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人Ⅱ型CD74基因胞外端片段在昆虫细胞中的表达
目的 建立应用昆虫杆状病毒表达系统表达人Ⅱ型CD74胞外端片段的技术平台.方法 运用分子克隆技术,分别将CD 74胞外端全长(73～232aa)和与MIF结合的核心区(109～192aa)片段置于表达载体pFastBacDual的PPH启动子下,重组质粒转入含有Bacmid的大肠杆菌DH10Bac后与病毒基因组重组,提取重组病毒杆粒基因组,转染Sf-21细胞系.用RT-PCR检测目的 基因mRNA,用SDS-PAGE和Western blot分析重组蛋白的表达.结果 CD74胞外端全长(73～232 aa)可实现在昆虫细胞中的表达,目的 蛋白可被His标签抗体和CD74抗体识别;在细胞感染72 h、病毒接种滴度MOI为8时,目的 蛋白可实现大表达量.CD74与MIF结合的核心区(109～192 aa)片段在mRNA可实现转录的情况下未实现目的 蛋白表达.结论 成功建立人Ⅱ型CD74胞外端全长在昆虫细胞Sf-21中的表达平台,并获得了目的 蛋白表达的优化条件.
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结肠腺癌中CD74的表达及临床意义
目的 检测CD74蛋白在结肠腺癌中的表达,探讨其表达的临床意义及与预后的关系.方法 应用免疫组化PV 9000法对53例结肠腺癌进行CD74免疫染色,同时选取结肠腺瘤38例、结肠炎11例及正常结肠黏膜26例作为对照,分析结肠腺癌中CD74的表达情况及与临床病理参数的关系.结果 结肠腺癌CD74的阳性率(79％)高于各对照组,与正常黏膜组(12％)和结肠炎组(31％)比较差异显著,与结肠腺瘤组(68％)比较差异不显著.CD74在结肠腺癌中的阳性强度高于正常组、结肠炎组和结肠腺瘤组,且差异显著.结肠腺癌中CD74阳性检出率与肿瘤组织学分级和分期有关,与患者年龄、性别、肿瘤大小、肿瘤部位、浸润深度、有无淋/巴结转移无关;CD74阳性强度仅与肿瘤分化程度有关.CD74阳性的结肠腺癌患者5年生存率(57.1％)明显低于CD74阴性患者(81.8％),其中CD74阳性强度高的患者生存期比CD74阳性强度低的患者生存期短,Kaplan-Meier生存曲线分析差异显著.COX回归表明,CD74在结肠腺癌中的表达为影响结肠腺癌预后的独立危险因素(P＜0.01).结论 CD74表达增高可能在结肠腺癌发生、发展中起重要作用,CD74阳性的结肠腺癌预后差.
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CD74及MIF表达对子痫前期巨噬细胞-胎盘滋养层相互作用的影响
子痫前期是一种较为严重的妊娠期并发症,临床上一般以血压升高为主要表现,伴随蛋白尿等症状,严重者可以危及母婴生命.近年来研究表明该病是由许多因素引起,但是确切病因并未十分明确.巨噬细胞-胎盘滋养层之间相互作用的平衡对于正常妊娠的发生有着重要影响,其中CD74及巨噬细胞迁移抑制因子(MIF)的正常表达对于巨噬细胞-滋养细胞之间的相互作用有着重要的意义,也是目前研究重点之一,本文将对CD74及MIF对子痫前期胎盘巨噬细胞-滋养层之间相互作用的影响进行综述,以期进一步探索该病的发病机制.
关键词： 巨噬细胞-滋养层细胞相互作用 CD74 巨噬细胞迁移抑制因子 胎盘形成 子痫前期 -
CD74在胰腺癌中的表达及与神经浸润的关系
目的：探讨 CD74在胰腺癌（PC）中的表达及与神经浸润（PNI）的关系。方法选取62例手术切除的PC组织和10例正常胰腺组织石蜡标本，应用免疫组化方法检测CD74的表达，分析CD74与PNI及其他肿瘤病理特征的关系。结果正常胰腺组织不表达CD74，62例PC中CD74的阳性率为72.6%（45/62），PNI的发生率为52%（32/62）；伴PNI患者的CD74阳性率为84%（27/32），显著高于不伴PNI者的60%（18/30）；中-重度炎症细胞浸润者的CD74阳性率为82%（32/39），高于无炎症细胞浸润的57%（13/23）（P＜0.05）；CD74表达在性别、肿瘤位置、大小、病理分级、临床分期和淋巴结转移等临床病理特征上均无显著性差异（P＞0.05）。结论 CD74在PC中高表达，与肿瘤PNI及炎症细胞浸润有关，可能为PNI治疗的新靶点。
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造血干细胞标志物CD74在大鼠肝干细胞中的表达
目的 检测与分析大鼠肝干细胞(HSC)标志物,为分离和鉴定HSC提供可能的新方法.方法 采用胶原酶灌流法与密度梯度离心法分离正常SD大鼠HSC,利用倒置相差显微镜、逆转录PCR和免疫组织化学法等技术,观察HSC标志物白蛋白、CK19、Oval-6、CD90和成熟肝细胞标志物酪氨酸氨基转移酶(TAT)及造血干细胞标志物CD45和CD74在HSC中的表达情况.结果 正常SD大鼠分离培养的HSC在倒置相差显微镜下呈卵圆形,具有较高的核浆比率.逆转录PCR分析显示,该细胞表达白蛋白、CK19、CD90和CD74基因,不表达TAT和CD45.细胞免疫组织化学法检测结果证实HSC表达Oval-6和CD74.结论 CD74有可能成为分离和鉴定HSC的新标志物之一.
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巨噬细胞移动抑制因子及其受体CD74在宫颈癌组织中的表达及意义
目的 探讨巨噬细胞移动抑制因子(MIF)及其受体CD74在宫颈癌组织中的表达及意义.方法 采用免疫组织化学SABC法和半定量反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测86例宫颈癌组织(63例无淋巴结转移,23例淋巴结转移)和21例正常宫颈组织中MIF、CD74蛋白及mRNA的表达并分析.结果 MIF、CD74 mRNA在宫颈癌中的表达显著高于在正常宫颈组织中的表达(P＜0.01),且在有转移的宫颈癌中的表达高于无转移的宫颈癌组织(P＜0.01).MIF及CD74在宫颈癌组织中的表达高于其在正常宫颈组织中的表达(P＜0.01),且在宫颈癌转移组中的表达更高(P＜0.01).结论 MIF、CD74在宫颈癌的发生发展中起重要作用,且在促进宫颈癌转移中发挥及其重要的作用.
关键词： 宫颈肿瘤 免疫组织化学 聚合酶链反应 巨噬细胞移动抑制因子 CD74 -
RNA干涉干扰素调节因子-1和CD74可抑制因高糖所致自发高血压大鼠大血管平滑肌细胞的过度增殖
目的:探讨特异性iRNA下调干扰素调节因子-1(IRF-1)及CD74表达对高糖所致自发高血压大鼠源大血管平滑肌细胞的过度增殖的影响.方法:合成特异性IRF-1及CD74的RNA干扰片段,并将其插入载体pGSsi-U6/Neo/GFP以构建重组载体.借助Lipofectmine2000,将重组载体转染自发高血压大鼠源大血管平滑肌细胞,然后将细胞置于高糖环境培养.细胞计数、MTT法及PCNA表达以检测平滑肌细胞的增殖能力.结果:携带特异性干扰IRF-1和CD74片段的重组质粒,经Lipofectmine2000转染后,分别见88.9%和80.5%的平滑肌细胞显示绿色荧光.与对照组相比,RNA干扰后,CD74和IRF-1的表达降至9.2%和4.2%.CD74和IRF-1表达的缺失导致细胞活力和PCNA表达的显著下调.MTT法的结果显示,IRF-1干扰引起平滑肌细胞OD的限制下降,但类似的结果在CD74干扰组中未见.结论:上述结果提示IRF-1和CD74基因与糖尿病大血管病变相关,或可作为该疾病的治疗靶点.
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干扰素调节因子-1和CD74的表达变化与自发性高血压大鼠源大血管平滑肌细胞增殖相关
目的:借助体外模型验证IRF-1、 CD74、 CD36、 GAP43、 CYP2E1和TCA4基因表达变化是否与糖尿病大血管病变相关. 方法:取自发性高血压大鼠胸主动脉平滑肌细胞,并将其分别培养于含不同浓度葡萄糖(5.5、 15、 25、 30mmol/L和35mmol/L)、波动糖中(25mmol/L和5.5mmol/L葡萄糖交替,每一浓度持续12h)以及持续高糖(25mmol/L)中,48h后运用半定量RT-PCR检测IRF-1、 CD74、 CD36、 CYP2E1和TCA4的表达变化,SPSS分析基因变化与平滑肌增殖的相关性. 结果:葡萄糖浓度低于30mmol/L时,平滑肌细胞的增殖随糖浓度的增加而加速.持续高糖中培养平滑肌细胞自第6h起增殖明显.统计分析显示,CD74、 IRF-1和GAP43的表达变化与平滑肌细胞的增殖存在相关性. 结论:IRF-1和CD74参与调节糖尿病大血管病变中平滑肌细胞的增殖.
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巨噬细胞迁移抑制因子受体CD74与乳腺癌转移及预后的相关性
目的:研究巨噬细胞迁移抑制因子受体CD74在乳腺癌细胞株MCF-7和MDA-MB-231 以及人乳腺癌组织中的表达及其与乳腺癌患者预后的关系.方法:应用荧光定量聚合酶链式反应(fluorescent quantitative polymerase chain reaction,FQ-PCR)和蛋白质印迹(Western blotting)方法分别检测不同转移潜能乳腺癌细胞株MCF-7和MDA-MB-231 CD74的mRNA和蛋白表达量,并比较CD74在两者间的表达差异;应用免疫组织化学检测89例乳腺癌组织中CD74的表达情况,分析CD74与乳腺癌患者总生存率和无瘤生存率的关系.结果:高转移潜能乳腺癌细胞株MDA-MB-231中CD74表达显著高于低转移潜能细胞株MCF-7(P<0.001).CD74表达水平是乳腺癌总生存率(P=0.001)和无瘤生存率(P<0.001)的独立预测因素.结论:CD74的表达水平与乳腺癌患者预后呈负相关.
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胰腺导管腺癌中CD74的表达及临床意义
目的 检测CD74蛋白在胰腺导管腺癌(pancreatic ductal adenocarcinoma,PDAC)组织中的表达并探讨其临床意义.方法 收集59例PDAC和23例慢性胰腺炎(chronic pancreatitis,CP)的存档石蜡包埋标本.HE染色、镜下观察神经纤维周围淋巴细胞病灶.免疫组化检测CD74的表达,统计分析其与PDAC临床病理参数的关系.结果 PDAC神经纤维周围淋巴细胞病灶发生率为67.8%.CD74在肿瘤细胞中阳性表达率为61%(36/59),明显高于CP导管上皮(13%,3/23,P=0.000).CD74表达与神经纤维淋巴细胞病灶密切相关(P=0.009),与其它临床病理参数无关.CD74阳性的PDAC患者术后生存时间明显短于CD74阴性患者(P=0.006 9).CD74在肿瘤细胞中的表达(P=0.009;rs=2.590)及Pt(P=0.022;rs=1.482)为影响PDAC患者预后的独立危险因素.结论 CD74在胰腺导管腺癌组织中高表达与神经纤维周围淋巴细胞病灶及肿瘤预后相关,可能成为PDAC预后相关的分子靶标.
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胃腺癌中CD74蛋白的表达及其临床意义
目的 探讨CD74蛋白在胃腺癌组织中的表达及其临床意义,为临床医师判断肿瘤预后及靶向治疗提供新的可行性参考指标.方法 选取手术切除胃腺癌患者58例不伴HP感染,同时选取正常胃黏膜20例作为对照.采用免疫组化SP两步法检测胃腺癌组织中CD74的表达,分析其与各临床病理特征间的关系.结果 胃腺癌中CD74的阳性检出率(74.1％)高于正常组(13.3％),差异有统计学意义.CD74在胃腺癌患者中表达增高与肿瘤分期及淋巴结转移有关,与患者年龄、性别、肿瘤大小、浸润深度、肿瘤分化程度、有/无复发无关.CD74阳性检出率随肿瘤分期增高而上升,伴淋巴结转移的患者CD74阳性检出率较未转移者高(P＜0.001).CD74阳性者生存时间比CD74阴性者生存时间短(P=0.007).结论 CD74可作为胃腺癌预后判断的一项独立指标及新的治疗靶点,CD74阳性胃腺癌患者预后较差.
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CD74和巨噬细胞移动抑制因子作为胃癌治疗靶分子的相关研究
目的 研究CD74、巨噬细胞移动抑制因子(MIF)、Toll样受体4(TLR4)在胃癌中的表达,进行相关性分析,并探讨其可能的分子机制.方法 免疫组化染色方法检测120个确诊的胃癌病人的胃癌组织石蜡切片中CD74、MIF和TLR4的表达,用Mann-Whitney U检验及Spearman相关分析进行CD74、MIF、TLR4和胃癌病人各病理参数的相关性分析.体外实验中,用慢病毒shRNA感染胃癌细胞株MKN-45干扰CD74表达,并用western blot检测其表达情况.用细胞计数试剂盒8(CCK8)检测MKN-45细胞的增殖.用ELISA检测细胞培养上清液中MIF的表达,并用流式的方法检测CD74的表达.结果 CD74、MIF、TLR4在胃癌中高表达,并与肿瘤病人的临床分期及淋巴结转移有关,与病人的年龄、性别、肿瘤细胞的病理分期没有相关性.相关性分析发现,CD74和MIF在胃癌中的表达呈正相关(r=0.236 7,P＜0.01),而且CD74、MIF和TLR4在胃癌中的表达也都呈正相关(r=0.441 4,r=0.550 1,P＜0.01).体外用脂多糖(LPS)1 μg/mL刺激胃癌细胞株MKN-45,和对照组相比,能够明显增强MKN-45的增殖(4.201±0.092 vs 3.027±0.388,P＜0.05),而且能够诱导MIF的表达[(54.333±2.906)pg/mL vs(29.667±3.180)pg/mL,P＜0.01)]和细胞表面分子CD74的表达[(75.6±4.046)% vs (9.4±0.964)%,P＜0.01].用抗CD74抗体和MIF的抑制剂ISO-1分别处理MKN-45细胞,发现LPS刺激后细胞的增殖明显减少(分别为4.534±0.222 vs 3.368±0.290,4.058±0.292 vs 2.934±0.197,P＜0.01).结论 CD74、MIF、TLR4在胃癌中高表达,在感染情况下,CD74、MIF表达增加,促进上皮细胞增殖,CD74、MIF有望成为胃癌治疗的有效靶分子.
关键词： 胃癌 CD74 巨噬细胞移动抑制因子 Toll样受体4 胃上皮细胞 -
巨噬细胞移动抑制因子及其受体CD74在宫颈癌中的临床意义
目的：探讨巨噬细胞移动抑制因子(MIF)及其受体CD74、HPV基因分析在宫颈癌中的临床意义，寻找一种宫颈癌的佳实验室筛查方法。方法：以30例无宫颈病变者作为对照组，30例宫颈癌患者作为实验组，借助PCR+RDB方法进行HPV基因分析、半定量反转录-聚合酶链反应（RT- PCR）法检测MIF及CD74 mRNA、免疫组织化学SABC法检测MIF及CD74的蛋白表达的表达。对比分析对照组与实验组之间HPV、MIF和CD74 mRNA及蛋白的差异。结果：宫颈癌患者组内MIF与CD74的蛋白表达、MIF与CD74 mRNA、HPV阳性基因的表达水平均显著高于无宫颈癌患者（＜0.05）；MIF与CD74的蛋白表达及mRNA的各自对照组与实验组两组间比较，差异性显著比HPV基因大（＜0.05）。结论：检测MIF及CD74 mRNA及蛋白表达在宫颈癌的诊断中有重要的临床意义。
关键词： 宫颈癌 巨噬细胞移动抑制因子 CD74 -
ISO-1在卵巢癌侵袭中的作用
目的 探讨巨噬细胞移动抑制因子MIF特异抑制剂(S,R)-3-(4-羟苯基)-4,5-二氢-5-异噁唑乙酸甲酯( ISO-1)对卵巢癌细胞增殖、侵袭的作用以及对血管内皮生长因子受体2(vascular endothelial growth factorreceptor-2,VEGFR-2)的影响,为卵巢癌CD74靶向治疗奠定基础.方法 不同浓度ISO-1作用于人卵巢癌细胞SKOV3、A2780,对照组以相应浓度的稀释液处理.MTT法检测卵巢癌细胞增殖,L-多巴色素甲酯测定M IF互变异构酶活性,微孔迁移法检测卵巢癌细胞体外侵袭,RT- PCR检测mRNA表达情况.结果 ISO-1能显著抑制人卵巢癌细胞SKOV3、A2780的增殖及其MIF互变异构酶活性(P＜0.05),且两者呈正相关性(SKOV3:r=0.841,P＜0.01；A2780:r=0.862,P＜0.01)；50 μmol/L ISO-1作用于卵巢癌细胞SKOV3、A2780细胞24 h后,其穿透聚碳酸酯膜的能力显著降低(P＜0.05),同时卵巢癌细胞的CD74、VEGFR-2的mRNA水平显著降低(P＜0.05).结论 ISO-1通过抑制CD74的活性下调VEGF、VEGFR-2的表达,从而抑制卵巢癌细胞的增殖及侵袭.
关键词： ISO-1 卵巢癌细胞 巨噬细胞移动抑制因子 血管内皮生长因子受体-2 CD74 -
MIF受体CD74的分子结构及其介导的信号转导在疾病发生发展中的作用
CD74是一种非多态性Ⅱ型跨膜糖蛋白,2003年被发现作为巨噬细胞移动抑制因子(MIF)的高亲和力膜受体,参与MIF介导的多种信号通路,与炎性疾病、自身免疫疾病、代谢疾病、肿瘤疾病的发生发展密切相关.文章综述了CD74的相关文献,分析了CD74作为膜受体的功能及其介导的信号转导在疾病发生发展中的作用.
关键词： CD74 巨噬细胞移动抑制因子 受体 -
乳腺浸润性导管癌中CD74的表达及临床意义
目的:研究乳腺浸润性导管癌中CD74的表达及其临床意义.方法:用免疫组化技术检测45例乳腺浸润性导管癌组织中CD74,雌激素受体(ER),孕激素受体(PR)及c-erbB-2的表达,分析CD74表达与ER,PR及c-erbB-2表达及临床病理特征和预后的关系；观察乳腺癌MB-MDA-435细胞(高侵袭性),MCF-7细胞(低侵袭性)和转染CD74表达质粒的MCF-7细胞中CD74蛋白的表达,并用Transwell小室检测3种细胞的侵袭能力.结果:乳腺浸润性导管癌中,CD74的表达量与病理分级有关(P＜0.01),癌细胞分化愈差则CD74表达愈高；CD74在受体阳性组中的表达率明显低于受体阴性组(P＜0.01)；三阴乳腺癌中CD74的阳性表达率明显高于非三阴乳腺癌组(P＜0.01)；CD74阳性患者淋巴结转移率明显高于阴性表达者(P＜0.01)；CD74表达阳性与否与患者的5年生存率未见明显关系性.高侵袭性MB-MDA-435细胞CD74蛋白表达量明显高于低侵袭性MCF-7细胞；MCF-7细胞转染CD74表达质粒后侵袭能力明显增强.结论:CD74可能在乳腺癌的侵袭和淋巴结转移中起着重要作用,并有可能成为一种潜在的高侵袭性乳腺癌特别是三阴乳腺癌的标志物.
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利用酵母双杂交系统鉴定MIF与CD74胞外片段间的相互作用
目的 利用酵母双杂交系统鉴定巨噬细胞移动抑制因子(MIF)与Ⅱ型穿膜蛋白CD74胞外片段间可能的相互作用区域.方法 利用分子克隆技术,分别构建以pGBKT7为载体的人全长MIF、MIF~(50-65)、MIF~(1-50/65-115)的重组诱饵质粒,以pGADT7为载体的人CD74~(73-232)、CD74~(73-109)、CD74~(109-149)、CD74~(149-232)的重组激活域(AD)质粒.用PEG/LiAC法将上述重组诱饵质粒分别与重组AD质粒两两共转化感受态酵母菌AH109,分别观察在SD/-Trp-Len、含X-α-gal的SD/-Trp-Leu-Ade-His培养基上生长情况.结果 限制性内切酶酶切和DNA测序证实所构建的重组质粒全部正确.3种重组诱饵质粒转化的酵母菌AH109均可在SD/-trp上生长,4种重组AD质粒转化的酵母菌AH109均可在SD/-len上生长,而且上述转化的酵母菌AH109均无自身转录激活活性.只有MIF、MIF~(50-65)、MIF~(1-50/-65-115)与CD74~(73-232)表达质粒共转化的酵母菌AH109可在SD/-Trp-Leu-Ade-His培养基上生长,能激活MEL1报告基因,使X-α-gal变蓝.结论 MIF能以功能域MIF~(50-65)非依赖性方式与完整的CD74胞外片段相互结合.进行细胞信号转导.
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人Ⅱ型穿膜蛋白CD74基因片段的克隆及原核表达
[目的]扩增、克隆人Ⅱ型穿膜蛋白CD74基因片段,并在大肠杆菌中表达出具有生物活性的重组CD74蛋白.[方法]根据人CD74基因序列,设计、合成PCR引物,利用RT-PCR技术,从人Raji B细胞中扩增CD74基因片段.将CD74基因定向插入原核表达载体pGEX-4T-1,构建重组表达载体pGEX-4T-CD74,并转化工程菌BL21(DE3).用IPTG诱导BL21(DE3)中导入的CD74基因的表达,并行SDS-PAGE和Western blot鉴定表达产物.用GSTrap亲合柱纯化重组CD74蛋白,通过体外血管生成实验鉴定重组CD74蛋白对巨噬细胞移动抑制因子(MIF)的阻断作用.[结果]扩增出人CD74基因片段,并成功构建了重组质粒pGEX-4T-CD74.测序结果显示,克隆的CD74 cDNA长480 bp,序列与文献报道一致.经IPTG诱导,特异表达出可溶性的44 KDa的重组蛋白,其可被人CD74抗体识别.体外血管生成实验结果显示,重组CD74蛋白能特异地阻断MIF的促血管生成作用.[结论]克隆了人CD74基因片段,并在大肠杆菌中表达出具有生物活性的重组CD74蛋白.
关键词： CD74 人巨噬细胞移动抑制因子 克隆 分子 基因表达 -
CD74基因转染对内皮细胞特性的影响
目的 探讨CD74基因在HUVEC的转染条件和CD74基因转染对细胞特性及功能的影响,为深入研究基于调节CD74表达的生物治疗打下基础. 方法 (1)pCMV-CD74质粒转染前后ECV304细胞功能相关基因(HLA-A、HLA-DR、IFNGR)表达的检测:采用Real-time RT-PCR比较转染前后脐静脉内皮细胞各功能相关基因的表达；(2)应用Real-time RT-PCR分析软件分析实验数据. 结果 Real-time RT-PCR结果显示,转染前后ECV304细胞HLA-A△Ct值分别为9.4881和12.1097,2-△△α为6.1543大于2,说明转染前后HLA-A表达有显著差异；IFNGR△Ct值分别为4.9828和5.5228,2-△△α为1.4539小于2,转染前后无显著差异；HLA-DR△Ct值分别为14.1098和14.7924,2-△△α为1.3036小于2,转染前后无显著差异.结论 人脐静脉内皮细胞ECV304表达HLA-A、HLA-DR、IFNGR和CD74mRNA; pCMV-CD74转染可增加ECV304细胞CD74基因和膜分子的表达,增加HLA-A基因的表达,但不增加HLA-DR和IFNGR的表达,为深入探讨CD74基因与内皮细胞功能的相关性提供实验数据.
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巨噬细胞移动抑制因子分子作用机制的研究进展
巨噬细胞移动抑制因子(MIF)是一种受下丘脑-垂体控制的多功能细胞因子,由于与多种炎症性cPLA2、自体免疫性疾病及肿瘤等密切相关而受到极大关注.MIF的分子作用机制较为复杂,至今尚未完全阐明,国内外学者对此进行了大量研究,现就MIF分子作用机制的新研究进展作一综述.
关键词： 巨噬细胞移动抑制因子 CD74 JAB1 TLR-4 P53
