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β-细辛醚对缺血/再灌注损伤心肌细胞的保护作用
目的 观察β-细辛醚对缺血/再灌注损伤(MI/RI)心肌细胞的保护作用.方法 体外培养原代乳鼠心肌细胞,采用连二亚硫酸钠(Na2S204)诱导心肌细胞MI/RI,测定细胞存活率(MTT法)和细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)的含量.结果 在MI/RI模型中,β-细辛醚能显著提高细胞存活率,明显降低培养液中LDH、CK的含量.结论 β-细辛醚对MI/RI心肌细胞具有显著的保护作用.
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清心开窍方含药脑脊液对连二亚硫酸钠所致PC12细胞损伤的保护机制研究
目的:从细胞水平研究清心开窍方含药脑脊液对连二亚硫酸钠(sodium dithionite,Na2S2O4)损伤的PC12细胞的保护作用,为该方剂的临床应用提供依据.方法:SD大鼠灌胃给予清心开窍方水煎液(7.9 g· kg-1),每12h ig1次,共7次,制备清心开窍方含药脑脊液.采用PC12细胞和终浓度8 mmol·L-1的Na2S2O4共培养,造成神经细胞损伤模型.以尼莫地平(1×107 mol·L-1)为阳性对照组,MTr法检测清心开窍方含药脑脊液对PC12细胞活性的影响,RT-PCR方法检测Bax,Bcl-2,Caspase-3 mRNA表达水平.结果:清心开窍方含药脑脊液组PC12细胞活性明显高于模型组,Bax,Caspase-3 mRNA表达水平降低,Bcl-2 mRNA表达增高,与模型组比较差异显著(P ＜0.05,P＜0.01).结论:清心开窍方对Na2S2O4损伤的PC12细胞有明显的保护作用.
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应用连二亚硫酸钠判断百草枯中毒的程度和预后
目的 应用连二亚硫酸钠显色法判断百草枯中毒的程度和预后.方法 将不同浓度的百草枯标准品与过量连二亚硫酸钠在碱性条件下反应,建立百草枯检测标准比色卡和标准曲线.应用连二亚硫酸钠显色法前瞻性检测浙江大学医学院附属第一医院2008年1月至2009年5月间收治的22例百草枯中毒患者血、尿液百草枯浓度,回顾性分析了患者就诊即刻血、尿百草枯浓度与患者预后的相关性.结果22例百草枯中毒患者经血液灌流、血浆置换和血液滤过治疗后随访3月以上,存活6例(27.3%).6例存活者就诊即刻百草枯半定量检测显示为极浅(3例)或浅(3例),16例死亡患者就诊即刻百草枯半定量检测显示为浅(1例)、中(2例)、深(2例)、极深(11例).6例存活患者与16例死亡患者就诊即刻尿百草枯质量浓度分别为(1.95±1.76)mg/L和(53.4±45.9)mg/L,P＜0.01.6例存活患者和13例死亡患者就诊即刻血清百草枯质量浓度分别为(1.70±1.39)ng/L和(29.5±22.1)mg/L,P＜0.01.22例百草枯中毒患者存活状况与就诊即刻尿百草枯半定量、定量检测结果 及血清百草枯质量浓度均显著相关(r_s分别为-0.804、-0.772,和-0.593,P＜0.01).结论 应用连二亚硫酸钠可迅速检测患者血、尿百草枯质量浓度,有助于了解患者中毒程度和判断预后.
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MCI-186对PC12细胞缺血性损伤的保护作用
目的:研究MCI-186对PC12细胞缺血损伤的保护作用.方法:以氰化钠(NaCN)合并培养基质缺糖以及连二亚硫酸钠(Na2S2O4)合并培养基质缺糖造成PC12细胞缺血性损伤模型,观察活体细胞的形态,并采用MTT比色法测定PC12细胞存活率.结果:10-5mol·L-1MCI-186可改善缺血引起的PC12细胞形态学变化,提高细胞存活率,对2种模型造成的缺血性损伤的抑制率分别为29 5%及14.3%.结论:MCI-186对NaCN及Na2S2O4造成的PC12细胞缺血性损伤有一定的保护作用.
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体外筛选川芎治疗冠心病的有效成分的提取纯化工艺研究
目的:通过体外筛选方法,优选川芎治疗冠心病的有效成分的提取纯化工艺.方法:培养原代乳鼠心肌细胞,利用连二亚硫酸钠(Na2S2O4)缺氧1 h 复氧1 h,损伤心肌细胞制备心肌细胞缺氧-复氧损伤模型来模拟体内缺血再灌注损伤,通过体外筛选方法,优选出川芎治疗冠心病的有效成分的佳提取和纯化工艺.结果:优选出川芎的佳提取工艺为使用6 倍量的水,提取2 次,每次1 h;其纯化工艺为使用15 ml HPD-300 树脂,取9 BV 的0.5 g/ml 的川芎提取液上样,以5 BV 的50%醇洗脱.结论:通过体外筛选的提取纯化工艺可信度高,为开发研究心脑血管疾病的药物提供了依据.
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当归黄芪超滤膜提取物预处理对乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤保护作用的研究
目的 探讨当归黄芪超滤膜提取物预处理对培养乳鼠心肌细胞缺g/复氧损伤和氧化损伤的保护作用.方法 体外培养原代乳鼠心肌细胞,不同分子量及剂量当归黄芪超滤膜提取物预处理24 h后,采用连二亚硫酸钠(Na<,2>S<,2>O<,4>)诱导心肌细胞缺氧/复氧损伤模型,测定细胞存活率(MTT法)、细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)释放量、细胞内超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量.结果 在缺氧/复氧损伤模型和氧化损伤模型中,当归红芪超滤膜提取物预处理明显提高细胞存活率,增加胞内SOD活性,降低培养液中LDH释放量和胞内MDA含量.结论 当归红芪超滤膜提取物预处理对缺氧/复氧损伤以及氧化损伤心肌细胞都具有明显的保护作用,其可能与防止氧自由基的产生或抑制氧自由基对心肌细胞的损伤有关.
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类叶升麻苷对缺糖缺氧诱导PC12细胞损伤的保护作用
目的 观察类叶升麻苷对连二亚硫酸钠致PC12细胞缺糖缺氧损伤的保护作用.方法 以1 mmol/L连二亚硫酸钠诱导PC12细胞建立缺糖缺氧损伤模型,然后以0.1、1、10、100 μmol/L的类叶升麻苷拮抗其作用.倒置显微镜观察PC12细胞形态学变化,MTT比色法测定细胞存活率,化学比色法测定细胞内乙酰胆碱(Ach)水平、乙酰胆碱转移酶(ChAT)及乙酰胆碱酯酶(TChE)活性.结果 采用缺糖缺氧损伤PC12细胞后,Ach水平、ChAT活力均降低;与不同浓度的类叶升麻苷(0.1、1、10、100 μmol/L)共孵育24 h后,各类叶升麻苷给药组均可提高Ach水平及ChAT活力,而TChE活力无明显变化.结论 类叶升麻苷对连二亚硫酸钠联合无糖培养液造成PC12细胞缺糖缺氧损伤具有显著的保护作用,其机制可能与提高ChAT活性进而增加Ach水平有关.
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白花前胡丙素对实验性心肌缺血损伤的影响
目的:观察白花前胡丙素对小鼠耐缺氧能力的影响以及对连二亚硫酸钠(Na2S2O4)和过氧化氢(H2O2)所致幼鼠心肌细胞损伤的保护作用.方法:采用异丙肾上腺素制备低氧模型,记录小鼠缺氧条件下的存活时间;应用原代培养的乳鼠心肌细胞,用Na2S2O4和H2O2制备心肌缺血性损伤模型,分别测定各组心肌细胞的存活率(MTT法)、乳酸脱氢酶(LDH)和超氧化物歧化酶(SOD)含量.结果:白花前胡丙素(10,20 mg·kg-1)明显延长异丙肾上腺素所致小鼠缺氧条件下存活时间(P＜0.01);白花前胡丙素(20,40,80 mg·L-1)降低细胞死亡率,显著抑制H2O2和Na2S2O4损伤引起的心肌细胞LDH释放,并提高细胞中SOD浓度(P＜0.05,P＜0.01);对正常生长条件下的心肌细胞无明显影响(P＞0.05).结论:白花前胡丙素对缺氧小鼠及缺氧心肌细胞有明显的保护作用,这可能与其抑制脂质过氧化反应有关.
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淫羊藿苷预适应对乳鼠心肌细胞的保护作用
目的:探讨淫羊藿苷预适应对培养乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤和氧化损伤的作用及其机制.方法:体外培养原代乳鼠心肌细胞,淫羊藿苷预适应24 h 后,采用连二亚硫酸钠(Na2S2O4)诱导心肌细胞缺氧/复氧损伤和过氧化氢(H2O2)诱导氧化损伤模型,测定细胞存活率(MTT法)、细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)释放量、细胞内超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量.结果:在缺氧/复氧损伤模型和氧化损伤模型中,淫羊藿苷预适应明显提高细胞存活率,增加胞内SOD活性,降低培养液中LDH释放量和胞内MDA含量.结论:淫羊藿苷预适应对缺氧/复氧损伤以及氧化损伤心肌细胞都具有明显的保护作用,可能与其抑制脂质过氧化作用有关.
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米帕明对大鼠皮层神经细胞缺血性损伤的保护作用
目的:研究米帕明(Imi)对培养大鼠神经细胞缺血和谷氨酸(Glu)损伤的保护作用.方法:分离培养 15～18 d胎龄的大鼠神经细胞,用连二亚硫酸钠消除培养基中的氧,合并培养基缺糖模拟细胞缺血性损伤;加入Glu模拟兴奋毒性损伤,测定乳酸脱氢酶、一氧化氮、丙二醛和超氧化物歧化酶的含量变化,观察缺血和Glu对神经细胞的损伤及Imi的保护作用.结果:缺血及Glu引起神经细胞明显损伤性变化,死亡率升高,培养上清液中乳酸脱氢酶、一氧化氮含量升高,细胞匀浆中丙二醛生成增加,超氧化物歧化酶含量明显减少.Imi 10-8～10-6 mol*L-1 能不同程度地减轻上述损伤性变化.结论:Imi对神经细胞缺血性损伤有保护作用,机制可能与抗脂质过氧化及钙拮抗作用有关.
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对羟基苯甲醛对脑缺血/再灌注损伤的保护作用研究
目的 探讨天麻酚性成分4-HBd对脑缺血/再灌注损伤的保护作用及机制.方法 复制大鼠脑缺血/再灌注损伤模型,各组动物脑缺血2 h,再灌注24 h,以神经病学评分、脑梗死体积评价4-HBd对脑缺血/再灌注损伤的保护作用;化学法(连二亚硫酸钠)复制原代皮层神经元OGD/Rep损伤模型,检测细胞存活率、MDA含量、SOD活性、NO释放量以及Bax、Bcl-2、caspase-3蛋白的表达,探讨其脑保护作用的可能机制.结果 4-HBd可降低MCAO/R模型大鼠的神经病学评分(P<0.05)、脑梗死体积(P<0.01),提高OGD/Rep损伤原代皮层神经元的细胞存活率(P<0.05)、SOD的活性(P<0.05),降低模型细胞MDA的含量(P<0.05)、NO的释放量(P<0.05),并能下调模型细胞Bax的表达水平(P<0.05)、上调Bcl-2的表达水平(P<0.05),下调Bax/Bcl-2的比值(P<0.05),终下调caspase-3的表达水平(P<0.05).结论 4-HBd对脑缺血/再灌注损伤有保护作用,其机制可能与提高SOD活性、降低MDA含量、减少NO释放、下调Bax蛋白表达、上调Bcl-2蛋白表达、下调caspase-3蛋白表达,进而对抗神经细胞凋亡有关.
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瓜子金皂苷己对连二亚硫酸钠致氧糖剥夺/复供诱导PC12细胞凋亡的抑制作用
目的 观察瓜子金皂苷己(polygalasaponin F,PGSF)对氧糖剥夺/复供(oxygen-glucose deprivation and reperfusion,OGD/R) 所诱导的PC12细胞凋亡的作用及其机制.方法 以连二亚硫酸钠合并无糖Earle's液造成氧糖剥夺,继而恢复为完全培养基以建立体外OGD/R模型,以Hoechst33342 / PI双染及流式细胞术观察细胞受损和凋亡情况;以JC-1荧光染色法测定细胞线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential,MMP);以Western blot法检测凋亡相关蛋白的表达.结果 PGSF可明显改善细胞形态并降低细胞受损和凋亡百分率,抑制MMP水平的降低,增加Bcl-2/Bax表达比值.结论 PGSF对OGD/R诱导的PC12细胞凋亡具有明显抑制作用,机制与其调节Bcl-2和Bax的表达及稳定MMP有关.
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大蒜多糖对乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用
大蒜(Garlic)为百合科葱属多年生草本植物,现代医学研究证明[1]:大蒜具有降血脂、防治冠心病、消炎杀菌、抗肿瘤、保护肝脏、降血压、降血脂和延缓衰老等作用,其作用可能与大蒜多糖(Garlic polysaccharide,GP)有关.GP约占大蒜干物质总量的80％以上,是一种新的食品资源[2].
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连二亚硫酸钠法尿百草枯半定量检测在急性百草枯中毒患者血液净化治疗中的应用
目的：探讨应用连二亚硫酸钠法尿百草枯半定量检测指导急性百草枯中毒患者血液净化方案的意义。方法74例因口服百草枯中毒就诊于重症医学科的患者，按住院号末尾数单双号分为对照组和治疗组。对照组（n＝35）给予常规治疗，并根据经验进行血浆置换及血液灌流治疗；治疗组（n＝39）除给予常规治疗外，根据检测结果决定血液净化的方式。如尿百草枯半定量结果为蓝色或墨蓝色，则给予血浆置换1次；如为淡蓝色，则给予血液灌流治疗1次；如为淡黄色，则不进行血液净化治疗。比较两组临床效果。结果治疗3周及12周，对照组存活率分别为42．86％和31．43％，治疗组存活率分别为64．10％和61．54％，治疗组3周存活率高于对照组但差异无统计学意义（P＞0．05），治疗组12周存活率高于对照组且差异有统计学意义（P＜0.05）。97．44％死亡病例尿百草枯半定量试验为蓝色或墨蓝色（尿百草枯浓度＞30μg／mL）。同时，治疗组肺间质纤维化发病率低于对照组，但差异无统计学意义（P＞0．05）。结论应用连二亚硫酸钠法尿百草枯半定量检测，有利于血液净化方案的制定，快速，易推广，初步显示较好的效果。
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阿米替林对缺氧缺糖培养神经细胞的保护作用
目的 研究阿米替林(Ami)对缺氧缺糖培养大鼠脑皮层神经细胞的保护作用.方法 分离培养15～18 d胎龄的大鼠神经细胞,用连二亚硫酸钠消除培养基中的氧合并培养基缺糖模拟细胞缺血性损伤,测定乳酸脱氢酶、一氧化氮、丙二醛和超氧化物歧化酶的含量变化,观察缺氧缺糖对神经细胞的损伤及Ami的保护作用.结果 缺氧缺糖引起神经细胞明显损伤性变化,死亡率升高,培养上清液中乳酸脱氢酶、一氧化氮含量升高,细胞匀浆中丙二醛生成增加,超氧化物歧化酶含量明显减少.Ami 10-7～10-5mol/L能不同程度地减轻上述损伤性变化.结论 Ami对神经细胞"缺血"性损伤有保护作用,机制可能与抗脂质过氧化及钙拮抗作用有关.
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分光光度法测定红虾中的百草枯
百草枯(1,1-2甲基-4,1-连吡啶二氯化物)是一种除草剂,可致人中毒.文献[1]中对百草枯的测定方法有较详细的叙述,但在实践中,有几个关键地方叙述不清,致使无法操作.第一,净化样品所用树脂没有说明用阳离子还是阴离子树脂;第二,样品过柱后,加连二亚硫酸钠前,是否要调节pH;第三,每个样品需要测定3个波长处的吸光度,计算公式繁琐,并且没有说明具体的测定波长;第四,连二亚硫酸钠在小于400nm波段有很强的吸收,该法没有说明其用量,且没强调空白用量.本文针对上述问题进行了较为详细的探讨,结果表明,树脂必须用阳离子树脂;样品过柱后,必须将pH调至大于10,然后再加连二亚硫酸钠;吸光度测定仅需在396.8nm处;连二亚硫酸钠用量要准确限量且空白用量也要与样品用量相同.
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葛花总黄酮对缺氧/复氧心肌细胞的抗氧化作用研究
目的 研究葛花总黄酮预处理对缺糖缺氧/复氧复糖(A/R)损伤心肌细胞的抗氧化作用.方法 连二亚硫酸钠(Na2S2O4)建立乳鼠心肌细胞A/R损伤模型,不同剂量葛花总黄酮(10,30,100 mg·L-1)预处理24h后,运用比色法测定细胞内SOD活性及MDA含量和上清液中iNOS活力；运用Annexin V/PI双染流式细胞术测定细胞凋亡变化.结果 与A/R模型组比较,葛花总黄酮预处理组能显著提高SOD活性(P＜0.05),降低培养液中iNOS释放量及胞内MDA含量,同时使细胞凋亡率显著降低(P＜ 0.05或P＜0.01).结论 葛花总黄酮预处理对A/R损伤心肌细胞具有明显的保护作用,此作用可能与增加SOD活性、清除自由基的产生、增强心肌抗氧化能力有关.
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尿检百草枯对治疗和预后评估的价值
目的：通过回顾分析我科2013年全年救治百草枯中毒病例，分析连二亚硫酸钠还原法尿检百草枯对疗效和预后评估的价值。方法：应用连二亚硫酸钠还原法检测收治的84例百草枯中毒患者尿液百草枯浓度，阳性为血灌指针，阴性者不予灌流。结果：84例百草枯中毒患者经血灌等治疗后90天随访，存活41例（48．8％），死亡43例（51．2％）。存活病例就诊即刻百草枯尿检检测结果明显轻于死亡病例，血灌次数也明显减少。结论：应用连二亚硫酸钠可迅速检测患者尿百草枯浓度，有助于评估患者血药浓度和中毒程度，指导是否给予血灌，尿百草枯持续阳性时间超过72 h，提示预后不良。
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丁苯酞对缺氧致PC12细胞损伤保护作用的比较蛋白质组研究
目的 从蛋白质水平研究丁苯酞对连二亚硫酸钠(Na2S2O4)致PC12细胞缺氧的保护作用及其作用机制. 方法 利用含Na2S2O4的无血清培养基处理PC12细胞,建立细胞缺氧模型,并观察丁苯酞对细胞缺氧的保护作用.噻唑盐比色法(MTT)测定细胞活性,蛋白质组学技术鉴定差异表达蛋白. 结果随着丁苯酞浓度的增大,细胞平均吸光度(A)值逐渐增加.当丁苯酞浓度大于等于5 mol/L时,细胞平均A值与未添加丁苯酞的模型组细胞A值差异有统计学意义(P＜0.05).蛋白质组学技术鉴定出PC12细胞缺氧模型组与丁苯酞干预组共17个差异表达蛋白点,多为细胞骨架蛋白、凋亡相关蛋白及氧化应激相关蛋白等. 结论 丁苯酞可减少缺氧导致的神经元凋亡.细胞骨架蛋白、凋亡相关蛋白及氧化应激相关蛋白可能在丁苯酞的神经保护机制中发挥作用.
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二苯乙烯苷对海马神经元细胞缺血性损伤模型大鼠的保护作用研究
目的:研究二苯乙烯苷(TSG)对大鼠神经细胞缺血性损伤的保护作用.方法:应用连二亚硫酸钠建立大鼠海马神经元细胞缺血性损伤模型,以四甲基偶氮唑盐(MTT)微量比色法及乳酸脱氢酶(LDH)漏出率测定法考察TSG对拟缺血性脑损伤的拮抗作用.结果:拟缺血性脑损伤可引起神经元细胞发生明显的损伤性变化,细胞死亡率升高,MTT值明显下降,LDH漏出增加;应用TSG后可减少LDH漏出,增加MTT值,降低细胞死亡率.结论:TSG对神经细胞缺血性损伤模型大鼠具有明显的保护作用.
