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SCID小鼠-人白血病模型在白血病研究中的应用
SCID小鼠-白血病模型是研究白血病细胞增殖、分化及其调控机制的重要手段和方法.本文综述了SCID小鼠-白血病模型的建立及研究进展,并对该模型在白血病发病学、白血病细胞生物学、临床诊疗措施和判断病人预后等方面的可能应用进行了探讨.后提出了此模型的应用局限性,以便更好的完善该模型,用于白血病的研究.
关键词： SCID小鼠-人白血病模型 NOD/SCID小鼠 白血病 -
NOD/SCID小鼠在实验血液学研究中的应用
NOD/SCID(非肥胖糖尿病/重症联合免疫缺陷)小鼠是在SCID(重症联合免疫缺陷)小鼠的基础上与非肥胖性糖尿病小鼠(NOD/Lt)品系回交的免疫缺陷鼠.NOD/SCID小鼠既有先天免疫缺陷,又有T和B淋巴细胞缺乏,各种肿瘤细胞可以植入,且较少发生排斥反应及移植物抗宿主病(GVHD),所以NOD/SCID小鼠逐渐成为血液学实验研究的有用工具.本文从NOD/SCID小鼠的生物学特性及其在建立人类白血病模型、干细胞移植、药物研究及NOD/SCID小鼠应用中存在的不足和改良等方面综合述评.
关键词： NOD/SCID小鼠 实验血液学 动物模型 -
槲皮素对人急性B淋巴细胞白血病NOD/SCID小鼠细胞周期及黏附分子表达的影响
目的:探讨槲皮素对人急性B淋巴细胞白血病(B-ALL) NOD/SCID小鼠的细胞周期及黏附分子的影响.方法:对48只NOD/SCID小鼠于尾静脉注射5×106 Nalm-6细胞,建立ALL NOD/SCID小鼠模型,模型15d后将ALL NOD/SCID小鼠随机分为3组:对照组(腹腔注射生理盐水(0.2 ml/只),环磷酰胺组(腹腔注射环磷酰胺100μg/kg)及槲皮素组(腹腔注射槲皮素3 mg/kg),治疗21d后用流式细胞术检测Nalm-6细胞在G1、G2、M和S周期细胞百分率;计数治疗前后全血B淋巴细胞、Nalm-6细胞、中性粒细胞百分率及白细胞总数;采用双抗体夹心法测定治疗前后细胞间粘附分子-1(ICAM-1)、血管细胞粘附分子-1(VCAM-1)和P-选择素(P-selectin)蛋白表达.结果:与治疗前比较,治疗后槲皮素组ICAM-1、VCAM-1和P-selectin蛋白表达降低.血象显示,外周血中性粒细胞明显升高,而B淋巴细胞、白细胞和Nalm-6细胞明显降低;G0/G1期细胞增殖比例减少,S期和G2-M增多(P＜0.05).结论:槲皮素可能通过抑制ICAM-1蛋白表达而降低细胞间的粘附性,并将Nalm-6细胞阻滞在S期和G2-M期,对急性淋巴细胞白血病有明显的抑制作用.
关键词： NOD/SCID小鼠 槲皮素 人急性B淋巴细胞白血病 粘附分子 细胞周期 -
应用SCID和NOD/SCID小鼠构建急性髓系白血病模型成瘤率的比较
目的:比较应用SCID和NOD/SCID小鼠构建急性髓系白血病模型成瘤率的不同.方法:分别给SCID和NOD/SCID小鼠腹腔注射HL-60细胞,观察小鼠的一般情况、应用流式细胞术检测骨髓细胞CD33阳性率,病理学检查鉴定动物模型.结果:应用SCID小鼠构建急性髓系白血病模型成瘤率为30％,而应用NOD/SCID小鼠构建急性髓细胞白血病模型成瘤率为100％.结论:接种HL-60的NOD/SCID小鼠相对于SCID小鼠成瘤率高,小鼠发病率稳定,更适宜应用于白血病机制研究.
关键词： 急性髓细胞白血病 SCID小鼠 NOD/SCID小鼠 -
人源化Ph染色体阳性急性淋巴细胞白血病小鼠模型的建立
本研究旨在建立一种新型人源化Ph染色体阳性急性淋巴细胞白血病(Ph+ ALL)小鼠异种移植模型.4-6周NOD/SCID小鼠经亚致死剂量60Co全身照射后,给予抗小鼠CD122单克隆抗体腹腔注射,在预处理后24 h内经小鼠膝关节骨髓腔注射Ph+ ALL患者骨髓单个核细胞.于移植后8-12周通过流式细胞术检测受鼠骨髓和脾脏中人源细胞的植入水平及其免疫表型,应用实时定量聚合酶链式反应(RQ-PCR)和荧光原位杂交(FISH)检测受鼠骨髓和脾脏中人BCR/ABL1水平,并通过苏木精-伊红染色和抗人CD19,抗人CD34免疫组化染色评价人源ph+ ALL细胞在受鼠各组织器官中的迁移浸润能力.结果表明,在接受Ph+ ALL患者细胞移植的受鼠骨髓和脾脏细胞中,人源Ph+ ALL(huCD45+ CD19+)细胞不仅有不同程度植入,而且植入细胞具有与ph+ ALL患者相似的细胞形态学、免疫表型和细胞遗传学特征.此外,人源Ph+ ALL细胞还广泛迁移浸润到受鼠的脑、肝脏和肾脏等组织器官中.结论:抗CD122抗体预处理的NOD/SCID小鼠联合骨髓腔注射能够支持Ph+ ALL患者骨髓单个核细胞的有效植入,为人类Ph+ ALL白血病启动细胞鉴定及临床新药筛选研究提供一种新型异种移植模型.
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过氧化氢酶对人造血干细胞在免疫缺陷小鼠中植入的作用
目的:研究人脐带组织来源的间充质干细胞(umbilical cord-derived mesenchymal stem cells,UC-MSC)过表达过氧化氢酶(catalase,CAT)基因对人造血干细胞(hematopoietic stem cells,HSC)移植作用的影响.方法:用携带GFP空载体与GFP-CAT载体的逆转录病毒感染UC-MSC,流式细胞术分选得到MSC-GFP和MSC-GFP-CAT两种细胞株,检测两种细胞株中CAT的mRNA表达水平和过氧化氢酶的酶活力;将其与人脐血CD34+细胞体外共培养;与人Lin-CD34+ CD38-CD45RA-CD90+ CD49f+ Rholow细胞共同移植到NOD/SCID小鼠胫骨中,移植12周后,检测骨髓中的人CD45+细胞比例.结果:感染48 h后能够观察到UC-MSC发出绿色荧光,并能够稳定传代;流式细胞术分选后,MSC-GFP的纯度达到97.6％,MSC-GFP-CAT达到96.8％;MSC-GFP-CAT细胞中CAT的mRNA水平为对照组的23.9倍;体外检测UC-MSC、MSC-GFP和MSC-GFP-CAT细胞的酶活力分别为19.5、20.3、74.1 Unit;在共培养实验中,各组中的CD34+细胞比例无显著差异;在共移植实验中,HSC、MSC-GFP和MSC-GFP-CAT组中人CD45+细胞的比例分别为(3.22±3.1)％、(4.26±3.56)％和(7.37±4.51)％,MSC-GFP-CAT组的植入率为对照组MSC-GFP的1.7倍.结论:MSC-GFP-CAT对人HSC体外扩增无影响;MSC-GFP-CAT与人HSC共移植能够提高人HSC的植入率.
关键词： 造血干细胞 间充质干细胞 过氧化氢酶 植入率 NOD/SCID小鼠 -
抗小鼠CD122抗体促进脐血CD34+细胞在NOD/SCID小鼠体内的重建
本研究旨在探讨抗小鼠CD122抗体促进人脐血CD34+造血干细胞在非肥胖糖尿病/重症联合免疫缺陷(NOD/SCID)小鼠体内的重建能力.对NOD/SCID小鼠进行半致死剂量γ射线照射,照射后腹腔注射200 μg同型对照抗体或者抗小鼠CD122抗体,6-8h后经尾静脉注射人脐血CD34+细胞或者注入PBS作为对照.处理后第2、3、4周取仅注射抗小鼠CD122抗体或同型对照抗体的小鼠外周血,动态监测小鼠NK细胞比例变化.在经过脐血CD34+细胞移植的小鼠中,利用流式细胞术对移植后小鼠骨髓中人CD45+比例以及CD45+细胞亚群中人CD34,CD19和CD33比例进行分析,观察抗小鼠CD122抗体对人造血干细胞在小鼠体内重建能力的影响.结果表明,用抗CD122抗体处理后2周和3周时,小鼠外周血中NK细胞比例分别为(4.6±0.6)％和(5.7±1.7)％,与注射同型对照抗体的NOD/SCID小鼠(12.2±1.4)％和(13.3±1.2)％相比下降约60％.在移植了人脐血CD34+细胞的小鼠中,同时用CD122抗体处理组在移植后6周和8周时小鼠骨髓中hCI45+比例分别为(63.0±12.2)％和(53.2±l6.3)％,明显高于同型对照抗体组中hCD45+比例(7.7±3.6)％和(6.1±2.4)％.此外,经过抗CD122抗体处理组的小鼠移植8周后骨髓中仍能够明显的检测到人CD34+细胞的存在.结论:抗小鼠CD122抗体通过降低NOD/SCID小鼠的NK细胞的比例,大大促进了人脐血CD34+造血干细胞在免疫缺陷小鼠体内的重建能力.
关键词： 造血干细胞 NK细胞 造血重建 NOD/SCID小鼠 -
体外扩增的脐血单个核细胞植入NOD/SCID小鼠的研究
为了探讨在无血清、无基质培养条件下SCF、FL和TPO 3种因子组合体外扩增的脐血单个核细胞(MNC)的佳移植时机及植入潜能,将SCF,FL和TPO 3种因子组合体外扩增的脐血单个核细胞培养14天,在0、7、10和14天检测有核细胞数(TNC),CD34+细胞数,CD34+CXCR4+细胞数,CD34+CD49d+的细胞数及集落形成单位(CFU)数,并将SCF+FL+TPO 3种因子组合的无血清无基质条件下扩增培养7天前后的脐血单个核细胞移植给经亚致死量照射的NOD/SCID小鼠,6周后用流式细胞术,PCR法检测存活小鼠体内的人源性细胞.结果表明,经过14天的培养,脐血细胞得到了有效的扩增,TNC数,CD34+细胞数,CD34+CD49d+的细胞数于7天达高峰,其后开始下降,而CFU数,CD34+CXCR4+细胞数于第10天达高峰.在移植6周后,扩增脐血移植组的NOD/SCID小鼠的存活率和人源性CD45+细胞的检出率分别为56.25%和(1.39±0.63)%,高于新鲜脐血移植组31.25%和(0.73±0.16)%,亦高于生理盐水移植组(0和0),差异有显著性(p＜0.05),扩增脐血移植组有6只NOD/SCID小鼠骨髓细胞中可检测到人特异ALU序列的表达.结论:体外培养7-10天可能是收获细胞的佳时机;SCF+FL+TPO 3种因子组合扩增7天的脐血单个核细胞能够植入NOD/SCID小鼠,其植入水平优于未扩增的脐血;上调脐血造血细胞上CXCR4,CD49d的表达可能会增加脐血造血细胞的植入能力.
关键词： 脐血 单个核细胞 体外扩增 NOD/SCID小鼠 -
不同时相移植人骨髓间充质干细胞对人脐血CD34+细胞植入NOD/SCID小鼠的影响
为了观察不同时相移植人骨髓间充质干细胞(MSC)对脐血(UCB)CD34+细胞移植的NOD/SCID小鼠造血重建的影响,明确佳的移植时机,将体外培养扩增的人骨髓MSC分别于UCB CD34+细胞移植同时、移植前48小时及移植后48小时输入经60 Co γ射线照射的NOD/SCID小鼠,观察共移植后42天内小鼠外周血白细胞和血小板变化,并于移植后42天处死小鼠,用FACS检测外周血、骨髓和脾脏人源细胞含量.结果表明:(1)MSC和UCBCD34+细胞同时输注可明显降低外周血白细胞和血小板下降幅度,缩短白细胞和血小板恢复时间;二者不同时输注均不降低白细胞和血小板下降幅度,且输注UCB CD34+细胞后48小时输注MSC时外周血血小板恢复时间明显晚于同时输注者.(2)与单纯UCB CD34+细胞移植相比较,不同时相输注MSC均可促进UCB CD34+细胞的植入,三个共输注组间促进骨髓各系造血植入效应无明显差异.结论:人骨髓MSC与UCB CD34+细胞共移植时,以同时移植效果佳,此结果为MSC的临床应用提供了实验依据.
关键词： 间充质干细胞 脐血CD34+细胞 共移植 NOD/SCID小鼠 -
尾静脉注射K562细胞建立慢性髓系白血病小鼠模型及其鉴定
本研究通过给NOD/SCID小鼠尾静脉注射K562细胞的方式,建立人慢性髓系白血病(CML)- NOD/SCID小鼠髓外浸润模型,并通过组织病理学检查及RT-PCR检测BCR- ABL融合基因等进行模型鉴定.将24只NOD/SCID小鼠经137s全身照射,剂量270 cGy,吸收剂量率80 cGy/min,之后随机分为实验Ⅰ组、实验Ⅱ组和对照组,每组8只.照射后24h内,实验组小鼠经尾静脉注射K562细胞,实验Ⅰ组:5×106/只,实验Ⅱ组:1×107/只；对照组注射生理盐水0.2 ml/只.持续观察小鼠的一般情况和生存时间,应用组织病理学检查和RT-PCR方法检测白血病细胞髓外浸润表现.结果表明,注射4-8周后,2个实验组均发生白血病细胞髓外浸润,提示成功建立CML/NOD-SCID小鼠髓外浸润模型.结论:应用尾静脉注射K562细胞的方法可成功建立CML/NOD-SCID小鼠髓外浸润模型.通过组织病理学检查及RT-PCR检测BCR-ABL融合基因可对模型进行鉴定.
关键词： NOD/SCID小鼠 髓外浸润 白血病动物模型 -
慢病毒介导的B区缺失的人凝血因子Ⅷ在NOD/SCID小鼠中的持续表达
近年来,基因治疗作为一种新的治疗方法给血友病A的治疗提供了新的思路.本研究旨在探讨在体外和NOD/SCID小鼠中应用慢病毒载体介导的血友病A基因疗法的可能性.构建含有B区缺失的人凝血因子Ⅷ(BDDhFⅧ)基因和IRES-eGFP编码序列的慢病毒表达载体pXZ9/BDDFⅧ.通过3质粒共转染293FT包装细胞,包装后感染293FT,HLF,Chang-liver和人骨髓间充质干细胞.在感染后分别通过酶联免疫吸附试验(ELISA),一期法,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和聚合酶链反应(PCR)法检测凝血因子Ⅷ(FⅧ)活性,FⅧ抗原,FⅧ的mRNA转录和基因整合情况.超速离心收集病毒颗粒,并通过门静脉注射感染NOD/SCID小鼠.ELISA分析小鼠血浆FⅧ抗原,荧光显微镜观察绿色荧光蛋白的表达,转导后1个月RT-PCR分析小鼠肝脏人FⅧ的转录情况.结果表明:成功制备高浓度的重组慢病毒,并能在体外高效转导靶细胞.感染后72 h能检测到高水平的FⅧ活性和FⅧ抗原.RT-PCR和PCR法能敏感检测到人FⅧ基因特录和整合至感染后的细胞中.在所有接受重组慢病毒颗粒注射后的NOD/SCID小鼠肝脏中均能检测到人FⅧ基因的转录,同时重组慢病毒也能在体内高效转导小鼠肝细胞.在感染后72 h小鼠血浆中人FⅧ水平为(49±6) mU,1周后为(54±8) mU,1个月后为(23±4) mU.结论:携带BDDhFⅧ基因的慢病毒颗粒在体内外能高效转导靶细胞,且所有被转导的靶细胞都能有效的分泌人FⅧ.经过门静脉注射慢病毒颗粒的NOD/SCID小鼠可以持续表达人FⅧ.
关键词： 慢病毒载体 NOD/SCID小鼠 血友病A B区缺失的人凝血因子Ⅷ基因 基因治疗 -
人慢性粒细胞白血病模型鼠的建立
通过SCID小鼠与NOD/Lt品系(T淋巴细胞、B淋巴细胞、自然杀伤细胞缺陷,循环补体缺乏,抗原呈递细胞分化及功能不良)回交得到的NOD/Ltsz-SCID/SCID小鼠(简称NOD/SCID小鼠).目前,NOD/SCID小鼠白血病模型的建立多采用经尾静脉接种较大数量的白血病细胞[1-3],虽然可以保证成功植入,但对研究小鼠的机体免疫反应实验十分不利,主要原因在于植入的肿瘤细胞不再分裂繁殖且小鼠本身为免疫缺陷鼠.
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CIK/NK细胞对荷骨肉瘤NOD/SCID小鼠肺转移瘤的杀伤作用
目的 制备骨肉瘤U-2OS细胞NOD/SCID小鼠肺转移模型,探讨CIK/NK细胞对肺转移瘤的杀伤作用.方法 60只NOD/SCID小鼠随机分为3组(每组20只),A组:每只鼠经尾静脉接种U-2OS细胞2×106(0.2 ml)后24h,输注CIK/NK细胞(2×107/0.2 ml)；B组:每只鼠经尾静脉接种U-2OS细胞2×106(0.2 ml)后24h,注射生理盐水0.2 ml;C组:每只鼠经尾静脉注射生理盐水0.2 ml后24 h,注射生理盐水0.2 ml.比较各组小鼠生存时间及肺部肿瘤负荷情况.结果 B组接种U-2OS细胞后29 d内小鼠全部死亡,其中16只肺部出现肉眼可见瘤块；A组接种U-2OS细胞后60d内小鼠死亡8只,肺部均发现肉眼可见瘤块,余12只肺部均无瘤块.A组平均生存时间显著高于B组,差异有统计学意义(P＜0.05),而与C组比较差异无统计学意义(P＞0.05).B组小鼠死亡时体重明显低于A组,而肿瘤细胞比例明显高于A组(P＜0.05).结论 CIK/NK细胞在NOD/SCID小鼠体内有肯定的抗骨肉瘤肺转移瘤效果.
关键词： 细胞因子诱导的杀伤细胞 骨肉瘤 NOD/SCID小鼠 -
NOD／SCID 小鼠主要脏器重量、血生理生化指标和免疫细胞的测定
目的：测定NOD/SCID小鼠的主要脏器重量、血生理生化指标和免疫细胞比例。方法选取5周龄和10周龄的NOD/SCID小鼠，测定主要脏器重量和血液生理生化指标；选取6周龄的NOD/SCID小鼠，利用流式细胞仪检测其T细胞及其亚群（ T细胞-CD3＋、T细胞亚群-CD4＋T细胞、CD8＋T细胞）、B细胞（ CD19＋或B220＋）、NK细胞（NK1.1＋）和粒细胞（CD11b＋）。结果同性别NOD/SCID小鼠，不同周龄的双肾、肝脏、心脏和肺脏重量，血生理指标RBC、HGB、HCT、MCV、MCH和RDW，血生化指标TP、ALB、ALP、CHO和TBIL具有显著差异；同周龄的雌雄相比，血生理指标HCT，血生化指标GLOB、A/G、CHO、TG、TBIL和UN有显著差异。 NOD/SCID小鼠无T细胞（0.37±0.26）％、CD4＋T细胞（0.35±0.13）％、CD8＋T细胞（0.47±0.10）％、CD19＋B细胞（0.13±0.05）％、B220＋B细胞（1.20±0.44）％），有低水平NK细胞（6.90±0.82）％，粒细胞比例为（47.88±15.54）％。结论 NOD/SCID小鼠表现为为T、B、NK细胞联合免疫功能缺陷，周龄和性别对其脏器重量、血生理生化指标有一定影响。本研究的NOD/SCID小鼠品系的生理生化指标与国外生产的相同品系基本一致。
关键词： NOD/SCID小鼠 脏器重量 血生理生化指标 免疫细胞 -
不同剂量辐射对NOD/SCID小鼠肠损伤的影响
目的 研究不同剂量辐射对NOD/SCID小鼠肠损伤的影响,寻找适合建立NOD/SCID小鼠放射性肠损伤模型的辐射剂量.方法 将40只雄性健康SPF级NOD/SCID小鼠随机分为空白对照组、4 Gy照射组、5 Gy照射组、6Gy照射组4组,每组10只.照射组小鼠全腹接受单次照射剂量分别为4、5、6Gy,剂量率为1 Gy/min.观察各组小鼠的一般情况、体质量变化、肠道细菌移位情况及病理学改变进行肠损伤的评估.结果 照射后15 d,4、5、6Gy照射组小鼠的生存率分别为60％、50％、30％;细菌移位率分别为20％、50％、70％;5 Gy照射组(P =0.015)和6 Gy照射组(P=0.011)小鼠的体质量明显低于空白对照组.4Gy照射组小肠绒毛长度变低;5Gy照射组肠黏膜绒毛结构宽大低平,并倒状,伴有上皮细胞脱落,腺体发生萎缩,隐窝结构破坏;6Gy照射组肠黏膜绒毛结构受损,绒毛离断破碎,隐窝结构缺失,组织间有大量炎症细胞浸润,可见点状出血或坏死.空白对照组、4Gy照射组、5Gy照射组、6Gy照射组小鼠的小肠绒毛长度分别为(361.77±22.77)、(291.68±32.45)、(248.03±51.09)、(195.90±26.39) μm,其中,4Gy照射组(P =0.005)、5Gy照射组(P＜0.001)、6 Gy照射组(P ＜0.001)均明显低于空白对照组;5Gy照射组(P =0.041)和6Gy照射组(P=0.001)明显低于4 Gy照射组;6Gy照射组明显低于5Gy照射组(P =0.020).结论 5Gy的腹部照射即可引起小鼠体质量减轻,肠黏膜绒毛表面坏死脱落,炎性细胞浸润,小鼠生存率和细菌移位率均稳定.
关键词： 辐射 肠损伤 NOD/SCID小鼠 模型 -
多发性骨髓瘤原代细胞异种移植小鼠模型的建立
目的 利用人多发性骨髓瘤(MM)原代细胞在非肥胖糖尿病/重症联合免疫缺陷(NOD/SCID)小鼠中建立人MM异种移植模型.方法 将2例MM终末期患者骨髓或外周血单个核细胞(MNC)悬液通过尾静脉分别输注给3只NOD/SCID小鼠.每周称量体重,移植2周后以流式细胞术(FCM)检测小鼠外周血中CD45+细胞百分比.当小鼠出现苍白、竖毛、精神萎靡或体重下降20％时,取小鼠脾脏及肝脏行组织病理学检查,FCM检测外周血、骨髓、脾脏和淋巴结细胞悬液中CD45+ CD38+细胞的百分比.结果 来源于病例1和病例2的MNC移植小鼠的平均体重分别自输注MM原代细胞第7周和第5周后开始下降；以对照组小鼠的单个核细胞做阴性设门,分别于移植(26±4)d和(16±4)d后,在病例1细胞来源组和病例2细胞来源组的小鼠外周血中检测到人CD45+ CD38+细胞,且其比例随时间延长而逐渐增高,实验终点时分别达(16.2±3.0)％和(31.3±3.5)％；组织病理大体形态观察发现小鼠脾脏、肝脏及淋巴结均不同程度增大,镜下可见典型的恶性浆细胞浸润；FCM检查骨髓、淋巴结和脾脏细胞表面标志,均发现一群人源CD45+ CD38+细胞.结论 成功建立了人MM原代细胞异种移植的免疫缺陷小鼠模型.
关键词： 多发性骨髓瘤 原代细胞 NOD/SCID小鼠 异种移植模型 -
K562-DC融合瘤苗刺激的CIK/NK细胞在荷瘤NOD/SCID小鼠体内的杀瘤活性
目的 探讨经K562细胞-树突细胞(DC)融合瘤苗刺激的脐血源性细胞因子诱导的杀伤(CIK)/自然杀伤(NK)细胞在荷瘤NOD/SCID小鼠体内的杀伤效能及其安全性.方法 通过不同细胞因子的组合分别诱导脐血单个核细胞(MNC)成为DC和CIK/NK细胞,通过聚乙二醇(PEG)将灭活K562细胞与DC融合形成K562-DC融合瘤苗.以10:1比例在CIK/NK细胞培养体系中加入K562-DC融合瘤苗,制备K562-DC融合瘤苗刺激的CIK/NK细胞.小鼠均经尾静脉接种K562细胞1×106诱导荷瘤鼠;于接种肿瘤细胞后24 h按不同分组分别经尾静脉输注K562-DC融合瘤苗刺激的CIK/NK细胞1×107、CIK/NK细胞1×107,同时设相应的非荷瘤鼠对照.比较各组小鼠的生存率、存活时间;用流式细胞术检测小鼠外周血、肝、肺组织中人CD13+细胞和外周血人CD56+细胞.结果 在接种1×106K562细胞后未经处理的小鼠39 d内全部死亡,8只鼠中肉眼可见瘤块的小鼠5只,其中位于肝脏的4只、脾脏的1只.接种K562细胞后接受K562-DC瘤苗刺激的CIK/NK细胞治疗的8只小鼠第65天时死亡1只,抗瘤有效率为87.5%;接受CIK/NK细胞治疗小鼠死亡2只,时间分别为接种K562细胞后第56天及第62天,抗瘤有效率为75.0%,均未发现肉眼可见瘤块.该两组小鼠存活时间分别为(69.4±1.8)d、(67.2±5.3)d,两组间差异无统计学意义(P＞0.05),均高于未予治疗的荷瘤对照组[(30.4±4.6)d](P＜0.01),荷瘤后接受K562-DC瘤苗刺激的和未经瘤苗刺激的CIK/NK细胞治疗的两组其余小鼠存活均超过70 d.经CIK/NK细胞治疗的两组存活小鼠外周血,肝、肺组织中人CD13+细胞率差异无统计学意义,均显著低于荷瘤未治疗组(P＜0.01),而治疗的两组存活小鼠外周血人CD56+细胞率与输注不同CIK/NK细胞的非荷瘤对照组相比差异无统计学意义(P＞0.05).结论 经过灭活肿瘤细胞预孵育的脐血源性CIK/NK细胞接种在动物体内具有抗瘤活性,无致瘤性.
关键词： K562细胞-树突细胞融合瘤苗 杀伤细胞 天然 NOD/SCID小鼠 -
NOD/SCID小鼠脐血单个核细胞骨髓腔内移植的实验研究
目的观察骨髓腔内移植(iBM)人脐血单个核细胞(MNC)对小鼠造血重建和免疫功能恢复的作用.方法NOD/SCID小鼠经137Cs全身照射后,在4 h内无菌条件下局部麻醉后从尾静脉或骨髓腔内输注分离脐血MNC.受体小鼠随机分为5组:①对照组:骨髓腔内输注培养液;②阳性对照组(iTV):尾静脉输注脐血MNC 3×107/只;③实验Ⅰ组(iBM-1):骨髓腔内输注脐血MNC 3×106/只;④实验Ⅱ组(iBM-2):骨髓腔内输注脐血MNC 1×107/只;⑤实验Ⅲ组(iBM-3):骨髓腔内输注脐血MNC 3×107/只.对照组4只小鼠,实验Ⅱ组7只小鼠,其余每组5只.24 h后观察iBM-2 2只小鼠未移植侧胫骨骨髓腔脐血细胞的迁移分布,动态观察移植后小鼠的存活和造血重建情况,7～8周后处死各组小鼠,检测骨髓细胞表面CD分子表达、碳青花(Dil-CM)染料示踪研究和脐血β-actin的DNA标记.结果①照射后骨髓腔内输注脐血MNC,24 h后在未输注脐血MNC的一侧胫骨骨髓细胞膜有Dil-CM标记;②7～8周后小鼠存活14只,其中对照组存活1只,iTV组、iBM-1组各存活2只,iBM-2组存活4只,iBM-3组存活5只;③外周血常规检查结果显示iBM组白细胞的恢复速度比iTV组和对照组快而且稳定;④移植后存活小鼠骨髓细胞表面CD45标记、Dil-CM染料示踪研究和β-actin均显示人源的标记.结论经iBM途径移植脐血MNC至NOD/SCID小鼠骨髓可以重建造血,提高照射小鼠的生存率,iBM植入率高于iTV方法,为临床脐血移植提供新的思路和方法.
关键词： 骨髓移植 胎血 NOD/SCID小鼠 造血重建 -
间充质干细胞与人脐血CD34+细胞共移植对NOD/SCID小鼠造血重建的影响
目的 观察间充质干细胞(MSC)与不同比例脐血CD34+细胞共移植对NOD/SCID小鼠造血重建的影响,明确MSC与脐血CD34+细胞共移植的适数量.方法 给60Coγ射线照射的雌性NOD/SCID小鼠共移植人MSC和不同比例的脐血CD34+细胞,观察共移植后42 d内小鼠外周血白细胞和血小板变化,并于移植后42 d处死小鼠,用流式细胞术检测外周血、骨髓和脾脏人源细胞含量.结果 与单纯脐血CD34+细胞移植相比较:①脐血CD34+细胞与1、5和10倍数量的MSC共移植时,可明显减轻外周血白细胞和皿小板的下降幅度(P<0.01),提前1周使白细胞和血小板恢复至正常水平(P<0.05),三组间差异无统计学意义(P>0.05);②MSC与不同比例的脐血CD34+细胞共移植均可明显提高外周血、骨髓和脾脏造血细胞植入率.比例为10:1时,外周血、骨髓和脾脏中的人源细胞(huCD45+细胞)含量分别增加了(2.8±0.6)倍、(3.5±0.9)倍和(5.2±0.6)倍,增加倍数差异均有统计学意义(P<0.01),达到了佳的植入效果.结论 脐血CD34+细胞与10倍数量的MSC共移植可达到佳的促进造血重建作用.
关键词： 间充质干细胞 胎血 CD34+细胞 NOD/SCID小鼠 造血重建 -
不同来源人造血干/祖细胞在NOD/SCID小鼠体内归巢能力的差异
目的 比较不同来源的人造血干/祖细胞在NOD/SCID小鼠体内归巢能力的差异性,并探讨其体内归巢能力与膜表面归巢相关分子CXCR4表达水平的相关性.方法 采用流式细胞术(FACS)检测新鲜脐血、冻存脐血、动员后外周血(mPB)及骨髓来源的CD34+细胞表面CXCR4表达水平;将荧光染料CFSE标记的人CD34+细胞移植入接受照射的NOD/SCID小鼠,移植后20小时检测已归巢于NOD/SCID小鼠骨髓及脾脏中不同来源的人CD34+细胞,计算其相应的骨髓及脾脏归巢效率;并将小鼠股骨制成组织切片,荧光显微镜下观察人CD34+细胞在小鼠骨髓腔内的分布.结果 新鲜脐血、冻存脐血、mPB和骨髓CD34+细胞膜表面CXCR4表达阳性率分别为(49.52±1.12)%,(46.12±2.29)%,(48.50±2.48)%和(65.39±1.27)%,CD34+细胞在NOD/SCID小鼠骨髓的归巢效率分别为(3.00±0.44)%,(2.84±0.46)%,(4.06±0.70)%及(5.76±0.52)%;在脾脏的归巢率分别为(1.88±0.12)%,(1.80±0.15)%,(1.90±0.22)%,(2.16±0.34)%.归巢的CD34+细胞主要分布于小鼠股骨的骨内膜区域.结论 脐血CD34+细胞膜表面CXCR4水平低于mPB和骨髓.经冻存复苏后脐血CD34+细胞膜表面CXCR4水平略有下调.脐血CD34+细胞在照射NOD/SCID小鼠的骨髓归巢效率低于mPB和骨髓.
关键词： 造血干/祖细胞 归巢 受体 CXCR4 NOD/SCID小鼠
