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温热刺激对bcr／abl融合基因阳性的慢性粒细胞白血病细胞gp96转录水平的影响
目的：探讨温热刺激对bcr/abl融合基因阳性的慢性粒细胞白血病（chronic myeloid leukemia，CML）细胞gp96转录水平的影响，为CML热疗研究提供理论基础。方法通过骨髓涂片对初选患者进行诊断，荧光原位杂交（ FISH）技术检测bcr/abl融合基因，采集病例血细胞分为4组，对照组采用37℃温热刺激30 min，试验组分别经40℃、42℃、44℃进行温热刺激各30min，采用RT-PCR技术检测gp96 mRNA的转录水平。结果骨髓涂片表现为CML骨髓像，FISH检测bcr/abl融合基因阳性。温热刺激后，随着刺激温度的提高，gp96的转录水平也升高。结论在CML病例中开展热疗，可能通过gp96参与的机体免疫调节，有助于病情的缓解。
关键词： 慢性粒细胞白血病 Bcr/abl融合基因 gp96 热疗 -
细胞遗传学检测在慢性粒细胞白血病中的应用价值
目的 分析慢性粒细胞白血病(CML)初诊和急变期患者染色体核型分析和间期FISH技术检测BCR/ABL融合基因的结果,探讨两种细胞遗传学方法在CML中的临床应用价值.方法 60例CML患者,包括44例初诊的患者和16例急变期患者,进行染色体R显带核型分析,同时应用间期荧光原位杂交技术(FISH),利用BCR、ABL位点特异性探针,检测患者的BCR/ABL融合基因.结果 60例CML患者中,染色体R显带核型分析57例(占95％)患者Ph(+),3例Ph(-).FISH技术检测58例(占96.7％)患者BCR/ABL融合基因(+),2例BCR/ABL融合基因(-).44例初诊患者中,42例Ph(+)/BCR/ABL(+),占95.5％;,1例Ph(-)/BCR/ABL(+),占2.3％;1例Ph(-)/BCR/ABL(-),占2.3％;16例急变期CML患者,15例Ph(+)/BCR/ABL(+),占93.8％;1例Ph(-)/BCR/ABL(-),占6.2％.其中8例(占50％)患者染色体R显带核型分析发现额外染色体异常,额外异常有+7,+8,t(4;22),t(1;3),t(4;11)及双Ph染色体等.结论 常规R显带染色体核型分析和FISH技术在CML诊断均有重要的临床应用价值;FISH技术判断变异易位和Ph(-)/BCR/ABL(-)患者有重要意义;急变期染色体核型分析可预示病情进展.
关键词： 慢性粒细胞白血病 染色体核型 Bcr/abl融合基因 荧光原位杂交 -
慢性髓性白血病bcr/abl融合基因的克隆与表达
目的:克隆bcr/abl融合基因融合位点基因片段.方法:以慢性粒细胞白血病(CML)K562细胞株总RNA作为模板,采用RT-PCR方法扩增包含Bcr/abl(b3a2)融合位点基因片段.将RT-PCR物按正确的阅读框架,定向克隆到pEGFP-N3的下游,将重组质粒转化大肠杆JM109大肠杆菌,用PCR初筛.将PCR扩增阳性的重组子用EcoR Ⅰ和BamH Ⅰ双酶切鉴定,并进行序列的测定.结果:扩增出470bp的Bcr/abl融合位点基因片段,构建重组质粒pEGFP-bcr/abl,酶切产物的大小分别与预期相符.结论:成功地扩增bcr/abl融合位点基因片段及构建真核表达重组质粒pEGFP-bcr/abl.为在体外表达重组bcr/abl蛋白奠定基础.
关键词： 慢性髓性白血病 Bcr/abl融合基因 克隆 鉴定 -
儿童BCR/ABL融合基因阳性急性淋巴细胞白血病临床分析
目的:研究儿童BCR/ABL融合基因阳性急性淋巴细胞白血病临床特点、遗传学特征、治疗反应及转归.方法:分析2008年8月-2015年4月在山西省儿童医院血液科治疗的16例BCR/ABL融合基因阳性急性淋巴细胞白血病息儿的临床特点、遗传学特征、治疗反应及转归,比较其与同期住院的BCR/ABL融合基因阴性急性淋巴细胞白血病患儿,在年龄、性别、初诊时外周血白细胞绝对值、免疫分型、染色体、融合基因、诱导治疗第15天、第33天骨髓状态及转归等方面的异同.结果:BCR/ABL融合基因阳性组16例患者均为初诊患者,男性所占比例与同期住院BCR/ABL阴性组比较,差异无统计学差异;与BCR/ABL融合基因阴性组比较年龄偏大;初诊时外周血白细胞更高.16例患儿免疫分型均为B细胞型,融合基因均为BCR/ABLP190阳性,15例行染色体检查,8例为正常染色体,4例仅有Ph染色体异常,另3例还有次要染色体异常.16例均采用高危化疗方案治疗,泼尼松治疗反应、诱导治疗第15天骨髓常规、第33天骨髓、3个月MRD与BCR/ABL融合基因阴性组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).随访1～79个月,3年无事件生存率为20％,而同期住院BCR/ABL阴性组为82％,差异有统计学意义.结论:儿童BCR/ABL阳性急性淋巴细胞白血病为儿童高危型白血病,化疗疗效差.伊马替尼等酪氨酸激酶抑制剂对于儿童BCR/ABL阳性急性淋巴细胞白血病治疗评价还有待进一步研究.
关键词： Bcr/abl融合基因 急性淋巴细胞白血病 儿童 -
外周血单倍体造血干细胞移植治疗成人急性淋巴细胞白血病:监测微小残留病及干预复发
背景:异基因造血干细胞移植后复发是影响急性淋巴细胞白血病患者长期生存的主要问题.早期干预、预防移植后复发可以提高无病生存率、总体生存率,降低移植后死亡率.通过分子生物学技术监测微小残留病是目前广泛可靠、切实可行的方法.目的:动态监测成人急性淋巴细胞白血病患者外周血单倍体造血干细胞移植后微小残留病指标,探讨其预测早期复发的意义.方法:选择2011年6月至2017年6月在郑州大学第一附属医院行外周血单倍体造血干细胞移植治疗的急性淋巴细胞白血病患者53例,检测移植后1,3,6,12个月微小残留病指标变化,观察微小残留病水平与移植后复发的关系.结果与结论:①微小残留病阳性组与阴性组的无病生存率分别为20.0%和65.8%,总生存率分别为50.8%和68.9%,差异均有显著性意义;②移植后骨髓微小残留病阳性患者16例,进行干预治疗后,4例患者微小残留病转阴,至今未复发;③血液学复发患者11例,分别给予酪氨酸激酶抑制剂靶向治疗、化疗、供者淋巴细胞输注和二次移植,终血液学复发死亡,从发现微小残留病阳性到血液学复发的中位时间为100(7-190) d,期间给予干预,可延长复发时间;④1例患者拒绝治疗,终复发死亡;⑤结果表明,急性淋巴细胞白血病患者外周血单倍体造血干细胞移植后动态监测微小残留病水平,预防早期复发,及时给予干预治疗,可以提高移植后无病生存率、总体生存率,延长复发时间.
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异基因造血干细胞移植治疗慢性髓细胞性白血病监测染色体核型及融合基因表达
背景:有报告显示,70％的慢性髓细胞性白血病患者异基因造血干细胞移植后1-5个月的细胞遗传学和基因标志检测阴性,但个别病例移植后1-3个月内反复变化,移植3-12个月的阴性率可达89.5％.目的:监测异基因造血干细胞移植治疗慢性髓细胞性白血病后的细胞分子遗传学标志变化,探讨其预后意义.方法:纳入异基因造血干细胞移植治疗慢性髓细胞性白血病患者17例,移植后30d及2,3,4,6,12,24,36,48,60,72个月,采用骨髓细胞短期培养法和直接法G显带分析患者染色体,双色荧光原位杂交检测bcr/abl融合基因,RQ-PCR检测骨髓原代细胞的bcr/abl基因.结果与结论:17例患者中,8例为男患/男供者异基因造血干细胞移植,7例为男患/女供者异基因造血干细胞移植(同胞姐妹),移植后多次复查染色体核型为46XX(女性核型),未见Y染色体及其他畸变染色体核型;1例为女患/女供者异基因造血干细胞移植(其姐妹);1例为女患/无亲缘男供异基因造血干细胞移植,移植后1个月时染色体核型46XY,但bcr/abl阳性,4个月后持续表达46XY,bcr/abl阴性,观察超过96个月,为持续缓解,说明疗效良好;其中1男患/男供(全相合同胞弟)异基因造血干细胞移植后,1-12个月Ph染色体bcr/abl基因持续阳性表达,施行供者淋巴细胞输注,48个月后染色体bcr/abl转阴性表达,为持续缓解.结果表明,慢性髓细胞性白血病患者实施异基因造血干细胞移植后,染色体核型、bcr/abl融合基因监测对后续治疗选择、预后判断有重要参考价值.
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应用间期荧光原位杂交技术评估干扰素治疗慢性粒细胞白血病的疗效
目的探讨间期荧光原位杂交技术(FISH)检测慢性粒细胞白血病(CML)干扰素(IFN)治疗后体内残留Ph阳性细胞的可行性.方法应用间期FISH对7例未治疗CML患者和17例IFN-α-2b长期治疗CML患者检测体内Ph阳性细胞变化情况.结果正常对照组假阳性率为(3.87±0.94)%,确定正常值为小于6.68%(x±3s).未治疗组Ph阳性细胞平均为89.21%.干扰素治疗组Ph阳性细胞平均为44.86%,与未治疗组相比无显著性差异(P>0.05).细胞遗传学有效患者(CGR4例,PGR2例,共8个标本)Ph阳性细胞平均为26.30%,与未治疗组相比有显著性差异(P<0.05).而且Ph阳性细胞的减少与INF用药总剂量具有相关性(r=-0.666,P=0.002).结论间期FISH检测比染色体核型、RT-PCR技术更能准确地评价干扰素治疗后体内存有的白血病细胞的负荷量,评价干扰素治疗CML的疗效.
关键词： 荧光原位杂交 慢性粒细胞白血病 干扰素 Ph染色体 Bcr/abl融合基因 -
Real Time PCR监测慢性粒细胞白血病bcr/abl融合基因的临床意义
目的 通过Real Time PCR实时监测慢性粒细胞白血病bcr/abl融合基因的表达,探讨其在诊断及预后评价价值.方法 采用荧光定量Real Time PCR反应技术检测39例慢性粒细胞白血病及其它血液系统疾病20例的bcr/abl融合基因表达水平.结果 骨髓原始、外周血原始与bcr/abl融合基因拷贝数有显著相关性,初诊慢性粒细胞的bcr/abl融合基因表达水平普遍明显增高,经羟基脲±干扰素治疗后表达明显下降,复发或加速期患者可提前2-4个月左右早期发现,格列卫或移植治疗后,多数bcr/abl融合基因可转阴性.结论 bcr/abl融合基因检测对诊断慢性粒细胞白血病有重要价值,同样是慢性粒细胞白血病治疗和预后观察的决定性指标.
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双标记原位杂交法检测间期细胞BCR/ABL融合基因
目的:应用双标记原位杂交方法检测BCR/ABL融合基因.方法:BCR基因探针用地高辛标记,碱性磷酸酶显色;ABL基因用3H-dATP标记,核子乳胶放射自显影.结果:检测9例初治的慢性粒细胞白血病(CML)病人均为阳性,阳性细胞比例为93%;检测CML来源的K562细胞株阳性细胞占98.8%;正常人假阳性率为0.75%.结论:该方法简便、快速,适用于CML微小残留病的检测.
关键词： 白血病 髓样 慢性 原位杂交 Bcr/abl融合基因 -
慢性粒细胞白血病Ph1染色体和bcr/abl融合基因检测的意义
目的:探讨Ph1染色体和bcr/abl融合基因检测在慢性粒细胞白血病诊断中的意义.方法:选择95例慢性粒细胞白血病患者和20例缺铁性贫血患者作为研究对象,采用骨髓细胞短期培养法制备染色体、采用RT-PCR法分析bcr/abl融合基因.结果:95例慢性粒细胞白血病患者中,Ph1染色体阳性者83例(87.4%),bcr/abl阳性阳性者90例(94.7%),Ph1和bcr/abl均阳性83例(94.7%),Ph1阴性、bcr/abl阳性7例(7.4%),ph1和bcr/abl均阴性5例(5.3%).20例缺铁性贫血患者Ph1和bcr/abl均阴性.结论:Ph1染色体、bcr/abl融合基因的检测有助于慢性粒细胞白血病的诊断和鉴别诊断.
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以急淋为起始的慢性粒细胞白血病骨髓形态学及分子生物学特点
目的:研究以急性淋巴细胞白血病为起始的Ph1阳性、BCR/ABL融合基因阳性的慢性粒细胞白血病细胞形态学和分子生物学特点.方法:采用细胞形态学、分子生物学、组织化学、流式细胞免疫标记技术及染色体检测法.结果:骨髓象以原始、幼稚淋巴细胞为主,粒细胞比例相对于急性淋巴细胞白血病较高;细胞表面标记以CD19、CD20为主,中性粒细胞碱性磷酸酶积分减低,Ph染色体阳性、BCR/ABL融合基因阳性.结论:在细胞形态学基础上,同时开展Ph染色体和BCR/ABL融合基因检测对以急性淋巴细胞白血病为起始的Ph1阳性、BCR/ABL融合基因阳性的慢性粒细胞白血病的诊断是非常必要的.
关键词： 急性淋巴细胞白血病 ph1染色体 Bcr/abl融合基因 -
PTD-OD-HA融合蛋白对BALB/c裸鼠皮下K562细胞实体瘤的治疗作用
目的 观察PTD-OD-HA融合蛋白对BALB /c裸鼠皮下K562细胞实体瘤的治疗作用.方法 采用皮下注射K562细胞的方法建立裸鼠皮下实体瘤模型,每两天向实体瘤中间部位多点注射200μl浓度为10 Mg/ml的PTD-OD-HA融合蛋白,观察裸鼠瘤体生长情况;HE染色观察肿瘤组织病理学变化;TUNEL法和透射电镜观察肿瘤组织细胞的凋亡.结果 经FMOD-HA治疗的肿瘤体积明显缩小;肿瘤组织切片经HE染色可见细胞核浓缩和细胞染色加深;TUNEL法和透射电镜检测可见肿瘤细胞发生了凋亡的改变.结论 在BALB/c裸鼠体内,PTD-OD-HA融合蛋白具有抑制K562细胞增殖和促进其凋亡的作用.
关键词： 慢性粒细胞白血病 融合蛋白 Bcr/abl融合基因 小鼠 裸 -
BCR/ABL融合基因与慢性粒细胞白血病的发生
BCR/ABL融合基因是一个重要的凋亡抑制基因,具有较强的PTK活性.src激酶、蛋白激酶家族C、信号转导和转录激活因子(STAT)等在BCR/ABL融合基因介导的肿瘤恶性转化中起着重要的作用.
关键词： Bcr/abl融合基因 蛋白酪氨酸激酶 信号转导 -
荧光原位杂交和常规细胞遗传学在慢性粒细胞白血病研究中的应用
目的:应用荧光原位杂交(FISH)和染色体核型分析技术,探讨慢性粒细胞白血病(CML)细胞遗传学特点与临床预后的相关性.方法:采用骨髓细胞直接法和(或)短期培养法制备染色体标本,采用热变性姬姆萨显带技术(RHG)进行染色体核型分析.荧光染色体原位杂交技术检测40例CML患者的BCR/ABL融合基因.回顾分析282例CML的临床及细胞遗传学资料.结果:常规细胞遗传学(CC)分析表明,282例患者中268例Ph染色体阳性,占95.04%;14例Ph染色体阴性,占4.96%.其中250例Ph阳性细胞为100%,占90.32%.12例Ph阳性细胞为30%～99%,占4.48%,核型显示正常与Ph嵌合状态.6例核型为复杂变异异位,占2.24%.41例除Ph染色体外,还出现额外染色体异常,占15.30%,分别为双Ph,+8,+22,-Y,i(17q)等,其中28例为加速或急变患者,占68.29%.应用FISH技术检测,BCR/ABL融合基因阳性34例(含14例Ph染色体阴性中的8例),占85%;BCR/ABL阴性6例,占15%.结论:在常规细胞遗传学分析的基础上,选用分子遗传学FISH技术可以明显提高染色体异常的检出率及准确率.细胞遗传学对于CML的正确诊断、指导临床治疗、判断预后具有重要价值.
关键词： 慢性粒细胞白血病 细胞遗传学 荧光原位杂交 Bcr/abl融合基因 -
66例血液病患者bcr/abl融合基因、Ph染色体结果分析
CML特异性费城染色体(Philadephia,Ph)是由t(9:22)(q34:11)易位形成.9号染色体原癌基因abl(Abelson protooncogene)易位至22号染色体的断裂点簇集区(breakpointcluster region,bcr),发生重排,产生ber/abl融合基因,引起CML的始动突变.融合基因bcr/abl几乎见于所有的慢性粒细胞性白血病、25%～50%的急性B系淋巴细胞性白血病(ALL)和约5%的急性粒细胞性白血病中,本文统计了进行染色体和bcr/abl融合基因检查的初诊血液病66例,对其骨髓细胞染色体核型及bcr/abl融合基因进行分析.
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BCR/ABL重组质粒实时荧光定量PCR标准品的制备
目的:用T-A克隆法构建含BCR/ABL融合基因的重组质粒,并用实时定量PCR(RQ-PCR)方法制备标准品.方法:通过培养细胞,提取总RNA并逆转录为cDNA后做PCR,电泳胶回收纯化,T-A克隆与pUCm-T载体连接,转染DHSa菌,蓝白斑筛选阳性菌落后,大量提取质粒,再进行RQ-PCR,后制得BCR/ABL的重组质粒标准品.结果:蓝白斑筛选实验、PCR扩增均证实BCR/ABL融合基因重组到pUCm-T载体上,经RQ-PCR定量后得到BCR/ABL重组质粒标准品的标准曲线.结论:该方法能大量制备质粒标准品,并且可被推广应用.
关键词： Bcr/abl融合基因 pUCm-T载体 T-A克隆法 实时定量PCR -
慢性粒细胞白血病患者外周血BCR/ABL融合基因表达水平及意义
目的 观察慢性粒细胞白血病(CML)初发和急变患者外周血BCR/ABL基因的表达变化.方法 建立实时定量RT-PCR同时检测b2a2和b3a2两种融合基因亚型,检测25例CML初发和25例CML急变患者的外周血样本中BCR/ABL融合基因的表达.结果 BCR/ABL及GAPDH标准曲线的相关系数均为1.0,灵敏度为2 pg RNA,根据熔解温度的不同可以区分b2a2和b3a2两种融合基因亚型.CML急变患者外周血BCR/ABL融合基因的表达水平是初发患者的4.72倍.结论 本法简便、敏感、特异,可以相对定量BCR/ABL融合基因表达水平,有助于反映白血病细胞负荷,评价疗效及判断预后.
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慢性髓细胞白血病患者染色体分析及bcr/abl融合基因转录本定量的临床意义
目的探讨慢性髓细胞白血病(CML)患者染色体分析与bcr/abl融合基因定量的临床应用价值.方法17例CML患者采用骨髓细胞短期培养法制备染色体,应用G、R显带技术进行染色体分析,同时采用实时定量RT-PCR技术进行bcr/abl融合基因定量检测,并对其中的9例患者进行了跟踪观察.结果全部患者均检出Ph染色体及表达bcr/abl融合基因,阳性患者之间bcr/abl表达水平差异很大.常规药物治疗后稳定于慢性期的4例患者,bcr/abl表达水平轻度上升或下降,未发现新的染色体异常;进入急变期的3例患者bcr/abl表达平均上升了9.06倍,均出现新的附加染色体异常;2例异基因骨髓移植的患者bcr/abl表达水平随临床治疗而发生变化;bcr/abl变化趋势相同而细胞遗传学结果不同的患者,对药物治疗的反应不同,预后也不一样.结论染色体分析结合bcr/abl基因定量较为全面地反映了CML患者的生物学特性,与疾病进展密切相关,对CML的诊断、疗效评价、预后判断反映白血病细胞负荷有较大的临床价值.
关键词： 慢性髓细胞白血病 Ph染色体 Bcr/abl融合基因 定量PCR -
RT-PCR一步法检测慢性粒细胞白血病bcr/abl融合基因
应用RT-PCR一步法检测了42例慢性粒细胞白血病(CML)患者的bcr/abl融合基因,均显示bcr/abl基因阳性,其中21例为168 bp扩增带,18例为93 bp扩增带,3例同时具有168 bp和93 bp二条扩增带.bcr/abl融合基因检测,对CML的诊断、治疗及预后判断均有重要意义.RT-PCR一步法特异性好,敏感性高,简单快速,可节省试剂,值得推广应用.
关键词： 慢性粒细胞白血病 ph1染色体 Bcr/abl融合基因 -
老年急性淋巴细胞白血病分子生物学改变的初步观察
目的研究老年急性淋巴细胞白血病(ALL)的分子生物学特征. 方法应用多聚酶链反应技术(PCR)检测了16例老年ALL患者的bcr/abl融合基因、TCRγ基因重排(TCRγRA)以及IgH基因重排(IgHRA). 结果 16例患者中IgHRA 11例,TCRγRA 4例,两类基因重排均阴性1例;bcr/abl融合基因阳性9例,阳性率56.25%. 结论老年ALL以B-ALL为多,bcr/abl融合基因阳性率较高,可能是其治疗效果较差的原因之一.
