首页 > 文献资料
-
姜黄素抑制血管生成作用的实验研究
目的研究姜黄素对血管生成和内皮细胞生长的影响.方法利用生长因子(VEGF和bFGF)诱导的鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)血管增生模型观察姜黄素对血管生成的影响;利用培养的人脐静脉内皮细胞(HUVEC),采用MTT法观察不同时间、不同浓度姜黄素对内皮细胞增殖的抑制作用.结果姜黄素能明显抑制VEGF和bFGF诱导的CAM小血管生成,对内皮细胞增殖的抑制作用呈剂量和时间依赖性.结论姜黄素具有显著的抗血管生成作用.
-
山茱萸环烯醚萜苷类成分对 AGEs诱导 HUVEC 损伤的保护作用
目的：探讨山茱萸环烯醚萜苷类特征成分马钱苷、莫诺苷对糖基化终末产物（ AGEs ）诱导人脐静脉内皮细胞（ HUVEC）损伤的保护作用。方法体外培养HUVEC，用马钱苷、莫诺苷（终浓度分别为100、10、1μmol? L－1）预孵1 h后，再加入AGEs（200 mg? L－1）刺激，并设氨基胍为阳性对照，孵育24 h后，采用MTT法检测马钱苷、莫诺苷对HUVEC增殖率的影响；采用试剂盒检测细胞上清液中一氧化氮（NO）、内皮素（ET－1）、单核细胞趋化蛋白－1（MCP－1）和血管细胞黏附分子－1（ VCAM－1）；采用 Western blot 法检测HU－VEC中糖基化终末产物受体（ RAGE）、核转录因子（ NF－κB）的蛋白表达。结果山茱萸环烯醚萜苷类特征成分马钱苷、莫诺苷能抑制AGEs导致的HUVEC损伤，与空白对照组比较，模型组细胞RAGE、NF－κB蛋白表达上调（P＜0．01），ET－1、MCP－1、VCAM－1分泌增加（P＜0．01），NO水平降低（P＜0．01）。马钱苷、莫诺苷给药组能不同程度地下调 RAGE、NF－κB蛋白表达，减少ET－1、MCP－1、VCAM－1分泌，升高NO水平，与模型组比较差异具有显著性（ P＜0．05～0．01）。结论山茱萸环烯醚萜苷类特征成分马钱苷、莫诺苷对AGEs导致的HUVEC损伤具有明显的保护作用，其作用机制为下调RAGE蛋白表达，抑制RAGE受体相关NF－κB信号通路发挥抗炎作用，从而改善内皮细胞功能。
-
柚皮苷对高糖引起血管内皮损伤的保护作用与CX3 CL1及抗氧化有关
目的：研究柚皮苷(naringin,Nar)对趋化因子CX3CL1参与的慢性高糖诱导的人脐静脉血管内皮细胞( HUVEC)损伤机制的保护作用。方法 MTS法测定不同浓度的柚皮苷对正常HUVEC的活性影响,及不同葡萄糖浓度下对HUVEC的损伤程度。实验分为对照组( Ctrl)、柚皮苷组( Nar)、高糖组( HG)和高糖加柚皮苷组( HG+Nar)4组。细胞经各种条件处理5d后,硝酸还原酶法测定细胞上清液中一氧化氮(NO)含量,多功能酶标仪测定细胞内活性氧(ROS)含量, RT-PCR和Western blot检测CX3CL1 mRNA和蛋白的表达。结果高糖组与正常对照组相比NO水平明显降低,ROS含量则明显升高,高糖处理后加入柚皮苷能增加NO的产生,同时降低细胞内ROS含量,柚皮苷组与对照组之间差异无显著性。 RT-PCR和Western blot结果显示柚皮苷可以降低高糖组CX3CL1 mRNA和蛋白的表达,柚皮苷组与对照组相比无显著性差异。结论柚皮苷对趋化因子CX3CL1参与的慢性高糖引起的HUVEC损害具有保护作用,且其保护作用可能与其抗氧化应激及抗炎作用有关。
-
穿心莲内酯抑制 bFGF 诱导血管新生的研究
目的 研究穿心莲内酯 (andrographolide,Andro) 对碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)诱导的血管新生的影响.方法 在人原代培养的脐静脉内皮细胞上 (human umbilical vascular endothelial cell,HUVEC),采用MTT法观察Andro对bFGF诱导HUVEC细胞增殖的影响;采用transwell小室检测Andro对bFGF诱导细胞迁移的影响;采用Matrigel检测Andro对bFGF诱导内皮细胞管腔形成的影响.结果 25 μmol·L-1 浓度的Andro可以明显抑制bFGF诱导的HUVEC细胞增殖.1~25 μmol·L-1不同浓度的Andro 均可以抑制bFGF诱导的HUVEC细胞迁移,并呈现明显的剂量依赖性.2.5~25 μmol·L-1不同浓度的Andro均可以抑制bFGF诱导的HUVEC细胞管腔形成,并呈现明显的剂量依赖性.结论 Andro可以抑制bFGF诱导的血管新生.
-
灵菌红素体外对肿瘤转移相关生物学行为的影响
目的 探明灵菌红素(Metacycloprodigiosin,MP)对肿瘤转移相关生物学行为的影响.方法 利用MTT法检测MP对HUVEC和4TO7细胞增殖的影响;划痕法检测其对HUVEC细胞迁移能力的影响;Matrigel模仿基底膜检测MP对HUVEC细胞管腔形成的影响;黏附实验检测MP对4TO7细胞黏附能力的影响;划痕法及Transwell小室法分别检测MP对4TO7细胞迁移及侵袭能力的影响.结果 MP在小于10 μmol·L~(-1)的浓度下对HUVEC及4TO7细胞增殖能力无影响,在0.01、0.1、1 μmol·L~(-1)浓度下能抑制HUVEC细胞的迁移及管腔形成,并且能明显抑制4TO7细胞的黏附、迁移和侵袭.结论 MP可能通过抑制血管内皮细胞管腔形成,以及影响肿瘤细胞黏附、迁移及侵袭,进而抑制肿瘤的转移.
-
姜黄素抗内皮细胞缺血/再灌注损伤的机制研究
目的 探讨姜黄素(curcumin,Cur)抗人脐静脉内皮细胞(HUVEC)缺血/再灌注(I/R)损伤的作用机制.方法 建立缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)损伤模型,MTT法检测不同的缺氧和复氧时间对内皮细胞的损伤作用及Cur对HUVEC的保护作用;预先给予Cur(5 μmol·L-1),用免疫荧光和Western blot法检测H/R对HUVEC微管相关蛋白LC3、溶酶体酶cathepsin B、L及促凋亡蛋白Bax、抗凋亡蛋白Bcl-2表达的影响.结果 Cur(1.25～5 μmol·L-1)可剂量依赖性的保护H/R的HUVEC;H/R能增加LC3、cathepsin B、Bax/Bcl-2的表达,并且使cathepsin L发生核转位;而用Cur预处理后,在进一步增强LC3表达的同时,明显抑制cathepsin B和Bax/Bcl-2的表达及cathepsin L的核转位现象.结论 Cur能有效提高HUVEC在缺血/再灌注损伤中的存活率,并通过诱导其自噬活性、抑制cathepsins以及Bax/Bcl-2的表达保护内皮细胞.
-
川芎嗪对脂多糖诱导的血管内皮细胞损伤的影响
目的 探讨川芎嗪(tetramethylpyrazine,TMP)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导引起的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVEC) 损伤的保护作用.方法 以人脐静脉内皮细胞为实验对象,MTT法检测细胞活力,比色法测定一氧化氮合酶(nitric oxide synthase,NOS)活性,硝酸还原酶法测上清液一氧化氮(nitric oxide,NO)含量,荧光法测定胞内NO及ROS水平,流式细胞仪法测定细胞凋亡与周期.结果 川芎嗪与脂多糖同内皮细胞孵育后没有引起细胞活力的明显改变,排除了实验模型中药物直接细胞毒作用.脂多糖可以抑制细胞NOS活性(P<0.05)及胞内外NO含量(P<0.05),增加胞内ROS水平(P<0.01),促进细胞凋亡(P<0.05),抑制正常细胞周期的进程(P<0.05),而川芎嗪可以恢复脂多糖所致的上述效应,并具有一定的浓度依赖性.结论 川芎嗪可以通过有效抑制脂多糖诱导的HUVEC NO、ROS水平改变所引起的细胞凋亡,从而起到内皮细胞损伤的保护作用.
-
氧化苦参碱对高糖毒性下血管内皮细胞的保护作用
目的：研究氧化苦参碱对 A2B受体介导高糖毒性下人脐带静脉血管内皮细胞（HUVEC）保护作用。方法采用传代细胞系培养方法培养人脐静脉血管内皮细胞，细胞分组如下：5.5 mmol·L －1对照糖组（Control），22.2 mmol·L －1高糖组（22.2 mmol·L －1），44.4 mmol·L －1高糖组（44.4 mmol ·L －1）；对照糖＋氧化苦参碱组（control ＋ OMT），22.2 mmol·L －1高糖＋氧化苦参碱组（22.2 mmol · L －1＋OMT），44.4 mmol·L －1高糖＋氧化苦参碱组（44.4 mmol ·L －1＋OMT）。采用 MTS 法观察高糖和氧化苦参碱保护效应；结合蛋白印迹、RT-PCR 等方法观察 HUVEC 中 A2B受体的表达变化。结果高糖培养可引起 HUVEC 受损和活性下降。氧化苦参碱（OMT）可明显减少高糖性 HUVEC 损伤和活性下降，并对A2B的表达有明显抑制作用。结论氧化苦参碱对高糖条件下的HUVEC 有保护作用，此作用可能通过抑制A2B的表达而实现。
-
尖吻蝮蛇毒PCA对人脐静脉血管内皮细胞的影响
目的：观察皖南尖吻蝮蛇毒蛋白C激活剂（ PCA）对人脐静脉血管内皮细胞（ HUVEC）的影响并分析其可能机制。方法：常规培养HUVEC，在倒置显微镜下观察细胞形态变化，用MTT法检测细胞活性。实验分为对照组、LPS损伤组和PCA实验组。将HUVEC接种在96孔板内加药处理，对照组加入PBS缓冲液，LPS损伤组加入0．1μg／mL LPS，PCA实验组分别加入0．16、0．32、0．63、1．25、2．50、5．00、10．00、20．00、40．00μg／mL的PCA溶液和0．16、0．32、0．63、1．25μg／mL的PCA与0．1μg／mL的LPS的混合液。每个浓度设5个复孔，每孔加药200μL，作用12 h后进行细胞活性测定并观察细胞形态。结果：PCA浓度低于2．50μg／mL时对HUVEC活性和形态没有明显影响，但可减轻LPS引起的HUVEC活性抑制和形态改变。高于2．50μg／mL时PCA可抑制HUVEC的活性并引起其形态改变。结论：低浓度PCA在一定程度上可减轻LPS引起的HU－VEC损伤。
-
刚地弓形虫对HUVEC、Vero和J774A.1、THP-1侵入的比较研究
目的探讨刚地弓形虫对不同类型传代细胞的侵入能力和致凋亡作用及其差异.方法实验中采用人脐静脉内皮细胞(HUVEC)、非洲绿猴肾成纤维细胞(Vero)、小鼠单核巨噬样细胞(J774A.1)和人单核细胞系(THP-1)细胞株.采用透射电镜和吉姆萨染色法,观察刚地弓形虫RH株侵入以上细胞的能力以及细胞骨架抑制剂秋水仙素、细胞松弛素D对其影响.用流式细胞术检测弓形虫引起的细胞凋亡.结果弓形虫RH株能侵入以上4种细胞,在胞内均有纳虫泡形成.其侵入率以J774A.1和THP-1略高.细胞骨架抑制剂细胞松弛素D可以明显降低速殖子对THP-1和J774A.1细胞的侵入率,对速殖子侵入HUVEC和Vero细胞的能力影响较小.弓形虫侵入HUVEC和J774A.1细胞均可不同程度地引起细胞凋亡和坏死,但前者以凋亡为主,后者以坏死为主.结论弓形虫可能通过不同的机制侵入非吞噬性细胞和吞噬性细胞.
-
登革病毒感染后ECV304单层细胞通透性与微丝关系的研究
目的研究登革病毒感染后,ECV304单层细胞通透性与病毒滴度及细胞微丝骨架形态变化的关系.方法以人血管内皮细胞株 ECV304和HUVEC 为研究对象,用免疫荧光法观察登革病毒感染对微丝排列的影响;用transwell模型研究登革病毒感染后单层ECV304细胞通透性的变化;用噬斑法检测培养上清的病毒滴度.结果登革病毒感染后1 h内,ECV304细胞和HUVEC微丝骨架均发生了重新排布;感染后第3天,上清登革病毒滴度在达到峰值,同时ECV304细胞的微丝排列及通透性也有显著改变.结论登革病毒感染后所引起的微丝重排可能与ECV304单层细胞通透性的改变有着密切联系.
-
银杏叶提取物对肿瘤坏死因子α诱导的人脐静脉内皮细胞损伤的影响
目的 研究银杏叶提取物肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)诱导的人脐静脉内皮细胞(human umbihcal vein endothelial cell,HUVEC)损伤的保护作用.方法 TNF-α诱导HUVEC复制细胞损伤模型;分为正常组、TNF-α模型组、银杏叶提取物低剂量组(50 μg/ml),银杏叶提取物高剂量组(100μg/ml),通过MTT法检测对HUVEC增殖的影响,流式细胞术检测银杏叶提取物对细胞周期的影响,硝酸还原酶法检测NO含量的变化,ELISA方法检测IL-6、IL-8、ET-1表达的变化,计量资料采用t检验,P＜0.05为差异有统计学意义.结果 银杏叶提取物可以显著促进TNF-α诱导的HUVEC的增殖,银杏叶提取物高剂量组、低剂量组增殖率与模型组相比差异均有统计学意义(均P＜0.05).银杏叶提取物可提高S期的细胞比例,可增加NO含量,抑制IL-6、IL-8、ET-1的表达,与模型组相比差异均有统计学意义(均P＜0.05).结论 银杏叶提取物具有保护血管内皮炎症损伤的作用.
-
人工麝香对过氧化氢造模的HUVEC保护作用机制研究
目的 研究人工麝香对HUVEC的凋亡相关分子的影响,探讨其对HUVEC的作用机制.方法 用H2O2构建凋亡模型,运用MTT及流式细胞仪检测细胞活性,线粒体膜电位改变,激光共聚焦测定钙离子浓度.结果 人工麝香可以稳定线粒体膜电位,减少钙离子内流,增加细胞的活力.结论 人工麝香对HUVEC有一定的保护作用.
-
姜黄素对胶质瘤-HUVEC微生态系统中HUVEC增殖能力的影响
目的 探讨姜黄素对胶质瘤-HUVEC微生态系统中人脐静脉内皮细胞(HUVEC)生物学特性的影响.方法 用姜黄素干预胶质瘤细胞和HUVEC,用MTT法检测HUVEC的增殖活性.结果 加入姜黄素干预后,HUVEC的增殖活性亦明显低于对照组.结论 姜黄素可以明显抑制HUVEC的增殖活性.
-
基于细胞力学加载装置的推拿(衮)法行气活血作用机制研究
目的 通过细胞力学加载装置,观察推拿(衮)法对体外培养人脐静脉血管内皮细胞血管活性物质的影响,探索(衮)法的行气活血效应机制.方法 培养HUVEC细胞,建立缺氧细胞模型,分别将正常细胞和缺氧细胞分为对照组、推拿组、推拿+维拉帕米组.除对照组外另两组均进行(衮)法干预,推拿方法在已建立的HUVEC细胞力学加载模型上进行,用Griess 还原法分别检测各组HUVEC细胞NO的合成与释放量,采用实时荧光定量PCR技术分析推拿(衮)法对HUVEC细胞eNOSmRNA相对表达量的影响.结果 缺氧可导致HUVEC合成和释放NO量显著降低(P＜0.01),eNOSmRNA相对表达量显著降低(P＜0.01);与对照组细胞相比,不论正常还是缺氧HUVEC细胞,推拿组NO合成和释放量显著增加(P＜0.01),eNOSmRNA相对表达量显著增强(P＜0.01,)推拿+Ver组NO及eNOSmRNA相对表达量并未显著增加,提示Ca2+拮抗剂Ver能显著抑制手法的这种促进作用.结论 (衮)法能够激活HUVEC的分泌功能,促进内源性血管舒张因子NO的合成和释放,引发血管舒张,这是其实现行气活血效应的主要机制.但该作用可能与Ca2有关,尚需进一步研究.
-
NGR修饰的香豆素-6隐形脂质体的制备及其体外细胞摄取性质
目的:应用NGR导向磷脂化合物修饰香豆素-6隐形脂质体以构建肿瘤新生血管靶向载体.方法:合成NGR导向磷脂化合物并进行了表征.采用薄膜法制备了不同比例NGR修饰的香豆素-6隐形脂质体,以包封率和泄漏率为指标,考察其稳定性;以人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC,阳性细胞,CD13高表达)为靶细胞,用流式细胞仪和激光共聚焦显微镜对载体体外细胞摄取性质进行了分析.结果:制得的不同比例NGR修饰的香豆素-6隐形脂质体的包封率均＞90.0％,12 h的体外累积泄漏率＜9.0％.NGR修饰后的香豆素-6隐形脂质体在HUVEC中的摄取率明显高于未经修饰的隐形脂质体,且以0.64％(摩尔比)的用量摄取效果好,而人冠状动脉内皮细胞(HCAEC,阴性细胞,CD13无表达)对两者的摄取没有明显差异.激光共聚焦观察表明,脂质体摄取入胞后,香豆素-6主要分布在细胞质中.结论:NGR修饰的隐形脂质体能够实现血管内皮细胞靶向,且用量以0.64％摩尔比为佳.
-
Hela培养上清液对hUVEC细胞增殖的影响
目的 研究子宫颈癌细胞(Hela)的培养上清液对人脐静脉内皮细胞(hUVEC)增殖的影响.方法 以Hela细胞培养上清液和DMEM培养基的等比例混合液培养的hUVEC细胞为实验组,以纯DMEM培养基培养的hUVEC细胞为对照组.MTT法检测细胞增殖情况的变化;流式细胞术检测细胞周期的改变;PCR法检测CDK和CyclinD调控基因的表达情况.结果 hUVEC经Hela细胞培养上清液作用96 h后,细胞数明显增加,S期细胞的比例明显上升,CDK和CyclinD调控基因表达明显上调.结论 Hela细胞培养上清液能明显促进人脐静脉内皮细胞的增殖,其机制之一可能是通过上调CDK和CyclinD调控基因来诱导更多的细胞进入S期,从而导致细胞的快速增殖.
-
5-AIQ对大肠癌细胞系HT-29细胞PARP活性抑制的生物学作用
背景与目的:聚(腺苷二磷酸核糖)聚合酶[poly(adenosine 5'-diphosphate ribose)polymerase,PARP]抑制剂5-氨基异喹啉酮(5-aminoisoquinolinone,5-AIQ)在炎症中具重要作用,但在肿瘤中的作用尚不清楚.本研究初步探讨5-AIQ对大肠癌PARP活性抑制的生物学作用.方法:链霉生物素-过氧化物酶法(Streptavidin-Peroxidase,SP)免疫组化法和免疫荧光双标法用于检测人大肠癌组织聚(腺苷二磷酸核糖)[poly(adenosine 5'-diphosphate ribose),PAR],及其与P-选择素(P-selectin)、细胞间粘附分子(intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1)的共表达,大肠癌切缘肠粘膜为对照.通过粘附实验观察5-AIQ对结肠癌HT-29细胞系与人脐静脉血管内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVEC)粘附的影响;同时采用SP法观察5-AIQ对HT-29细胞PAR、P-selectin和ICAM-1表达的影响.结果:45例大肠癌组织中,PAR阳性率(77.8%,35/45)明显高于对照肠粘膜(10.0%,1/10)(P＜0.05);其中伴转移者PAR阳性率(86.7%,26/30)高于不伴转移者(60.0%,9/15).PAR阳性与P-selectin和ICAM-1表达相关.结肠癌HT-29细胞与HUVEC粘附实验显示,5-AIQ浓度为100、300、500 μmol/L时,细胞粘附率分别为56.79%、46.31%和39.77%,明显低于对照组(未加5-AIQ者)(粘附率为100%).经5-AIQ处理的HT-29细胞PAR、P-selectin和ICAM-1表达HSCOR得分分别为1.41±0.12、1.57±0.13和1.23±0.13,明显低于未经5-AIQ处理的HT-29细胞(HSCOR得分分别为2.61±0.10、2.73±0.16和2.30±0.12)(P＜0.05).结论:大肠癌组织内PARP活性增强.PARP抑制剂5-AIQ可抑制大肠癌HT-29细胞与HUVEC的粘附,并可抑制大肠癌HT-29细胞PAR、P-selectin和ICAM-1表达.
-
染料木黄酮对X射线辐射所致HUVEC损伤的防护作用
目的 研究染料木黄酮对大剂量X射线辐射诱导的人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)氧化性损伤的防护作用.方法 染料木黄酮浓度为0、5、20、50 μmol/L分别于辐照前2h预作用于HUVEC,以3.6Gy、6.0 Gy X射线照射后于24、48 h检测细胞内SOD、GSH-Px和ROS的水平变化.结果 与正常对照组比较,辐照模型组HUVEC细胞内SOD、GSH-Px的含量明显降低(P＜0.01),ROS含量显著增加(P＜0.01),且随着辐照剂量的增加变化越明显；与辐照模型组相比,染料木黄酮给药组能明显改善辐射诱导的氧化应激引起的损伤,显著降低ROS含量,增加SOD活性(P＜0.01),在一定浓度范围内,防护作用随着染料木黄酮浓度的增加而增强,且染料木黄酮对3.6 Gy辐照剂量下的防护效果优于6.0 Gy辐照剂量.与辐照模型组相比,染料木黄酮各组细胞内GSH-Px水平无显著变化(P＞0.05).结论 染料木黄酮有一定的抗辐射作用,在一定浓度范围内其防护效果呈现浓度依赖性.
-
纳米金-表阿霉素复合体的体外抗肿瘤作用
[目的]观察纳米金-表阿霉素复合体(EPI-AuNP)能否抑制人脐静脉内皮细胞(HUVEC)、人肝癌细胞(HepG2)的增殖.[方法]采用化学合成法制备EPI-AuNP,通过紫外-可见吸收光谱、荧光淬灭实验、动态光散射及Zeta电位变化对其进行鉴定.体外实验分为AuNP处理组、EPI处理组、EPI-AuNP处理组和空白对照组.将HUVEC、HepG2细胞分别接种于96孔板,培养24h后各组分别加入AuNP溶液、EPI溶液、EPI-AuNP溶液和无血清培养液200 μL,继续培养24h后:MTT比色法检测HUVEC、HepG2细胞生存率;紫外-可见分光光度法检测各细胞内EPI的积聚量.[结果]紫外-可见吸收光谱显示:AuNP的大吸收峰在520 nm处,而EPI-AuNP在525 nm处.EPI( 100 mg/L)荧光强度为195.2±7.5;EPI-AuNP为16.4±5.0,P=0.000.AuNP的平均粒径及Zeta电位分别为:(14.34±0.75 )nm、(-21.19±0.64)mV；EPI-AuNP为:(18.54±1.84)nm、(-15.34±0.72)mV,P＜0.01.体外实验:MTT比色法结果显示EPI处理组HUVEC、HepG2细胞的生存率分别为(29.25±1.59)％、(71.10±4.16)％; EPI-AuNP处理组:(21.29±1.51)％、(43.82±2.21)％,P=0.000.[结论]成功合成EPI-AuNP复合体,体外实验证实其对HUVEC、HepG2细胞均具有增殖抑制作用.
关键词： 纳米金-表阿霉素复合体 HUVEC HepG2细胞
