食管正常者20例作为对照组.应用荧光定量PCR法检测各组食管组织中p53、COX-2 mRNA表达,ELISA法检测组织TNF-α、NF-κB水平.计量资料多组间比较采用单因素方差分析,两两比较采用LSD-t检验.采用Pearson相关分析变量间关系.P＜0.05为差异有统计学意义.结果 对照组、SSBE组、LSBE组p53 mRNA相对表达量分别为1.00±0.33、2.77±0.41、3.54±0.45,COX-2 mRNA相对表达量分别为1.00±0.28、2.33±0.25、3.78±0.32,TNF-α水平分别为(23.15±4.41、65.78±5.32、87.94± 4.83) pg/ml,NF-κB水平分别为(18.52± 8.41、52.71±10.25、76.45 ±9.36) pg/ml.SSBE组、LSBE组p53、COX-2 mRNA相对表达量及TNF-α、NF-κB水平均高于对照组(均P＜0.05),LSBE组COX-2 mRNA相对表达量及TNF-α、NF-κB水平高于SSBE组(均P＜0.05),但两组p53相对表达量比较差异无统计学意义(P＞0.05).Pearson相关分析显示,SSBE组、LSBE组p53 mRNA相对表达量与COX-2 mRNA相对表达量及NF-κB、TNF-α水平均呈正相关(r=0.623、0.601、0.502;0.701、0.589、0.536,均P＜0.05),COX-2 mRNA相对表达量与NF-κB水平呈正相关(r=0.453、0.583,均P＜0.05),而与TNF-α水平无相关性(r=0.253、0.329,均P＞0.05).结论 p53、COX-2、TNF-α、NF-κB共同介导的炎症反应可能在BE的发生发展中起重要作用,联合检测有助于BE的早期诊断、治疗及评估预后.
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COX-2特异性SiRNA联合卡铂促进HeLa细胞增殖及凋亡
目的:研究环氧合酶-2(COX-2)特异性小干扰RNA(SiRNA)联合卡铂对宫颈癌HeLa细胞增殖和凋亡的影响.方法:COX-2 SiRNA转染HeLa细胞并联合卡铂进行药物干预,以荧光定量PCR和Westem blot检测COX-2 mRNA和蛋白表达,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖,用流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡.结果:COX-2靶向SiRNA能有效沉默HeLa细胞COX-2基因,降低COX-2 mRNA及蛋白表达水平,并有效的抑制HeLa细胞增殖并促进细胞凋亡,SiRNA联合卡铂干预能进一步抑制细胞增殖且具有时间一效应关系.结论:COX-2靶向SiRNA联合卡铂在抑制HeLa细胞增殖过程中具有协同放大效应.
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NOV基因与Ki-67、VEGF、p27和COX-2在肾透明细胞癌中的相关性
目的 研究肾母细胞瘤过表达基因(NOV/CCN3)在肾透明细胞癌(ccRCC)中与增殖细胞核抗原Ki-67、血管内皮生长因子(VEGF)、细胞周期依赖性激酶抑制因子p27、环氧合酶2(COX-2)的相关性.方法 用过表达NOV质粒pEGFP-C1-NOV转柒人肾透明细胞癌细胞株786-O,实时定量PCR(RT-PCR)技术测定转染了过表达NOV质粒的细胞(实验组)、转染了空载体的细胞(空载组)及未行质粒转染的786-O细胞(空白组)中Ki-67、p27、VEGF和COX-2 mRNA表达的差异.应用免疫组化染色法对组织芯片行NOV及Ki-67、VEGF、p27、COX-2染色,得到量化资料并行相关性分析.结果 RT-PCR结果显示,实验组细胞与空白组细胞比较NOV mRNA水平增高(P＜0.05),同时Ki-67、VEGF在mRNA水平降低(P＜0.05),p27、COX-2 mRNA水平显著升高(P＜0.05).空白组与空载组相比较均无明显差异.免疫组化染色结果显示,肾透明细胞癌组织中NOV的表达与Ki-67、VEGF的表达呈负相关(r分别为-0.686、-0.646,P＜0.05),而与p27、COX-2的表达呈正相关(r分别为0.491、0.762,P＜0.05).结论 NOV在肾透明细胞癌中对增殖和进展的作用可能与影响Ki-67、VEGF、p27、COX-2的表达相关.
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原发性肺腺癌组织中 COX-2、EGFR、PDGFR和 nm23的表达变化及意义
目的：观察环氧合酶2（COX-2）、表皮生长因子受体（EGFR）、血小板衍生生长因子受体（PDGFR）和转移抑制基因23（ nm23）蛋白在原发性肺腺癌中的表达变化，探讨其与临床病理因素的关系。方法应用免疫组化S-P法检测COX-2、EGFR、PDGFR和nm23蛋白在109例原发性肺腺癌组织和30例正常肺组织中的表达。结果COX-2、EGFR、PDGFR蛋白在肺腺癌组织中的阳性率分别为78．0％、58．7％、74．3％，均显著高于正常肺组织（ P均＜0．05）。 nm23蛋白在肺腺癌组织中的阳性率为60．6％，显著低于正常肺组织（P＜0．05）。 COX-2蛋白的表达与肺腺癌患者的年龄相关（P＜0．05）；EGFR蛋白的表达与患者的年龄、淋巴结转移及TNM分期相关（P均＜0．05）；nm23蛋白的表达与淋巴结转移及TNM分期相关（P均＜0．05）。肺腺癌组织EGFR和nm23、PDGFR和nm23的表达均呈负相关（r＝－0．448，P＜0．05；r＝－0．432，P＜0．05），EGFR和PDGFR的表达呈正相关性（r＝0．403，P＜0．05）。结论在肺腺癌组织中，COX-2、EGFR、PDGFR表达升高，nm23蛋白表达降低，综合检测上述指标在判断肿瘤的恶性程度、估计预后等方面具有一定价值。
关键词： 肺肿瘤 环氧合酶2 表皮生长因子受体 血小板衍生生长因子受体 转移抑制基因23 -
Agkihpin对人肝癌SMMC-7721细胞COX-2、MRP1和E-CD表达的影响
目的 探讨蛇毒精氨酸酯酶( Agkihpin)影响人肝癌SMMC-7721细胞活力、增殖和迁移的机制,为肝癌的治疗提供新的思路.方法 取对数生长期SMMC-7721细胞随机分为8组,分别用质量浓度为0.207 ～4.130 g/mL的Agkihpin处理72 h,应用免疫细胞化学、Western blotting、RT-PCR法检测环氧合酶-2(COX-2)、表皮钙黏素(ECD)和多药耐药相关蛋白1(MRPl)蛋白表达和基因转录水平,分析三指标之间的关系.结果 与未行Agkihpin处理者比较,Agkihpin处理的SMMC-7721细胞COX-2基因转录、蛋白表达均降低(P＜0.01),并呈一定的浓度依赖效应；COX-2与E-CD的表达和转录均呈负相关,MRP1与E-CD的表达和转录均呈负相关,COX-2与MRP1的表达和转录均呈正相关.结论 Agkihpin可通过下调MRP、COX-2表达及上调E-CD表达抑制人肝癌SMMC-7721细胞的活力、增殖和迁移,有望用于提高肝癌细胞对化疗药物的敏感性、逆转肝癌耐药细胞的多药耐药表型、提高肝癌患者术后生存率、抑制肝癌细胞的浸润和转移.
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胃乐散对大鼠溃疡组织TXA2、PGI2 及COX-2含量的影响及意义
目的 观察胃乐散对大鼠实验性溃疡血栓素A2(TXA2)和前列腺素I2( PGI2)及环氧合酶2(COX-2)的影响,并探讨其作用机理.方法 SD大鼠48只,随机分为正常对照组、模型组、胃乐散低剂量组、胃乐散中剂量组、胃乐散高剂量组和雷尼替丁组.采用冰醋酸烧灼法制备大鼠胃溃疡模型,连续用药后第14天处死大鼠,取溃疡部位组织提取蛋白.用ELISA法检测组织中血栓素B2(TXB2)和6-酮-前列腺素F1α(6-Keto-PGF1α)的水平变化,并观察TXB2/6-Keto-PGF1α的比值变化.Western blot检测组织中COX-2的含量.结果 与正常对照组比较,模型组6-Keto-PGF1α、COX-2水平降低(P＜0.05),TXB2及TXB2/6-Keto-PGF1α升高(P＜0.05)；胃乐散高剂量组6-Keto-PGF1α的含量高于正常对照组(P＜0.05).与模型组比较,胃乐散中、高剂量组及雷尼替丁组6-Keto-PGF1α、COX-2的含量增加,特别是胃乐散高剂量组增加更为明显(P＜0.01),胃乐散高剂量组及雷尼替丁组TXB2低于模型组(P＜0.05),特别是TXB2/6-Keto-PGF1α降低更为显著(P＜0.01).结论 胃乐散治疗胃溃疡可能是通过促进PGI2分泌,纠正TXA2/PGI2的失衡来实现的.
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L-精氨酸对肺血栓栓塞症eNOS和COX2表达的影响
目的 观察L-精氨酸(L-Arg)对实验性肺血栓栓塞症(PTE)中内皮型一氧化氮合酶(eNOS)及环氧合酶2(COX2)的影响,探讨其对PTE的作用机制.方法 采用自体血栓回输的方法制备PTE大鼠模型,L-Arg组经腹腔注射L-Arg 100 mg/kg.用免疫组化和RT-PCR技术检测肺组织eNOS和COX2 mRNA和蛋白表达.结果 肺栓塞后病理可见肺动脉血栓形成,炎性反应明显.与模型组比较,L-Arg组肺组织病变程度减轻,eNOS mRNA和蛋白表达上调,COX2 mRNA和蛋白表达下调.结论 PTE时,L-Arg可通过下调肺内eNOS表达和上调COX2表达起到保护肺组织的作用.
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外源性硫化氢对人宫颈癌HeLa细胞的影响及作用机制
目的 探讨外源性硫化氢对人宫颈癌Hela细胞的影响及其作用机制.方法 将培养好的人宫颈癌He-La细胞随机分为6组,正常对照组:正常培养,不作任何处理;NaHS组:加入400 μmo]/L的NaHS;NaHS+ PDTC组:加入400 μmol/L的NaHS和100 μmol/L的PDTC(NF-κB通路抑制剂);NaHS+ NS-398组:加入400μmol/L的NaHS和10 μmol/L的NS-398(COX-2通路抑制剂);PDTC组:加入100 μmol/L的PDTC;NS-398组:加入10 μmol/L的NS-398.各组干预24h,用CCK-8法测定细胞相对存活率,用ELISA法检测细胞培养上清液中血管内皮生长因子(VEGF)水平,用Transwell小室实验检测细胞迁移能力,用Western blotting法检测细胞内Caspase-1、Caspase-12、p-NF-κB p65和COX-2蛋白表达.结果 干预24h,与正常对照组、NaHS+ PDTC组、NaHS+ NS-398组比较,NaHS组细胞相对存活率、培养上清液VEGF水平、细胞迁移能力及NF-κB p65(除外NaHS+ NS-398组)、COX-2蛋白表达升高,Caspase-1、Caspase-12蛋白表达降低(P均＜0.05);PDTC组、NS-398组以上指标与正常对照组比较差异无统计学意义(P均＞0.05).结论 外源性硫化氢可通过激活NF-κB/COX-2信号传导通路促进人宫颈癌HeLa细胞增殖、新生血管形成、细胞迁移.
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坤泰胶囊对促排卵小鼠子宫内膜溶血磷脂酸受体3、环氧合酶2表达的影响
目的：观察坤泰胶囊对促排卵小鼠子宫内膜溶血磷脂酸受体3( LPAR3)、环氧合酶2( COX-2)表达的影响,探讨其是否具有提高子宫内膜容受性的作用。方法将90只6~8周龄的昆明雌鼠随机分为三组,各30只。A组：每天生理盐水灌胃1次(连续1个月),控制性超促排卵( COH)；B组：每天坤泰胶囊生理盐水溶解后灌胃1次(连续1个月),COH；C组：每天生理盐水灌胃1次(连续1个月)。雌鼠与雄鼠以2∶1合笼,检查雌鼠次日晨阴栓(按天数表示为d1~d6)。每天每组处死5只雌鼠,取其子宫,观察子宫内膜腺体发育情况,检测其LPAR3、COX-2。结果 d4,A、B、C组子宫内膜腺体数分别为(13±3)、(20±2)、C(17±2)个,B组与A、C组相比,P均<0.05。 d3, A、B、C组子宫内膜LPAR3的积分光密度值(IOD值)分别为0.293±0.019、0.255±0.014、0.253±0.032,B组与A组相比,P<0.05；d4,A、B、C组子宫内膜LPAR3的IOD值分别为0.207±0.022、0.330±0.026、0.311±0.019,B组与A组相比,P<0.05。 d4、d5、d6,A组子宫内膜COX-2的IOD值分别为0.282±0.019、0.419±0.052、0.573±0.057,B组分别为0.176±0.018、0.288±0.020、0.417±0.053,两组相比,P均<0.05。结论坤泰胶囊可调控COH小鼠子宫内膜LPAR3及COX-2的表达,发挥提高子宫内膜容受性的作用。
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乙肝病毒对环氧合酶2表达的影响
目的 探讨乙肝病毒(HBV)在体内外对环氧合酶2(COX-2)及前列腺素E2(PGE2)表达的影响.方法 采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western印迹法检测HepG2细胞和整合了HBV全基因组的HepG2.2.15细胞中COX-2mRNA和蛋白的表达;将HBV感染性克隆pHBV1.3及其空载体pBlue-ks分别转染HepG2细胞,采用RT-PCR和Western印迹法检测HepG2细胞转染pHBV1.3后COX-2 mRNA和蛋白表达的变化;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测HBV患者和健康体检者血清中PGE2的含量.结果 COX-2mRNA和蛋白在HepG2.2.15细胞中的表达较HepG2升高;与转染pBlue-ks相比,pHBV1.3在HepG2细胞上调COX-2 mRNA和蛋白的表达;与健康对照组相比,HBV患者PGE2血清学水平显著升高,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 HBV能够在HepG2细胞中上调COX-2的表达,并在体内促进PGE2的合成和分泌.
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流感病毒对环氧合酶-2表达的影响及其机制探讨
目的 探讨流感病毒对环氧合酶2(COX-2)表达的影响及其调节机制.方法 流感病毒感染A549细胞,将其非结构蛋白NS1真核表达载体与COX-2基因启动子的报告质粒pCOX-2-Luc共转染A549细胞,测定其荧光素酶活性,采用反转录PCR和Western印迹法检测COX-2 mRNA和蛋白表达的变化.结果 流感病毒上调mRNA和蛋白的表达,其NS1蛋白能显著激活COX-2基因启动子的活性,并上调COX-2 mRNA和蛋白的表达,激活作用呈剂量依赖关系.结论 流感病毒通过其NS1蛋白上调COX-2的表达.
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EPA和DHA对人食管鳞癌及腺癌细胞增殖的影响
目的 观察EPA和DHA对食管鳞癌(ESCC)和腺癌(EAC)细胞增殖的影响,探讨可能机制.方法 EPA、DHA分别设100 μmol/L、50 μmol/L、1 μmol/L干预组及对照组.干预Eca-109细胞(ESCC)及OE-19细胞(EAC)24 h及48 h后,CCK-8法检测细胞增殖,RT-PCR及Western blot检测COX-2 mRNA和蛋白表达,ELISA法检测PGE2和PGE3水平.结果 在Eca-109细胞,高浓度EPA及DHA抑制细胞增殖,仅高浓度EPA抑制COX-2 mRNA表达;EPA及DHA呈时间-浓度依赖性抑制COX-2蛋白表达;各浓度EPA及高浓度DHA组PGE2减少、PGE3增加(P均<0.05);在OE-19细胞,DHA呈时间-浓度依赖性抑制细胞增殖(P<0.05),而EPA对其无影响(P>0.05);DHA呈时间-浓度依赖性抑制COX-2 mRNA及蛋白表达,EPA则先促进后抑制其表达;EPA引起PGE2增加而PGE3减少,DHA反之(P均<0.05).结论 DHA抑制EAC细胞增殖,且与COX-2及PGE2表达抑制、PGE3增加有关.EPA对EAC细胞增殖、EPA及DHA对ESCC细胞增殖无明显影响.
关键词： n-3多不饱和脂肪酸 环氧合酶2 食管鳞癌 食管腺癌 -
COX-2在食管癌中的表达及其意义
目的通过研究COX-2和PGE2在食管癌中的表达,探讨COX-2与食管癌的关系.方法分别采用RT-PCR、免疫组织化学和放射免疫分析等方法研究食管腺癌和食管鳞癌病人内窥镜活检组织中COX-2及其mRNA的表达率以及PGE2在组织中的含量.结果RT-PCR法研究显示,食管腺癌组(88.24%)、食管鳞癌组(72.73%)中COX-2 mRNA表达率与正常组织(25.00%)相比有显著差异(P＜0.01);免疫组织化学研究显示,食管腺癌和食管鳞癌的癌细胞胞浆中COX-2蛋白呈阳性表达,食管腺癌组(76.47%)、食管鳞癌组(72.73%)中COX-2蛋白表达率与正常组织(20.00%)比有显著差异(P＜0.01).放射免疫分析法研究显示,食管腺癌组(559.22±37.77)、食管鳞癌组(563.52±41.12)中PGE2的含量(pg/mg)与对照组(357.10±37.58)相比有显著差异(P＜0.05),前两组中PGE2的含量之间无显著差异(P＞0.05).结论食管腺癌和食管鳞癌中COX-2蛋白及其mRNA均呈高表达,PGE2的含量增高.
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胰腺癌环氧合酶-2表达的意义
目的 研究胰腺癌中COX-2表达的意义.方法 应用免疫组化SP法检测82例胰腺癌、22例慢性胰腺炎、9例胰腺良性肿瘤、15例正常胰腺组织和2株人胰腺癌细胞中COX-2的表达,然后比较胰腺癌组织COX-2表达与胰腺癌患者临床病理特征的关系.结果 2株人胰腺癌细胞COX-2表达均阳性.70.7%(58/82)胰腺癌组织可见COX-2表达,而正常胰腺组织只有6.7%(1/15)呈微弱表达.COX-2在4种组织中的表达程度有显著性差异(P<0.001).胰腺癌组织COX-2表达显著高于其他3种组织(P<0.05).胰腺癌组织COX=2表达水平的高低与胰腺癌的f临床病理特征无关(P>0.05).结论 COX-2蛋白的检测对胰腺癌的诊断及其与胰腺良性肿瘤、慢性胰腺炎的鉴别诊断有帮助.胰腺癌组织COX-2表达不能作为预测患者预后的指标.
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血管生成相关因子在脉络膜黑色素瘤中的表达
背景 血管生成与肿瘤的发生之间有着密切的关系,目前对脉络膜黑色素瘤的发生发展过程与缺氧及血管生成相关因子相互关系的研究尚属少见.目的 研究血管生成相关因子缺氧诱导因子1α(HIF-1α)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、环氧合酶2(COX-2)及血管内皮生长因子(VEGF)在脉络膜黑色素瘤中的表达及其相互之间的关系.方法 收集青岛大学医学院附属医院眼科病理室保存的脉络膜黑色素瘤标本44例和眼睑色素痣石蜡标本16例,应用兔抗人HIF-1α、iNOS、COX-2及VEGF多克隆抗体,采用免疫组织化学SP法测定HIF-1α、iNOS、COX-2及VEGF在脉络膜黑色素瘤组织及眼睑色素痣中的表达并进行比较,评价4种蛋白与脉络膜黑色素瘤临床病例特征的关系,并对4种蛋白在脉络膜黑色素瘤中表达的相互关系进行研究.结果 脉络膜黑色素瘤组织中VEGF、HIF-1α、iNOS、COX-2的阳性表达率均明显高于眼睑色素痣组织,差异均有统计学意义(x2 =6.580、4.105、8.350、13.240,P＜0.05);VEGF蛋白在较大体积肿瘤中的表达明显高于体积较小的肿瘤,差异有统计学意义(x2=9.389,P＜0.05),但VEGF蛋白在不同病理分型及不同浸润深度肿瘤中的表达差异均无统计学意义(x2=1.186、5.398,P＞0.05)；HIF-1α在脉络膜黑色素组织中的表达与肿瘤体积大小、病理分型有关,差异均有统计学意义(x=8.664、6.622,P＜0.05),但其与肿瘤的浸润深度无关,差异无统计学意义(x2=4.914,P＞0.05)；iNOS蛋白的表达与肿瘤体积大小有关(x2=8.609,P＜0.05),但与病理类型及浸润深度无关,差异均无统计学意义(x2=4.789、4.309,P＞0.05)；COX-2蛋白的表达在不同体积的肿瘤中明显不同,差异有统计学意义(x2=7.320,P＜0.05),而COX-2蛋白在不同病理分型及浸润深度的肿瘤组织中的表达量差异均无统计学意义(x2=2.772、2.103,P＞0.05).HIF-1α、iNOS、COX-2的表达量与VEGF表达均呈显著正相关(r=0.943、1.000、0.986,P＜0.05)；COX-2与iNOS表达量之间、HIF-1α与iNOS表达量间及HIF-1α与COX-2的表达量间均呈明显正相关(r=0.986、0.943、0.986,P＜0.05).结论 HIF-1α、iNOS、COX-2在脉络膜黑色素瘤中表达升高,其表达水平与VEGF相关,提示3种基因对脉络膜黑色素瘤的血管生成均有一定作用,可通过该作用促进肿瘤组织的生长.
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NS-398对人胃癌裸鼠移植瘤血管生成的影响
目的:探讨NS-398对裸鼠胃癌移植瘤血管生成的影响.方法:12只裸鼠随机分为2组,以人胃癌细胞株SGC7901建立荷瘤裸鼠动物模型.治疗组于接种第2 d开始给予10 mg/kg NS-398腹腔注射,隔d给药;对照组隔d腹腔注射同体积PBS,连续20 d,观察抑瘤率,应用免疫组织化学技术检测2组肿瘤组织环氧合酶-2(COX-2)、VEGF表达及微血管密度(MVD).结果:NS-398抑瘤率达88.7%,COX-2、VEGF及MVD在治疗组分别为2.6±0.8,2.3±1.2和21.2±4.8,显著低于对照组的5.0±0.6,5.8±0.4和41.3±2.6(P均＜0.05).结论:NS-398可能通过抑制COX-2、减少VEGF的表达抑制裸鼠胃癌移植瘤血管生成.
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结直肠癌组织中半胱氨酸61、环氧合酶2表达的意义
目的 研究结直肠癌组织中富含半胱氨酸61( Cyr61)蛋白和环氧合酶2(Cox-2)蛋白的表达与临床病理学特征的关系.方法 应用免疫组织化学方法检测70例结直肠癌组织以及20例结直肠癌癌旁组织中Cyr61 、Cox-2表达.结果 Cyr61 、Cox-2表达在结直肠癌组织中均显著高于癌旁正常结直肠组织(P＜0.05)；结直肠癌组织中Cyr61、Cox-2表达与分化程度、浸润深度、淋巴结转移、Dukes’分期密切相关(p＜ 0.05);Cyr61、Cox-2表达呈正相关性(P＜ 0.05).结论 Cyr61 、Cox-2在结直肠癌组织中高表达,两者在结直肠癌的肿瘤生成和进展中起重要作用.
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环氧合酶2及过氧化物酶体增殖物激活受体γ和核因子κB与胃癌关系的研究进展
近几年来,国外诸多研究表明,环氧化酶2(cyclooxygenase-2,COX-2)与肿瘤的发生、发展和转移密切相关.同时有研究显示过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliforator-activated receptot-gamma,PPARγ)与其配体结合后对人类各种肿瘤细胞的增殖、分化和凋亡具有调节作用.
关键词： 胃肿瘤 环氧合酶2 过氧化物酶体增殖物激活受体γ 核因子κB -
靶向性蛋白激酶B1和环氧合酶-2 shRNA腺病毒载体的构建和在人胃癌细胞的表达
目的 构建靶向性蛋白激酶B1(PKB1/Akt1)和环氧合酶-2(COX-2)的短发夹RNA(shRNA)腺病毒载体,观察其在人胃癌细胞株SGC-7901中的表达.方法 利用同源重组技术构建重组腺病毒载体pGSadeno-Akt1+COX-2(pGSadeno-A+C),经酶切及测序鉴定后转染人胚肾细胞HEK293包装成为重组rAd5-A+C腺病毒,并测定病毒的滴度.体外转染人胃癌细胞株SGC-7901后,Real-time PCR和蛋白印迹分别检测Akt1和COX-2 mRNA和蛋白质的表达.结果 成功构建rAd5-A+C重组腺病毒,测定包装的病毒滴度为1.0×1010pfu/ml.转染组Akt1和COX-2 mRNA表达明显下调,其△Ct值分别是(12.26±0.05)和(5.41±0.09),比rAd5-HK空载组(10.63±0.02)、(3.75±0.08)和对照组(10.57±0.02)、(3.73±0.08)增高(P<0.01),而空载组和对照组比较ΔCt值无明显变化(P>0.05).同样转染组Akt1和COX-2蛋白表达量与空载组和对照组比较分别下调70.5%和63.7%(P<0.01),空载组和对照组比较Akt1和COX-2蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05).结论 靶向性Akt1和COX-2的shRNA腺病毒载体可以特异性抑制Akt1和COX-2的表达,可能成为胃癌靶向性Akt1和COX-2基因治疗的新策略.
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消化道肿瘤环氧合酶-2表达与凋亡抑制蛋白及化疗药敏性的关系
目的 探讨消化道肿瘤环氧合酶(COX)-2表达与凋亡抑制蛋白及体外化疗药敏性的关系.方法 对84例胃癌、大肠癌标本进行噻唑蓝(MTT)比色法体外化疗药物敏感性实验,并进行COX-2、p53、Survivin、bel-2免疫组织化学染色.结果 肿瘤组织COX-2、p53、Survivin、bel-2表达率分别为70.3%、64.3%、89.3%、60.7%;COX-2与Survivin、bcl-2表达呈正相关(r=0.5072、0.3783,均P<0.01).在肿瘤COX-2强表达组,紫杉醇(PTX)、表阿霉素(eADM)、羟基喜树碱(OPT)对肿瘤细胞抑制率明显低于弱表达组(均P<0.05);p53强表达与PTX、顺铂(DDP)对肿瘤细胞的抑制率明显降低有关(均P<0.05);Survivin强表达时,长春新碱(VCR)、DDP对肿瘤细胞抑制率明显降低(均P<0.05);bcl-2强表达时,5-氟尿嘧啶(5-Fu)、VCR、eADM、奥沙利铂(OXA)对肿瘤细胞抑制率明显低于弱表达组(均P<0.05).结论 消化道肿瘤COX-2通过抑制肿瘤细胞凋亡参与了肿瘤的多药耐药.
