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多柔比星联合顺铂对宫颈癌Caski细胞株的凋亡诱导作用
目的:体外观察多柔比星(Doxorubicin,ADM)联合顺铂(Cisplatin,CDDP)对宫颈癌Caski细胞株的增殖抑制作用及可能的协同机制.方法:MTT法检测浓度分别为9、4.5、2.25、1.125、0.562 5 μg/ml ADM、CDDP以及两种药物联合对Caski细胞的增殖抑制作用.RT-PCR法检测ADM、CDDP及两种药物联合对Caski细胞Bax和Bcl-2基因表达的影响.结果:MTT法检测显示ADM浓度为0.562 5 μg/ml联合相同浓度的CDDP时,两药联合能明显增强其对Caski细胞的增殖抑制作用,具有协同抑制作用;RT-PCR法检测显示ADM、CDDP联合处理Caski细胞后Bax基因表达明显增高,同时下调Bcl-2基因的表达.结论:合适浓度的ADM和CDDP联合可以增强化疗效果,而且两药物在联合作用下可通过诱导Bcl-2/Bax基因表达量的改变,协同发挥其促凋亡作用,从而增强肿瘤细胞对化疗药物的敏感性.
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蒜素组分二烯丙基三硫(DATS)诱导Hela细胞凋亡及其机制的研究
目的:研究蒜素组分DATS对Hela细胞的诱导凋亡作用及其机制.方法:采用MTT和软琼脂克隆形成实验检测DATS处理后的Hela细胞的增殖情况.流式细胞术检测Hela细胞的凋亡比例和线粒体膜电位下降细胞比例.Western blot技术检测可能的细胞信号传导通路.结果:DATS可以明显抑制Hela细胞增殖,并且诱导凋亡,引起Hela细胞线粒体损伤.线粒体凋亡通路两种重要的蛋白Bax和Bcl-2出现变化.结论:DATS通过线粒体凋亡通路导致Hela细胞凋亡.
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TGF-β1诱导HL-60细胞凋亡及TIEG1,Bcl-2/Bax的表达变化
目的:研究TGF-β1诱导HL-60细胞凋亡后TIEG1及Bcl-2/Bax的表达变化.方法:用不同浓度的TGF-β1处理HL-60细胞,采用MTT法检测细胞生长抑制率.用10.4 ng/ml TGF-β1处理HL-60细胞,以流式细胞仪检测细胞凋亡,以RT-PCR方法检测TIEG1、Bcl-2及Bax的表达.结果:TGF-β1对HL-60细胞具有增殖抑制作用,其抑制效应呈时间及剂量依赖性.10.4 ng/ml TGF-β1增殖抑制作用较为明显.在细胞凋亡过程中,TIEG1、Bax表达呈升高趋势,而Bcl-2呈下降趋势.结论:TGF-β1可以抑制HL-60细胞增殖,并诱导其凋亡,且呈时间、剂量依赖性.在TGF-β1诱导HL-60细胞凋亡的过程中,TIEG1表达逐渐加强,与HL-60细胞凋亡呈负相关.Bcl-2/Bax与TGF-β1诱导HL-60细胞的凋亡相关,且与TIEG1的表达有相关性.
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内皮抑素抑制卵巢癌细胞生长的初步研究
目的:内皮抑素是一种特异性血管内皮生长抑制因子,本研究目的在于探讨人内皮抑素对卵巢癌SKOV3细胞生长的抑制作用及其机制.方法:MTT法观测内皮抑素对SKOV3细胞的生长抑制作用;透射电镜观察内皮抑素处理SKOV3细胞后细胞的凋亡情况,流式细胞仪检测细胞凋亡率及细胞周期;RT-PCR法检测内皮抑素处理SKOV3细胞后凋亡调控基因bcl-2和bax mRNA的表达.结果:内皮抑素具有体外抑制SKOV3细胞增殖的作用,15μg/ml 内皮抑素组的A490值(0.454)明显低于PBS对照组(0.686)(P<0.01);内皮抑素能诱导SKOV3细胞凋亡;内皮抑素对SKOV3细胞中bcl-2和bax的表达无明显改变;结论:人内皮抑素具有抑制SKOV3细胞生长的作用,其机制可能与诱发细胞凋亡相关.
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内皮抑素对宫颈癌细胞生长抑制作用的初步研究
目的:探讨内皮抑素对人宫颈癌Hela细胞生长的抑制作用及其作用机制.方法:用MTT法检测细胞生长;用透射电镜观察细胞凋亡;用免疫细胞化学、RT-PCR及Western blot法检测细胞中bcl-2和bax蛋白及mRNA的表达.结果:内皮抑素抑制:Hela细胞增殖;能诱导.Hela细胞凋亡;而对细胞中bcl-2和bax蛋白及mRNA的表达无明显影响.结论:人内皮抑素具有抑制宫颈癌:Hela细胞生长的作用,其作用机制可能与诱发细胞凋亡相关.
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Endostatin抑制人卵巢癌细胞生长及其在裸鼠皮下移植瘤中的作用
0 引言我们采用人浆液性乳头状囊腺癌SKOV3细胞系及其荷瘤鼠为研究对象,研究Endostatin对其增殖、凋亡的影响及作用机制,为其应用于卵巢癌的临床治疗提供试验依据.
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EPO对早期糖尿病大鼠肾脏的保护作用
目的 观察亚临床剂量EPO对糖尿病大鼠早期肾损伤的影响,并探讨其作用机制.方法 将大鼠随机分为正常对照组(NC)、糖尿病组(DM)及糖尿病EPO干预的两个剂量亚组(DMTA和DMTB).采用链脲佐菌素诱导1型糖尿病大鼠模型,腹腔注射EPO 10周后,测定血糖、血压、血红蛋白、肾功能;光镜及电镜下观察肾组织形态学变化;免疫组化分析肾组织细胞凋亡相关蛋白Bcl-2/Bax及细胞因子VEGF的表达.结果 实验剂量EPO干预后,大鼠肾功能及其形态学指标得到显著改善;Bcl-2/Bax比值及VEGF表达升高;均呈剂量依赖性.血糖、血压、血红蛋白值与对照组相比无明显变化.结论 亚临床剂量EPO可延缓早期糖尿病肾病发展进程,可能与上调Bcl-2/Bax蛋白表达比值,抑制肾脏细胞凋亡有关;在本实验条件下,肾组织VEGF的表达上调未对糖尿病肾病造成不良影响.
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藏红花素抑制谷氨酸盐诱导的视网膜神经节细胞凋亡
目的 研究藏红花素通过影响Ca2+内流对谷氨酸盐诱导的视网膜神经节细胞(RGCs)凋亡的影响及可能机制.方法 分离大鼠RGCs,以0.1、1 mmol/L的谷氨酸盐刺激RGCs 24、48 h,建立RGCs凋亡模型,并用0.1、1.0、3.0 μmol/L浓度梯度藏红花素分别处理.Annexin V-FITC/PI双标检测细胞凋亡率,Fluo-3/AM荧光标记Ca2+检测胞内钙离子浓度,Western blot检测藏红花素对胞内钙离子介导的凋亡信号分子calpain和CaMKⅡ表达的影响.JC-1荧光染色和Western blot分别检测藏红花素对线粒体膜电位和线粒体凋亡相关信号分子Caspase-3、Caspase-9、Bcl-2/Bax表达的影响.结果 0.1 mmol/L谷氨酸盐刺激24 h,RGCs细胞凋亡率与对照组差异无统计学意义(P＞0.05);而当刺激48 h时,RGCs的凋亡率达到(43.050±2.616)％,差异有统计学意义(P＜0.01).高剂量谷氨酸盐(1 mmol/L)刺激24、48 h的RGCs凋亡率为(46.450±1.061)％和(45.500±3.253)％,较对照组均显著增加,差异有统计学意义(P＜0.01).用1 mmol/L谷氨酸盐刺激RGCs 12 h后加入0.1、1.0、3.0μmol/L藏红花素再处理12h,不同浓度藏红花素均可显著抑制细胞凋亡(P＜0.01),且抑制效率具有剂量依赖性.另外,1.0μmol/L藏红花素组的谷氨酸盐诱导的胞外Ca2+内流减少及钙依赖蛋白Calpain1和CaMKⅡ的表达减弱,线粒体膜电位增高,Caspase-3和Caspase-9的表达减少,Bcl-2/Bax表达上调.结论 藏红花素抑制谷氨酸盐诱导的RGCs凋亡,其机制可能与阻止胞外Ca2+内流,抑制钙依赖的凋亡信号通路和线粒体凋亡信号通路有关.
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重离子对人肝癌细胞细胞凋亡及bcl-2/bax基因表达的研究
目的探讨重离子诱导人肝癌细胞SMMC-7721细胞凋亡及bal-2/bax的表达在重离子治癌中的作用.方法应用流式细胞技术、MTT法及免疫组化法,观察重离子诱导人肝癌细胞SMMC-7721细胞凋亡和bal-2/bax表达的情况,并应用AO/BE荧光染色,在荧光显微镜下,观察各组织细胞凋亡的形态学变化.结果经MTT比色法测定细胞增殖能力,可见随辐射剂量的增加,细胞存活率逐渐降低.流式细胞仪检测重离子对SMMC-7721细胞的DNA含量变化,结果显示2.0、3.0 Gy组的SMMC-7721细胞在G2/M期所占细胞比率较对照组及1.0、1.5Gy组增高(P＜0.01).免疫组化法观察随辐射剂量的增加,bax的表达显著上调,而bcl-2的表达则受抑制.结论重离子能在体外诱导SMMC-7721细胞凋亡,且具有剂量依赖性;重离子在一定剂量时,使细胞增殖能力降低;重离子能诱导SMMC-7721细胞bax蛋白表达上调,而bcl-2表达降低,从而诱导细胞凋亡.
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间接免疫荧光法和原位杂交法检测急性白血病中Bcl-2和Bcl-2/Bax表达的对比研究
目的:比较两种不同方法检测急性白血病(AL)患者Bcl-2和Bcl-2/Bax表达情况.方法:采用链亲和素-胶体金原位杂交法(ISH-SAG)和间接免疫荧光法对57例AL患者的Bcl-2和Bcl-2/Bax进行检测.结果:(1) ISH-SAG法中,完全缓解(CR)组Bcl-2细胞表达率高于间接免疫荧光法,且差异有统计学意义(P<0.05).(2) Bcl-2及Bcl-2/Bax检测均显示ISH-SAG法的特异度、准确度、阳性预测值、阴性预测值、阳性似然比、阴性似然比优于间接免疫荧光法;Bcl-2/Bax检测也显示ISH-SAG法较间接免疫荧光法高.(3)ISH-SAG法中Bcl-2细胞表达率和积分值的阳性检出率无差别.结论:(1) ISH-SAG法测定Bcl-2及Bcl-2/Bax优于间接免疫荧光法.(2)ISH-SAG法中Bcl-2积分值临床应用价值不大.
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香叶木苷对人肝癌HepG2细胞凋亡及Bcl-2/Bax基因表达的影响
目的 研究香叶木苷对人肝癌HepG2细胞增殖抑制及诱导凋亡的作用,并探讨其相关分子机制.方法 将HepG2细胞分为对照组和香叶木苷组,香叶木苷组分别加入终质量浓度为1、5、25 μg/mL的香叶木苷DMSO溶液,对照组加入等体积的DMSO.药物处理24 h后,台盼蓝染色及Live/Dead染色检测香叶木苷对HepG2细胞活性的影响;CCK-8及EdU染色检测香叶木苷对HepG2细胞增殖的影响;TUNEL染色检测香叶木苷对HepG2细胞凋亡的影响;实时荧光定量PCR (qRT-PCR)及Western blotting法检测香叶木苷对Bcl-2、Bax mRNA和蛋白水平的影响.结果 与对照组比较,香叶木苷降低HepG2细胞活力、抑制细胞增殖,5、25 μg/mL组差异显著(P＜0.05、0.01、0.001);促进HepG2细胞凋亡,各浓度组均差异显著(P＜0.01、0.001),且均呈剂量相关性.经5μg/mL香叶木苷处理后,HepG2细胞中抗凋亡蛋白Bcl-2的mRNA水平显著降低(P＜0.001),而促凋亡蛋白Bax的mRNA水平显著升高(P＜0.001),Bcl-2/Bax蛋白水平显著降低(P＜0.001).结论 香叶木苷抑制HepG2细胞活力和增殖、促进凋亡,作用机制与调控Bcl-2/Bax表达有关.
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Bcl-2/Bax蛋白表达对皮瓣重建兔阴囊生精细胞凋亡的影响
目的:探讨皮瓣重建兔阴囊生精细胞的凋亡与Bcl-2/Bax蛋白表达的关系.方法:将12只育龄期健康雄性新西兰大白兔随机分成实验组和对照组,每组6只.采用温度计埋藏法测量实验组皮瓣重建前阴囊内睾丸表面温度,手术切除实验组动物阴囊,建立皮瓣重建阴囊动物模型,对照组不作处理.动物模型建立后第8周末,实验组动物测量睾丸表面温度后行睾丸活检:对照组直接进行睾丸活检.采用原位末端标记(TUNEL)法检测睾丸生精细胞凋亡指数,免疫组织化学法结合图象分析仪检测睾丸生精细胞Bcl-2/Bax蛋白的表达.结果:实验组模型建立前睾丸表面温度为36.0±0.3℃,模型建立后第8周末睾丸表面温度为38.1±0.6℃(P＜0.05).模型建立后第8周末实验组睾丸生精小管中生精细胞的凋亡指数(AI)为71.85±2.69％,对照组AI为7.73±4.95％(P＜0.05).手术使Bax表达显著升高(P＜0.05),Bcl-2表达显著降低(P＜0.05)；凋亡细胞主要为初级精母细胞和圆形精子细胞.结论:皮瓣重建兔阴囊后睾丸局部温度升高,诱导睾丸生精细胞凋亡增加；生精细胞凋亡增加与Bcl-2基因表达降低、Bax基因表达升高密切相关.细胞内Bcl-2/Bax比值是影响生精细胞凋亡的重要因素之一.
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氯化铈单独及与射线联合作用对K562细胞凋亡的影响及其机制研究
背景与目的:探讨氯化铈(CeCl3)单独及与60Co γ射线联合作用对K562细胞凋亡的影响及其可能机制.材料与方法:以K562细胞为研究对象,分为对照组、CeCl3组、60Co γ射线组及CeCl3与射线联合作用组,观察CeCl,单独及与射线联合作用对细胞凋亡的影响.采用流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期的变化,应用Western blot检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Ba][的表达情况.结果:与对照组相比较,CeCl3单独作用26 h、γ射线及CeCl3与γ射线联合作用均可以显著诱导K562细胞凋亡(P<0.05),γ射线、CeCl3单独作用组及CeCl3与γ射线联合可引起K562细胞S期细胞比例较对照组明显减少(P<0.05或P<0.01);同时γ射线组及CeCl3与γ射线联合组的G2/M期细胞较对照组明显阻滞(P均<0.01);CeCl3组、γ射线组及CeCl3与γ射线联合组的Bel-2/Bax比值较正常对照组降低.结论:CeCl3单独及与γ射线联合作用可以诱导K562肿瘤细胞凋亡,其诱导凋亡机制主要是通过线粒体途径.联合组的凋亡可能还与细胞周期阻滞有关.
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大鼠视神经横断伤后视网膜形态学改变及Bcl-2/Bax表达
目的 观察大鼠视神经横断伤后,视网膜细胞(RGCs)形态学变化、Bcl-2/Bax蛋白不同时间的表达变化,并探讨其与视神经损伤经过时间的关系.方法 采用大鼠球后视神经横断伤动物模型,用Bcl-2和Bax免疫组织化学和HE染色方法 观察伤后不同时间RGCs的动态变化.应用图像分析技术,对Bcl-2及Bax免疫反应阳性细胞进行统计学分析.结果 视神经横断伤后RGCs数目严重下降,2周内RGCs快速减少.2周以后缓慢减少:伤后Bcl-2、Bax表达随时间不同程度的增加,Bax对损伤反应较Bcl-2稍晚,两者表达均呈现先升后降的趋势,并维持一定的时间.Bcl-2/Bax蛋白表达比率与RGCs存活数目有一定的相关性.结论 视神经横断伤后Bcl-2和Bax的表达在伤后不同时间呈现一定的规律性变化,可为损伤时间的推断提供一定依据.
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初治急性白血病Bcl-2和Bax表达的研究
[目的]研究初治急性白血病(AL)患者预后与Bcl-2和Bax的关系,提高初发AL的早期完全缓解(CR)率.[方法]用流式细胞仪检测85例初治AL患者骨髓或外周血白血病细胞Bcl-2和Bax的阳性率,并计算Bcl-2/Bax的比值.[结果]在初发AL中,不管是非难治组还是难治组中Bcl-2的表达两者相比差异无统计学意义(P＞0.05);非难治组Bax明显高于难治组(P＜0.001),且难治组Bcl-2/Bax比值均＞1.0.[结论]初治AL的预后与Bcl-2的表达无明显相关,而与Bax的表达有明显相关性,Bcl-2/Bax比值是判断AL预后的一项敏感指标.
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化浊清脑合剂对血管性痴呆模型大鼠海马CA1区bcl-2、Bax基因表达的影响
以高脂饮食+缺血再灌注诱发血管性痴呆大鼠模型,运用免疫组织化学方法观察海马CA1区bcl-2、Bax基因表达情况,并以化浊清脑合剂进行干预.结果发现模型大鼠海马CA1区bcl-2、Bax基因表达增强,Bax尤为明显,bcl-2/Bax比值变小,化浊清脑合剂可以逆转这种改变.表明化浊清脑合剂可以抑制模型大鼠海马神经细胞凋亡基因Bax的表达,从而改善血管性痴呆大鼠的学习记忆能力.
