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催化甾体羟基化的P450氧化酶BM3的蛋白质工程的研究进展
甾体关键位点的羟基化在药用甾体的合成中发挥重要作用。为探究细胞色素 P450（CYP450）氧化酶 BM3在甾体羟基化合成中的潜在应用，基于细胞色素 P450 BM3的蛋白质工程逐渐发展起来。在取得的若干 P450 BM3突变酶的基础上，通过新一代测序技术和生物信息学分析等方法，筛选出催化甾体羟基化的相关 CYP450。根据易错 PCR等定向进化技术获得了突变位点信息，进一步采用（饱和）定点突变等进化技术对活性氨基酸位点进行分析，再经过筛选获得既高于亲本酶也高于易错 PCR技术得到的突变酶活力的新突变酶，并对突变体进行功能验证，进一步阐明甾体羟基化的可行性和重要性。此外，P450 BM3催化底物和生成产物的选择性可以通过迭代的组合活性位点突变而改变。本文旨在探究近年来科研人员在 P450氧化酶 BM3蛋白质工程催化甾体羟基化的改良领域中所做的尝试、获得的成果以及存在的问题，为 P450 BM3羟基化疏水性甾体的深入研究提供理论依据。
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核糖开关在逆转细菌耐药性机制中的潜在应用
核糖开关（riboswitch）为一种不需要蛋白质参与，能够直接结合代谢物或其他小分子物质并控制相关基因表达的RNA［1唱3］。目前在三域生物中均发现有核糖开关的存在。随着对其结构和功能的深入研究，发现其作用不仅是一种简单的“开／关”功能，更是一种具有复杂功能的基因调节器［4唱5］。目前关于细菌核糖开关结构、功能及作为药物靶点等的研究正不断深入，但尚无核糖开关与细菌耐药机制及其逆转耐药性的系统报道，本文就目前研究中核糖开关影响细菌耐药的具体机制，以及核糖开关在耐药机制新策略中的潜在应用做一综述，以期为进一步的综合研究打下基础。
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以ANO1蛋白为靶点的钙激活氯通道调节剂研究进展
钙激活氯通道是广泛存在于人体内的一种阴离子通道,参与分泌、心肌细胞去极化、神经信号传导等多种生理活动.ANO1蛋白是钙激活氯通道的分子基础之一,对ANO1蛋白进行调节能够产生多种药效作用,例如镇痛、治疗痢疾、哮喘、抑制肿瘤等.近10年来发展出许多ANO1蛋白调节剂筛选测试方法,虽然筛选出一系列以ANO1蛋白为靶点的钙激活氯通道调节分子,但是这些分子的药理学作用却并不一致.本文从筛选方法、构效关系、潜在应用前景等多方面对ANO1蛋白调节分子的研究进展进行论述.
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反义寡核苷酸技术及其在NMDA受体亚单位研究中的应用
反义寡核苷酸技术是利用碱基互补配对的原则,设计一段寡脱氧核苷酸,与靶序列特异结合,从而抑制基因表达,降低mRNA和/或蛋白质水平,影响动物的后续生物效应.反义寡核苷酸技术作为一种快速、特异性阻断基因表达的方法,近二十年来取得迅速发展,其潜在应用价值巨大.特别是近年来在对NMDA受体领域的反义研究,越来越得到人们的重视.本文就反义寡核苷酸技术及当前反义寡核苷酸技术在NMDA受体亚单位研究中的应用进行阐述.
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RNA干扰的抗病毒作用及其影响因素
自从在哺乳动物细胞中发现存在RNA干扰现象以来,RNA干扰技术也应用于抗病毒研究.通过多种形式诱发的RNA干扰对细胞中病毒的复制或病毒基因的表达都产生了有效的抑制,为病毒病的预防和治疗提供了新的途径.然而,一些因素制约着RNA干扰的潜在应用,如在RNA干扰压力下病毒逃逸株的出现,有的病毒可以编码RNA干扰抑制因子以及小干扰RNA的脱靶效应等.
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窄波成像技术在消化道疾病诊断中的应用
窄波成像(NBI)是一种对黏膜表浅病变具有潜在应用前途的新技术.白光模式转换成NBI模式时,标准氙气灯光源与红、绿、蓝(R、G、B)回旋滤器间插人NBI滤器,光透过NBI滤器射入同步的R、G、B回旋滤器上,形成415 nm和540 nm窄带光,照射黏膜后反射光被电荷耦合器件(CCD)捕获,图像经处理后在监视器上显示,并结合放大内镜强调黏膜浅层和黏膜下血管改变的观察.
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颅颌面骨牵张成骨的生物学基础研究
牵张成骨(distraction osteogenesis,DO)已有90余年历史,50年代以后DO技术的日益成熟及其在临床的成功使颌面外科医生发现其在颅颌面骨性畸形及颌骨缺损治疗中具有极大的潜在应用可能,70年代下颌骨DO的实验成功[1],1992年McCarthy等成功地延长了人下颌骨[2],90年代中期以后陆续报道上颌骨及面中份的牵张前移及在腭裂术后患者延伸上颌骨[3～5].可控制的牵张力量不仅可刺激骨形成使骨延长,还可在周围软组织包括皮肤、肌腱、肌肉和神经等产生适应性应答.DO的基本生物学原则为低能量截骨操作,大限度保护骨膜和骨内血供,适当的牵张前间歇期以便骨痂形成,准确的牵张速率和频率,功能负重前适当的新形成骨的钙化改建期.
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人胚胎干细胞及其潜在应用
人胚胎干细胞在体外给予特殊的生长因子刺激,可以控制其向特定的细胞分化,这些分化成特定的细胞可以用于治疗性移植、检测药物或潜在毒素的筛选、探索胚胎早期发育中染色体的异常、及遗传工程的新开发.
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间充质干细胞的生物学特性及临床应用展望
间充质干细胞(Mesenchymal stem cell,MSC)是一类具有高度自我更新和分化能力的多能干细胞,广泛存在于骨髓中,此外,在脐血、外周血和胎肝中也有报道.本文就骨髓、脐血和外周血三种不同来源的MSC的生物学特点及其在组织工程、造血重建和基因治疗中的潜在应用作一综述.
