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益气解毒方通过MAPK/ERK信号通路抑制鼻咽癌细胞增殖
该文研究益气解毒方水提物对人鼻咽癌CNE2细胞增殖的抑制作用,并初步探讨其作用机制,为益气解毒方的临床应用提供新的理论依据.用不同质量浓度(0.125,0.25,0.5,1.0 g·L-1)的益气解毒方水提物、阳性对照药(顺铂,4.0 mg·L-1)、抑制剂PD98059(50 μmol·L-1)、激活剂isoproterenol hydrochloride(ISO,20 μmol·L-1)、激活剂ISO+益气解毒方水提物0.5 g·L-1处理CNE2细胞,使用实时无标记细胞功能分析仪(RTCA)和CCK-8法检测细胞增殖活性,并计算出半数抑制浓度(IC50),用荧光双染流式细胞仪PI染色检测药物作用后细胞周期分布情况;Westem blot法检测周期相关蛋白和MAPK/ERK信号通路相关蛋白的表达水平.RTCA和CCK-8法检测结果显示,与正常培养组比较,益气解毒方水提物能够有效抑制CNE2细胞增殖(P＜0.01),呈剂量和时间依赖性,48 h IC50为0.5 g·L-1;细胞周期结果显示,水提物处理48 h后,G0/G1期比例降低,G2/M期比例增加,阻滞细胞周期于G2/M期(P ＜0.01);Western blot实验结果显示,经过不同浓度水提物处理48 h后,细胞周期相关蛋白cyclinD1,cyclinD3,CDK2表达下调,MAPK/ERK信号通路相关蛋白p-c-Raf,p-MEK,p-ERK1/2表达明显下调,与对照组相比差异具有统计学意义(P＜0.05);在此基础上,加入MAPK/ERK信号通路的激活剂和抑制剂,结果显示,加入激活剂ISO,细胞增殖明显高于正常培养组,周期相关蛋白cyclinD1,cyclinD3,CDK2表达量均提高,同时,该信号通路关键蛋白p-c-Raf,p-MEK,p-ERK1/2的表达量也相对上升;而加入抑制剂PD98059后,细胞增殖明显低于正常培养组,相应蛋白的表达量亦降低,与对照组相比差异明显(P＜0.05).益气解毒方水提物主要通过下调MAPK/ERK信号通路关键蛋白p-c-Raf,p-MEK,p-ERK1/2的表达,阻滞细胞周期,抑制CNE2细胞增殖.
关键词： 益气解毒方 鼻咽癌 细胞增殖 MAPK/ERK信号通路 -
齐墩果酸通过MAPK/ERK信号传导通路对U87 MG细胞增殖及凋亡的体外实验研究
目的 探讨齐墩果酸(0A)对神经胶质母细胞瘤U87MG细胞增殖及细胞凋亡的影响.方法 以U87MG细胞为研究对象,使用25、50、80、100、150和200μg/ml的OA处理24、48和72h后,采用MTT实验检测OA对体外培养U87MG细胞增殖抑制作用,计算其抑制率；采用划痕法检测OA对U87MG细胞迁移能力的影响；用流式细胞仪分析OA对U87MG细胞周期与凋亡的影响；通过Western blot检测OA对MAPK/ERK信号传导通路活性的影响.结果 50μg/ml以上浓度的OA处理48h后,U87MG细胞的形态发生不同程度的变化,大量细胞脱落.150μg/ml和200μg/ml的OA处理U87MG细胞72h后,生长抑制率可达100％,与对照组相比差异有统计学意义(P＜0.01).25μg/ml的OA处理48 h后,迁移至划痕区的细胞数量相比于对照组明显减少.经50μg/mlOA作用48h后,处于Go/G1期的细胞从64.23％上升至75.03％,说明发生Go/G1期阻滞.同一浓度下,细胞凋亡率达到18.77％.U87MG细胞中MEK和ERK蛋白的磷酸化水平受到明显的抑制.结论 OA可显著抑制U87 MG细胞的生长增殖,呈一定的量效关系；OA可明显抑制U87MG细胞的迁移,并能抑制MAPK/ERK信号传导通路的激活.OA通过抑制MAPK/ERK信号传导通路的激活,可以抑制神经胶质母细胞瘤细胞的增殖生长.
关键词： 神经胶质母细胞瘤 齐墩果酸 MAPK/ERK信号通路 细胞凋亡 U87 MG细胞 -
赫赛汀获得性耐药胃癌细胞非标定量蛋白质组学研究
基于非标定量(label-free quantitative)蛋白质组学对HER2表达阳性胃癌细胞(N87)和赫赛汀获得性耐药细胞(N87/R)进行蛋白质组学研究,发现耐药细胞蛋白质组的变化.提取的蛋白质样品经还原烷基化、FASP酶解;肽段经自制反相柱(small manual reversed phase,sRP)分离、LC-MS/MS分析;获取的数据通过Protein Database 2.1软件搜库鉴定.采用基于强度定量法(intensity based quantification,IBQ)进行蛋白质定量,寻找差异表达蛋白质.基于Web Gestalt数据库对差异蛋白质进行基因本体分析(gene ontology,GO)、基因-疾病网络构建及通路富集分析.共鉴定蛋白质8 509个,对其中7 163个蛋白质进行生物信息学分析,与母本组相比,耐药组中110个蛋白质显著上调,70个下调.GO富集显示,差异蛋白质在细胞成分、生物过程、分子功能方面明显不同;基因-疾病网络分析表明,差异蛋白质与肿瘤转移、肿瘤侵袭及炎症等相关;Wikipathway富集表明,IL-2、MAPK/ERK、mTOR、auroraA、Ret激酶、NF-κB、免疫调控及代谢通路在耐药细胞中有显著变化;Western blot证实,ERK1/2在耐药组中表达显著增加;MAPK/ERK通路抑制剂SCH772984能够选择性降低耐药细胞活力.结果表明,MAPK/ERK通路激活是赫赛汀获得性耐药的重要机制.本研究为胃癌赫赛汀耐药机制研究提供了理论基础.
关键词： 赫赛汀 获得性耐药 蛋白质组学 MAPK/ERK信号通路 -
黑色素瘤小分子靶向药物研究进展
黑色素瘤(melanoma)是一种恶性的黑色素细胞肿瘤.我国黑色素瘤的发病率逐年攀升,而中晚期黑色素瘤尚无有效的治疗方法,因此研发新的治疗药物显得尤为迫切.本文对当前黑色素瘤靶向药物进行了总结,重点讨论了MAPK/ERK信号通路的抑制剂(如BRAF抑制剂和MEK抑制剂).
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丝裂原活化蛋白激酶/细胞外调节蛋白激酶信号通路与肿瘤血管新生的关系
丝裂原活化蛋白激酶/细胞外调节蛋白激酶(MAPK/ERK)信号通路参与调控肿瘤的生长和转移，而肿瘤的生长需要新生血管的维持，肿瘤血管的生成需要血管内皮细胞的参与，包括内皮细胞的增殖、迁移、侵袭。作为Ras/Raf/MEK/ERK途径是该网络信号的核心，本文就MAPK/ERK信号通路中各环节与肿瘤血管新生的联系做一综述，进一步研究其在抑制肿瘤生长方面做出推论。
关键词： MAPK/ERK信号通路 肿瘤 血管新生 -
快速眼球运动睡眠剥夺对记忆和突触可塑性的影响及其分子机制的研究进展
睡眠不足是快节奏的现代社会人们需要面对的越来越严重的问题之一，而长期的睡眠不足又会导致认知功能障碍。睡眠剥夺会影响实验动物的学习记忆能力已得到广泛认可。本文回顾总结了近些年有关快速眼球运动睡眠剥夺对记忆和突触可塑性的影响及其分子机制的研究新进展，以期为相关治疗靶点和治疗药物的研究提供理论支持和启发。
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绿原酸抑制HepG2细胞增殖的体外研究
目的 研究不同浓度绿原酸对肝癌细胞的抑制作用,以及对肝癌细胞MAPK/ERK信号通路的影响. 方法 分别应用50,125,250,500,1 000μmol/L绿原酸与肝癌细胞株HepG2细胞共孵育24h,Trypan blue染色并进行HepG2细胞计数,Western blotting测定HepG2细胞MAPK/ERK信号通路的ERK1/2磷酸化,CM-H2 DCFDA荧光探针测定HepG2细胞内ROS浓度,观察绿原酸对HepG2细胞增殖的抑制作用. 结果 与0μmol/L组比较,500,1 000 μmol/L组HepG2细胞的增殖分别降低了45.5和81.7个百分点;绿原酸抑制HepG2细胞MAPK/ERK信号通路的ERK1/2磷酸化(P＜0.01);绿原酸促进HepG2细胞内ROS浓度升高. 结论 绿原酸通过抑制MAPK/ERK信号通路的活化遏制肝癌细胞增殖.
关键词： 绿原酸 MAPK/ERK信号通路 HepG2细胞 -
PI3K/Akt/mTOR和MAPK/ERK信号通路在胃癌细胞生长中协同作用及机制
目的 初步探讨PI3K/Akt/mTOR和MAPK/ERK信号通路在胃癌细胞生长中的协同作用.方法 采用不同浓度的PI3K/Akt/mTOR和MAPK/ERK信号通路抑制剂rapamycin与PD98059分别单独及联合作用于胃癌细胞SGC-7901.采用CCK8法检测SGC-7901细胞增殖情况;实时荧光定量PCR检测关键基因mRNA的表达;蛋白印迹法(WB)检测相关蛋白的表达;流式细胞术检测细胞周期和凋亡的变化.结果 Rapamycin(12.5、25、50、100、150、200 nmol/L)与PD98059(25、50、100、200、300、400 μmol/L)单独作用可抑制SGC-7901细胞增殖活性,联合作用也可抑制其活性,且联合组的抑制作用强于单独作用(P＜ 0.05).与rapamycin、PD98059单独作用相比,联合组对AKT、mTOR、MEK、ERK基因mRNA表达和p-AKT、p-mTOR、p-MEK1/2、p-ERK1/2蛋白表达的抑制作用明显增强(P＜0.05).联合组阻滞于G0/G1期的细胞比例显著增多,且具有更强的促凋亡作用.结论 PI3K/Akt/mTOR和MAPK/ERK信号通路在胃癌细胞生长中具有一定的协同调控作用.
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迷迭香酸通过MAPK/ERK信号通路对结肠癌细胞增殖及凋亡的影响
[目的]探讨迷迭香酸通过丝裂原激活的蛋白激酶/胞外信号调节的蛋白激酶(MAPK/ERK)信号通路对结肠癌细胞增殖凋亡的影响.[方法]取对数生长期LS174T细胞,加入迷迭香酸(0、25、50和100μmol/L)处理24、48和72h后,CCK-8法检测迷迭香酸对细胞增殖活性的影响.以l00μmol/L迷迭香酸处理细胞,24、48和72h后,采用流式细胞仪检测迷迭香酸对细胞周期和细胞凋亡率的影响;采用蛋白质印迹法检测细胞中Bax、Bcl-2和Cleaved Caspase3蛋白的表达及ERK1/2磷酸化水平.[结果]迷迭香酸对LS174T细胞呈时间浓度依赖性抑制细胞增殖;100μmol/L迷迭香酸处理LS174T细胞不同时间后,与对照组相比,迷迭香酸组细胞中S期和G2/M期细胞所占比例明显降低,G0/G1期比例显著升高,但组间时间效应不显著(P＞0.05);而Bcl-2蛋白表达、ERK1/2磷酸化水平明显降低,细胞凋亡率、Bax和Cleaved Caspase-3蛋白表达量显著增强,均表现出明显的时效关系(P＜0.05).[结论]迷迭香酸能够抑制结肠癌LS174T细胞增殖,诱导细胞凋亡,其作用机制可能与抑制MAPK/ERK信号通路有关.
关键词： 迷迭香酸 结肠肿瘤 细胞增殖 细胞凋亡 MAPK/ERK信号通路 -
MAPK/ERK信号通路参与褪黑素 对阿尔茨海默病大鼠小脑的神经保护作用
目的 观察褪黑素能否通过MAPK/ERK信号通路,发挥对阿尔茨海默病大鼠小脑的神经保护作用.方法 将32只♂SD大鼠随机分为4组:对照组、Aβ1-42侧脑室注射组(AD)、褪黑素腹腔注射组(MT)、Aβ1-42侧脑室注射结合褪黑素腹腔注射组(AD+MT).HE染色观察各组大鼠小脑皮层的病理学变化;免疫荧光染色观察各组颗粒细胞标记物Ne-uN、浦肯野细胞标记物Calbindle和p-ERK蛋白的表达情况;Western blot检测各组小脑组织中p-ERK蛋白的表达.结果 HE 染色结果显示,AD 组大鼠小脑皮层的神经元数量减少,细胞排列紊乱,细胞形态改变,褪黑素可明显减轻侧脑室注射Aβ1-42 对小脑的病理学损害;免疫荧光结果显示,与AD组相比,AD + MT 组颗粒细胞标记物NeuN 的蛋白表达增加,以Calbindin 标记的浦肯野细胞个数明显增多(P < 0. 01),p-ERK 蛋白表达减少(P < 0. 01);Western blot 结果显示,与AD 组相比,AD + MT 组小脑组织中p-ERK 蛋白表达水平降低.结论 褪黑素可能通过抑制MAPK/ ERK 信号通路的激活,发挥对小脑皮层神经原的保护作用.
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氯吡格雷对人胃黏膜上皮细胞紧密连结蛋白ZO-1表达的影响
目的 探讨氯吡格雷(Clopidogrel)对人胃黏膜上皮细胞(GES-1)的损伤机制.方法 建立GES-1单层细胞模型,将细胞分为阴性对照组、U0126干预组、氯吡格雷干预组、U0126预处理后氯吡格雷干预组(联合组),采用MTT比色法和流式细胞术检测各组细胞增殖、凋亡情况;免疫细胞化学检测各组p-ERK1/2的表达情况;采用Western blotting检测各细胞组p-ERK1/2和紧密连接蛋白ZO-1的表达量.结果 与阴性对照组比较,U0126干预组、氯吡格雷干预组、U0126预处理后氯吡格雷干预组的细胞增殖明显受到抑制(P＜0.05);Western blotting结果显示:与阴性对照组比较,后3组的p-ERK1/2表达下降,与免疫细胞化学的趋势一致;ZO-1表达趋势亦与p-ERK1/2表达一致.结论 在GES-1细胞模型中,氯吡格雷可能通过抑制p-ERK1/2的表达来降低ZO-1的表达,从而损伤GES-1细胞.
关键词： 氯吡格雷 MAPK/ERK信号通路 ZO-1 -
雷贝拉唑对NSAIDs相关小肠损伤大鼠紧密连接蛋白Occludin表达的影响及其机制
目的 探讨雷贝拉唑对非甾体类抗炎药(NSAIDs)相关性小肠损伤大鼠紧密连接蛋白Occludin表达的影响及可能的机制.方法 将36只SD大鼠随机平均分为阴性对照组、双氯酚酸损伤组和雷贝拉唑处理组.采用双氯酚酸7.5 mg/(kg·d)灌胃,连续4d,制造大鼠NSAIDs相关性小肠损伤模型；而雷贝拉唑处理组在每次造模前0.5h予以15 mg/(kg·d)雷贝拉唑灌胃处理,连续4d.处死大鼠进行大体及病理观察小肠损伤情况,采用免疫组织化学和Western blot方法检测小肠组织中Occludin和磷酸化ERK( p-ERK)蛋白表达水平的变化.结果 雷贝拉唑处理组大鼠大体和病理损伤均低于损伤组(P＜0.05).Occludin蛋白在损伤组中表达较对照组明显下降(P＜0.05),而在雷贝拉唑处理组中的表达较损伤组上升(P＜0.05)；与阴性对照组相比,p-ERK蛋白在损伤组中表达上升(P＜0.05),在雷贝拉唑处理组中的表达较损伤组下降(P＜0.05).结论 雷贝拉唑对大鼠NSAIDs相关性损伤有保护作用,其机制可能是通过MAPK中的ERK途径,增加小肠上皮组织中Occludin蛋白表达,从而增强肠黏膜屏障功能.
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MAPK/ERK信号通路在大鼠视神经损伤后小胶质细胞活化中的作用及机制研究
目的 探讨丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)/细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)信号通路在大鼠视神经损伤后小胶质细胞活化中的作用及机制.方法 将100只成年雄性大鼠随机分为实验组50只和对照组50只,实验组采用荧光金双侧上丘逆行标记视网膜神经节细胞并在培养7d后制作视神经损伤模型,免疫组织化学方法检测2组视网膜铺片小胶质细胞计数情况,应用蛋白免疫印记法检测2组MAPK通路的ERK蛋白表达水平及磷酸化蛋白水平,并应用免疫组化法检测2组视网膜白介素10(IL-10)和肿瘤坏死因子(TNF-α)等表达水平;向实验组视网膜铺片添加ERK1/2通路阻断剂PD98059,再次检测其IL-10和TNF-α等表达水平及小胶质细胞计数情况.结果 与对照组比较,实验组ERK蛋白表达水平及磷酸化蛋白水平降低,视网膜铺片小胶质细胞计数降低,IL-10阳性率和TNF-α阳性率升高(P＜0.05).与阻断前比较,实验组阻断后6h的IL-10和TNF-α等表达水平升高,小胶质细胞计数降低(P＜0.05).结论 MAPK/ERK信号通路在大鼠视神经损伤后小胶质细胞活化中具有保护作用,其机制可能通过抑制炎症因子IL-10和TNF-α等表达而减少其视神经损伤并促进小胶质细胞活化.
关键词： MAPK/ERK信号通路 视神经损伤 小胶质细胞 活化 机制 -
miR-4306通过MAPK/ERK信号通路抑制血管紧张素Ⅱ诱导的主动脉夹层的形成
目的 探讨miR-4306对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的主动脉血管平滑肌细胞增殖、迁移的影响及作用机制.方法 将miR-4306 mimic转染至人主动脉血管平滑肌细胞(HA-VSMC),按照细胞处理方式分为miRNA-NC组、miR-NA-NC+AngⅡ组、miRNA-mimics组和miRNA-mimics+AngⅡ组;利用CCK-8细胞增殖法检测AngⅡ对HA-VSMC细胞的佳作用时间、浓度以及miR-4306对AngⅡ诱导的HA-VSMC细胞增殖的影响,细胞划痕实验检测miR-4306对AngⅡ诱导的HA-VSMC细胞迁移的影响,Western blot检测HA-VSMC细胞MMP-9、MAPK/ERK信号通路相关蛋白表达.结果 AngⅡ呈剂量和浓度依赖性的方式诱导HA-VSMC细胞增殖,组间和不同时间点之间差异具有统计学意义(均P<0.05).miR-4306过表达可以抑制AngⅡ诱导的HA-VSMC细胞增殖,与miRNA-NC+AngⅡ组比较,miRNA-mimics+AngⅡ组细胞增殖数量明显减少,组间差异具有统计学意义(P<0.05).miR-4306过表达可以抑制AngⅡ诱导的HA-VSMC细胞迁移,与miRNA-NC+AngⅡ组比较,miRNA-mimics+AngⅡ组细胞迁移距离增加,组间差异具有统计学意义(P<0.01).miR-4306过表达明显降低AngⅡ诱导的HA-VSMC细胞MMP-9蛋白和p-ERK1/2蛋白表达,与miRNA-NC+AngⅡ组比较,miRNA-mimics+AngⅡ组MMP-9、p-ERK1/2蛋白表达明显降低,组间差异具有统计学意义(均P<0.01).结论 miR-4306可能通过MAPK/ERK信号通路抑制AngⅡ诱导的血管平滑肌细胞增殖、迁移功能.
关键词： 微小RNA 血管紧张素Ⅱ 主动脉夹层 MAPK/ERK信号通路 -
少腹逐瘀汤对子宫内膜异位症大鼠MAPK/ERK信号通路的影响
目的:观察少腹逐瘀汤对子宫内膜异位症大鼠丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)/细胞外信号调节激酶(ERK)信号通路的影响,探讨少腹逐瘀汤治疗子宫内膜异位症的分子机制.方法:健康雌性SD大鼠随机分为空白对照组、模型组、痛经宝阳性对照组及少腹逐瘀汤低、中、高剂量组.构建大鼠子宫内腹异位症模型,药物处理4周后,HE染色观察异位子宫组织的病理变化;ELISA法检测宫腔组织中肿瘤坏死因子 α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)及IL-8的含量;RT-qPCR检测宫腔组织中ERK、血管内皮生长因子(VEGF)和基质金属蛋白酶9(MMP-9)的mRNA表达量;Western blot检测宫腔组织中核因子-κB(NF-κB)、MAPK和MAPK-ERK激酶(MEK)的蛋白含量.结果:与模型组相比,少腹逐瘀汤中、高剂量组大鼠子宫组织中TNF-α、IL-6及IL-8含量显著降低(P<0.05),ERK、VEGF和MMP-9的mRNA表达量显著降低(P<0.05),NF-κB、MEK和MAPK的蛋白表达显著下降(P<0.05).结论:少腹逐瘀汤通过调节MAPK/ERK信号通路中关键分子的作用,达到治疗子宫内膜异位症的效果.
关键词： 少腹逐瘀汤 子宫内膜异位症 MAPK/ERK信号通路 -
骨髓基质细胞介导的微环境对人肺腺癌A549细胞的作用
目的:探讨肿瘤微环境中人骨髓基质细胞HS-5对人肺腺癌A549细胞的作用及机制.方法:采用HS-5细胞条件培养基(HS-5 cell-conditioned medium,HS-5-CM)处理A549细胞,分别通过MTT实验和划痕愈合实验观察A549细胞的活力和迁移能力,应用qPCR检测CX3C趋化因子受体1(CX3C chemokine receptor 1,CX3CR1)的表达;加入丝裂原活化蛋白激酶/细胞外信号调节激酶(mitogen-activated protein kinase/extracellular signal-regula-ted kinases,MAPK/ERK)通路抑制剂U0126后,应用Western blot 法检测MAPK/ERK信号通路活化相关蛋白ERK及其磷酸化水平,划痕愈合实验检测抑制MAPK/ERK通路对HS-5-CM效果的影响,应用Western blot检测CX3CR1的表达情况.结果:HS-5-CM可以促进A549细胞的活力和迁移能力(P<0.01),同时A549细胞中CX3CR1的表达升高(P<0.05).MAPK/ERK通路抑制剂U0126可以有效抑制HS-5-CM处理后MAPK/ERK通路的激活(P<0.01),抑制HS-5-CM促进A549细胞迁移的能力(P<0.01),同时下调CX3CR1的表达(P<0.05).结论:HS-5细胞介导的微环境可以促进A549细胞的活力和迁移,其机制可能涉及MAPK/ERK信号通路的活化和CX3CR1的表达.
关键词： 骨髓基质细胞 肺癌 肿瘤微环境 MAPK/ERK信号通路 -
人参二醇组皂苷对再生障碍性贫血小鼠造血组织MAPK/ERK信号通路的诱导作用
目的:观察人参二醇组皂苷(PDS)对免疫介导型再生障碍性贫血(简称再障)小鼠骨髓细胞MAPK/ERK信号通路蛋白激酶及脾脏调节性T细胞的诱导作用,探讨其治疗再障的作用机制.方法:用[60Co]-γ射线5.0 Gy全身照射BALB/c小鼠,后经尾静脉输入DBA/2小鼠的淋巴细胞悬液,制备免疫介导型再障小鼠模型.60只小鼠随机分为6组,即正常组,模型组,PDS低、中、高剂量组,环孢素组.不同浓度药物灌胃治疗14 d测定各组小鼠外周血象,观察骨髓病理切片,Western blot 法及免疫组织化学法测定骨髓细胞MEK1/2、p-MEK1/2、ERK1/2和p-ERK1/2的蛋白水平,流式细胞术检测脾脏调节性T细胞比例.结果:再障小鼠外周血全血细胞减少,骨髓呈抑制状态;PDS治疗能够显著升高再障小鼠外周血象,增加脾脏调节性T细胞比例,呈剂量依赖性(P<0.05).PDS中、高剂量组显著上调骨髓细胞MEK1/2、p-MEK1/2、ERK1/2和p-ERK1/2的蛋白水平(P<0.05).结论:PDS能有效促进造血,上调再障模型小鼠骨髓细胞MAPK/ERK信号通路多种蛋白激酶的表达,可能是PDS促进骨髓造血功能恢复的作用机制之一.另外,PDS对再障模型小鼠的免疫功能有一定的调节作用.
关键词： 人参二醇组皂苷 再生障碍性贫血 MAPK/ERK信号通路 -
甲磺酸阿帕替尼对结肠癌HCT-116细胞增殖的抑制作用及其机制
目的 检测阿帕替尼对结肠癌HCT-116细胞的抑制作用,探讨其可能的作用机制及其影响的信号通路.方法 MTT方法检测不同浓度(0、0.5、1、1.5、2 μmol/L)的阿帕替尼对结肠癌HCT-116细胞的毒性作用,并设置卡培他滨阳性对照组;Annexin V-FITC/PI双染法检测上述不同浓度的阿帕替尼处理后结肠癌HCT-116细胞的凋亡情况,实时荧光定量PCR及Western Blotting技术检测其对凋亡相关基因及蛋白Bcl-2,Bax,Caspase-3的影响,Western blotting技术检测其对Akt、p-Akt、Erk 1/2和p-Erk1/2蛋白表达的影响.结果 MTT细胞毒性检测结果表明,阿帕替尼在体外能有效抑制HCT-116细胞的增殖,IC50为1.335 μmol/L.Annexin-V/PI双染法细胞凋亡检测结果表明,阿帕替尼能显著的诱导HCT-116细胞凋亡,并且呈浓度依赖性实时荧光定量PCR和Western blotting结果表明,阿帕替尼可以诱导促凋亡基因 Bax和Caspase-3的表达,并抑制抗凋亡基因Bcl-2的表达.Western blotting检测信号通路蛋白的结果表明,在阿帕替尼处理后p-Akt 和p-Erkl/2的表达显著降低,而Akt和Erk总蛋白水平没有变化.结论 阿帕替尼可通过抑制MAPK/Erk、PI3K/Akt信号转导通路来实现诱导细胞凋亡,从而达到抑制HCT-116细胞增殖的目的.
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PD98059抑制MAPK/ERK信号通路对胃癌细胞生物学功能的影响
目的:研究MAPK/ERK信号通路中关键信号分子MEK和ERK在胃癌SGC-7901细胞中的表达及PD98059抑制MAPK/ERK通路对胃癌细胞生物学功能的影响.方法:体外培养胃癌细胞株SGC-7901,不同浓度(0、25、50、100、200、300和400 mmol/L)PD98059处理24h后CCK-8法检测细胞增殖率变化;再用0、25、50和I00 μmol/L PD98059处理24 h后采用实时荧光定量PCR(qPCR)检测MEK和ERK mRNA的表达量;Western blot检测MEK和ERK蛋白的表达;流式细胞术检测细胞周期和凋亡变化.同时设正常胃黏膜上皮GES-1细胞为对照.结果:与正常胃黏膜上皮GES-1细胞相比,胃癌SGC-7901细胞中MEK和ERK mRNA的表达升高,差异具有统计学意义(P＜0.05);p-MEK、p-ERK蛋白的表达亦显著升高,差异具有统计学意义(P＜0.05).0～200μmol/L PD98059处理SGC-7901细胞后,细胞增殖率随着抑制剂浓度的升高而降低(P＜0.05).当PD98059浓度处于200～400 μmol/L时抑制作用逐渐趋于平稳.0～100 μmol/L PD98059作用后MEK、ERK mRNA的表达量低于对照组(P＜0.05),随着PD98059浓度升高,ERK mRNA表达量逐渐降低(P＜0.05).Western blot检测结果显示50和100 μmol/L PD98059作用后p-MEKI/2、p-ERKI/2蛋白表达降低(P＜0.05).且抑制剂PD98059使胃癌SGC-7901细胞发生G0/G1期阻滞,可诱导细胞凋亡.结论:MAPK/ERK信号通路在胃癌细胞中激活,PD98059通过抑制MAPK/ERK信号通路的活性可影响胃癌细胞的生物学功能.
关键词： 胃癌 MAPK/ERK信号通路 PD98059 细胞增殖 细胞凋亡
