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曲霉菌PCR检测方法标准化的探讨
近年来,随着器官移植、艾滋病、恶性肿瘤放化疗等引起的免疫低下患者的增多,侵袭性曲霉菌病(IAD)的发病率也大幅度增加.尽管目前检测曲霉菌的方法很多,但尚未有一种能满足临床对曲霉菌病早期、快速、准确诊断的要求,致使曲霉菌病的病死率仍居高不下.PCR检测技术在生物基因相关方面的研究有很多突出优点,已有多种类型的PCR技术被广泛应用于临床诊断曲霉菌病,但一些方法的检测环节及检测性能仍存争议,以致尚未有被公认作为临床曲霉菌检测的标准化参考方法.该综述主要对曲霉菌PCR检测方法标准化的相关要素进行探讨,为今后曲霉菌PCR检测方法的研究及其标准化提供参考.
关键词： 曲霉菌 聚合酶链反应(PCR) 标准化 -
中药结合克念菌素治疗前列腺肥大症
克念菌素为七烯类抗生素,是抗真菌药.对白色念珠菌抑制作用较强,对隐球菌,曲霉菌,孢子丝菌也有明显抑制作用,口服不易吸收多作为外用药物,外用于粘膜、腔道念珠菌病等治疗.
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常见侵袭性真菌疫苗的研究现状
临床上存在抗肿瘤药物及抗生素滥用现象,使得条件致病性真菌感染疾病发病率升高,研究针时条件致病性真菌敏感的制剂-抗真菌药物及疫苗就显得十分重要.而临床应用抗真菌药物治疗的疗效不佳.出现较多耐药菌株,同时药物本身的毒副反应使患者无法耐受.因此,抗真菌治疗依然面临着严峻挑战.这无疑给研发真菌疫苗进行早期预防开辟了一条新的挑战途径.本文对真菌菌体疫苗、亚单位疫苗、DNA疫苗、树突状细胞与真菌疫苗以及含有失活基因的真菌疫苗进行综述.
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局部应用两性霉素B脂质体滴眼治疗兔曲霉菌性角膜溃疡的效果
目的:探讨两性霉素B脂质体(AmBL)对兔实验性曲霉菌性角膜溃疡的治疗作用.方法:用40只新西兰白兔,采用角膜"#"形划痕法制作实验性曲霉菌性角膜溃疡模型,随机分为4组,每组10眼.A组应用5g/L AmBL滴眼液点眼,B组应用2.5g/L AmBL滴眼液点眼,C组应用5g/L两性霉素B滴眼液(AmBS)点眼,D组应用生理盐水点眼作对照.造模后第3d每15min点眼1次,共点眼4次,后改为每天点眼6次,并于造模后3,5,7,10,15d,用裂隙灯显微镜观察结膜充血,角膜水肿,角膜浸润的范围,角膜新生血管,房水闪辉,前方积脓的水平作为得分,并进行角膜刮片,角膜共焦纤维镜,角膜组织病理切片及培养观察真菌的生长程度.结果:A,B组造模后3,5d角膜水肿,角膜浸润范围,前房积脓,结膜充血均与其它组无明显差别,造模后7,10d,较其它组显著减轻,造模后15d,各组间无明显差异.A组,B组,与C组,D组在造模后7d角膜新生血管存在明显差异,造模后10d,15d无明显差异.4组间在造模后7,10d角膜刮片及角膜病理学检查存在明显差异,造模后15d无明显差异.结论:AmBL眼液能有效抑制曲霉菌性角膜溃疡的进展, 5g/L AmBL及2.5g/L AmBL均有良好的耐受性,治疗效果无显著差异.
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曲霉菌预处理前后大鼠角膜上皮TLR4受体的表达
目的 检测曲霉菌预处理前后大鼠角膜上皮TLR4受体的表达变化.方法 健康Wistar大鼠24只随机分为A、B、C、D共4组,A组不予特殊处理,B、C、D三组以罩杯法刺激大鼠角膜4h建立曲霉菌刺激模型.B组在完成刺激后立即取角膜上皮,C组在96h后取角膜上皮,D组在96h后重复刺激,其后取角膜上皮,采用Real-time PCR法检测所取上皮组织中TLR4受体mRNA的表达.结果 罩杯法建立大鼠角膜曲霉菌刺激模型后TLR4受体mRNA的表达明显上升,但96h后已趋于正常,再次刺激后受体mRNA的表达变化与初次刺激差异无统计学意义(P>0.05).结论:罩杯刺激法可以使TLR4受体mRNA表达上升,但受体并未因曲霉菌刺激而产生基础表达量的变化,重复刺激后受体表达亦无明显差异.
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儿童急性白血病并发侵袭性肺曲霉菌病的CT表现
目的 探讨儿童急性白血病并发侵袭性肺曲霉菌病(IPA)的CT特征.方法 回顾性分析经临床和痰培养证实的13例IPA患儿的临床、CT资料,13例均行胸部CT扫描,并进行了4～10次随访CT扫描.结果 首次CT表现:单发结节2例,多发结节影10例,结节伴晕征9例,胸膜下楔形实变影5例,其中4例胸膜下楔形实变影与肺部多发结节影并存.随访CT扫描结节病灶和楔形病灶内出现空洞或"空气新月征"11例,7例结节病灶和2例空洞病灶周围出现晕征.结论 IPA的CT表现具有一定的特征性,CT对观察该病的发展、演变及估计预后有重要的价值.
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曲霉菌感染兔主要脏器的功能及病理变化
1 材料和方法1.1 材料甲强龙(注射用甲泼尼龙琥珀酸钠)为法码西亚普强公司产品;新西兰大白兔购自本校实验动物中心,2只,体质量分别为2.5 kg和3 kg;曲霉菌为临床器官移植患者标本分离株.
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曲霉菌感染对器官移植患者生化检验指标的影响
1 临床资料1.1 病例 4例器官移植患者为西京医院近2 a开展的器官移植患者,其中心脏移植3例,小肠移植1例,均经血液培养和痰培养证实为曲霉菌感染.
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器官移植术后曲霉菌感染致死4例
1 临床资料 2000/2001西京医院器官移植后死亡患者4例,其中,心脏移植3例,小肠移植1例;肝功能变化:在4例器官移植患者中,ALT值增高1例,AST值增高3例,ALP值增高4例,GGT值增高4例,检测值的增高幅度不大;心功能变化:在3例心脏器官移植患者中,LDH值、CK值和HBDH值均有明显的增高,超出正常参考值的5～10倍以上;肾功能变化:
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兔曲霉菌性角膜炎共焦显微镜与组织病理检查的对比分析
目的:探讨共焦显微镜与组织病理检查对真菌性角膜炎的诊断价值.方法:选择有色实验兔24只建立曲霉菌性角膜炎的模型,分别在接种后的第3,7,10,15日行角膜共焦显微镜与组织病理检查.结果:曲霉菌接种后的第3,7,10日角膜共焦显微镜与组织病理切片(HE,PAS染色)检查均可见曲霉菌菌丝及孢子,呈垂直、斜形生长,周围伴有较多炎性细胞(中性粒细胞、巨噬细胞)浸润,第15日角膜共焦显微镜可见到少量稀疏分布、短小的真菌菌丝.组织病理切片未见明显菌丝生长.结论:角膜共焦显微镜与组织病理对曲霉菌菌丝、孢子及生长方式的检测一致.角膜共焦显微镜是一种无创、快速的检查方法,为真菌性角膜炎的早期诊断、治疗用药、手术时机及手术方式的选择提供重要客观的依据.
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兔曲霉菌性角膜炎动物模型建立及角膜共焦显微镜检查
目的:建立有色实验兔真菌性角膜炎动物模型,角膜共焦显微镜进行早期诊断. 方法:应用内皮面作"#"形划痕的角膜植片,用10-0尼龙缝线将其固定于受体角膜上,将曲霉菌混悬液注入植片与植床间,建立模型. 并在接种后第3,7,10,15日作裂隙灯、角膜刮片、角膜共焦显微镜、角膜组织病理切片检查及培养. 结果:兔眼真菌性角膜炎动物模型成功建立,并经角膜刮片、角膜共焦显微镜、组织病理切片染色检查及培养证实. 共焦显微镜检查早期(接种3 d)见较直、短、分支比较少的高反光的菌丝及孢子,菌丝以斜行、垂直生长方式为主,伴有少量的炎症细胞浸润. 中期(接种7,10 d)共焦显微镜检查除可见高反光的菌丝外还可见大量的炎症细胞(中性粒细胞、巨噬细胞)浸润. 后期(接种15 d)在角膜刮片和组织病理切片检查均未见明显真菌菌丝时,共焦显微镜检查仍可在基质深层见到少量稀疏分布、短小的真菌菌丝. 结论:应用角膜植片成功建立兔曲霉菌性角膜炎模型,共焦显微镜为曲霉菌性角膜炎早期诊断提供了重要的客观依据.
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免疫抑制小鼠侵袭性肺烟曲霉菌病动物模型的建立及病理分析
目的: 建立侵袭性肺烟曲霉菌病动物模型,探讨免疫抑制宿主曲霉菌病致病机制.方法: 以甲基强的松龙为免疫抑制剂,造成小鼠免疫抑制,对腹腔巨噬细胞和脾细胞进行计数.双侧鼻孔滴注烟曲霉菌孢子引起侵袭性肺烟曲霉菌病,不同时间点处死小鼠,进行组织培养及病理分析.结果: 糖皮质激素注射后小鼠免疫细胞数量急剧下降,腹腔巨噬细胞数量明显减少[(6.33±1.76)×106 vs (3.18±0.57)×106,P<0.01],脾细胞和外周血淋巴细胞数量下降(P<0.01);病理切片可见免疫抑制小鼠感染烟曲霉菌后肺组织大量烟曲霉菌聚积,组织坏死,形成肺脓肿.结论: 成功建立了免疫抑制小鼠侵袭性肺烟曲霉菌病动物模型,为研究免疫抑制宿主易于感染烟曲霉菌的致病机制以及疾病的发生发展奠定基础.
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呼吸道标本直接涂片或培养正常菌群区分曲霉菌定植与感染比较
目的：研究分析呼吸道标本直接涂片或培养正常菌群区分曲霉菌定植与感染的诊断意义。方法将我院2013年4月~2015年2月收治的100例呼吸道标本培养曲霉菌阳性患者，按曲霉菌的定植诊断和感染标准分为定植组(n=81)、感染组(n=19)。对两组呼吸道标本均进行直接涂片和培养。结果两组的镜下正常菌群、培养正常菌群相比，感染组明显低于定植组，差异显著(﹤0.05)；感染组检出曲霉菌次数明显高于定植组，差异显著(﹤0.05)；感染组使用激素、患有糖尿病、呼吸道衰竭情况和定植组相比，明显较高，差异显著(﹤0.05)。结论呼吸道标本直接涂片及培养出正常菌群对区分曲霉菌的感染及定植均存在积极的诊断意义。
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自制复方净癣水治疗甲真菌病的临床研究
甲癣通常由皮癣菌即毛发癣菌,小孢子菌或表皮癣菌侵犯甲板所致.由皮肤癣菌以外的真菌如念珠菌、曲霉菌等侵犯甲板而引起的感染则称甲真菌病.治疗该病方式方法很多,大部分以口服、外包或外擦为主,但是所有口服药长期服用均会损害患者肝肾功能,而多数市面上的外用药效果参差不齐.多数因浓度问题而导致正常皮肤损伤,我们采用自制复方净癣水治疗甲真菌病,取得了满意的疗效,现报告如下.1 资料与方法
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半乳甘露聚糖检测用于侵袭性曲霉菌早期感染诊断的研究
目的：评价酶联免疫吸附试验(ELISA)检测半乳甘露聚糖(GM)抗原在侵袭性曲霉菌(IA)早期感染诊断和疗效监测中的临床价值。方法以62例呼吸内科、重症医学科及血液内科造血干细胞移植(HSCT)患者为研究对象,针对患者连续检测,共检测标本188份。采用ELISA法测定患者血清中GM含量,测定浓度可达0.5ng/ml。同时对所选病例进行G实验检测和真菌培养,所得结果与GM结果联合分析。结果以1.0为阳性界值,GM检测的敏感性为53.8%,特异性100%,诊断符合率88.7%；以0.5为阳性界值,敏感性为84.6%,特异性96.7%,诊断符合率95.2%。 G实验显示以GM0.5为阳性界值GM阳性患者血浆(1-3)-β-D-葡聚糖含量为(68.58±12.76)pg/ml,GM阴性患者血浆(1-3)-β-D-葡聚糖含量为(3.18±1.25)pg/ml,两组数据经t-检验比较具有统计学意义(P<0.05)。GM检测可早于真菌培养方法9d预测曲霉感染。曲霉菌感染患者GM的连续监测显示抗曲霉菌治疗前GM水平保持在较高水平,抗真菌治疗有效患者的GM含量呈下降趋势,无效死亡患者仍保持较高水平。结论血清GM检测是侵袭性曲霉菌早期感染诊断和疗效监测的有用指标,与G实验联合应用判断效果更好。
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药物联合结膜瓣遮盖术治疗曲霉菌性角膜溃疡的疗效分析
目的:探讨药物联合结膜瓣遮盖术治疗曲霉菌性角膜溃疡的效果.方法:回顾性分析2014-06/2015-06安徽省第二人民医院收治的15例(15只眼)真菌性角膜溃疡患者,通过病原学检查及显微形态学检查确诊为曲霉菌性角膜溃疡,经过5～7d的抗真菌药物治疗后,无明显好转或加重,行结膜瓣遮盖术,观察术后视力、手术前、后眼部刺激症状及溃疡局部体征的变化情况.结果:平均随访6个月,相对于术前视力,术后视力提高6例(40％),不变8例(53％),下降1例(7％),疼痛等主观症状减轻,溃疡瘢痕化12例(80％),症状和体征无显著改善2例(13％),症状和体征加重1例(7％).结论:抗真菌药物联合结膜瓣遮盖术治疗曲霉菌性角膜溃疡是一种简易、安全、有效的治疗方案,尤其适合基层医院,能有效降低曲霉菌性角膜溃疡的致盲率,值得推广.
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肝炎肝硬化伴发肺曲霉菌肺炎2例
例1,男,42岁,1992年查体发现HBSAg(+).近日无明显诱因出现乏力、腹胀、纳差、恶心、厌油腻,剑突下胀满不适并口干、口苦等不适,尿为浓黄色和皮肤重度黄染.于2011 -09- 07入我院,查体:口腔两侧侧颊黏膜可见少量白苔附着,血压115/67 mmHg,心肺一般检查未见异常.
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肺棘球蚴病合并曲霉菌感染1例
患者,男性,44岁.因胸闷、咳嗽3个月于2009-02-02入院.患者入院3个月前无明显诱因出现胸闷、咳嗽,为刺激性干咳,晨起及夜间咳嗽较重,外院给予抗炎治疗效果不佳,胸闷逐渐加重,病程中无发热.来我院CT检查示:左肺叶间裂中段有一直径5 cm圆形囊性占位性病变,边缘整齐,左上肺部分不张,并有中量液体.初步诊断:肺棘球蚴病.
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2013-2015年院内曲霉菌感染的菌群分布及流行情况分析
目的 了解宁夏医科大学总医院2013-2015年院内曲霉菌感染的菌群分布,探讨本院曲霉菌感染的总体情况及变化趋势.方法 采用回顾性调查方法,统计我院2013-2015年度检出并进行菌种鉴定的曲霉菌的数据,进行总结和分析.结果 我院2013-2015年共检出曲霉菌410株,其中烟曲霉菌比例高,平均77.80％,但烟曲霉菌的比例由2013年的90.58％下降到2015年的60.74％;检出的410株曲霉菌中,痰标本所占比例高,平均86.3％.结论 2013-2015年本院院内曲霉菌感染菌群分布已经发生了变迁,非烟曲霉菌感染正逐年增高,感染的部位以呼吸道为主.
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曲霉菌138株的鉴定分析
目的 分析了解曲霉菌的流行状况.方法 统计某院2013年度检出并进行菌种鉴定的曲霉菌的数据,进行总结和分析.结果 某院2013年度检出并进行菌种鉴定的曲霉菌共138株,其中烟曲霉125例,黄曲霉8例,黑曲霉4例,构巢曲霉1例.常见的标本来源是呼吸科,共检出73例,占52.9％;标本种类主要是痰液,共128例,占92.8％.病原学诊断依据主要是培养,菌种鉴定依赖形态学特征.结论 此地区曲霉菌的流行状况与国内基本一致,主要以烟曲霉为主,标本来源以痰液为主.应注意提高菌种形态学和分子生物学鉴定水平,同时还应积极开展非培养检测手段,如进行半乳甘露聚糖及葡聚糖检测,保证正确和及时的诊断.
