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Axl及配体Gas6在甲状腺乳头状癌中的表达及意义
目的 通过检测Axl、Gas6在甲状腺乳头状癌(PTC)中的表达,分析和探讨两者在甲状腺乳头状癌发生、发展中的作用及相关性.方法 采用免疫组织化学法、Western blotting及Real-time PCR法检测Axl、Gas6在甲状腺乳头状癌中的表达并分析两者的变化与临床病理特征的关系.结果 与结节性甲状腺肿(NG)及瘤旁正常组织相比,甲状腺乳头状癌组织中Axl、Gas6的mRNA及蛋白表达水平明显升高(P＜0.05),且蛋白表达量与淋巴结转移、临床病理分期有关,与患者年龄、性别、肿瘤大小无关.结论 Axl和Gas6两者在PTC中的表达量高于结节性甲状腺肿.在PTC中Axl、Gas6的高表达与肿瘤的淋巴结转移和临床病理分期呈正相关,两者在PTC的发生、发展、转移的过程中起重要的作用.
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含微乳头结构肺腺癌CT重建征象特征及上皮间质转化相关基因表达
目的 探讨含微乳头结构(MPP)肺腺癌具有的CT重建征象特征,上皮间质转化(EMT)相关分子表达情况以及它们之间的关系.方法 选取含MPP侵袭性肺腺癌(IAC) 37例、不含MPP 80例及其对应的癌旁组织,比较临床病理特征、CT重建征象;应用Real-time PCR及Western blotting检测EMT有关标识分子表达变化情况.结果 含MPP组淋巴结转移比例较高、毛刺、胸膜凹陷征、实性及分叶比例较高(均P＜0.001).含MPP组E-钙黏蛋白(cadherin)及β-连环蛋白(β-catenin)表达均下调(P＜0.05),N-cadherins、波形蛋白(vimentin)、Snail及转化生长因子(TGF)-β表达均上调(P＜0.05).有毛刺组E-cadherin及β-catenin表达下调者所占比例较高,而vimentin表达上调者所占比例较高(均P＜0.05);实性结节组E-cadherin表达下调者所占比例较高,而N-cadherin及vimentin表达上调者所占比例较高(均P＜0.05).结论 含MPP浸润性肺腺癌具有特征性CT重建征象,发生了EMT改变.其CT重建征象与EMT相关分子表达存在联系.
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MicroRNA-145通过丝裂原活化蛋白激酶和磷脂酰肌醇3激酶/蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶通路调控肺癌A549细胞系转移及侵袭
目的 探讨microRNA-145(miR-145)对非小细胞肺癌A549细胞转移、侵袭及对丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)和磷脂酰肌醇3激酶/蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶(PI3K/AKT)通路的作用.方法 将非小细胞肺癌A549细胞分成miR-145模拟物(mimics)组和negative-mimics组(miR-NC)以及antago miR-145组(抑制剂组)和antago miR control组(antago-NC),采用Transwell迁移实验及基质胶侵袭实验等检测miR-145对人非小细胞肺癌A549迁移、侵袭能力的影响;Western blotting方法分析miR-145对MAPK和PI3 K/AKT通路的影响.此外,采用细胞外调节蛋白激酶(ERK)及AKT的通路抑制剂分别作用于A549细胞系,检测A549细胞迁移、侵袭能力的改变.结果 miR-145 mimics组穿过细胞数(90.67 ±10.33)明显少于miR-NC组(175.33±23.67),miR-145 mimics组穿过基质胶的细胞数(153.33±22.33)少于miR-NC组(77.33±13.67),P＜0.05;antago-NC组通过小室的细胞数量以及穿过基质胶的细胞数量明显少于antago miR-145组(P＜0.05),结果说明,miR-145具有抑制非小细胞肺癌A549细胞迁移、侵袭的能力;miR-145 mimics转染可分别抑制A549细胞中90％、78％以及73％的ERK1/2、AKT的ser-473位点和thr-308位点的磷酸化,antago miR-145转染可促进A549细胞中ERK1/2、AKT的ser-473位点和thr-308位点的磷酸化,增加115％、125％以及129％,而当抑制MAPK通路及PI3 K/AKT通路的激活后,A549细胞的转移及侵袭能力下降.结论 miR-145通过MAPK和PI3 K/AKT通路调控肺癌A549细胞转移及侵袭.
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M T2受体介导褪黑素对小鼠前胃癌细胞的抑制作用
目的：探讨褪黑素（ MLT）通过褪黑素膜受体MT2抑制小鼠前胃癌（ MFC）细胞增殖及其与丝裂原活化蛋白激酶（ MAPKs）、磷脂酰肌醇-3激酶（ PI3K）-Akt信号通路的关系。方法应用siRNA技术沉默MT2表达，观察褪黑素对小鼠前胃癌细胞的抑制作用及ERK1/2、Akt的磷酸化的影响。结果1.siRNA介导的MT2沉默能明显拮抗褪黑素对胃癌细胞增殖的抑制作用；2．沉默MT2可部分阻断褪黑素抑制ERK1/2、Akt磷酸化的作用。结论褪黑素可通过MT2受体抑制ERK1/2、Akt的磷酸化从而抑制胃癌细胞增殖。
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Galecin-3在膜联蛋白A7表达抑制的HeLa细胞中的表达变化
目的 探讨膜联蛋白A7(ANXA7)表达抑制的HeLa细胞galectin-3(gal-3)的表达改变.方法 将细胞分为实验组、阴性对照组和空白对照组.采用RNA干扰技术将靶向ANXA7的siRNA和阴性对照siRNA脂质体2000转染法分别转染宫颈癌细胞系HeLa细胞,空白对照组不予任何处理.转染48h后采用Western blotting法和RT-PCR法分别在蛋白水平和mRNA水平进行抑制效果的鉴定.Western blotting和实时定量PCR法分别检测ANXA7表达抑制的HeLa细胞中galectin-3的表达改变.结果 靶向ANXA7的siRNA可显著抑制ANXA7的表达;当ANXA7表达受抑后,galectin-3在HeLa细胞中的表达显著下降,与阴性对照组和空白对照组相比,差异有显著性(P＜0.05).结论 ANXA7表达抑制的宫颈癌细胞系HeLa细胞中galectin-3的表达显著下调,这可能是ANXA7表达受抑的细胞行为学发生改变的机制之一.
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5-氮杂-2’-脱氧胞苷和4-苯基丁酸对慢性粒细胞白血病细胞的miR-196b表达水平有协同作用
目的：探讨慢性粒细胞白血病细胞中影响miR-196b表达水平的表观遗传学因素。方法分别采用DNA甲基化转移酶抑制剂5-氮杂-2’-脱氧胞苷（5-Aza-2’-dc）、组蛋白去乙酰化酶抑制剂4-苯基丁酸（ PBA）和两者联合处理K562细胞，采用实时定量PCR（Real-time PCR）检测miR-196b的表达水平变化。结果 PBA的半数抑制浓度为1．58mmol/L。和正常人骨髓细胞miR-196b的表达水平相比，Aza组、PBA组和阴性对照组miR-196b的表达水平显著降低且基本一致，Aza＋PBA组miR-196b的表达水平和正常人表达水平基本一致。结论单独使用5-Aza-2’-dc或PBA不能使K562细胞中miR-196b的表达恢复正常，两者联合使用共同处理K562细胞，可使miR-196b的表达恢复正常，表明K562细胞中miR-196b的表达水平和基因组甲基化及组蛋白乙酰化均有关系。
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三叶因子3在甲状腺乳头状癌TPC-1细胞上皮间质转化中的作用及机制
目的 探讨三叶因子3(TFF3)基因沉默对人甲状腺乳头状癌TPC-1细胞迁移、侵袭、克隆形成能力以及对上皮间质转化(EMT)的影响及机制.方法 免疫组织化学技术检测甲状腺乳头状癌组织芯片中Snail与TFF3的表达.划痕实验、侵袭实验和克隆形成实验分别检测TFF3基因对TPC-1细胞迁移、侵袭和克隆能力的影响;实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)、免疫印迹法和免疫细胞化学染色检测上皮间质转化标志物及丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路相关蛋白的变化.结果 31例甲状腺乳头状癌组织中,Snail蛋白于癌细胞胞质表达,31例癌旁组织阴性表达;Snail蛋白与TFF3表达呈正相关(r=0.8450,P＜0.05).TFF3基因沉默后,人TPC-1细胞的细胞迁移、侵袭和克隆形成能力均明显降低(P ＜0.01);TPC-1细胞上皮间质转化标志物及MAPK通路相关蛋白细胞外调节蛋白激酶(ERK) 1/2和p-ERK1/2也显著降低(P＜0.05).结论 沉默TFF3可能通过MAPK通路相关蛋白ERK1/2抑制上皮间质转化,降低TPC-1细胞迁移、侵袭和增殖能力.
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CXC趋化因子受体4和叉头蛋白3基因蛋白及mRNA在儿童纵隔神经母细胞瘤SK-N-SH和LAN-5细胞中的表达及环磷酰胺对其的影响
目的 观察环磷酰胺对儿童纵隔神经母细胞瘤LAN-5和SK-N-SH细胞CXC趋化因子受体4(CXCR4)和叉头蛋白3(Foxp3)表达的影响.方法 采用实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)法检测CXCR4和Foxp3基因mRNA的相对表达,MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪分析CXCR4和Foxp3基因的表达.结果 CXCR4和Foxp3在LAN-5和SK-N-SH细胞高表达;环磷酰胺对LAN-5和SK-N-SH细胞的IC50分别为6.5 μmol/L和3.9μmol/L;环磷酰胺显著降低了LAN-5细胞表面CXCR4基因蛋白的表达(P＜0.01),也显著降低了SK-N-SH细胞CXCR4 mRNA的表达(P＜0.05),同时环磷酰胺显著下调Foxp3基因蛋白(P＜0.05)和Foxp3 mRNA(P＜0.01)在LAN-5细胞的表达.结论 CXCR4和Foxp3可能为神经母细胞瘤化疗的潜在靶点.
关键词： 环磷酰胺 神经母细胞瘤 CXC趋化因子受体4 叉头蛋白3 实时定量聚合酶链反应 儿童 -
人附睾蛋白4过表达对子宫内膜癌细胞增殖、侵袭能力及肿瘤形成的影响
目的 探讨人附睾蛋白4(HE4)过表达对子宫内膜癌(EC)细胞增殖、侵袭能力及肿瘤形成的影响.方法 构建HE4过表达质粒载体(pcDNA 3.1/Myc-His-HE4)和HE4特异性小干扰RNA(siRNA)表达质粒载体(siRNA-HE4),分别转染HEC-1B(HE4过表达组)和Ark2(HE4低表达组)两个EC细胞系;以空载体pcDNA 3.1/Myc-His转染的HEC-1B细胞为HE4过表达组的阴性对照,以非特异性序列siRNA转染的Ark2细胞为HE4低表达组的阴性对照;不进行转染处理、正常培养的EC细胞系为正常对照组.转染后,采用实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)法检测HE4 mRNA表达水平,MTT比色法测定细胞增殖活性,体外迁移和侵袭实验检测细胞的迁移和侵袭能力.构建移植性肿瘤小鼠模型,比较各组动物的形成瘤体积.结果 与正常对照组和阴性对照组的HEC-1B细胞比,转染pcDNA 3.1/Myc-His-HE4后HEC-1B细胞中HE4 mRNA表达水平显著升高(P＜0.05),细胞增殖活性、穿膜细胞数明显升高(P＜0.05);与正常对照组和阴性对照组的Ark2细胞比,转染siRNA-HE4后Ark2细胞中HE4 mRNA表达水平显著降低(P＜0.05),细胞增殖活性、穿膜细胞数明显降低(P＜0.05);而阴性对照组与正常对照组之间比较差异无统计学意义(P＞0.05);HE4过表达组的移植性肿瘤体积和重量明显大于其对照组(P＜0.05),而HE4低表达组的移植性肿瘤体积和重量明显小于其对照组(P＜0.05).结论 HE4过表达可导致EC细胞的增殖、迁移及侵袭能力增强,促进肿瘤形成;下调HE4基因表达可明显抑制EC细胞的增殖、迁移和侵袭,并抑制肿瘤生长.
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紫杉醇诱导HepG2肝癌细胞凋亡中miR-224沉默凋亡抑制因子5基因的作用
目的 探讨紫杉醇诱导肝癌HepG2细胞凋亡时miRNA对基因的沉默的作用.方法 用不同浓度紫杉醇处理肝癌HepG2细胞后,流式细胞术检测其细胞凋亡;通过实时定量PCR(Real-time PCR)测定miR-224和凋亡抑制因子5(api-5)mRNA的表达;用免疫组织化学二步法和免疫印迹法(Western blotting)检测API-5蛋白的表达.结果 紫杉醇诱导HepG2细胞凋亡时,通过2-△△CT法分析发现,除了0.5mg/L、1 mg/L紫杉醇培养HepG2肝癌细胞24h miR-224不升反降外,其他浓度和处理时间miR-224表达均显示上调;0.5mg/L、1 mg/L紫杉醇培养HepG2肝癌细胞24h api-5 mRNA表达稍微降低,0.5mg/L紫杉醇处理48h无增长,其他浓度和处理时间api-5 mRNA表达均上调;应用IPP v 5.1图像分析软件处理,经t检验分析发现,紫杉醇处理后API-5蛋白表达均下调(P＜0.05).结论 上调的miR-224可能作用其靶基因api-5的表达,通过与api-5 mRNA的3'UTR结合阻止翻译的完成,从而对肝癌细胞的凋亡途径产生影响.
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微管末端结合蛋白1在Siha细胞自噬的表达和意义
目的 探讨宫颈癌Siha细胞自噬过程中微管末端结合蛋白1(EB1)基因的表达变化.方法 Hank平衡盐溶液(HBRSS)和秋水仙素处理体外培养的宫颈癌Siha细胞,分别采用实时定量PCR和Western blotting检测EB1基因、LC3和p62的表达,荧光显微镜检测特异性绿色荧光蛋白(GFP)-LC3以证实自噬体形成.结果 宫颈癌Siha细胞随HBSS作用时间延长,LC3 mRNA、EB1 mRNA、LC3-Ⅱ蛋白和EB1蛋白的表达均呈时间依赖性增加,差异具有统计学意义(P＜0.05).EB1 mRNA和LC3 mRNA表达呈正相关,具有统计学意义(P＜0.05).p62mRNA和蛋白在HBSS作用后的表达呈时间依赖性降低,差异具有统计学意义(P＜0.05),EB1 mRNA和p62mRNA表达呈负相关,具有统计学意义(P＜0.05).GFP-LC3结果显示,在HBSS作用12 h后,Siha细胞胞质中GFP-LC3强度和数目明显增加,含有GFP信号的细胞数量也明显增加.秋水仙素处理后,LC3、p62和EB1 mRNA及蛋白均未发生显著改变,差异无统计学意义(P＞0.05),但此时几乎检测不到含GFP-LC3荧光信号的细胞.结论 EB1在饥饿状态Siha细胞中高表达,此时伴随LC3表达增加、p62表达降低以及自噬体形成增加,而用秋水仙素破坏EB1赖以作用的微管时,上述现象消失,充分表明EB1参与细胞自噬的可能.
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RNAi靶向沉默对人卵巢癌OVCAR3细胞CD105和Ki67基因表达的影响
目的 探讨RNAi靶向沉默对人卵巢癌OVCAR3细胞CD105和Ki67基因的表达.方法 采用脂质体介导的基因法将不同浓度的CD105-siRNA、Ki67-siRNA转染至体外培养的人卵巢癌OVCAR3细胞中,检测干扰前后人卵巢癌细胞中CD105、Ki67基因表达的变化以确定沉默效果.构建CD105-siRNA、Ki67-siRNA及各自的阴性对照序列并高效地转染人卵巢癌OVCAR3细胞,采用Western blotting和Real-time PCR从蛋白和基因水平检测CD105和Ki67的表达变化.结果 转染CD105-siRNA或Ki67-siRNA终浓度为50nmol/L和100nmol/L的人卵巢癌细胞中CD105mRNA或Ki67mRNA的相对表达水平及CD105和Ki67的表达均明显低于空白对照组和阴性对照组(NC1),差异具有统计学意义(P＜0.001).结论CD105-siRNA和Ki67-siRNA能特异性抑制人卵巢癌OVCAR3细胞中的CD105和Ki67基因表达,下调mRNA和蛋白的表达水平.
关键词： CD105 Ki67 实时定量聚合酶链反应 免疫印迹法 人 -
敲低膜联蛋白A5对人胃癌MGC-803和MKN-45细胞周期的影响
目的 探讨敲低膜联蛋白A5(ANXA5) 对人胃癌细胞系MGC-803、MKN-45细胞周期相关蛋白表达的影响.方法 将细胞分为干扰组、阴性对照组及空白对照组,采用脂质体转染法将靶向膜联蛋白A5的siRNA以及阴性siRNA分别转染干扰组和阴性对照组MGC-803、MKN-45细胞,空白对照组不加任何试剂.转染后48 h采用Real-time PCR和Western bloting分别从mRNA和蛋白水平检测ANXA5的表达,确定ANXA5被敲低之后,Realtime PCR和Western bloting检测各组p21cip1 mRNA和P21cip1的表达,Western bloting检测各组细胞周期蛋白D1(cyclinD1) 蛋白的表达,流式细胞术检测各组细胞周期的变化情况.结果 敲低ANXA5后,与阴性对照组和空白对照组相比,两种细胞的p21cip1mRNA和P21cip1蛋白均显著降低(P＜0.05) , cyclinD1(P＜0.05) 也显著降低.结论 敲低ANXA5可下调MGC-803、MKN-45细胞中p21cip1mRNA和P21cip1蛋白以及cyclinD1的表达,推测ANXA5可能通过作用于细胞周期相关蛋白而引发细胞周期阻滞从而影响着胃癌的发展.
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RNA干扰MEX3A基因对膀胱癌细胞增殖和凋亡的影响
目的 探讨通过慢病毒介导的RNA干扰技术抑制MEX3A基因表达对膀胱癌细胞增殖和凋亡的影响.方法 应用GV115载体构建针对MEX3A基因的shRNA慢病毒载体,转染包装细胞293T产生慢病毒颗粒,收集并滴度测定后转染5637膀胱癌细胞,实验组转染MEX3A-shRNA慢病毒,对照组转染阴性对照慢病毒;实时定量PCR(Real-time PCR)检测MEX3A基因敲减效率;慢病毒转染3d后,使用Celigo连续细胞计数5d检测细胞生长;慢病毒转染5d后,进行膜联蛋白V(Annexin V)染色并用流式细胞术检测细胞凋亡.结果 成功构建MEX3A-shRNA慢病毒载体以及稳定抑制MEX3A表达的细胞株,MEX3A基因敲减效率达到74％;Celigo细胞计数检测显示,与对照组相比,实验组5637细胞的增殖速率受到显著抑制;流式细胞术检测显示,实验组发生凋亡的5637细胞显著增加.结论 MEX3A基因促进膀胱癌细胞的增殖,抑制膀胱癌细胞的凋亡.
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Ezrin在浆液性卵巢癌中的表达及临床意义
目的 通过检测Ezrin在正常卵巢上皮和浆液性卵巢癌组织中的差异表达,探讨其对浆液性卵巢癌发生发展的影响.方法 收取浆液性卵巢癌冷冻组织40例,正常卵巢上皮27例,提取总RNA,采用Real-time PCR技术检测Ezrin mRNA在两组样本中的表达差异;选取有完整临床病理资料的浆液性卵巢癌石蜡包埋组织134例,以及27例非卵巢癌病例的卵巢上皮组织,通过免疫组织化学染色检测两组样本中Ezrin蛋白质的表达差异,并应用SPSS 20.0软件分析其与临床病理的相关性.结果 Ezrin mRNA在新鲜卵巢癌组织中的表达显著低于正常卵巢上皮组织(P＜0.05).Ezrin蛋白在石蜡包埋卵巢癌组织中也相应降低(P＜0.05).Ezrin蛋白质表达水平与年龄、手术满意程度及化疗敏感程度无相关性,与细胞分化、病理分期及大网膜转移显著相关,(P＜0.05).Ezrin表达水平高的浆液性卵巢癌病例的无进展生存期(PFS)值和总生存期(0S)值都明显高于表达水平低的病例(P＜0.05).但Ezrin并不能作为浆液性卵巢癌的独立预后因素.结论 Ezrin的表达下调与浆液性卵巢癌的发生发展、转移等病理过程相关,其可以作为临床预后的潜在指标.
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MicroRNA-940在乳腺癌中的表达变化及作用机制
目的 探讨microRNA-940(miR-940)在乳腺癌组织和细胞中的表达以及对乳腺癌细胞增殖、侵袭、迁移能力的影响及其相关分子机制.方法 实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测2016年1月～2017年1月我院手术切除的78例患者的乳腺癌组织、癌旁组织和人乳腺癌细胞系MCF-7、SK-BR-3、MDA-MB-231、BT-549及人正常乳腺细胞系MCF-10 A中miR-940的表达情况.在乳腺癌细胞系MDA-MB-231中利用脂质体LipofectaminsTM 2000转染miR-940模拟物上调miR-940的表达,CCK-8实验检测细胞增殖活性的改变,小室侵袭及迁移实验(transwell)检测细胞侵袭、迁移能力的改变.生物学信息法预测miR-940的可能作用靶基因,双荧光素酶报告实验检测miR-940与CXC趋化因子受体2(CXCR2)的3'UTR区结合情况,Western blotting检测miR-940对CXCR2蛋白表达的影响.结果 miR-940在乳腺癌组织和细胞中表达明显降低(P＜0.01),并且miR-940的表达与TNM分期和淋巴结转移密切相关(P＜0.01).上调MDA-MB-231细胞miR-940表达后,细胞的增殖活性明显下降(P＜0.01),侵袭及迁移能力明显下降(P＜0.01).双荧光素酶报告显示,miR-940可与CXCR2的3'UTR区特定序列结合显著抑制荧光素酶活性(P＜0.01),上调miR-940后细胞中CXCR2蛋白的表达均明显下降(P＜0.01).结论 miR-940在乳腺癌中的表达降低,miR-940可以通过靶向CXCR2抑制乳腺癌细胞的增殖、侵袭及迁移能力.
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母源性甲状腺功能亢进对仔鼠心脏甲状腺激素受体mRNA表达的影响
目的 探讨母源性甲状腺功能亢进(简称甲亢)对新生仔鼠心脏中甲状腺激素受体的影响.方法 首先对24只雌性Wistar大鼠建立妊娠合并甲亢模型,取新生5d、10d、15d仔鼠心脏进行解剖检查,取部分心脏组织石蜡切片M asson染色,取部分心脏组织采用实时定量PCR法检测甲状腺激素受体(TR)α1、TRα2、TRβ1 mRNA水平表达量的变化.结果 在心脏组织中TRα1mRNA的表达量较TRα2、TRβ1的表达量高,且在出生10d的仔鼠心脏(包括甲亢组和对照组)中TRα1mRNA的表达量呈现峰值;与同期对照仔鼠相比,母源性甲亢仔鼠出生5d与出生10d心肌中TRα1mRNA的表达量显著上调,出生15d的表达量与对照组相比表达量下调;TRα2在母源性甲亢和对照中差异无统计学意义;TRβ1在甲亢出生5d仔鼠中表达量显著下调,10d组表达量上调,15d组表达量差异无显著性.结论 母源性甲亢会对仔鼠心肌产生影响,引起甲状腺激素受体的差异表达;这种变化随出生后时间延长而减弱.甲状腺激素受体中TRα1的变化显著,可能在甲亢引起的心肌损伤中起重要作用.
关键词： 母源性甲状腺功能亢进 甲状腺激素受体 实时定量聚合酶链反应 仔鼠 -
趋化因子2促进肝再生中脂肪的形成
目的 探讨趋化因子2(CCL2)对肝再生的影响以及作用机制.方法 大鼠随机分为3组,每组10只.液压转基因技术将质粒转入大鼠体内,6h后荧光显微镜下观察转染效率.称量再生肝重量,计算肝再生率和肝脏指数以观察肝脏再生情况.测量血清中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)与总胆红素(TBIL)的含量以评估肝脏功能情况.苏丹Ⅳ染色观测脂肪聚积情况.Real-time PCR检测脂肪代谢相关基因的表达.Western blotting检测磷酸化丝裂原细胞外激酶1/2(p-MEK1/2)和磷酸化细胞外信号调节激酶l/2(p-ERKl/2)的表达情况.结果 转质粒后6h各组绿色荧光蛋白表达量均大于30％.pEGFP-N1-CCL2转染组肝再生率、肝脏指数、ALT、AST和TBIL含量均高于pEGFP-N1组.随转基因时间延长,脂肪代谢相关基因表达量增加,有较多猩红色脂肪滴出现,p-MEK1/2和p-ERKl/2表达量增多.结论 趋化因子2可能通过MEK/ERK通路增加脂肪合成,促进肝脏再生.
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GZMA、GZMB、TSP-1、TLR和IL-15条细胞凋亡通路基因在肝再生中的表达变化
目的 探讨颗粒酶A(GZMA)、颗粒酶B(GZMB)、血小板反应蛋白-1(TSP-1)、Toll样受体(TLR)和白细胞介素-1(IL-1)5条细胞凋亡通路基因在肝再生(LR)过程中的表达变化.方法 大鼠随机分为33组,每组6只,用Rat Genome 230 2.0芯片检测大鼠部分肝切除(PH)后不同恢复时间点5条细胞凋亡通路基因的表达情况,采用Real-time PCR和Western blotting技术对芯片结果进行验证,并用生物信息学方法对凋亡通路基因在肝再生中的表达变化进行分析.结果Real-time PCR和Western blotting均与Rat Genome 230 2.0芯片的检测结果趋势一致;GZMA、GZMB、TSP-1、TLR和IL-15条细胞凋亡通路中9、8、24、31和34个基因与肝再生相关.它们主要在肝再生启动阶段起始表达,在细胞增殖阶段表达的基因数多.表达的相似性分为均上调、上调占优势、均下调、下调占优势、上调和下调相近等5类,大多数基因表达加强,少数基因表达降低.它们表达的时间相关性分为13组.基因协同作用模型(E,)分析表明,GZMA介导的细胞凋亡通路在肝再生后期促进细胞凋亡;TLR介导的细胞凋亡通路几乎均在整个肝再生中促进细胞凋亡;GZMB、TSP-1和IL-1介导的细胞凋亡通路可能在肝再生中不发挥细胞凋亡作用.结论GZMA和TLR两条通路调控肝再生中的细胞凋亡.
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结直肠癌组织中ECM1基因水平的测定及临床意义
目的:探讨细胞外基质蛋白1基因在结直肠癌中的表达及其意义.方法:基于TaqMan-MGB荧光探针技术,建立实时荧光定量RT-PCR方法,检测正常结直肠黏膜组织(n=46),结直肠腺瘤(n=18),结直肠癌(淋巴结未转移)(n=25)和结直肠癌(淋巴结转移)(n=21)中ECM1基因的表达.结果:正常黏膜,腺瘤组织,结直肠癌(淋巴结未转移)组织和结直肠癌(淋巴结转移)组织中ECM1基因的表达均值分别为(9.81±3.16)×108拷贝/g RNA,(10.1±3.65)×108拷贝/gRNA,(6.89±2.96)×109拷贝/g RNA,(5.01±2.22)×1010拷贝/g RNA.正常黏膜和腺瘤组织组间无明显差异(P＞0.05);结直肠癌(淋巴结未转移)组明显高于正常黏膜和腺瘤组织组(P＜0.01);结直肠癌(淋巴结转移)组明显高于其他三组(P＜0.01).结论:ECM1基因在结直肠癌中表达升高,并且与结直肠癌的转移相关.
关键词： 细胞外基质蛋白1 结直肠癌 实时定量聚合酶链反应
