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中西医结合心脑血管病杂志社大鼠脑梗死后神经前体细胞移行及电针作用的研究
目的 研究成年大鼠脑梗死后电针作用对内源性神经前体细胞移行的影响.方法 采用易卒中型肾性高血压大鼠(RHRSP),电凝法凝闭大脑中动脉(MCAO).用Garcia评分、HE染色、免疫荧光等方法观察电针对脑梗死后1周、2周、3周、4周大鼠脑内梗死灶体积,行为学评分及5-溴脱氧尿核苷(Bromodeoxyuridine,Brdu)、Doublecortin(DCX)阳性细胞数的干预作用,并与脑梗死组和对照组比较.结果 电针治疗后前3周梗死体积较脑梗死组缩小(P<0.05);电针后2 d与3 d大鼠行为学评分较梗死组高(P<0.05);MCAO后梗死灶边缘有Brdu阳性细胞和DCX阳性细胞分布.电针组Brdu阳性细胞较脑梗死组明显增加(P<0.05),电针组DCX阳性细胞数在1周末明显高于脑梗死组(P<0.05).结论 电针促进神经功能恢复,减小脑梗死体积,并使缺血灶周移行的神经前体细胞增多,可能与其改变脑内微环境密切相关.
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骨髓间充质干细胞上清液治疗大鼠脑缺血的作用机制
目的 观察骨髓间充质干细胞上清液经尾静脉注射治疗大鼠脑缺血的干预效果,探讨骨髓间充质干细胞移植体内作用机制.方法 建立大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型.16只健康Wistar大鼠分为假手术组、缺血对照组、上清液低浓度组、上清液高浓度组.模型制作24 h后各组腹腔注射5-溴脱氧尿核苷(bromodeoxyuridine,BrdU) 标记处于增殖状态的神经前体细胞,应用免疫组织化学染色检测缺血后7 d脑组织BrdU、BrdU+NSE、BrdU+GFAP阳性细胞数.结果 脑梗死后7 d侧脑室室管膜下区、海马齿状回区BrdU、BrdU+NSE、BrdU+GFAP阳性细胞数开始增多,上清液高浓度组的上述阳性细胞数明显多于对照组(P<0.01)和低浓度组(P<0.05).结论 骨髓间充质干细胞上清液可以促进脑梗死大鼠损伤原位内源性神经前体细胞的增殖、分化.
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BRL-CM小鼠胚胎干细胞及体外诱导的研究
目的探讨以Buffalo大鼠肝细胞培养上清(BRL-CM)替代含LIF培养液体外培养小鼠胚胎干细胞(ESC)的可行性;无血清体外诱导ESC为神经前体细胞(NPC).方法以BRL-CM维持ESC生长并抑制其分化,用含LIF的培养液作为对照,硝基四氮唑蓝/5-溴-4氯-3-吲哚基磷酸(NBT/BCIP)显色检测碱性磷酸酶.采用N2选择性无血清培养法获取NPC,免疫组化法检测巢蛋白(Nestin)鉴定.结果 BRL-CM与含LIP的培养液一样能维持ESC未分化状态,无血清培养基诱导ESC后获得细胞的86%为NPC.结论 BRL-CM可替代LIF用于ESC培养,且经济、简便.采用N2选择性培养基可获得较高纯度的NPC.
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Notch在脊椎动物神经发育中作用的研究进展
Notch具有高度保守性,从无脊椎动物到脊椎动物的多个物种中均有表达.在脊椎动物胚胎发育过程中,Notch信号控制神经前体细胞的分化方向、影响神经元突起的延伸、调节神经元迁移和脑区形成.Notch在脊椎动物神经系统中的研究越来越引起人们的重视,尤其是其在哺乳动物新皮质形成过程中的作用研究将有可能从根本上揭示出脊椎动物端脑发育进化的分子机制.
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脂肪来源间充质干细胞的生物学特性及临床应用前景
组织工程技术发展的关键是获得具有来源方便、广泛、具有分化能力的种子细胞.脂肪来源间充质干细胞的发现及研究,证明了它可以充当这一角色.它具有多项分化潜能,在合适的诱导条件下可以分化为骨细胞、软骨细胞、神经前体细胞,心肌细胞等.它的这些分化能力,给临床上一些疾病如组织缺损性疾病,心肌梗死,基因疾病的治疗带来了曙光.脂肪来源的干细胞,因其取材方便、安全和扩增速率高等特点必将在细胞治疗和组织工程方面有更广阔的应用前景.
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BrdU标记法检测不同年龄阶段小鼠神经前体细胞的增殖潜能
背景:BrdU是胸腺嘧啶核苷类似物,常用来标记前脑室管膜下区具有增殖潜能的神经前体细胞.目的:建立不同年龄阶段BrdU标记方法,系统分析不同年龄阶段神经前体细胞增殖特点以及变化规律.方法:选取胚胎期小鼠、新生小鼠、成年小鼠和老年小鼠各5只,腹腔注射BrdU,观察不同年龄阶段神经前体细胞增殖潜能及不同年龄阶段前脑衰老细胞,探讨微环境对神经前体细胞增殖潜能的影响.结果与结论:胚胎期小鼠、新生小鼠、成年小鼠和老年小鼠前脑室管膜下区BrdU+细胞分别为(897.20±22.38),(262.17±26.26),(76.67±5.63),(43.8±2.61)个,随年龄增加细胞增殖潜能逐渐降低(P < 0.05).成年小鼠和老年小鼠脑室周围有大量β-半乳糖苷酶染色阳性衰老细胞,说明随年龄增加脑内β-半乳糖苷酶染色活性增强,衰老细胞逐渐增多,神经前体细胞生存微环境失衡可能与神经前体细胞增殖潜能下降有关.
关键词： 神经前体细胞 5-溴脱氧尿嘧啶核苷 β-半乳糖苷酶 增殖 衰老 -
胚胎干细胞源性神经前体细胞移植脑缺血大鼠局部细胞的免疫反应
背景:神经前体细胞的免疫原性各家研究结果不一,尤其是体内移植后的机体免疫反应模式需要进一步研究.目的:体外观察神经前体细胞组成型及诱导型主要组织相容性抗原表达情况;体内观察神经前体细胞移植入大鼠脑缺血组织后局部免疫细胞活化情况,探讨神经前体细胞的移植排斥可能性及模式.方法:自pCX-hrGFP ES-D3胚胎干细胞诱导分化神经前体细胞,流式细胞术体外检测主要组织相容性抗原Ⅰ,Ⅱ类分子表达及v-干扰素诱导前后表达变化.实验分3组,磷酸盐缓冲液组、神经前体细胞组分别于大脑中动脉缺血大鼠模型造模后经侧脑室给予磷酸盐缓冲液注射及神经前体细胞移植,假手术组不造模.免疫组化法观察纹状区ED1+、CD4+、CD8+细胞浸润情况;淋巴细胞再刺激增殖实验观测神经前体细胞诱导移植大鼠颈部淋巴细胞的增殖指数.结果与结论:神经前体细胞组成型高表达主要组织相容性抗原Ⅰ类分子,几乎不表达主要组织相容性抗原Ⅱ类分子;经γ-干扰素诱导后,主要组织相容性抗原Ⅰ类分子进一步上调,主要组织相容性抗原Ⅱ类分子亦有轻度上调,提示神经前体细胞有可能引起机体免疫反应.移植实验表明,与假手术组相比,磷酸盐缓冲液组及神经前体细胞组均表现强烈的ED1+、CD4+、CD8+细胞浸润(P＜0.05),说明脑缺血损伤本身能导致局部免疫细胞活化;神经前体细胞组比磷酸盐缓冲液组有更强的ED1+、CD4+细胞浸润(P＜0.05),提示神经前体细胞移植可能导致局部免疫更进一步活化,且以CD4+T细胞反应为主.磷酸盐缓冲液组及神经前体细胞组神经前体细胞诱导下的增殖指数值均较假手术组升高(P＜0.01),但前两组增殖指数值比较差异无显著性意义(P＞o.05),提示脑组织局部炎症导致颈部淋巴细胞增殖性增加,而离体神经前体细胞不足以单独刺激致敏淋巴细胞增殖.
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体外局部微环境下小鼠胚胎干细胞向神经前体细胞的定向诱导分化
背景:周围微环境能够调节胚胎干细胞在体外的诱导分化情况,可能与多种信号通路及细胞因子作用有关.目的:观察局部微环境对体外培养的小鼠胚胎干细胞向神经前体细胞定向诱导分化的影响.设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2005-10/2006-04在上海第二医科大学发育生物学研究中心实验室完成.材料:清洁级孕13.5 d的C57BL/6昆明鼠6只,由中科院上海实验动物中心提供.携带LacZ标记基因的小鼠胚胎干细胞株S8由上海市发育生物学研究中心提供.方法:取孕鼠胚胎,采用组织块消化法制备小鼠胚胎成纤维细胞,经丝裂霉素C处理得到滋养层细胞.将携带LacZ标记基因的小鼠胚胎干细胞株S8解冻复苏,加入含白血病抑制因子的高糖DMEM培养基体外扩增培养,将细胞克隆吹打成单细胞悬液,加到滋养层细胞上,在37℃、体积分数为0.05的CO2培养箱中培养.胚胎干细胞传代后,再加入含全反式维甲酸的高糖DMEM培养基,以单纯加入高糖DMEM培养基作为空白对照,调整细胞浓度为3×108L-1,吹打法悬浮培养48 h,收集悬浮液,反复离心去上清,移入铺有明胶的培养皿中,培养9 d.主要观察指标:诱导前后细胞形态及生长状态变化,RT-PCR检测诱导后细胞向神经前体细胞的分化情况.结果:胚胎干细胞在含有白血病抑制因子的高糖DMEM培养基中能够保持未分化状态,克降生长良好:换用含全反式维甲酸的高糖DMEM培养基悬浮培养后,4.0～5.0 h聚集成团,形成圆球状的类胚体.加入全反式维甲酸的诱导组内胚层细胞呈多边形且数量较多,对照组内胚层细胞呈长梭形且数量少.诱导后细胞表达神经干细胞特异性标志巢蛋白,神经细胞特异性标志微管相关蛋白2呈弱表达,不表达神经胶质细胞特异性标志胶质纤维酸性蛋白.结论:体外培养的小鼠胚胎干细胞可保持末分化状态,具有不断增殖的能力,经白血病抑制因子与全反式维甲酸两步诱导后可分化为神经前体细胞.
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成鼠骨髓间充质干细胞体外分化为神经前体细胞的研究
目的:探讨成年大鼠骨髓间充质干细胞(MSC)体外分化为神经前体细胞的可能性.方法:MSC原代培养、传代后在细胞因子和氧化剂作用下进行诱导.形态学观察,免疫细胞化学、流式细胞分析和细胞电生理检查.结果:MSC体外可诱导为神经前体细胞,诱导后有表面抗原nestin表达,5 h分化率49.8%,同时具有早期神经干细胞电流特性.结论:骨髓来源的神经前体细胞治疗中枢神经系统疾病成为可能.
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现代医学200词131.神经干细胞(Neural stem cells)
神经干细胞是具有自我复制能力和多向分化能力的未分化神经系统细胞.从神经干细胞生成神经前体细胞和神经胶质前体细胞,再由这些细胞向神经细胞、星形细胞以及少突细胞分化.神经干细胞不仅存在于胎儿期,在成年哺乳动物的脑部(嗅球、侧脑室周围、海马齿状回)也可发现,并于近从人脑也成功分离、培养了神经干细胞.神经干细胞作为研究热点,其理由是①可以应用于阐明神经系统的分化机制;②可作为移植的供体细胞应用于功能再生和重建等.
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神经前体细胞基因调控研究进展
神经前体细胞的基因调控主要包括基因修饰、基因转录的诱导、miRNA的调控等.其中,目前研究较多的基因是HOX -B基因、Sonic hedgehog基因、Noggin基因和miRNA.本文重点就这些基因对神经前体细胞的增殖和分化的调控作一综述.
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胚胎干细胞源性树突状细胞对同源性神经前体细胞脑内移植耐受诱导
目的：观察脑缺血环境下胚胎干细胞源性树突状细胞（esDCs）能否诱导同源性神经前体细胞（NPCs）的移植耐受。方法：分别自129／svj pCX-eGFP ES-D3诱生NPCs及129／svj ES-D3诱生esDCs。线栓法制作MCAo模型SD大鼠并相应分为预处理组及对照组，术后1周预处理组经尾静脉注射esDCs而对照组注射PBS，两组动物在预处理1周后侧脑室注射NPCs，2周后（MCAo术后4周）免疫组化观察纹状区CD4＋、CD8＋、ED1＋细胞的分布差异，MTT法观察颈部淋巴细胞增殖性（ PI），逆转录PCR（ RT-PCR）半定量局部IL-10、IFN-γmRNA表达差异，荧光显微镜观察GFP标记NPCs海马存活率。结果：预处理组大鼠，CD4＋细胞浸润显著低于对照组（134.7±36.2 vs 198.8±59.6，P＜0.05），NPCs存活率显著高于对照组（P＜0.05），但预处理组对ED1＋（298.8±75.9 vs 302.2±88.5）、CD8＋（145.8±45.4 vs 134.3±39.0）细胞浸润、局部细胞因子mRNA IFN-γ（1.697±0.273 vs 1.829±0.250）、IL-10（1.147±0.260 vs 1.264±0.119）及外周淋巴细胞增长率（ PI，1.245±0.211 vs 1.331±0.235）无明显影响。结论：esDC可能通过降低局部CD4＋细胞反应诱导针对同源性NPCs免疫耐受，尚无确切证据表明细胞因子途径参与该过程，确切的机理尚需更深入研究。
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脑梗死大鼠神经前体细胞增殖水平的研究
目的研究脑梗死病灶周围及海马处神经前体细胞增殖水平的动态变化.方法采用易卒中型肾性高血压大鼠(RHRSP),电凝大脑中动脉(MCA)主干制成脑梗死(MCAO)模型.行大鼠神经功能评定,免疫组化观察并计数梗死灶边缘、对侧镜区及双侧海马5-溴脱氧尿核苷(Bromodeoxyuridine,BrdU)标记的细胞.结果 MCAO后大鼠神经功能评分减低,5d时恢复正常.MCAO后梗死灶边缘、对侧镜区及双侧海马均有BrdU阳性细胞分布,且病灶侧多于病灶对侧,集中分布于病灶周围.结论脑缺血可诱导神经前体细胞增殖并移向病灶,可能成为脑梗死恢复的重要物质基础.
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SOX2对牙髓干细胞神经分化的促进作用及其意义
目的：探讨转录因子 SOX2对牙髓干细胞（DPSCs）神经分化的影响，为研究 DPSCs神经分化的机制提供依据。方法：从人源第三磨牙牙髓中分离 DPSCs （DPSCs 组），通过逆转录病毒感染方法构建过表达SOX2的DPSCs （DPSCs-SOX2组），以空白载体感染的 DPSCs 作为对照组（DPSCs-vector组），采用神经分化培养基诱导各组DPSCs分化为神经前体细胞（NPCs）。采用 CCK-8法分析各组 NPCs的增殖指数（PI）；采用qPCR和流式细胞术检测各组 NPCs 中 Nestin和 Pax6基因的表达水平；采用免疫荧光和流式细胞术分析各组NPCs在神经元分化方面的能力和分化后β3-Tubulin的表达效率。结果：通过神经分化培养基的定向诱导，正常DPSCs、DPSCs-vector和DPSCs-SOX2均可通过分化形成 NPCs，但 DPSCs-SOX2组 NPCs 的 PI 和 NPCs 中Nestin和Pax6表达水平明显高于 DPSCs组和 DPSCs-vector组（P＜0.05）；DPSCs-SOX2组 NPCs 在神经元分化方面也具有一定的优势，分化后细胞的β3-Tubulin表达效率明显高于其他2组（P＜0.05）。结论：SOX2对DPSCs的神经分化具有一定的促进作用。
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Nogo-A及其受体在中枢神经系统发育过程中作用及机制的研究进展
Nogo-A及其受体在成年哺乳动物的中枢神经系统(CNS)中,尤其是在中枢神经系统损伤及修复过程中的作用及机制已经被广泛而深入的研究,但是它们在CNS发育中的扮演的角色却了解甚少.新近研究表明,Nogo-A在CNS发育过程中神经前体细胞分化及迁移,轴突的生长及可塑性的变化以及少突胶质细胞前体细胞分化和成髓鞘化等过程中发挥着重要的作用.
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神经前体细胞增殖标志巢蛋白在缺血性脑损伤中的意义
本文通过对巢蛋白的结构、功能、表达及在缺m性脑损伤后的表达规律等方面深入研究,发现其可作为神经前体细胞的特异性标志物,用于爪踪骨髓间充质干细胞移植后向神经元样细胞的分化,为细胞替代疗法治疗缺血性脑损伤提供鉴定方法.
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外源性碱性成纤维细胞生长因子对成年大鼠弥漫性脑损伤后海马齿状回神经前体细胞增殖影响的研究
0.01),其中第6天时达到峰值.弥漫性脑损伤大鼠侧脑室注射外源性bFGF后齿状回神经前体细胞增殖水平较对照组显著升高(P< 0.05). 结论 弥漫性脑损伤可诱导成年大鼠海马齿状回神经前体细胞增殖水平在一定的时间窗内上调,外源性bFGF可促进弥漫性脑损伤后齿状回神经前体细胞增殖水平的上调.
关键词： 神经前体细胞 碱性成纤维细胞生长因子 弥漫性脑损伤 -
胚胎干细胞分化的神经前体细胞移植治疗帕金森病的实验研究
目的 探讨胚胎干细胞(embryonic stem cell,ESC)来源的神经前体细胞(Neural precursor cell)移植治疗帕金森病的可能性.方法 将胚胎干细胞诱导分化到神经前体细胞阶段后移植到大鼠帕金森病模型纹状体中,并设生理盐水组做对照研究,观察两组移植后行为学改变及检查纹状体内DA、DOPAC的含量.结果 移植组在2～4周后与对照组相比行为学上有明显改善(P＜0.01),纹状体内DA、DOPAC的含量显著提高(P＜0.01).结论 胚胎干细胞经诱导分化成神经前体细胞可用于帕金森病的修复治疗,胚胎干细胞是良好的干细胞移植治疗用细胞来源.
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神经干细胞及其临床应用前景
存在于神经系统中的神经干细胞,是一种具有潜在增值分化能力的神经前体细胞,是新生神经细胞的"发源地".作为一种具有终身自我更新能力的细胞,神经干细胞能分化产生神经系统的各类细胞,这一过程中经过不对称分裂产生一个祖细胞(neural progenitor)和另一个干细胞而实现的,其中,祖细胞具有有限的自我更新能力,并自发分化为成神经元和成胶质细胞,进而再转变为神经元及神经胶质细胞[1].
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Cdk抑制剂影响小鼠神经前体细胞增殖和分化的研究
目的 探讨不同的细胞周期蛋白依赖性激酶(Cdk)抑制剂对小鼠大脑皮层神经前体细胞(NPCs)体外增殖和分化的影响.方法 选用两种分别针对Cdk2和Cdk4的特异性抑制剂Cdk2 Inhibitor Ⅱ和Cdk4 Inhibitor Ⅱ,用细胞免疫荧光、蛋白质免疫印迹和实时定量PCR的方法来检测它们对胚胎11.5天小鼠皮层神经前体细胞(NPCs)体外增殖和分化的影响.结果 通过BrdU细胞增殖实验,发现Cdk2 Inhibitor Ⅱ和Cdk4 Inhibitor Ⅱ均不影响NPCs的增殖.TuJ1细胞免疫荧光染色结果显示Cdk2 Inhibitor Ⅱ可以促进TuJ1(+)细胞的比列从(24.58±4.78)%增加到(37.42±3.85)%(P<0.001),而Cdk4 Inhibitor Ⅱ不影响神经元的分化;蛋白质免疫印迹和实时定量PCR的检测显示其抑制NPCs向星型胶质细胞分化.结论 Cdk2 Inhibitor Ⅱ和Cdk4 Inhibitor Ⅱ对NPCs的体外分化有着不同的影响,提示了Cdk2和Cdk4可能在小鼠胚胎期大脑皮层的发育过程中起着不同作用.
关键词： 神经前体细胞 细胞周期素依赖性激酶 增殖 分化
