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异甘草素对低氧诱导的大鼠肺动脉结构重建的影响
目的 观察异甘草素对缺氧性肺动脉高压(HPH)大鼠模型的肺动脉压力的变化,右心室肥厚程度及肺血管结构重建的影响,探讨异甘草素对HPH的抑制作用及其可能机制.方法 雄性SD大鼠30只随机分为对照组、HPH组、异甘草素组,每组各10只.HPH组和异甘草素组大鼠置于缺氧箱中建立大鼠HPH模型.异甘草素组中,每只大鼠腹腔注射异甘草素剂量为10 mg/(kg·d),从缺氧前1周开始给药直到缺氧结束.对照组和HPH组大鼠腹腔注射等体积0.5％ DMSO.测定各组大鼠平均右心室压力(RVSP);称重法测得各组大鼠右心室游离壁(RV)及左心室加室间隔(LV+S)质量,以及RV/(LV+S);HE染色观察肺动脉病理形态改变,计算血管厚度百分比(WT％)及面积百分比(WA％);ELISA法检测各组大鼠血清及肺组织中的超氧化物歧化酶(SOD)及丙二醛(MDA)的含量.Real-time PCR检测各组大鼠肺组织中的NADPH氧化酶4(NOX4) mRNA的表达.结果 HPH组大鼠RVSP、RV/LV+S、WT％,以及WA％明显高于对照组大鼠(P＜0.01),然而异甘草素组大鼠RVSP、RV/LV+S、WT％,以及WA％均明显低于HPH组大鼠(P＜0.01).HPH组大鼠肺组织及血清中的SOD含量较对照组明显降低,而MDA含量则明显增高(P＜0.01).异甘草素组大鼠肺组织及血清中的SOD含量较HPH组大鼠明显增高,而MDA含量则明显降低(P＜0.01).Real-time PCR结果显示,异甘草素有效抑制了低氧诱导的大鼠肺组织中NOX4 mRNA的高表达(P＜0.01).结论 异甘草素抑制由低氧诱导的HPH大鼠肺动脉压力升高、右心室肥厚,以及肺动脉管壁的增厚,可能与异甘草素抑制HPH大鼠体内的氧化损伤有关.
关键词： 异甘草素 缺氧性肺动脉高压 活性氧 实时定量聚合酶链反应 大鼠 -
C1型尼曼-匹克病小鼠肝脏功能及病理变化
目的 探讨晚期(P60) Npc1-/-小鼠肝脏功能和病理变化,为C1型尼曼-匹克病(NPC1)患者肝脏的病理发生及临床治疗提供实验依据.方法 小鼠称重后,眼内眦取血检测血清中乳酸脱氢酶(LDH)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天冬氨酸氨基转移酶(AST)的活性变化,评价Npc1-/-小鼠的肝功能变化;取肝组织进行石蜡和冷冻切片,通过HE染色和油红O染色评估肝脏组织的形态变化和脂肪储存情况,以及Masson染色评估肝脏组织胶原沉积情况;Real-time PCR和Western blotting分别检测肝脏组织促炎症因子,白细胞介素(IL)-1β、IL-6和肿瘤坏死因子(TNF)-α的mRNA和蛋白水平表达情况;TUNEL染色评估肝脏组织凋亡情况.结果 与Npc1+/+小鼠相比,Npc1-/-小鼠的体重及肝脏系数显著降低(P ＜0.001);LDH、ALT及AST活性显著升高(P ＜0.001);HE染色发现,Npc1-/-小鼠肝脏组织形态改变明显,出现大量泡沫细胞;油红O染色显示,Npc1-/-小鼠肝脏脂肪含量显著降低;Real-time PCR显示,Npc1-/-小鼠肝脏组织IL-1β、IL-6和TNF-α表达均显著升高(P＜0.01,P＜0.05和P＜0.001),同时,Western blotting也显示,3个因子的蛋白表达均显著升高(P＜0.05,P＜0.05和P＜0.01),证实Npc1-/-小鼠肝脏晚期发生炎症反应;Masson染色未发现Npc1-/-小鼠肝脏纤维化的发生;TUNEL染色显示,Npc1-/-小鼠肝脏组织凋亡细胞数量增加.结论 Npc1基因突变导致肝脏组织形态发生改变,大量的巨噬细胞聚集引发炎症反应,而炎症反应的发生可能是引起肝脏细胞凋亡和肝功能受损的重要途径之一.
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先天性肠无神经节细胞症患儿中血清维生素A及肠组织维甲酸受体α和HA117的表达特点
目的 检测先天性肠无神经节细胞症(HD)患儿中血清维生素A及肠组织维甲酸受体α(RARα)、抗分化长链非编码RNA(LncRNA) HA117的表达特点,探讨其与HD发病机制的可能联系.方法 收取17例临床诊断为HD的患儿术前外周血及手术结肠组织标本,结肠组织由近端至远端分为3组:吻合口组、扩张段组和痉挛段组.检测血清维生素A浓度,采用Real-time PCR、免疫组织化学染色、Western blotting方法检测RARα及HA117在各组结肠组织的表达水平.结果 17例HD患儿均有不同程度维生素A缺乏,血清维生素A平均浓度为(0.73±0.05) μmol/L.在吻合口段,RARα在肌间神经丛可见棕黄色的阳性染色,而在痉挛段几乎未见阳性神经丛染色;在吻合口组、扩张段组和痉挛段组,RARα mRNA相对表达量依次为3.62±1.12、1.81±0.69、0.65±0.32,与吻合口相比,痉挛段表达量降低(P＜0.05,n=17);HA117mRNA相对表达量依次为0.47±0.15、1.25±0.40、2.57±0.70,与吻合口相比,痉挛段表达量增高(P ＜0.001,n=17);RARα蛋白相对表达量依次为1.16±0.05、0.99±0.05、0.88±0.04,与吻合口相比,扩张段及痉挛段表达量降低(分别为P＜0.05、P＜0.001,n=17).结论 维生素A、RARα及HA117可能共同参与肠神经系统(ENS)的发育过程;其中,维生素A和RARα可能促进了ENS的正常分化发育,而高表达的HA117可能对抗了前者的促分化作用,阻碍了ENS正常分化发育过程,进而导致HD的发生.
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孤雌胚胎干细胞来源的诱导多能干细胞的建立及对印记基因表达的影响
目的 通过诱导多能干细胞(iPSCs)技术重编程孤雌胚胎干细胞,探讨iPSCs技术对孤雌胚胎干细胞的多能性及印记基因的影响.方法 从孤雌激活的囊胚中建立了孤雌胚胎干细胞;利用反转录病毒将多能性转录因子转入孤雌胚胎干细胞中,建立孤雌iPS细胞.结果 建立的孤雌来源的iPS细胞体内外分化能力与孤雌胚胎干细胞的差别无显著性;Real-time PCR结果显示,孤雌iPS细胞母源印记基因的表达明显高于孤雌胚胎干细胞,父源印记基因表达下降,多能性基因表达升高.结论 iPSCs技术能影响基因的表达,尤其是印记基因,印记使其更接近于正常受精来源的胚胎干细胞中印记基因水平.
关键词： 孤雌胚胎干细胞 诱导多能干细胞 印记基因 实时定量聚合酶链反应 小鼠 -
磷酸化信号转导和转录激活因子3(Y705)在子宫腺肌症中的表达及其临床意义
目的 通过检测磷酸化信号转导和转录激活因子3(p-STAT3)(Y705)和血管内皮生长因子(VEGF)在正常子宫内膜与子宫腺肌症在位内膜中的定位与表达,探讨p-STAT3 (Y705)和VEGF在子宫腺肌症中发生发展中的作用.方法 免疫组织化学SP法检测14例正常子宫内膜和14例子宫腺肌症在位内膜中p-STAT3(Y705)和VEGF的定位和表达情况;Real-time PCR检测正常子宫内膜与子宫腺肌症在位内膜组织中STAT3 mRNA表达情况;Western blotting检测正常子宫内膜与子宫腺肌症在位内膜组织中p-STAT3 (Y705)、STAT3和VEGF蛋白的表达水平.结果 p-STAT3 (Y705)主要在正常子宫内膜和子宫腺肌症在位内膜腺上皮细胞核中表达,子宫腺肌症在位内膜蛋白表达高于正常子宫内膜(P＜0.05),正常子宫内膜和子宫腺肌症在位内膜相应的增殖期和分泌期p-STAT3(Y705)的表达无显著性差异(P＞0.05).正常子宫内膜和子宫腺肌症在位内膜中,STAT3在mRNA和蛋白表达水平差异均无显著性(P＞0.05).VEGF主要表达在腺上皮细胞中,子宫腺肌症在位内膜蛋白表达高于正常子宫内膜(P＜0.05),正常子宫内膜和子宫腺肌症在位内膜相应的增殖期和分泌期VEGF的表达差异无显著性(P＞0.05).结论 p-STAT3 (Y705)促进血管生成对子宫腺肌症的发生发展有一定的作用.
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分泌性腹泻对小鼠钙激活Cl-通道基因表达的影响
目的 探讨肠道组织钙激活C1-通道(CLCAs)基因表达与分泌性腹泻发生的关系.方法 选取昆明小鼠24只,雌雄各半,随机分为3组:对照组、实验1h和8h组,每组8只.对照组小鼠经腹腔注射0.2ml生理盐水,实验组小鼠经腹腔注射脂多糖(LPS,6mg/kg)分别作用1h和8h,于注射后观察小鼠活动特征及肠道组织形态,以判定分泌性腹泻模型的建立,利用实时光定量PCR法检测各段肠道组织CLCAs基因的表达.结果 LPS成功诱导小鼠发生了分泌性腹泻;小鼠十二指肠、空肠、回肠和结肠中均有CLCAs基因的转录;注射LPS后,十二指肠、空肠、回肠和结肠的CLCA1、CLCA2、CLCA3、CLCA4、CLCA6基因转录水平均发生上调,与1h组相比,8h组各基因转录水平显著上调.注射LPS后,十二指肠未检测到CLCA5的表达,但空肠、回肠CLCA5的表达均上调.结论 LPS引起的分泌性腹泻与各肠段CLCAs基因的差异表达有关.
关键词： 钙激活Cl-通道基因 分泌性腹泻 肠道 基因表达 实时定量聚合酶链反应 小鼠 -
PERK-eIF2α-ATF4信号通路参与调控磷酸三钙磨损颗粒诱导的假体周围骨溶解
目的 探讨蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)-真核细胞起始因子2α(eIF2α)-活化转录因子4(ATF4)介导的内质网应激通路在磷酸三钙(TCP)磨损颗粒诱导假体周围骨溶解中的作用.方法 取雄性ICR小鼠30只,随机分为3组:假手术组(sham,n=10)、TCP磨损颗粒组(模型组,n=10)和salubrinal干预组(SAL,n=10).采用TCP磨损颗粒诱导小鼠颅骨溶解模型,于术后第2天颅顶局部注射SAL(1 mg/kg),每隔2d1次,持续干预2周.实验结束后处死动物取颅骨和外周血.Western blotting法检测TCP磨损颗粒植入部位周围骨组织中内质网应激分子伴侣葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、C/EBP同源蛋白(CHOP)表达水平及PERK-eIF2α-ATF4信号通路的活化情况;HE染色和抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色观察SAL对假体周围骨溶解和破骨细胞形成的影响;Real-time PCR检测SAL对破骨细胞活化相关基因抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)和c-fos的mRNA水平;ELISA法检测SAL对血清中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)和前列腺素E2(PGE2)水平的影响.结果 TCP磨损颗粒可诱导假体周围骨组织发生内质网应激反应,同时激活PERK-eIF2α-ATF4信号通路,表现为TCP磨损颗粒组小鼠颅骨组织中内质网应激通路蛋白GRP78、CHOP和磷酸化PERK(p-PERK)、磷酸化eIF2α(p-eIF2α)和ATF4蛋白表达均显著上调,而PERK和eIF2α蛋白明显下调(P＜0.05);而颅顶局部注射eIF2α特异性抑制剂SAL可明显阻止TCP磨损颗粒诱导假体周围破骨细胞形成和骨溶解,减少TRAP、MMP-9和cathepsin K的mRNA水平(P＜0.05);同时抑制TNF-α、PGE2和IL4β等炎症因子的产生(P＜0.05).结论 PERK-eIF2α-ATF4介导的内质网应激通路参与调控TCP磨损颗粒诱导的小鼠颅骨溶解;抑制该信号通路可减轻TCP磨损颗粒诱导的假体周围骨溶解和关节松动.
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Smad2/3与Smad7在大鼠化疗性卵巢早衰卵泡中的表达和意义
目的 探讨顺铂对大鼠卵巢结构和功能损伤的影响及其可能的分子机制.方法 3月龄SD雌性大鼠随机分为对照组(C组,5只)和化疗组(H组,5只).H组给予每只大鼠腹腔注射顺铂2 mg/(kg.d),C组给予腹腔注射等体积生理盐水,连续注射7d后检测大鼠卵巢指数(卵巢湿重/体重);酶联免疫吸附法检测血清雌二醇(E2)和促卵泡刺激素(FSH)水平;苏木素-伊红染色观察卵泡发育并计数各级卵泡;免疫组织化学和Real-time PCR法检测各组Smad2、磷酸化Smad2(p-Smad2)、Smad3、磷酸化Smad3(p-Smad3)、Smad4和Smad7的蛋白和mRNA表达.结果 与C组相比,H组大鼠卵巢体积减小,生长卵泡数明显减少(P＜0.05),大鼠卵巢指数下降(P＜0.05),血清中E2水平降低和FSH水平上升(P＜0.05).免疫组织化学和Real-time PCR结果显示,Smad2(p-Smad2)、Smad3(p-Smad3)、Smad4和Smad7蛋白在卵巢各级卵泡均有表达,H组Smad2蛋白和mRNA表达增加(P＜0.05),Smad2磷酸化水平(p-Smad2)表达增高(P＜0.05);Smad3、Smad4和Smad7蛋白和mRNA表达减少(P＜0.05),p-Smad3表达降低(P＜0.05).结论 顺铂诱导大鼠卵泡损伤并促进卵巢早衰,引起卵泡细胞内Smad2表达增加,Smad3、Smad7表达降低,Smad细胞内信号通路参与了化疗性卵巢损伤的过程.
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黄芪丹参联合应用可延缓大鼠失神经骨骼肌萎缩
目的 探讨黄芪丹参联合应用对大鼠失神经骨骼肌萎缩的治疗效果.方法 取雄性健康8周龄SD大鼠20只,随机分为对照组、治疗组.两组均切断右侧坐骨神经约1cm,建立右下肢失神经腓肠肌萎缩模型.治疗组术后每日采用黄芪与丹参各1.5ml混合液,腹腔注射给药;对照组不做任何处理.于给药后的第2周和第3周时间点,各取两组大鼠双侧腓肠肌,测量肌湿重,计算肌湿重比值;另取两组右侧腓肠肌测量肌纤维横截面积、总蛋白含量、细胞凋亡率、叉头蛋白(FoXO3a)、肌萎缩F-box蛋白(MAFbx) mRNA及蛋白表达水平.结果 第2周对照组、治疗组肌湿重比值:0.62±0.07、0.76±0.05;肌纤维横截面积:300.24±17.87、365.49±24.19;总蛋白量:63.32±5.30、80.28±3.12;细胞凋亡率:20.34±2.51、12.62±1.20; FoXO3a蛋白及mRNA表达:0.828±0.090、0.643±0.090、24.45±7.21、19.38±5.55;MAFbx蛋白及mRNA表达:1.224±0.090、0.956±0.040、27.45±8.50、19.44±5.64;第3周对照组、治疗组肌湿重比值:0.35±0.03、0.59±0.07;肌纤维横截面积:253.38±13.32、314.50±16.74;总蛋白量:50.34±4.12、67.70±5.42;细胞凋亡率:33.45±1.71、17.53±1.26;FoXO3a蛋白及mRNA表达:1.963±0.150、1.236±0.060、35.62±6.24、27.91±7.71;MAFbx蛋白及mRNA表达1.487±0.050、1.240±0.123、43.63±8.22、35.39±7.96,两组相比,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 黄芪丹参联合应用可延缓大鼠失神经骨骼肌萎缩,其可能的机制为抑制细胞凋亡、延缓总蛋白降解速度;抑制蛋白降解通路FoXO3a、MAFbX mRNA和蛋白表达水平.
关键词： 叉头蛋白3a 肌萎缩F-box蛋白 黄芪 丹参 失神经 骨骼肌 免疫印迹法 实时定量聚合酶链反应 大鼠 -
基质细胞衍生因子-1α和白细胞介素-1β诱导淋巴管内皮表型的作用
目的：探讨基质细胞衍生因子-1α（ SDF-1α）及白细胞介素-1β（ IL-1β）诱导内皮细胞表达淋巴管表型的作用。方法 SDF-1α和IL-1β分别诱导内皮细胞株CRL-1730，用Real-time PCR、Western blotting 及免疫细胞化学等方法检测其内皮及淋巴管标志物，的表达情况。结果 SDF-1α诱导培养之后，CRL-1730细胞株的内皮细胞标志物血管性血友病因子（vWF）、血管内皮钙黏蛋白（VE-cadherin）、血管内皮生长因子受体（VEGFR）2随其浓度增高而表达降低，淋巴管标志物平足蛋白（ podoplanin ）、同源异形盒蛋白-1（ Prox-1）和淋巴管内皮透明质酸受体-1（LYVE-1）随其浓度增高而表达增高。 IL-1β诱导之后，CRL-1730细胞株的vWF、VEGFR2和podoplanin、prox-1、LYVE-1的变化趋势同SDF-1α，而VE-cadherin的表达量基本不变。结论 SDF-1α和IL-1β都能够诱导血管内皮细胞表达淋巴管标志物。
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Pin1抑制剂对小鼠植入前胚体外发育的影响
目的 观察Pin1在小鼠植入前胚中的定位分布及其抑制剂胡桃醌(Juglone)对小鼠植入前胚体外发育的影响.方法 免疫荧光染色观察不同发育阶段植入前胚中Pin1的分布;收集小鼠1-细胞胚,以KSOM培养液为对照组,以培养液中添加有不同浓度的Juglone为实验组,观察各组1-细胞胚体外发育情况;Real-time PCR检测体外发育2-细胞胚内干细胞转录因子(Sox2、Oct4 、c-Myc和Klf4)mRNA表达水平.结果 小鼠不同发育阶段植入前胚中都存在Pin1的表达,胞质和胞核内均有分布,且核内荧光着色明显比胞质强;10 μmol/L和25 μmol/L胡桃醌持续作用93h(注射人绒毛膜促性腺激素后27h ～ 120h)使1-细胞胚阻滞于2-细胞阶段,极少能过渡至4-细胞胚(P＜0.01).25μmol/L胡桃醌短时间作用18h(注射人绒毛膜促性腺激素后27～ 45h)同样使1-细胞胚发育阻滞于2-细胞胚(P ＜0.01);25μmol/L胡桃醌组2-细胞胚内Sox2 mRNA表达水平低于KSOM组(P＜0.05),而Klf4、c-Myc和Oct4 mRNA表达水平无明显变化(P＞0.05).结论 小鼠1-细胞胚之后,Pin1主要定位在细胞核内,提示其可能参与细胞转录活动.且Pin1抑制剂(胡桃醌)能使2-细胞胚至4-细胞胚过渡率明显降低,并使干细胞转录因子Sox2 mRNA表达下调,提示Pin1在小鼠植入前胚早期发育阶段具有一定作用,其参与调控合子基因组激活与干细胞转录因子Sox2有关.
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小鼠胚胎生殖细胞系的建立及其印记状态
目的 成功建立小鼠胚胎生殖细胞(EGCs)系,并初步分析小鼠胚胎生殖细胞的印记状态.方法 建立交配后12.5d(12.5dpc)原始生殖细胞(PGCs)来源的小鼠EGCs,通过碱性磷酸酶(AKP)染色、免疫荧光细胞化学、体内分化及体外分化等方法检测EGCs的多能性,并以小鼠胚胎干细胞(ESCs)为对照,应用Real-time PCR检测EGCs中与发育相关的Ins2、Lgf2、H19、Lgf2r等11个父源与母源印记基因的表达情况.结果 成功建立小鼠EG细胞系,EGCs克隆AKP染色显示有高水平的AKP活性,免疫荧光细胞化学方法显示克隆表达小鼠ESCs多能性标记物Oct4及细胞表面标记SSEA-1.核型分析检测显示,小鼠EGCs为正常的40条染色体,体内可分化出3个胚层来源的组织,说明小鼠EGCs具有多能性；Real-time PCR结果显示EGCs的印记基因表达量显著高于ESCs.结论 12.5dpc PGC来源的EGCs的印记基因处于擦除状态.
关键词： 胚胎生殖细胞 印记基因 实时定量聚合酶链反应 小鼠 -
输尿管梗阻及再通大鼠肾组织中单核-巨噬细胞相关因子动态表达
目的：探讨输尿管梗阻及再通大鼠肾间质纤维化发生和恢复过程中单核-巨噬细胞相关因子的动态表达。方法将48只SD大鼠随机分成梗阻和再通两个实验部分，梗阻部分分为假手术组（ sham，n＝6）、单侧输尿管梗阻（UUO）3d（n＝6）、UUO 7d（n＝6）和UUO 14d（n＝6）；再通部分分为双侧输尿管梗阻（RBUO）0d（n＝6）、RBUO后再通3d（n＝6）、RBUO后再通7d（n＝6）和RBUO 后再通14d（n＝6）。术后3、7和14 d后处死取其肾脏组织。采用HE和Masson染色观察肾组织病理改变和间质纤维化程度；免疫组织化学染色检测肾组织内单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）、巨噬细胞克隆刺激因子（M-CSF）和活化巨噬细胞标志物CD68的表达水平；Real-time PCR检测MCP-1和M-CSF mRNA表达水平；ELISA测定TGF-β1含量。结果与Sham大鼠相比，UUO大鼠随着梗阻时间延长，纤维化程度加剧。同时TGF-β1水平明显升高。输尿管再通后，纤维化程度随时间延长明显减轻，且TGF-β1水平明显下调。 UUO大鼠肾组织中， MCP-1和M-CSF mRNA 和表达蛋白随梗阻时间延长而增加；梗阻再通后， MCP-1和M-CSF mRNA和蛋白表达随再通时间延长持续下降。 MCP-1和M-CSF在UUO或再通大鼠肾组织中的表达与CD68呈现一致性变化趋势。结论输尿管梗阻后，M-CSF和MCP-1的动态表达反映单核-巨噬细胞的活化和聚集状态，这可能是间质纤维化发生十分重要的炎症基础。而输尿管再通可抑制活化和趋化的单核-巨噬细胞，控制炎症反应，缓解肾间质纤维化。
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孕酮调节谷胱甘肽S-转移酶Omega-1在小鼠妊娠早期子宫腔上皮及腺上皮中的表达
目的 研究谷胱甘肽S-转移酶Omega-1(Gsto 1)在小鼠胚胎着床过程中的表达和孕酮的调节.方法 105只CD1小鼠,分为正常妊娠模型和类固醇激素处理模型.正常妊娠模型中,收集妊娠第1～第5天子宫,采用Real-time PCR、原位杂交和Western blotting 3种方法检测Gsto1的表达变化;类固醇激素处理模型均采用卵巢切除2周后的小鼠,又分为雌孕激素处理组、孕酮处理不同时间组和孕酮受体拮抗剂Ru486处理组,所有组中的对照均用芝麻油处理.雌孕激素处理组中,收集芝麻油、雌激素、孕酮、雌激素加孕酮分别处理12h后的子宫;孕酮处理不同时间组中,收集芝麻油和孕酮分别处理1、3、12、24 h后的子宫;Ru486处理组中,收集芝麻油、Ru486、孕酮、Ru486加孕酮分别处理12h后的子宫.类固醇激素处理模型使用Real-time PCR和Western blotting两种方法检测Gsto1的表达变化.结果 Gsto1主要在妊娠第1～4天的子宫腔上皮及腺上皮中表达,其中,妊娠第1～3天表达量较高,第4天表达量较低,第5天着床点和非着床点均不表达.孕酮诱导Gsto1的表达,雌激素不能诱导Gsto1的表达,并能抑制孕酮对Gsto1的诱导.Ru486降低孕酮对Gsto1的诱导,孕酮处理1、3、12 h均促进Gsto1的表达,但作用24 h后,抑制Gsto1的表达.结论 Gsto1在小鼠妊娠早期子宫腔上皮及腺上皮中表达,雌激素能够拮抗孕酮对Gsto1的诱导,孕酮可以通过孕酮受体调节Gsto1的表达,并且具有短时调节作用.
关键词： 谷胱甘肽S-转移酶Omega-1 子宫 孕酮 免疫印迹法 实时定量聚合酶链反应 小鼠 -
卵泡刺激素与卵泡刺激素及黄体生成素共同干预对玻璃化冻存小鼠卵巢组织血管内皮生长因子表达的影响
目的 通过在玻璃化冻存全程给予小鼠卵巢组织卵泡刺激素(FSH)及FSH和黄体生成素(LH)共同干预,观察冻融卵巢组织的形态学改变以及两种激素干预对冻存卵巢组织血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响,寻找佳的提高冻融卵巢组织卵泡存活及VEGF表达的激素干预方式.方法 4周龄C57 BL/6J小鼠卵巢组织分为新鲜对照组(CG),玻璃化冻存对照组(VCG),300IU/L FSH全程干预玻璃化冻存组(OG-FSH),以及150IU/LFSH+ 150IU/L LH全程干预玻璃化冻存组(OG-FSH+ LH),每组30个卵巢样本.通过常规组织学、Western blotting 技术,观察并分析各组卵巢组织形态结构改变及VEGF蛋白表达量;通过荧光定量PCR技术(Real-time PCR)检测VEGF mRNA表达情况.结果 OG-FSH+ LH组正常卵泡百分比高,且显著高于OG-FSH组(P ＜0.05);VEGF蛋白表达量在OG-FSH+ LH组显著高于OG-FSH组(P＜0.05);荧光定量PCR检测结果表现为VEGF mRNA表达量在OG-FSH+ LH组高,其次为OG-FSH组,低是VCG组(P＜0.05).结论 玻璃化冻存全程添加FSH+ LH的干预方式较单独FSH干预具有更高正常卵泡百分比和更佳的VEGF蛋白表达.
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活性维生素D3在大鼠肺纤维化发生发展中的作用及对miR-29a表达的影响
目的 探讨活性维生素D3[1,25 (OH)2D3]在大鼠肺纤维化发生发展中的作用及对miR-29a的影响.方法 150只SD雄性大鼠随机分为纤维化发生干预组(90只)和纤维化后干预组(60只),纤维化发生干预组分为模型组Ⅰ、给药组Ⅰ和对照组Ⅰ(n =30),纤维化后干预组分为模型组Ⅱ、给药组Ⅱ和对照组Ⅱ(n=20).模型组Ⅰ/Ⅱ和给药组Ⅰ/Ⅱ经气管注入博来霉素(5mg/kg)建立肺纤维化模型,对照组Ⅰ/Ⅱ经气管注入等体积生理盐水.给药组Ⅰ/Ⅱ分别于手术后第2天和第14天腹腔注射活性维生素D3,模型组Ⅰ/Ⅱ分别于手术后第2天和第14天腹腔注射等量的活性维生素D3溶剂(0.1％乙醇和99.9％的丙二醇),对照组Ⅰ/Ⅱ分别在术后第2天和第14天腹腔注射等量的生理盐水.各种处理均为两天1次.纤维化发生干预组分别于手术后第14天、第21天和第28天处死大鼠取材,纤维化后干预组分别于手术后第21天和第28天处死大鼠取材,各小组每个时间点10只大鼠.用Masson染色法观察各组实验大鼠肺中胶原纤维的差异,用碱水解法检测羟脯氨酸含量的变化,用实时定量PCR检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原蛋白(Col)Ⅰ mRNA及miR-29a的相对表达量,用免疫组织化学方法检测α-SMA和ColⅠ蛋白质表达水平,并经图像分析进行量化.结果 博来霉素处理后,第14天大鼠肺部已经出现纤维化,随着时间推移,纤维化进一步加重.模型组Ⅰ/Ⅱ和给药组Ⅰ/Ⅱ中的羟脯氨酸含量、α-SMA和Col Ⅰ的mRNA和蛋白质表达都明显高于对照组Ⅰ/Ⅱ,而其miR-29a表达与对照组Ⅰ/Ⅱ相比则明显减少.给药组Ⅰ/Ⅱ中miR-29a的表达与模型组Ⅰ/Ⅱ相比有所增加(P＜0.05).在纤维化发生干预组中,与模型组Ⅰ相比,给药组Ⅰ在3个时间点羟脯氨酸含量、α-SMA 、Col Ⅰ的mRNA和蛋白质表达都显著降低(P＜0.05),但在纤维化后干预组中的给药组Ⅱ中羟脯氨酸含量、α-SMA、Col Ⅰ的mRNA和蛋白质表达比模型组Ⅱ虽有所降低,但差异无显著性(P＞0.05).结论 活性维生素D3对大鼠肺纤维化的发生发展具有一定的抑制作用,其预防效果更好一些,并且能促进miR-29a的表达,活性维生素D3可能是通过促进miR-29a的表达来抑制肺纤维化的发生发展.
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miR-182靶向作用环磷酸腺苷反应元件结合蛋白1调控人黑素瘤A375细胞的增殖和侵袭
目的 探讨miR-182对人皮肤黑素瘤细胞系A375细胞的增殖与侵袭能力的影响,及miR-182影响黑色素细胞增殖的机制.方法 利用阳离子脂质体LipofectamineTM 2000将miR-182模拟物或抑制剂转染人黑素瘤A375细胞,以使miR-182过表达或低表达,采用MTT方法检测细胞活力变化,应用Transwell小室法检测A375细胞侵袭能力的变化,同时通过Real-time PCR检测核转录因子环磷酸腺苷反应元件结合蛋白1(CREB1) mRNA的表达情况,采用Western blotting检测CREB1蛋白的表达水平.结果 与对照组相比,miR-182沉默能够显著增强A375细胞增殖和侵袭能力,P＜0.01,显著降低CREB1蛋白与mRNA的表达水平,P＜0.01;miR-182过表达的作用与之相反.结论 miR-182沉默增强A375细胞增殖和侵袭能力可能与降低CREB1蛋白相关.
关键词： miR-182 增殖 侵袭 环磷酸腺苷反应元件结合蛋白1 转染 A375细胞 实时定量聚合酶链反应 人 -
MicroRNA-539靶向调控E2F转录因子3抑制肝癌的发生与发展
目的 探讨肝癌组织中microRNA-539(miR-539)表达水平及其抑制肝癌细胞增殖的作用机制.方法 收集90例肝癌患者术后肝癌组织及癌旁组织标本,用实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测组织中miR-539表达量.在PCL/PRF5、Huh7和QGY-7701肝癌细胞中转染miR-539模拟物(mimics),用Real-time PCR检测miR-539表达量.用MTT法检测miR-539对肝癌细胞增殖的影响;用流式细胞仪检测miR-539对肝癌细胞凋亡的影响;用免疫印迹法检测miR-539对肝癌细胞中E2F转录因子3(E2F3)蛋白表达的影响.结果 肝癌组织中miR-539表达量显著低于癌旁组织(P＜0.05);miR-539表达量与肝癌患者性别、年龄及肝癌组织分化程度无关(P＞0.05);与肿瘤直径和淋巴结转移相关(P＜0.05).转染miR-539 mimics组肝癌细胞中miR-539表达量显著高于空白组和miR-539 NC组(P＜0.05).在QGY-7701细胞中,过表达miR-539能显著抑制细胞增殖(P＜0.05),降低E2F3蛋白的表达(P＜0.05),对细胞凋亡无明显作用(P＞0.05).结论 miR-539是肝癌发生中的抑癌因子,可能是通过靶向下调E2F3蛋白水平达到抑制癌细胞的增殖.
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黄芪多糖联合顺铂对小鼠Lewis肺癌细胞肺转移的影响
目的 观察黄芪多糖(APS)联合顺铂(DDP)对小鼠Lewis肺癌细胞肺转移、核因子(NF)-κB、P38、P53及Caspase-9表达的影响.方法 将90只Lewis小鼠随机分为模型组、顺铂组(6mg/kg DDP)、APS组(50、100、200)mg/kg,联合用药组[1/2 DDP+APS,即:(3+25、3+50、3+100)mg/kg].各组均于造模第2天起用药,APS每日1次,DDP每周1次,连续20d.观察肿瘤肺转移情况,采用Real-time PCR法和Western blotting法检测肿瘤组织中NF-κB、P38、P65蛋白和基因,并用免疫组织化学检测Caspase-9的表达.结果 与模型组相比,各治疗组均可降低肺转移灶数目(P＜0.05或P＜0.01);除P38外,APS中、高剂量组可使小鼠Lewis肺癌组织中NF-κB p65、P53表达降低,Caspase-9表达增高;联合用药高剂量组作用则接近DDP组.结论APS可抑制小鼠Lewis肺癌细胞的转移,抑制NF-κB和丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路的激活,这可能是其抑制肿瘤转移的机制之一;APS与减半剂量的DDP铂类化疗药物联合使用时,作用增强,APS对DDP有增效减毒作用.
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膜联蛋白A7在胃癌组织中的表达和意义
目的 检测膜联蛋白A7(ANXA7)在胃癌组织中的表达改变,探讨胃癌的发生机制.方法 收集人胃癌组织55例及正常胃组织25例,细胞裂解液裂解组织细胞,蛋白定量试剂盒进行蛋白定量后,Western blotting法和Real-time PCR法分别于蛋白水平和基因转录水平检测ANXA7在胃癌组织和正常胃组织中的表达改变,并用免疫组织化学法对ANXA7在细胞中的定位和表达进行检测.结果 ANXA7在胃癌中蛋白水平和转录水平的表达均显著增高,与正常组相比差异有显著性(P＜0.05);ANXA7在胃癌细胞中定位于细胞质.结论 膜联蛋白A7在胃癌中的表达增高有可能是胃癌发生的机制之一.
关键词： 膜联蛋白A7 胃癌 免疫印迹法 实时定量聚合酶链反应 人
