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冰片对中医眼科外用药促渗作用的研究
目的:观察冰片在眼科外用药应用中的促渗作用.方法:以兔眼为研究对象,用荧光分光光度计测量冰片对病毒一号滴眼液中秦皮甲素浓度变化情况进行分析.结果:冰片可以促进病毒一号滴眼液中秦皮甲素滴眼液透过角膜进入前房.结论:冰片对眼科外用药具有促渗作用.
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冠心病患者红细胞变形性和全血粘弹性的变化
一、对象和方法1.对象:选择1998年7月至2000年11月在我科的住院患者101例,分组进行对比分析.(1)冠心病(CHD)组:按1979年WHO/ISFC的冠心病诊断标准,经选择性冠状动脉(冠脉)造影确诊为CHD患者66例,其中冠脉单支局限病变(CHD-1组)34例,男18例,女16例,年龄61～79岁,平均(69.5±4.5)岁;2支、3支或弥漫性病变(CHD-2组)32例,男18例,女14例,年龄64～75岁,平均(69.9±2.5)岁.(2)对照组:选择同样有CHD易患因素并感心前区不适患者35例,经冠脉造影证实冠脉无异常,并经常规检查排除脑、心、肾和其他系统器质性疾病;男22例,女13例,年龄为62～75岁,平均(68.5±2.7)岁.2.方法:(1)血脂测定:按常规方法测定血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG);(2)红细胞膜微粘度()测定:配置DPH(1.6-二苯基1,3,5己三烯,美国Sigma公司产品)应用液,并加入红细胞膜溶液,于荧光分光光度计上测量荧光偏振度值,并计算红细胞膜[=2/(0.46-)];(3)钠泵活性(SPA)测定:以单位重量膜蛋白在单位时间里产生无机磷的量(μmol P*mg-1Pro*h-1)表示,无机磷含量以硫酸亚铁钼蓝比色法测定;(4)膜收缩蛋白(SP)相对含量测定:采用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定;(5)红细胞变形参数(α)测定[1]:采用BL88-C型激光衍射仪测定切应力(τ)为20 Pa(1 dyn/cm2=0.1 Pa)时红细胞所产生的衍射图上第1暗环的长径(b)、短径(a),由下列各式计算变形指数及相关参数(α0为未加载切应力时红细胞衍射图上第1暗环的直径):α1=b/α0(表示红细胞变形指数)、α2=α0/α(反映红细胞膜稳定性)、α3=b/α(表示红细胞变形指数)、α4=√b/α(反映红细胞膜稳定性);(6)全血粘弹性测定:采用Low Shear-30流变仪(美国Contraves公司生产),测得各组在不同角频率(ω)下的粘弹性参数,即复粘度的动态粘度(dynamic viscosity,η')和弹性模量(dynamic modulus,G').
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荧光分光光度计液相快速观测发夹探针与katG基因463突变密码子的杂交荧光
目的 针对结核分枝杆菌耐异烟肼katG基因463密码子设计发夹DNA探针,尝试运用荧光分光光度计直接观测液相中发夹DNA探针与katG基因463密码子扩增产物杂交后的荧光信号,从而检出该位点突变.方法 运用软件Beacon designer设计katG基因包含463密码子的发夹DNA探针,应用荧光分光光度计检测扩增片段与探针杂交后荧光信号,同时对扩增产物测序并作比较.结果 通过荧光分光光度计观测到结核标准株及耐异烟肼katG基因463密码子PCR产物与发夹DNA探针杂交后荧光信号差异有统计学意义;16株耐异烟肼组与10株H37RV标准株对照组荧光信号强度比较,耐异烟肼组katG基因463密码子突变检出率为34%,测序法突变检出率为37%.结论 应用荧光分光光度计直接观测发夹DNA探针液相杂交荧光具简单、灵敏等优特点;katG基因463密码子突变是结核分枝杆菌耐异烟肼的主要原因之一.
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茎环分子探针液相快速检测结核分枝杆菌katG315codon突变
目的 应用茎环分子探针检测结核分枝杆菌耐异烟肼katG315codon点突变,运用荧光分光光度计直接观测液相中探针与katG315codon扩增产物杂交后的荧光信号,并与测序结果比较以验证该检测方法.方法 运用软件:Beacon designer设计katG基因包含315codon的茎环分子探针,建立其扩增体系及分子信标芯片检测方法;对扩增产物测序并作比较.结果 通过荧光分光光度计观测到结核标准株及耐异烟肼PCR产物与探针杂交后荧光信号差异有统计学意义;16株耐异烟肼组与10株H37RV标准株对照组荧光信号强度比较,耐异烟肼组315codon突变检出率为44%,茎环分子探针检测方法与测序法符合率97.5%.结论 茎环分子探针技术是一种具有高灵敏核酸点突变检测技术;荧光分光光度计液相荧光检测方法与测序法符合率较好.
关键词： 耐异烟肼katG基因 315密码子点突变 茎环分子探针 荧光分光光度计 -
β淀粉样蛋白致PC12细胞毒性的自由基机制
本实验采用体外培养的大鼠嗜铬细胞瘤(PC12)细胞,观察β淀粉样蛋白Aβ25～35作用后细胞中自由基含量的变化,以及抗自由基药物的作用,并探讨自由基机制在培养的PC12细胞死亡中的意义以及抗自由基药物过氧化氢酶(catalase,CAT)的保护作用.方法和结果:将Aβ25～35或CAT加入培养的PC12细胞,24 h后通过MTT法[溴化-3-(4,5-二甲基噻唑基-2)-2,5-二苯基四唑]检测细胞活性,判断Aβ的毒性作用和CAT的保护作用;用激光共聚焦显微镜、KS400图像分析系统及荧光分光光度计直接检测以H2O2为主的自由基的生成.结果显示加药后24 h应用MTT法观察不同浓度Aβ(0.1～40 μmol/L)的毒性作用,发现随着Aβ 25～35浓度的增加,细胞活性下降,IC50大约为20 μm.而应用不同浓度的CAT(100、300、500 U/ml)可以拮抗20 μm Aβ 25～35的毒性,且随着CAT浓度的增加,其保护作用增强.用激光共聚焦显微镜拍照,Aβ组的细胞荧光强度明显高于对照组.用KS400图象分析系统,随机选取若干视野(3～5),检测单个细胞的荧光强度,与选定荧光小球作对比结果显示,Aβ组的细胞平均灰度为21.9±10.7(n=35),对照组细胞平均灰度为6.3±4.2(n=20),而CAT(300 U/ml)组则为13.4±5.5(n=24).Aβ组与对照组及CAT组差异均有显著意义(P<0.01).用荧光分光光度计检测各组的相对荧光强度(%,对照组),结果显示,Aβ组为1.8±0.2(n=6),而CAT(500 U/ml)组0.9±0.4(n=6),t检验示Aβ组与对照组及CAT组差异均有显著意义(P<0.01).
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5-氨基酮戊酸诱导白念珠菌生成原卟啉Ⅸ两种检测方法的比较
目的：对两种测定原卟啉Ⅸ( ProtoporphyrinⅨ, PpⅨ)荧光强度的方法进行比较,探求高效、准确、可靠、快速的检测方法。方法将白念珠菌悬液与5-氨基酮戊酸(5-Aminolevulinic acid,5-ALA)避光孵育。分别利用荧光分光光度计(以下简称荧光法)和共聚焦显微镜(以下简称共聚焦法)下测量PpⅨ荧光强度。结果两种测量方法的统计学比较P<0.05,差异有显著性。共聚焦显微镜操作简单,方便快捷,自带分析软件可以直接算出测值,计算精确,但是测量价格较贵,荧光分光光度计相对操作相对繁琐,但是价格便宜。结论共聚焦显微镜无论从测量的简便性还是从测量的准确性都要优于荧光分光光度计。
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高温作业环境下沥青烟气的测定方法
石油沥青在高温下的逸散物,含有大量的多环芳烃.现已研究表明,沥青烟气是一种很强的致癌物.而沥青烟气的测定多用经典的荧光目视比色法,该方法随然简单,但由于吸收液环己烷的沸点低(80.0～81.5℃),随着采样的进行而挥发,不利于样品的采集;目视比色测定时,又因加入的醋酸及产生的荧光对分析者的眼睛刺激较大,所以很难得到准确的数据;高效液相色谱法虽然灵敏度高,准确,但仪器昂贵,不易普及及推广.
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磁片贴敷穴位对家兔血清过氧化脂质水平的影响
过氧化脂质(LPO)是在自由基作用下氧化和过氧化作用的产物，它的产生和积累对机体有着毒害作用，加速了机体的老化过程。本实验根据磁场的生物效应，研究了磁场穴位刺激对机体血清LPO水平的影响。材料和方法 日本纯种大耳兔21只，由本校动物部提供，平均体重(3.0～3.5)kg。随机分为实验组11只，对照组10只。实验组进行磁场穴位刺激，每天1次，30 min。在每只家兔的腹部(相当于中脘、下脘、天枢、关元穴)呈十字形贴磁5片，在背部脊柱两侧凹陷处(相当于夹脊穴)每排贴磁5片，腹背磁片的N、S极均交叉放置，此外，在膝关节下方(相当足三里穴)各置一直径为5 mm×3 mm 圆柱形磁片。每片磁感应强度为0.2 T，贴磁部去毛，并用胶布包裹固定。6周后，由耳静脉采血，分离血清进行LPO测定，测定方法见文献［1］。测试仪器为日立-3000荧光分光光度计，统计学处理采用t检验。
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大鼠心肌细胞内游离钙的Fura-2荧光测定
Fura-2的化学名为2-[6-双乙酸基-5-(2-双乙酸氨基)-5-甲苯氧乙氧基]-2-苯骈呋喃基-5-恶唑羧酸五钾盐.属于第二代荧光指示剂,是测定细胞内游离钙的重要试剂[1].用Ca2+荧光指示剂Fura-2检测活细胞胞浆中[Ca2+]i是十几年来兴起的一门技术,已广泛应用于细胞生理、病理的研究,已有文献报道应用于测定细胞[2]、组织块[3]等内的游离钙.应用本院的970CRT荧光分光光度计,根据本院的实验条件,本研究建立了用Fura-2双波长荧光法测定心肌细胞内游离钙的方法.
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复方益肾胶囊对糖尿病肾病大鼠血清AGES表达影响的实验研究
1 实验材料复方益肾胶囊:哈尔滨医科大学大庆校区药理教研室提供.链脲佐菌素(Strptoxotocin,STZ):美国Sigma公司.58只清洁级雄性Wistar大鼠体重200-230g,由哈尔滨医科大学大庆校区提供.One Touchll型强生血糖仪,岛津RF-5300型荧光分光光度计,全自动生化分析仪.
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电项针对睡眠剥夺大鼠脑干5-HT,5-HIAA,NE含量的影响
目的:通过电项针干预睡眠剥夺大鼠的实验研究探讨电项针对失眠影响机制.方法:将大鼠随机分为空白组、模型组、电项针组、甜梦胶囊组,除空白组外,其余组通过腹腔注射PCPA复制睡眠剥夺大鼠模型.通过荧光分光光度计观察大鼠脑中5 - HT、5- HIAA、NE含量的变化.结果:荧光分光光度计法证实,睡眠剥夺后,电项针可以提高脑干网状组织内5 - HT、5- HIAA的含量,降低NE的含量,与模型组比较有显著差异(P＜0.01),甜梦胶囊组NE的含量降低,同模型组相比有显著性差异(P＜0.01),与电项针组比较无显著性差异(P＞0.05).甜梦胶囊组5- HT、5- HIAA的含量降低,同模型组相比无显著性差异(P＞0.05),与电项针比较有显著性差异(P＜0.05).结论:电项针可以通过恢复5 - HT通路与NE通路之间的相互平衡和制约,进而恢复正常的睡眠觉醒节律,从而纠正失眠.
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甲基苯丙胺中毒大鼠相关脑区多巴胺能神经毒性研究
目的:探讨MA中毒多巴胺能神经毒性的损伤机制.方法:将Wistar大鼠40只,随机分成对照组10只和实验组30只(实验组分成三个亚组,分为末次给药后1天组、4天组和7天组,n=10).实验组给予20mg/kg的MA腹腔注射,对照组给予同样剂量的生理盐水,每天注射一次,注射时间为20:00,连续注射4天.分别于末次给药后1天,7天,14天处死实验大鼠,用免疫组织化学染色法(S-P法)和荧光分光光度计法检测大鼠中脑黑质致密区(SNC)、中脑腹侧被盖区(VTA)、前额叶皮质(PFC)以及纹状体(CPu)四个脑区的多巴胺神经元细胞的形态和数量的变化,对神经纤维进行灰度值分析.结果:1、黑质致密区和腹侧被盖区TH 阳性细胞图像分析结果与细胞计数分析结果一致:与时照组相比,各实验组TH免疫反应阳性降低,差异具显著性(P＜0.05),d1组开始降低(P＜0.05),d7组达到低谷(P＜0.01),d14天组黑质致密区和腹侧被盖区TH免疫反应阳性有不同程度的恢复(P＜0.05).2、纹状体和前额叶皮质TH阳性纤维图像定量分析结果:各实验组TH免疫反应阳性均减低(P＜0.05),d7组阳性反应弱(P＜0.01),d14组仍未恢复(P＜0.05).3、黑质致密区、腹侧被盖区、纹状体及前额叶皮质荧光分光光度计检测DA递质含量结果:与上述免疫组化结果基本一致.结论:1、大鼠各脑区TH阳性表达和DA含量,均出现不同程度的减低.2、MA中毒大鼠各脑区DA递质含量的变化与TH的变化结果基本一致.
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vMIP-II对细胞表面趋化因子受体CXCR4内化及调变的研究
研究利用激光共聚焦显微镜和流式细胞仪分别定性、定量检测CXCR4的内化,观察vMIP-II对细胞表面趋化因子受体CXCR4内化的影响,用荧光分光光度计连续动态检测vMIP-II对细胞内钙离子浓度的影响,以阐明vMIP-II抗HIV/AIDS的作用机制.结果表明100 ng/ml vMIP-II在给药后的初30 min能使细胞表面受体CXCR4内化达到大值,内化率约为75%,且内化到细胞内的CXCR4并不能再循环到细胞表面.vMIP-II能诱导瞬间的高钙离子内流及细胞内钙离子库中钙离子的释放,证明了vMIP-II能引起细胞表面受体CXCR4的内化,内化的受体不再循环到细胞表面.
关键词： 病毒巨噬细胞炎症蛋白II 内化 激光扫描共聚焦显微镜 流式细胞仪 荧光分光光度计 -
新型荧光薄层层析-分光光度计测定细胞内GCS酶活性
目的:通过建立一种新型的荧光薄层层析.分光光度法,精确而直接测定细胞内葡萄糖神经酰胺合酶GCS的活性,以评价其对耐药性肿瘤细胞的作用.方法:加入不同剂量的含荧光的NBD-C6-Ceramide,运用荧光薄层层析-分光光度法测定不同反应时间下人乳腺癌细胞MCF-7-AdrR中,葡萄糖神经酰胺(glucosylxeramide,GlcCer)和神经酰胺(ceramide,Cer)含量,计算两者的比值大小反映GCS酶活性情况,放射性酶学测定作为对照.Western-blot及免疫荧光分析MCF-7-AdrR及其转化细胞(MCF-7-adrR/GCS及MCF-7-adrR/asGCS)中GCS与P-糖蛋白(P-gp)的蛋白表达关系.结果:研究表明5 μmol/L NBD-Cer是细胞内神经酰胺糖基化作用的佳浓度.糖基化作用随时问延长而增强,此方法精确测定MCF-7-AdrR各细胞及其它耐药型细胞中的GCS酶活性,MCF-7-adrR与MCF-7-adrR/GCS较药物敏感组MCF-7的糖基化作用(GC/Cer)明显增强(P均＜0.01),而在MCF-7-adrR/asGCS中糖基化作用急剧下降(P＜0.01).放射性酶学测定结果与之相符.Western-blot及免疫荧光显示GCS表达与耐药标志物P-gp表达在MCF-7-AdrR各细胞中呈明湿相关.结论:不同于传统的同位素酶学测定,这种新型荧光薄层层析.分光光度法,是测定细胞内神经酰胺糖摹化作用的一种简单易行、重复性好的实验方法,为进一步应用于耐药性肿瘤的体内实验奠定基础.
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大鼠肝微粒体细胞色素P450酶系检测方法学研究
目的:建立大鼠肝微粒体蛋白含量以及肝微粒体细胞色素P450酶系含量与活性测定的紫外和荧光分光光度方法.方法:应用差速离心法提取大鼠肝微粒体,Lowery法测定肝微粒体蛋白浓度,应用紫外和荧光分光光度法测定肝微粒体细胞色素P450酶系含量及活性.结果:牛血清白蛋白标准曲线的线性范围为25～250 mg·L-1,低检测限为 25 mg·L-1,相关系数r为 0.9975;紫外分光光度法测定细胞色素P450和细胞色素b5含量及NADPH-CytC还原酶活性的结果显示方法灵敏;测定氨基比林N-脱甲基酶、红霉素N-脱甲基酶活性的甲醛标准曲线,线性范围为 0.05～0.5 mmol·L-1,低检测限为 0.05 mmol·L-1,相关系数r为 0.9988;测定7-乙氧基香豆素脱烃酶活性的resorufin标准曲线线性范围为1～8 μmol·L-1,低检测限为 1 μmol·L-1,相关系数r为 0.9998.结论:紫外和荧光分光光度方法测定大鼠肝微粒体细胞色素P450酶系中6种酶的含量及活性的灵敏可靠,重复性较好.
关键词： 紫外分光光度计 荧光分光光度计 肝微粒体细胞色素P450 -
南四湖6种鱼类矿物质和氨基酸含量分析
南四湖位于山东省西南部,包括微山湖、昭阳湖、南阳湖、独山湖,水面面积1 209km2,是我国大型浅水营养型湖泊之一.为了解南四湖6种鱼类营养素的含量,更好地指导渔业、食品加工,1999年6～7月对南四湖6种鱼类的矿物质、氨基酸含量进行了分析.1 材料与方法1.1 材料南四湖6种经济鱼类采取由湖边到湖心鱼船选点(以微山湖为主),采集黄颡鱼、鲫鱼、鲤鱼、乌鳢、红鲅鱼、长春鳊,取每种鱼可食部位搅碎混合,按国标<食品卫生检验方法>(理化部分)进行样品处理.1.2 方法仪器为WFX-1F2B型原子吸收分光光度计、日立835-50型高速氨基酸自动分析仪、WFD-9型荧光分光光度计.取同一种鱼类的3份样品进行消化处理,分别测3次,再求其平均值.钙、锌、铁、钾、钠铜、锰、镁用原子吸收分光光度法.氨基酸:木瓜蛋白酶水解法,测定色氨酸含量,其余17种氨基酸用盐酸水解法测定.硒:荧光分光光度法;磷:钼蓝比色法.
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青霉素邻苯二甲醛衍生荧光法测定方法分析
目的 以邻苯二甲醛衍生荧光法对牛奶中苄青霉素残留进行测定为例,对青霉素邻苯二甲醛衍生荧光法测定方法进行分析与探讨.方法 随机选取某品牌的牛奶,准确量取1毫升,加入酸化乙腈5毫升后进行震荡等处理后经衍生反应后配制成样品溶液,与标准溶液共同进行荧光检测,并将检测结果进行比较分析.结果 通过对检测结果进行分析得出,样品溶液水解50分钟后衍生产物的荧光强度趋于稳定;且样品溶液的平均回收率约为89.1%左右,与相关文献报道结果基本一致.结论经试验研究分析结果证实,邻苯二甲醛衍生荧光法能够对青霉素的检测要求得以满足,值得在今后的实验研究中对其予以推广使用.
关键词： 青霉素 邻苯二甲醛衍生荧光法 水解 荧光分光光度计 -
比索洛尔对心力衰竭患者心功能及血淋巴细胞内游离钙浓度的影响
应用超声心动图及荧光分光光度计分别测定40例心力衰竭患者和15例健康人的左室舒缩功能和血淋巴细胞内游离钙浓度([Ca2+]i).其中20例心衰患者在强心、利尿、扩血管等治疗基础上加用比索洛尔5 mg/d,另20例患者仅常规治疗.3周后重复各项检查.结果显示:心衰患者血淋巴细胞内[Ca2+]i显著高于正常对照组.比索洛尔治疗3周后,心功能改善,血淋巴细胞内[Ca2+]i明显降低(P＜0.01);心功能改善程度与[Ca2+]i降幅呈正相关(r=0.695,P＜0.01).
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心肌细胞核钙信号的研究
采用激光扫描共聚焦显微镜、荧光分光光度计和荧光显微镜,观察培养的大鼠心肌细胞和离体细胞核的Ca2+信号变化.结果:培养的心肌细胞内Ca2+荧光分布不均匀,即核的荧光强度显著高于胞浆;β-受体激动剂异丙肾上腺素(10-6mol/L)使核钙浓度[(Ca2+)n]增加程度显著大于胞浆钙浓度[(Ca2+)c],β-受体阻滞剂心得安(10-3mol/L)浓度显著降低细胞核/胞浆游离钙梯度;P物质(10-6mol/L)作用下,[(Ca2+)n]增加2.17倍,而[(Ca2+)c]仅增加91.45%(P<0.05),[(Ca2+)n]/[(Ca2+)c]大幅度上升.心肌细胞经钙泵抑制剂thapsigargin和EGTA刺激后,可见核膜腔存在钙库.正常心肌细胞存在小幅度的钙震荡,分别加入去甲肾上腺素(10-5mol/L)、AngⅡ(10-6mol/L)和ATP(3×10-3mol/L),均使心肌细胞胞浆Ca2+和核Ca2+震荡幅度明显升高(P<0.01),NO-供体硝普钠(10-5mol/L)和KCI(20mmol/L)使钙的周期性震荡消失.IP3和Ryanodine分别使核Ca2+短暂升高1.68倍和1.93倍(P<0.001),而Thapsigargin预处理心肌细胞核,均能显著的阻断IP3和Ryanodine的致核Ca2+升高作用(P<0.05),荧光染色观察可见IP3受体染色主要位于核内膜,而钙泵和ryanodine受体染色主要位于核外膜.结论:心肌细胞核是细胞内的钙库之一,心肌细胞核也存在Ca2+震荡,并受多种因素影响.心肌细胞核膜上存在Ca2+-ATPase、RyR和IP3受体等核Ca2+摄取和释放系统.核Ca2+释放的前提条件是首先存在核Ca2+摄取.
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PCR产物与结核分支杆菌分子信标杂交优化及荧光检测的初步实验研究
目的 建立PCR反应后再加入结核分支杆菌分子信标杂交试验,优化杂交条件.并对分子信标PCR杂交产物荧光信号的观测条件进行摸索.方法 通过对杂交温度、杂交时间以及杂交方式的优化,建立PCR反应后再加入TB分子信标杂交试验.运用荧光分光光度计和荧光显微镜对MB PCR杂交产物荧光信号的观测条件进行摸索.并进行不同荧光-淬灭分子对标记分子信标的观测试验.结果 PCR反应后再加入,TB分子信标杂交试验中水浴、PCR仪、恒温摇床的适杂交温度和适杂时间分别为:55℃,6h;55℃,4h;50℃,7h.阴-阳性效果区分;水浴＞恒温摇床＞PCR仪.荧光分光光度仪检测MB PCR杂交阳性产物、MB PCR杂交阴性产物(茎环结构未打开)、无游离分子信标探针PCR产物(空白对照)三者的荧光光亮度比值为:6.102/0.136/0.003.荧光显微镜观测MB PCR杂交阳性产物、MB PCR杂交阴性产物(茎环结构未打开)荧光强度明显区别.本试验Cy3-BDH组成分子信标荧光-淬灭效率较Cy3-DABCLYE高,FAM-DABCLYE组成分子信标荧光.淬灭效率较FAM-BDH高.结论 建立起结核分支杆菌分子信标荧光芯片的检测技术,包括样本制备、芯片制备、杂交反应以及扫描和图像分析等方法 .并兼顾到各种因素对单侧延长臂分子信标芯片的影响,对反应体系中各条件进行了合理的优化,使所建立的检测体系稳定可靠.
