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抗菌肽P18抑制喉癌细胞Hep-2增殖
抗菌肽能广谱杀伤包括耐药菌株在内的细菌、某些真菌、寄生虫、部分病毒以及肿瘤细胞,具有微量高效、快速、广谱的特点.抗菌肽P18是天蚕素A和爪蟾素2通过连接和替换某些氨基酸设计出的抗菌肽P18[1],其有更强的抗菌活性,并且对K562、Jurkat等多种肿瘤细胞系有抗癌效果,同时不会诱导溶血.而有关抗菌肽P18对喉癌方面的研究国内外报道较少,本研究成功构建真核表达载体,表达出融合蛋白对于Hep-2细胞增殖具有一定抑制作用,这为其后续作用机制的研究提供了依据.
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PD短程化疗前后对喉癌细胞的透射电镜观察
随机选择6例喉癌患者,化疗前后分别行透射电镜观察,以了解平阳霉素对肿瘤细胞的超微结构产生的影响.
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喉及喉咽癌DNA、RNA测定的临床意义
随着随着细胞化学定量分析的研究进展,喉癌细胞DNA及RNA的规定,为探讨喉癌生物学行米提供了新的方法,为喉癌预后的估计提供了重要参数,但结论并非一致[1,2].
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华蟾素诱导兔晶状体上皮细胞凋亡的研究
白内障手术目前已日臻完善,而晶状体后囊膜混浊也称后发性白内障,仍然是防治的重点.近年来的研究发现,华蟾素可以抑制肝癌细胞、肺癌细胞、喉癌细胞等多种细胞增殖,在肿瘤的临床治疗上已被广泛应用.其特点是安全、毒副作用小[1].
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miRNA－93调控细胞信号转导与转录激活因子3信号通路影响喉癌细胞机制研究
目的：研究miRNA－93调控细胞信号转导与转录激活因子3（STAT3）信号通路影响喉癌细胞增殖、凋亡的作用及机制。方法选取人喉癌Hep－2细胞，分为对照组、实验组（ miRNA－93组）、联合组（ miRNA－93＋STAT3组）。用逆转录－聚合酶链反应（ RT－PCR）检测Hep－2细胞中STAT3及miRNA93的表达，蛋白质免疫印迹检测Hep－2细胞质粒－细胞信号转导与转录激活因子3（ p －STAT3）、周期蛋白依赖性激酶（ Cyclins ）、骨髓细胞瘤病毒癌基因（ c－Myc）、细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子（ CKI）、B淋巴细胞瘤－2、生存素基因的表达。结果转染miRNA－93对STAT3基因mRNA含量无明显影响（ P＞0.05）；转染miRNA －93可明显下调STAT3蛋白（ P＜0.05）。故而提示miRNA－93于转录后水平调控STAT3基因的表达；3组对Hep－2细胞周期无明显影响（P＞0.05）；与对照组比较，实验组可明显诱导细胞凋亡（P＜0.05）；而与实验组比较，联合组可明显抑制细胞凋亡（ P＜0.05）；转染48 h后，与对照组比较，实验组转染miRNA－93后，p－STAT3、Cyclins、c－Myc、CKI、B淋巴细胞瘤－2、生存素基因明显下调，而联合组可使p －STAT3、c －Myc、B 淋巴细胞瘤－2表达明显上升。结论 miRNA－93可通过与STAT3基因mRNA93结合而于转录后水平调控该基因的表达，并且通过下调STAT3信号通路的相关蛋白，从而抑制Hep－2细胞凋亡。
关键词： miRNA-93 细胞信号转导与转录激活因子3 喉癌细胞 增殖 凋亡 -
钙网蛋白在人喉癌细胞中的表达及临床意义
目的 探讨钙网蛋白(CRT)在人喉癌细胞中的表达及临床意义.方法 应用荧光定量PCR(RT-PCR)、蛋白印记(Western blot)检测CRT在mRNA与蛋白水平上的差异性变化.结果 喉癌组织CRT的mRNA和蛋白表达水平显著升高(P<0.05),CRT mRNA表达升高67％,CRT蛋白表达升高71％.结论 CRT可能参与了喉癌的发生、发展过程,CRT可能是喉癌一个潜在的基因治疗靶点.
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黄芩素对喉癌Hep-2细胞增殖的抑制作用
目的：探讨黄芩素对人喉癌Hep-2细胞的增殖抑制作用。方法：Hep-2细胞在含黄芩素（10~80μmol/L）的培养基中，分别培养24 h及48 h，用MTT法检测对细胞增殖的影响；用台盼兰染色法检测对细胞活力的影响；用吖啶橙染色法（AO染色法）检测对细胞形态的影响。结果：黄芩素呈时间-剂量依赖性的抑制Hep-2细胞的增殖，并可使细胞活力明显降低；AO染色法显示，黄芩素可诱导Hep-2细胞形态发生明显变化，呈凋亡形态。结论：黄芩素可抑制喉癌Hep-2细胞增殖，降低细胞活力，诱导喉癌Hep-2细胞呈典型的凋亡形态。
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千根草中的抗病毒类黄酮
大戟科的千根草Chamaesyce thymi folia为巴西常用的利尿药，并能治疗泌尿生殖系统感染和去除肉赘。作者等从其地上部分分得槲皮素(Ⅰ)，槲皮素-3-O-β-葡糖苷(Ⅱ)，槲皮素-3-O-β-半乳糖苷(Ⅱ)，槲皮素3-O-β-木糖苷(Ⅳ)，槲皮素3-O-β-阿糖苷(V)和3′，4′，5，7-四羟基黄酮-7-O-β葡糖醛苷(Ⅵ)等6个化合物。经药理试验，其醋酸乙酯提取部分对HEp-2喉癌细胞有较强的细胞毒活性，而其中的Ⅰ和Ⅱ对Ⅰ型单纯性疱疹病毒(HSV-1)和牛腹泻病毒(BVDV)有中度的抑制作用。 (史玉俊摘译)〔Amaral A C F, Kuster R M, Gonealves J L S, et al. Fitote-rapia, 1999, 70:293〕
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原代喉癌细胞药敏实验研究
肿瘤对化疗药物的敏感性一直是近年研究的热点,如何客观地选择有效的药物进行治疗,是新辅助化疗亟待解决的问题[1].喉癌是头颈外科高发肿瘤,由于其生长部位及解剖特点,手术很难彻底切除病灶.因此,喉癌术后进行化学药物治疗,提高患者生存率十分必要,故本研究应用手术切除的喉癌组织制备原代喉癌细胞培养,进行抗癌药物敏感性实验,旨在提高疗效,避免抗肿瘤药物对正常组织的损伤,亦可开发新型抗肿瘤药物.
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Livin基因siRNA慢病毒表达载体的构建及其对喉癌细胞HEP-2增殖的影响
目的 构建及鉴定Livin基因siRNA慢病毒表达载体并观察其对喉癌细胞HEP-2增殖的影响. 方法 从基因库获得Livin基因序列,设计3段siRNA序列;经Mlu Ⅰ和ClaⅠ双酶切后克隆人慢病毒表达载体pLenOR-THM,构建pknOR-THM-Livin-siRNA重组质粒,将其转化感受态细菌DH5α,对阳性克隆进行筛选后,用EcoR Ⅰ和XbaⅠ双酶切及测序鉴定正确后用脂质体转染293T细胞包装病毒颗粒,感染293T细胞及HEP-2细胞,用荧光定量PCR检测其对HEP-2增殖的影响. 结果 慢病毒表达载体pLenOR-THM-Livin-siRNA被成功构建;转染293T细胞组装病毒液有绿色荧光,并主要表达在细胞膜上;浓缩后的病毒液感染293T细胞及HEP-2细胞均有绿色荧光表达.SH2-R组的Livin蛋白相对表达量低为(12.31±4.43)％;SH2-R组与SH2-F、NC组比较,差异有统计学意义(P＜0.05). 结论 成功构建了Livin基因siRNA慢病毒载体;HEP-2细胞Livin蛋白表达受到抑制.
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苯乙酸钠对人肝癌细胞凋亡的研究
为了观察苯乙酸钠(NaPA)对人肝癌细胞株(HepG-2)的分化诱导作用,应用流式细胞仪(FCM)、台盼蓝染色计数法和3H-TdR掺入法观察苯乙酸钠对人肝癌细胞株的细胞周期动力学变化.另用喉癌细胞株(Hep-2)做对照细胞.结果显示苯乙酸钠对人肝癌细胞呈剂量依懒性抑制,细胞周期的G1期下降,S期相对升高,但对喉癌细胞抑制作用不明显.表明苯乙酸钠可抑制人肝癌细胞株增殖,主要是抑制细胞周期的G1期.
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雷公藤内酯醇对人喉癌Hep-2细胞增殖的影响
目的 探讨雷公藤内酯醇(TL)对人喉癌Hep-2细胞生长的影响.方法 采用MTT法检测喉癌Hep-2细胞的生长抑制作用;应用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记技术法(TUNEL)评价细胞凋亡;透射电镜观察雷公藤内酯醇对喉癌Hep-2细胞超微结构的影响.结果 10～40ng/mL的雷公藤内酯醇作用48h后能明显抑制Hep-2细胞的增殖(P<0.01),并呈剂量依赖性;透射电镜观察到明显的细胞凋亡特征.结论 在体外培养的条件下雷公藤内酯醇能明显抑制喉癌Hep-2细胞的增殖,并可诱导喉癌Hep-2细胞凋亡.
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Ad-hIL-24体外诱导喉癌细胞Hep-2的凋亡作用
目的 研究腺病毒介导的人白细胞介素-24(hIL-24)基因选择性诱导喉癌细胞Hep-2凋亡的作用.方法 将携带有hIL-24基因的重组复制缺陷型腺病毒(Ad-hIL-24)感染喉癌细胞Hep-2,并以人胚肺成纤维细胞WI-38为对照,采用RT-PCR法检测Hep-2、WI-38细胞中外源性hIL-24基因表达;采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法、激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)及流式细胞术等方法检测细胞的生长和凋亡情况.结果 腺病毒介导的hIL-24基因能在Hep-2细胞和WI-38细胞中表达;MTT法显示Ad-hIL-24能明显抑制喉癌细胞Hep-2的生长.LSCM观察结果表明Ad-hIL-24能促进喉癌细胞Hep-2凋亡,流式细胞术显示Hep-2细胞经Ad-hIL.24感染48 h后凋亡率为18.47%,G2/M期细胞百分比为38.9%,显著高于PBS组、Ad-GFP组和WI-38细胞,差异有高度统计学意义(P<0.01).结论 Ad-hIL-24能抑制喉癌细胞Hep-2生长和诱导Hep-2细胞凋亡,但对正常细胞无毒性作用.
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RNA干扰对喉癌细胞MMP-9基因表达的抑制效应及其与瘤细胞增殖活性和侵袭潜能的相关性
目的 探讨RNA干扰(RNAi)对喉癌细胞基质金属蛋白酶-9基因(MMP-9)表达活性的抑制作用及其与瘤细胞增殖和侵袭潜能的相关性.方法 于MMP-9基因编码区选择1对目标序列(A组)及1对非特异性序列(B组)构建小分子干扰RNA(siRNA)表达元件,转染Hep-2喉癌细胞,以未转染的母代细胞作为对照组(C组),RT-PCR法检测MMP-9 mRNA转录活性,蛋白印迹法检测MMP-9蛋白表达活性,细胞侵袭重建基底膜实验检测细胞体外侵袭潜能.结果 A、B、C组细胞MMP-9mRNA相对表达水平分别为0.51±0.05、0.87±0.09、0.89±0.07,MMP-9蛋白相对表达水平分别为0.29±0.07、0.595±0.11、0.61±0.10,A组的相对表达水平均明显下降(P<0.05);A、B组细胞侵袭抑制率分别为48.0%和11.5%,组间差异有统计学意义(P<0.05),但细胞增值活性却无明显变化(P>0.05).结论 Hep-2喉癌细胞中存在RNAi现象,MMP-9 siRNA特异性抑制MMP-9基因表达,伴随以细胞侵袭潜能明显减弱.
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甘氨双唑钠对离体乏氧喉癌细胞放射增敏作用的实验研究
目的 探讨甘氨双唑钠对离体乏氧喉癌细胞的放射增敏作用及机制.方法 以加药乏氧照射喉癌细胞为实验组,单纯乏氧照射喉癌细胞为对照组;实验组分别给予不同浓度的甘氨双唑钠,经照射后,应用MTT法、克隆形成试验检测其放射增敏作用;并应用流式细胞仪分析放射后细胞周期变化情况.结果 MTT法和克隆形成实验均证明甘氨双唑钠对乏氧喉癌细胞具有显著放射增敏作用,随着药物浓度增加,放射增敏比SER分别为1.23、1.54、1.98,放射增敏作用增强,各组间比较有统计学差异(P<0.05).流式细胞仪检测结果显示,乏氧喉癌细胞发生G2/M期阻滞,甘氨双唑钠药物浓度越高,G2/M期比例越高,呈上升趋势.结论 甘氨双唑钠对离体乏氧喉癌细胞具有明显放射增敏作用,其增敏效果随药物浓度的增加而增强,其放射增敏机制可能与减小对放射耐受的G0/G1 期细胞比例、增大对放射敏感的G2/M期细胞比例有关.
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白莪星注射液对诱导喉癌Hep-2细胞凋亡的实验研究
目的探讨白莪星注射液对喉癌Hep-2细胞凋亡的影响.方法将白莪星注射液稀释为10倍、102倍、103倍、104倍、105倍、106倍,加入Hep-2细胞培养,MTT法检测细胞生长情况,TUNEL法标记细胞,流式细胞仪测定凋亡率.结果102倍、103倍、104倍的白莪星注射液在第3天和第5天可抑制Hep-2细胞生长.102倍、103倍的白莪星注射液可以促进Hep-2细胞凋亡(P<0.05).结论白莪星注射液具有抑制喉癌Hep-2细胞生长增殖和促进Hep-2细胞凋亡的作用.
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负载凋亡肿瘤细胞的树突状细胞对喉癌细胞的杀伤作用
目的 探讨凋亡肿瘤细胞抗原负载的树突状细胞(DC)对喉癌细胞杀伤作用的影响.方法 用细胞因子重组人白细胞介素4(rhIL-4)、重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)与肿瘤坏死因子α(rhTNF-α)体外诱导扩增人外周血单个核来源的DC,6d后将DC分为凋亡组、冻融组和未处理组;各组细胞继续培养4h后,分别采用流式细胞术检测DC表面分子的表达、ELISA法检测干扰素γ(IFN-γ)的水平、MTF法评估各组DC刺激细胞毒性T淋巴细胞(CTL)增殖的能力及诱导CTL的杀伤活性.结果 与其余各组相比,凋亡组DC表面分子与IFN-y的表达明显增加(P＜0.05),CTL的增殖能力与杀伤活性增强(P＜0.05).结论 凋亡肿瘤细胞可以促进DC的分化与成熟,并能使DC产生高效而特异性的抗喉癌免疫应答.
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全反式维甲酸对人喉癌细胞株Hep-2体外增殖及Survivin表达的影响
目的 进一步探讨全反式维甲酸(ATRA)对人喉癌的治疗机制.方法 取对数生长期人喉癌细胞株Hep-2,以1×105/ml细胞密度接种于96孔培养板,置于CO2培养箱中24 h后随机分为观察组和对照组,观察组分别加入终浓度为10-7、10-6、10-5 mol/L的ATRA,对照组为空白对照.观察两组细胞增殖抑制率(IR)、细胞凋亡率、Survivin表达水平.结果 观察组Hep-2细胞IR及细胞凋亡率均显著高于对照组,Survivin表达显著低于对照组,且呈时间和剂量依赖性.结论 ATRA对人喉癌细胞株Hep-2生长有抑制作用,同时可诱导其凋亡,机制可能与Survivin基因表达下调有关.
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白细胞介素-24对喉癌细胞的增殖抑制效应及机制
目的:研究腺病毒介导的人白细胞介素-24(Ad mda-7/IL-24)基因对喉癌细胞Hep-2增殖抑制效应及机制.方法:将携带有hIL-24基因的重组复制缺陷型腺病毒(Ad-hIL-24)感染喉癌细胞Hep 2,并以正常人脐静脉内皮细胞HUVEC为对照,采用RT-PCR方法检测Hep-2、HUVEC细胞中外源性hIL-24表达,以及Bcl-2和Bax的变化;采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测细胞的生长和凋亡情况.结果:腺病毒介导的hIL-24mRNA能在Hep-2细胞和HUVEC细胞中表达;在Hep-2细胞中,抗凋亡分子Bcl-2表达降低,而促凋亡分子Bax表达增强;在HUVEC细胞中Bcl-2表达没有变化,Bax表达有所增强.MTT法显示Ad-hIL-24能明显抑制喉癌细胞Hep 2的生长.在Hep2细胞中,显微镜下可见明显的细胞凋亡.结论:Ad-hIL-24能抑制喉癌细胞Hep-2生长和诱导Hep-2细胞凋亡,但对正常细胞无毒性作用.
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塞来昔布对喉癌Hep-2细胞COX-2和Caspase-3表达的影响
目的:探讨塞来昔布对喉癌细胞株Hep-2生长抑制及对环氧化酶-2(COX-2)和Caspase-3变化的影响.方法:将不同浓度塞来昔布作用于体外培养的人喉癌细胞株Hep-2,MTT法计算细胞生长抑制率,流式细胞术检测细胞周期变化,Western blot检测COX-2表达,分光光度法检测Caspase-3活性.结果:塞来昔布呈剂量依赖性显著抑制Hep-2细胞生长,阻滞细胞G0/G.期转化,且可明显降低COX-2蛋白水平,增加Caspase-3活性.结论:塞来昔布能抑制喉癌细胞的生长,其机制可能与下调COX-2表达、增强Caspase-3活性有关.
