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RT-PCR检测慢性粒细胞白血病患者骨髓细胞集落bcr/abl mRNA的表达
采用RT-PCR技术对CML患者骨髓细胞14d的细胞集落群和部分14d或28d的单个细胞集落bcr/abl mRNA表达进行分析.结果显示:所检测的骨髓细胞集落bcr/abl基因的表达均呈阳性,即为CML集落,与细胞遗传学分析结果一致.该方法为研究CML造血前体细胞基因表达及其诊断、治疗监测提供了灵敏、有效的分析手段;并可作为研究CML发病、治疗及筛选抗CML药物较为理想的方法.
关键词: 慢性粒细胞白血病 骨髓 细胞集落 bcr/abl融合mRNA* RT-PCR -
沉默Sam68基因抑制急性淋巴细胞白血病Jurkat细胞增殖
目的:探讨Sam68对急性淋巴细胞白血病Jurkat细胞增殖的影响。方法:针对Sam68 mRNA的第531~552靶位点,构建pLKO-Tet-On载体,制备慢病毒并感染、筛选Jurkat细胞,诱导干扰载体表达;采用real-time PCR和Western blot技术验证干扰效率;用体外细胞集落形成实验观察干扰Sam68基因表达后对细胞集落形成能力的影响;用流式细胞术检测分析Jurkat细胞细胞周期的变化。结果:Sam68基因表达下调能抑制了细胞的增殖和集落形成能力,导致S期细胞比例显著增加,G2期细胞比例显著降低,G1期细胞比例无明显差异。结论:shRNA靶向干扰Sam68基因的表达能有效抑制急性淋巴细胞白血病细胞系Jurkat细胞的增殖。
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沉默SIRT2基因抑制AML耐药HL60 A细胞株的增殖
目的:探讨靶向干扰SIRT2基因表达对急性粒细胞白血病( AML)多药耐药细胞株HL60A细胞增殖的影响。方法:针对SIRT2基因构建shRNA真核表达载体,制备慢病毒并感染HL60A细胞。沉默SIRT2基因之后,改良MTT法检测对HL60A细胞活力的影响;甲基纤维素集落形成实验观察对HL60A细胞集落形成能力的影响;采用流式细胞术检测分析对HL60A细胞的细胞周期的影响。结果:干扰组SIRT2基因的表达量被有效抑制;干扰SIRT2基因表达量后,HL60A细胞的细胞活力明显下降,集落形成数量减少及集落的形状减小,细胞被明显阻滞于G1/S期。结论:shRNA靶向干扰SIRT2基因的表达可有效抑制急性粒细胞白血病耐药细胞系HL60A细胞的增殖。
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ABO血型不合脐血干细胞移植后血型转变1例
患者男,10岁,体重29 kg,急性淋巴细胞性白血病.常规血型检查结果:O型,RhD阳性.家庭成员中未能找到合适供者,从广东省脐血库得到HLA-A、B、DR全相合的AB型脐带血1份,复苏后细胞活性86%,细胞回收率93%,细胞集落总数为6.27×106,CFU-GM为9.3 ×104/kg(受者体重),CD34+细胞数未检,实际患者植入单个核细胞数为6.9×107/kg(受者体重).
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去甲斑蝥素对Burkitt淋巴瘤Raji细胞株生物学特性的影响
目的:探讨去甲斑蝥素(nor-cantharidin,NCTD)对Raji细胞的增殖抑制及周期阻滞作用.方法:通过台盼蓝拒染法观察NCTD对Raji细胞及外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMC)的增殖抑制情况;甲基纤维素集落形成法观察NCTD对Raji细胞自我更新能力的影响;流式细胞仪检测Raji 细胞周期变化.结果:NCTD抑制Raji细胞增殖,具有剂量时间依赖性(P < 0.05),但是对单个核细胞增殖无影响(P > 0.05);NCTD显著抑制Raji细胞的集落形成能力(P < 0.05),NCTD使 Raji细胞G2/M期细胞增多,G0/G1期细胞和S期细胞减少.结论:去甲斑蝥素能抑制Raji细胞增殖并产生G2/M期阻滞,且对Raji原始干祖细胞有抑制作用,有可能成为一种新的抗瘤制剂作用于人Burkitt淋巴瘤.
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粒细胞巨噬细胞集落刺激因子在创面愈合中的应用进展
粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(granulocyte/macrophage colony-stimulating factor,GM-CSF)是近几十年来医学研究的一热门细胞因子.1977年它由Burgess等在鼠的肺条件培养液中首次发现,因能刺激造血前体细胞形成粒细胞巨噬细胞集落,故而得名[1].1985年,人类GM-CSF基因(human GM-CSF,hGM-CSF)被首次克隆表达,此后重组人GM-CSF(recombinant human GM-CSF,rhGM-CSF)渐应用于临床.
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人脐带血基质细胞体外扩增体系建立的临床前研究
人脐血中存在基质细胞,但由于其数量少,扩增能力弱而限制了在临床上的使用.本课题通过研究不同细胞因子:成纤维细胞生长因子(BFGF)、干细胞生长因子(SCF)、白细胞介素-3(IL-3)、肿瘤坏死因子(TNF)及其组合对人脐血基质细胞集落形成作用的比较,筛选出能高效稳定扩增人脐血基质细胞的体外培养体系并观察扩增后基质细胞的生物学性状.