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通过配体文库研究GIPC2 PDZ配体结合特点及其相互作用蛋白
目的 通过验证性筛选配体文库,获得GIPC2 PDZ结构域的配体结合特点,进而找到GIPC2的相互作用蛋白.方法 1)利用酵母双杂交的方法从已有的PDZ配体库中寻找与GIPC2的PDZ结构域配体结合特性;2)根据GIPC2的亚细胞定位和肿瘤相关功能再结合PDZ结构域结合序列的共同特征在蛋白质数据库中预测GIPC2的天然潜在配体;3)将天然潜在配体的C末端序列依次与GIPC2 PDZ结构域或GIPC2全长进行验证反应,从而得到阳性蛋白.结果 1)GIPC2 PDZ结构域的配体结合特性是C末端后4个氨基酸为-X-S/T-X-V/L/I,是Ⅰ类PDZ配体;2)综合GIPC2的生物学特征和GIPC2 PDZ结构域的配体结合特点,在蛋白质数据库中预测得到47个天然潜在配体;3)将天然潜在配体的C末端序列克隆至酵母双杂交系统进行验证,后得到10个确定的阳性蛋白.结论 获得10个GIPC2相互作用蛋白.
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通过筛选随机多肽文库研究Veli3 PDZ结构域配体结合特性
目的 研究Veli3 PDZ结构域配体的结合特性.方法 用Veil3 PDZ为诱饵蛋白,用酵母双杂交方法 筛选随机多肽文库.结合生物信息学方法 在各种数据库中检索与Veli3 PDZ识别规律相符合的天然人类蛋白质.然后根据蛋白质的功能和细胞定位等性质选择14个潜在新配体用酵母双杂交验证相互作用.文献检索与Veil3 PDZ配体结合的其他PDZ蛋白.结果 Veil3 PDZ结构域配体C-末端保守的氨基酸序列通式可以表示为:[E/X][S/T]X[V/I/L]-COOH(X表示任意氨基酸).这是Class I PDZ结构域配体的特点.用酵母双杂交实验证实14个生物信息方法 预测的潜在配体中有6个配体与Veil3相互作用.另一个PDZ蛋白PSD-95与已报道的Veil3 PDZ配体和本研究新发现的潜在配体有多个相互作用.结论 新发现的6个Veli3PDZ潜在配体为进一步研究Veil3的生物学功能提供新的线索.另外Veli3与PSD-95可能易于同时竞争结合同一配体,其生物学意义还有待进一步研究.
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PDZ结构域中间序列结合特性及其临床应用
PDZ结构域在生物体中广泛存在,介导着大量的蛋白质相互作用,参与和执行多种生物过程和生理功能.PDZ结构域常规地结合配体蛋白C末端4～5个氨基酸残基.然而,蛋白质的相互作用可能比想象中复杂得多.研究发现PDZ结构域还存在着非常规的结合特性,PDZ结构域非常规结合的特性研究有助于丰富蛋白质相互作用网络,发现蛋白质新功能,并能以结合特性为基础研发安全有效的药物应用于相关疾病的治疗.
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PSD-95的生物学功能与应用研究进展
突触后致密物(postsynaptic density,PSD)是位于中枢神经系统突触后膜的特殊结构,是突触后信号转导和整合的关键物质[ 1].根据分子质量不同,可将其分为:突触后致密蛋白 -95 (postsynaptic density -95 ,PSD -95 )、突触后致密蛋白-93 (PSD-93 )、突触相关蛋白-97 (synapse-associated proteins -97 ,SAP -97 )和突触相关蛋白-102 (SAP-102).
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人hDlg蛋白PDZ结构域的克隆及原核表达与纯化
目的 探讨人果蝇肿瘤抑制蛋白hDlg的PDZ结构域在大肠杆菌中的表达与纯化.方法 从HeLa细胞中设计引物克隆含有hDlg PDZ cDNA片段后进行第二轮扩增,并连接至T载体进行测序鉴定,EcoRⅠ和Xho Ⅰ双酶切后连接至pGEX-6p-l原核表达载体.转化BL21大肠杆菌后37℃诱导表达.结果 测序和双酶切鉴定hDlg的PDZ结构域被成功克隆至pGEX-6p-1原核表达载体.37℃诱导表达后,大部分GST-PDZ融合蛋白以包涵体的形式存在,部分存在于细菌裂解上清液中.16℃诱导表达后,无法检测到目的蛋白的表达.通过GST-beads结合的方式对细菌裂解液进行纯化,可溶性GST-PDZ的蛋白量可以显著提高.结论 通过GST-PDZ诱导表达,再通过GST-beads结合纯化的方式成功表达可溶性的hHlg PDZ结构域.
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新型有机阳离子转运体-2调控研究进展
新型有机阳离子转运体-2(OCTN2)是有机阳离子转运体家族成员,可转运肉毒碱及多种有机阳离子类药物,具有重要的生理学和药理学研究价值.大量研究表明,多种因素可通过不同的机制对转运体表达及功能产生一定的作用,从而可能对机体内环境的稳定和药物的处置产生影响.本文综述了OCTN2调控研究的新进展.
关键词： 新型有机阳离子转运体-2 PDZ结构域 多态性 PPARα -
中药治疗中风的分子靶点
"中风"是中医学对急性脑血管疾病的统称,具有极高的死亡率和致残率.中医药治疗中风有着悠久的历史,临床实验也证实了其疗效.然而由于中药常常需要多味药物联合使用,其有效成分很难明确,对其有效性评价具有挑战性,因此很难将中药制剂推向世界.综述中药治疗中风的分子靶点作用,列举了一些可能起效的天然化学物质,调查结果表明多成分多靶点的中药理论具有科学性.现代分子医学和传统中医理论的结合能促进医学界的广泛交流,值得深入探讨.
关键词： 中医药 N-甲基-D-天冬氨酸受体 PDZ结构域 中风 -
PICK1的结构与功能研究进展
PICK1蛋白是一个从线虫到人都高度保守膜周蛋白,在多种组织中表达,尤以脑和睾丸的表达高.在细胞内,PICK1定位于核周区和诸如神经突触的特化细胞结构中.PICK1蛋白含一个PDZ结构域和一个BAR结构域,PDZ结构域能和许多膜蛋白结合.而BAR结构域能与脂质分子(主要为磷酸肌醇)相结合,通过这种机制PICK1可调节相关蛋白的亚细胞定位和膜表达.由于各蛋白与PICK1相互作用的PDZ结合基序不同,可利用与特定蛋白结合基序相同的PDZ结合多肤竞争性地结合PDZ结构域,特异性地阻断该蛋白的作用,从而特异性地增强或减弱PICK1在某组织中的作用,为PICK1的临床应用提供了药理基础.
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连结蛋白36和闭锁小带蛋白1的PDZ结构域关系
目的:探讨连结蛋白36(Cx36)和闭锁小带蛋白1(ZO-1)相互作用的PDZ结构域.方法:构建pGEX-3XGST-PDZ重组载体在DH5α细菌表达,加IPTG产生融合蛋白,经纯化,免疫印迹分析Cx36与ZO-1相互作用的PDZ结构域,PVDF膜洗脱后抗GST和考马斯亮蓝染色.结果:构建了pGEX-3X GST-PDZ重组载体,与转染Cx36的HeLa细胞孵育,免疫印迹显示Cx36与ZO-1的PDZ1结构域结合.而对照组Cx43与ZO-1的PDZ2结构域结合.实验组在相对分子质量为40 000～42 000有蛋白带,提示GST-PDZ融合蛋白表达.与鼠视网膜组织孵育免疫印迹显示Cx36与ZO-1的PDZ1结构域结合,而对照组Cx43与ZO-1的PDZ2结构域结合,相同膜洗脱后抗GST抗体和考马斯亮蓝染色显示GST-PDZ融合蛋白表达.结论:Cx36与ZO-1的PDZ1结构域结合.
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PICK1蛋白83位点氨基酸对PDZ结构域的影响
目的:研究PICK1 (protein interacting with C kinase 1)蛋白PDZ结构域内83位点赖氨酸( K83)对PICK1和AMPA受体GluR2亚单位相互作用的影响.方法:利用计算机对PICK1 PDZ结构域和GluR2 C末端4个氨基酸残基进行对接模拟,然后将K83进行虚拟点突变,计算并观察突变后结构和键能的改变.利用实验室已有的野生型全长PICK1 cDNA质粒为模板,构建点突变质粒,与野生型GluR2共转到HEK293T细胞,观察两者在细胞内定位和分布的改变.结果:当野生型PICK1与GluR2共转染时,HEK293T细胞有大量PICK1和GluR2共定位的集簇(cluster).当我们把构建的PICK1突变体与GluR2共转染时,不同的突变体表现出不一样的改变.结论:改变K83位点的氨基酸结构,很可能会改变PICK1 PDZ结构域与GluR2 C末端结合所形成的疏水、氢键、静电相互作用,使得PDZ结构域与GluR2 C末端的结合能力发生不同程度的改变.
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PICK1在中枢神经系统疾病中的作用
PICK1(protein interacting with C kinase 1)是一种含PDZ(PSD-95/Dlg/ZO1)结构域和BAR (Bin/amphiphysin/Rvs)结构域的蛋白,它可通过PDZ结构域与多种蛋白发生相互作用,其中一些蛋白与中枢神经系统(CNS)疾病密切相关.文中综述了近年来关于PICK1在几种中枢神经系统疾病中的作用研究,以期对疾病研究和临床治疗提供参考.
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PICK1蛋白生理功能及其作为药物新靶点研究进展
PICK1蛋白(protein interacting with C alpha kinase 1)是一种同时具有PDZ和BAR区域的支架蛋白,在哺乳动物体内与多种蛋白质相互作用,并被证明在多种生理过程中发挥重要的调节作用,同时参与了多种疾病病理过程.因此,PICK1蛋白可能成为极具前景的疾病治疗靶点.该文通过对近年来国内外发表的相关文献进行整理与分析,综述了PICK1蛋白的生理功能与其作为药物靶点的研究新进展,旨在为PICK1蛋白的深入研究提供理论支持.
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接头蛋白NHERF2的结构和功能
钠/氢交换调节因子2 (Na +/H+ exchanger regulatory factor 2,NHERF2)是由337个氨基酸组成的多功能连接蛋白.NHERF2通过其PDZ-Ⅰ、PDZ-Ⅱ和ERM结合结构域与多种蛋白质结合,对Cl、Na +/Pi等离子转运进行调节,影响PI3K/Akt、Erk等生长信号途径及对细胞迁移进行调控.参与调节与电解质及液体运输失调相关的疾病、氯离子通道功能障碍相关疾病以及肿瘤等疾病的形成过程.文章通过对其分子结构、调控的细胞功能及其与疾病发生、发展的关系进行综述,从而为研究相关疾病的防治提供新线索.
关键词： 钠/氢交换子调节因子2 (NHERF2) PDZ结构域 离子转运 肿瘤 -
紧密连接蛋白ZO-1 PDZ结构域的研究进展
自然界的生物过程常常需要特定的蛋白质间相互作用来实现,而这些相互作用大多数是通过结构域来实现的.结构域是蛋白质的基本结构和功能单位,是蛋白质中具有特异结构和独立功能的区域,决定着蛋白质的主要功能,许多蛋白质的相互作用是通过蛋白质结构域识别另一蛋白质的一段短肽序列而结合完成的.结构域作为一个重要的进化单元,可以在基因组中重复出现,结构域的核苷酸序列比较保守,可以经若干代的进化仍能比较完整地保留下来,这也证明了结构域对于维持蛋白质的功能具有无可替代的重要性.
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LIM激酶1的研究进展
LIM激酶1(LIM Kinasel,LIMK-1)是单丝氨酸蛋白激酶,它包含LIM和PDZ蛋白和蛋白相互作用区、P/S结构域、激酶结构域,在神经元中呈高表达.它的主要作用是使肌动蛋白解聚因子cofilin磷酸化和失活,从而导致肌动蛋白细胞骨架的改变.LIMK-1的活化受多种机制调控,成为联系细胞外刺激与细胞骨架稳定性的枢纽,在多种基本的生物学过程中起重要作用.
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PDLLM5与α7烟碱乙酰胆碱受体的相互作用及作用位点的研究
目的 研究支架蛋白PDLIM5与神经元α7烟碱乙酰胆碱受体(α7nAChR)间的相互作用及其作用位点.方法 构建PDLIM5基因及其截短片段原核、真核重组表达载体和构建α7nAChR真核重组表达载体,并在大肠杆菌中表达与纯化相关蛋白.采用GST pull down及免疫共沉淀(CO-IP)方法检测PDLIM5与α7nAChR分子间相互作用及结合位点.结果 GST pull down和CO-IP方法检测结果显示PDLIM5与α7nAChR具有相互作用,且α7nAChR与PDLIM5中的PDZ结构域具有特异的相互作用,但不与PDLIM5中的LIM结构域发生反应.结论 PDLIM5通过其PDZ结构域介导同α7nAChR的相互作用.
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PSD-95抑制剂在缺血性脑损伤后的神经保护作用
迄今绝大多数在脑缺血动物模型中证实有效的神经保护药物，进入临床试验后都被证实无效甚至有害[1]。近年来，突触后致密物-95（postsynaptic density-95，PSD-95）抑制剂成为神经保护治疗研究的新热点。本文对PSD-95抑制剂Tat-NR2B9c（NA-1）从离体细胞、啮齿类动物、非人灵长类动物到人体试验的研究进展进行综述。
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Pdlim2的研究进展
Pdlim2蛋白是辅肌动蛋白关联的LIM蛋白(ALP)超家族的成员之一,存在于许多细胞的细胞核内,其在N末端含有一个PDZ结构域,在C末端含有一个LIM结构域.其中Pdlim2的PDZ结构域(Pdlim2-PDZ)作为一个蛋白-蛋白相互识别的功能模块,与蛋白复合物的装配有关,而其LIM结构域作为蛋白与蛋白之间相互作用的结构域,在细胞骨架的形成、细胞分化、信号转导及肿瘤的发生中发挥重要作用.
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Erbin的分子结构及其生物学功能
ErbB2相互作用蛋白(ErbB2 interacting protein),又称Erbin,是ErbB2的结合伴侣,亦称Densin 180 样蛋白[1].Erbin为富含亮氨酸重复序列及PDZ结构域蛋白(leucine-rich repeat and PDZ-containing protein,LAP)家族的成员.
