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脐带血干细胞的研究进展
早在20世纪20年代，ENDE等［1］就首次报道了脐带血干细胞移植（umbilical cord blood transplantation， UCBT）。近年来，随着研究越来越深入，发现脐带血干细胞具有多向分化潜能、更新能力强等诸多优点，可诱导分化成多样种子细胞应用于组织工程及代谢性疾病等临床疾病的治疗中，临床价值巨大。本人主要就脐带血干细胞的相关细胞特性以及目前临床上对于脐带血干细胞的新研究作一综述。
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维甲酸受体β2在宫颈癌靶向治疗中的作用机制
宫颈癌是女性生殖系统常见的癌症之一［1］。手术治疗是早期宫颈癌的主要治疗方法，但对于常伴有复发或转移的晚期宫颈癌，手术常不能根治，而且晚期宫颈癌对化疗或放疗具有抵抗性，通常预后不良［2］。因此，宫颈癌的研究重点在于寻找更有效的治疗方法上。近年来维甲酸类化合物因其特殊的抑制增殖、促进凋亡、诱导分化等抗肿瘤作用而在众多肿瘤包括宫颈癌研究中受到越来越多的关注，维甲酸主要通过与维甲酸受体结合形成复合物，作用于相应的靶基因而发挥抗肿瘤的效应，现就维甲酸受体β2（retinoic acid receptorβ2，RARβ2）在宫颈癌中的有关研究作一综述。
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犬骨髓间质干细胞体外培养和鉴定
目的:建立犬骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)的体外分离、培养和鉴定方法,以期为应用BMSCs作为种子细胞提供实验基础.方法:采集犬胫骨骨髓组织,采用全骨髓贴壁培养法体外分离、培养和扩增犬骨髓间充质干细胞.倒置相差显微镜观察细胞形态,流式细胞术检测细胞表面标志物,成骨和成软骨诱导培养鉴定,观察细胞生物学特性.结果:原代和传代的BMSCs贴壁生长,呈纺锤形、长梭形,漩涡状排列、成集落生长.细胞表面标志物CD 90、CD 29、CD44分子阳性,CD34和HLA-DR分子阴性.经成骨诱导后钙结节形成并茜素红染色阳性,诱导期间碱性磷酸酶活性持续增高.成软骨诱导后HE染色见软骨组织,甲苯胺蓝染色见细胞基质异染成紫红色.结论:成功建立了犬BMSCs体外分离纯化、培养的有效方法,扩增的BMSCs具有多向分化潜能,是理想的组织工程种子细胞.
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神经细胞移植促进大鼠损伤的周围神经功能的恢复
目的:研究神经细胞移植修复大鼠周围神经损伤的效果.方法:(1)分离培养BMSCs,诱导分化为神经细胞并进行鉴定；(2)CM-Dil标记神经细胞,建立大鼠坐骨神经损伤模型后随机分为对照组、DMEM/F12组及移植组；(3)术后进行斜板试验、肌电图检测及免疫荧光染色.结果:(1)斜板实验:移植组斜板倾斜角角度显著高于对照组和DMEM/F12组(P＜0.05),DMEM/F12组和对照组倾斜角角度差异无显著性意义(P＞0.05)；(2)肌电图:对照组及DMEM/F12组大鼠有较多的自发性电位及纤颤波,移植组大鼠为正常的静息电位；(3)荧光显微镜:移植后1周可见大量的神经细胞存在于注射部位的神经组织,移植后1个月大量细胞逐渐向周围迁移,红色荧光的神经细胞数逐渐减少.结论:神经细胞的移植可以促进大鼠损伤的周围神经功能的恢复.
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来源于大鼠腹股沟皮下脂肪垫与附睾周围脂肪的间充质干细胞生物学特性的对比研究
目的:分离培养大鼠腹股沟皮下和附睾周围脂肪的间充质干细胞(ADMSC),研究两种不同来源的间充质千细胞的生物学特征.方法:分离提取Wistar大鼠腹股沟皮下和附睾周围脂肪中的ADMSC,进行体外培养.观察细胞形态,计算细胞的收获情况,MTT法检测细胞的生长增殖状态,应用流式细胞仪检测细胞表面标志CD44以及细胞周期.地塞米松、胰岛素定向诱导后,油红O染色检测细胞内的中性脂肪.结果:单位质量腹股沟皮下和附睾周围脂肪组织中获得的间充质干细胞数量存在差异,两处细胞形态均为条索样.不同的时间点两处细胞的贴壁率相似,并且有同向变化的趋势.两处细胞的增殖能力相当.两处细胞绝大多数处于G0/G1,无明显差异.两处细胞表面标记CD44均为阳性.两处细胞经成脂诱导后,胞浆中有脂滴形成,经油红O染色,脂滴呈鲜红色.结论:从不同部位提取的ADMSC仅在单位质量组织所获得干细胞数量上存在差异,即单位质量的附睾周围脂肪中获取的干细胞数多于腹股沟皮下脂肪垫中获取的干细胞数.两处细胞的其他生物学特性以及成脂分化能力没有明显差异.
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改良法培养骨髓基质干细胞向成骨细胞分化的实验研究
目的:研究大鼠骨髓基质干细胞的生长特点和在诱导条件下的成骨能力.方法:通过改良的骨髓培养法分离成年大鼠骨髓基质干细胞,应用含地塞米松、β-甘油磷酸钠和维生素 C的诱导分化培养液定向诱导传代细胞向成骨细胞分化,并检测骨钙素的分泌、碱性磷酸酶的活性和细胞矿化作用.结果:原代培养基质干细胞首先形成细胞集落,12 d时集落间接近融合;传代细胞体积变大,约5～7 d传代一次.诱导条件下,细胞碱性磷酸酶活性明显增高,并出现了矿化结节.结论:骨髓基质干细胞易于分离培养及体外扩增,成骨能力肯定,可作为骨组织工程的种子细胞.
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体外转录信使RNA在再生医学领域的研究进展
再生医学是一门研究组织器官受损后修复和再生的学科，主要研究正常机体的组织特征功能、创伤修复与再生机制及干细胞分化机制，以寻找有效的生物治疗方法，促进机体自我修复与再生，构建新的组织与器官。体外转录信使RNA（in vitro transcription messenger RNA，IVT mRNA）是在体外无细胞系统下，模拟体内转录过程合成的一种mRNA。近来研究表明，IVT mRNA在细胞重编程中具有重要的调控作用，它可以诱导细胞多能性［1］，并且在诱导性多能干细胞（induced pluripotent stem cells，iPSCs）定向分化的过程中扮演着重要角色［2］。 IVT mRNA诱导分化的iPSCs不仅可以促进疾病模型的建立［3］，而且拓展了毒理学测试的应用［4］，更重要的是它为再生医学药物应用奠定了基础［5］。此外，IVT mRNA 编码基因组编辑中的核酸酶［6－8］比其他核酸酶更具优势。 IVT mRNA 的技术发展为再生医学的进一步研究提供了新思路与新方法。本文就IVT mRNA在再生医学方面的研究进展进行综述。
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维A酸与复方黄黛片联合化学治疗用于治疗相关急性早幼粒细胞白血病的疗效分析——附6例报告
目的:探讨维A酸与复方黄黛片联合化学治疗用于治疗相关急性早幼粒细胞白血病的疗效.方法:6例治疗相关急性粒细胞白血病应用维A酸诱导分化治疗,完全缓解后用复方黄黛片(4例)或维A酸(2例)与其他化学药物交替作缓解后治疗.结果:6例患者使用维A酸后全部获得完全缓解,完全缓解中位时间为45日(32～67日),持续完全缓解中位时间为31个月(10～86个月),其中2例完全缓解时间超过3年,1例已达临床治愈,3例至随访终止仍处于完全缓解期.结论:该研究所用治疗方案为治疗相关急性早幼粒细胞白血病提供多1种治疗选择.
关键词： 治疗相关急性早幼粒细胞白血病 维A酸 复方黄黛片 诱导分化 疗效 -
体外诱导小鼠心脏CD51+细胞分化为血管内皮细胞的研究
目的 探讨小鼠心脏CD51 +细胞的分离培养及体外定向诱导分化为血管内皮细胞的可行性,为其治疗心脏血管内皮损伤提供理论依据.方法 取出日龄为7 d的C57 BL/6乳鼠心脏,用流式分选法分选原代细胞、悬浮培养法培养及纯化心脏CD51 +细胞.用内皮生长培养基(EGM-2)对纯化和扩增后的CD51 +细胞进行体外诱导内皮分化20 d.诱导后观察细胞形态变化;实时荧光定量PCR分析内皮相关基因CD31、CD34、vWF、VEGFR-2及VE-Cadherin的mRNA表达;细胞免疫荧光技术、流式表型分析术检测内皮相关标志 CD31、VEGFR-2及 vWF 的表达;测定细胞一氧化氮(NO)含量、行体外血管形成实验以鉴定其功能.结果 诱导内皮分化后细胞变为短梭形,呈铺路石样排列生长;荧光定量PCR结果显示诱导后细胞CD31、CD34、vWF、VEGFR-2、VE-Cadherin的mR-NA相对表达量较诱导前增加(t值分别为24.529、6.383、25.872、5.256、5.255,P均<0.05);细胞免疫荧光染色及流式表型分析结果均显示诱导后细胞表达CD31、VEGFR-2及vWF;诱导后细胞NO含量较诱导前增加(t=9.549,P=0.011)并具有体外形成管腔样结构的能力.结论 心脏CD51 +细胞具有在体外定向诱导分化为血管内皮细胞的能力.
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外周造血干细胞转化为肝样干细胞的研究
目的 探讨外周血造血干细胞在体外转化为肝样干细胞的诱导条件.方法 选取自愿行造血干细胞移植符合入选标准患者,用血细胞分离机采集经粒细胞集落刺激因子(recombinant human granulocytecolony stimulating factor,G-CSF)+化疗药物动员后患者的外周血单个核细胞,通过流式细胞仪及免疫磁珠法筛选出CD34+的单个核细胞.将CD34+的单个核细胞分为对照组、肝细胞生长因子(hepatic growth factor,HGF)组、成纤维细胞生长因子4(fibroblast growth factor,FGF4)组、FGF4+ HGF组、HGF+ FGF4+巨噬细胞集落刺激因子(macrophage colony stimulating factor,MCSF)组.动态观察细胞形态学变化,15 d后免疫细胞化学检测Oct4、ALB、AFP、c-Kit、CK19及CD34在各组细胞中的表达.结果 HGF+ FGF4+ MCSF组:见大量类圆形细胞,贴壁生长,核仁明显,核质比例大,部分细胞串珠样生长;FGF4+ HGF组:见少量类圆形细胞,余细胞形变明显;对照组、HGF组、FGF4组:仅个别细胞呈类圆形,大部分死亡.HGF+ FGF4+ MCSF组:Oct4、c-Kit、CK19、CD34阳性表达,AFP弱阳性,ALB阴性;FGF4+ HGF组:细胞AFP、ALB阳性表达,CK19、CD34弱阳性表达,Oct4、c-Kit阴性;对照组、HGF组、FGF4组:检测指标均无表达.结论 经HGF、FGF4及MCSF联合诱导后的外周血CD34+单个核细胞更易转化为肝样干细胞.
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苦参碱对白血病细胞的作用及分子机制的研究进展
目前白血病治疗方法主要为化疗和造血干细胞移植,但两者都有一定副作用.苦参碱对白血病细胞有抑制增殖、诱导分化、抑制转移和逆转耐药的作用,单独用药或作为化疗、骨髓移植辅助药物,都具有较高的应用价值.本文就苦参碱对白血病细胞的作用及分子机制的研究进展作一综述.
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大鼠牙髓干细胞的分离培养与鉴定
目的:分离培养大鼠牙髓干细胞并对其进行生物学鉴定.方法:采用酶消化法分离获得大鼠牙髓干细胞,有限稀释法纯化细胞,测定细胞克隆形成率,细胞计数法测生长曲线,抗波形丝蛋白及角蛋白、抗STRO-1免疫化学染色.体外分化诱导实验检测细胞的多向分化能力.结果:分离纯化获得的大鼠牙髓干细胞在体外具有一定的克隆形成能力,波形丝蛋白、STRO-1均有表达.诱导条件下部分牙髓干细胞具有多向分化的潜力,符合干细胞特征.结论:成功从大鼠牙髓中获取牙髓干细胞.
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骨髓基质干细胞及其在脊髓损伤修复中的应用前景
骨髓基质干细胞(MSCs)是成年动物或人骨髓中的非造血组织干细胞,具有多能干细胞的特点,可向多个方向分化,在特定条件下可诱导分化为神经元.近几年的实验研究发现,MSCs在体内及体外一定条件下可定向分化为神经元和胶质细胞,在体内能与神经干细胞一样迁移至脊髓并进行整合[1,2].动物实验显示MSCs在治疗脊髓损伤有着良好的应用前景.
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肿瘤坏死因子抗鼻咽癌细胞实验研究进展
应用生物反应调节剂对肿瘤进行免疫治疗是近十几年来发展较快的一项新型抗瘤疗法,也是对临床手术、化疗、放疗等常规治疗肿瘤手段的有效补充.肿瘤坏死因子(TNF)的多种生物学活性如诱导分化、细胞调亡(apoptosis)和细胞毒/细胞静止(cytotoxic)等效应,特别是对肿瘤细胞的抑制和杀伤作用,具有重要的病理生理学意义和肿瘤治疗价值,其作用机制研究很多,但尚无定论.本文仅就TNF-α介导的鼻咽癌细胞毒效应、不同鼻咽癌细胞株对TNF-α反应差异的分子机制作一综述.
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3种获得中性粒细胞方法的比较及应用的探讨
目的：比较诱导髓系白血病细胞株分化法、外周血分离纯化法、诱导造血干细胞定向分化法3种获得中性粒细胞的方法。方法用1μmol/L 全反式维甲酸（ATRA）诱导 NB4细胞分化；用红细胞裂解法结合免疫磁珠法分离纯化外周血中性粒细胞；用 Percoll 密度梯度离心法结合免疫磁珠法分离纯化外周血干细胞，然后用 GM-CSF 和 G-CSF 诱导粒细胞的产生。3种方法获得的细胞通过 MGG 染色检测细胞形态及中性粒细胞纯度，利用免疫荧光技术检测 CD18蛋白的表达及胞内分布特点。结果诱导 NB4细胞分化可获得约40％的中性粒细胞，从外周血分离纯化的中性粒细胞纯度约为90％，通过诱导造血干细胞定向分化可获得70％以上的中性粒细胞。免疫荧光结果显示，3种方法获得的中性粒细胞，CD18蛋白的表达强度无明显不同，也都呈现点状分布。结论红细胞裂解法结合免疫磁珠法分离纯化外周血中性粒细胞，纯度高、活性好，有利于快速检测新鲜血液样本中的中性粒细胞；诱导造血干细胞定向分化获得的中性粒细胞，活性高，可在体外维持长达几天之久，可应用于中性粒细胞长时间的体外试验。
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乙醇抑制大鼠骨髓间充质干细胞参与的肝细胞更新
乙醇是导致酒精性肝病的直接病因,肝脏更新的细胞来源有骨髓源性肝干细胞、造血干细胞、间质干细胞(MSCs)[l-2].MSCs由于其获取容易、很强的体外扩增能力、多向分化潜能和免疫调节能力,日益成为研究的焦点[3].长期大量摄入乙醇可以导致人体内多种代谢变化,体内微环境中乙醇及其代谢产物含量增加,本研究拟以体外试验探讨乙醇对MSCs参与的肝细胞更新的影响.
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丹参注射液诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化为神经元样细胞的研究
目的:探讨丹参注射液在体外诱导大鼠骨髓间充质ff-～(MSCs)向神经元样细胞分化的作用.方法:采用差速贴壁法体外分离培养大鼠MSCs,流式细胞仪检测其表面标志,经碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)预诱导24 h,采用含丹参注射液的无血清L-DMEM培养液诱导MSCs,倒置显微镜下观察细胞形态的变化,免疫荧光细胞化学检测巢蛋白、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、神经丝蛋白(NF-M)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达.结果:体外培养的大鼠MSCs表达CD29、CD44、CD105、CD166.丹参注射液诱导后MSCs胞体收缩,突起伸出,较密的部分神经元拉成网状,免疫细胞化学显示巢蛋白、NSE、NF-M表达阳性,阳性率分别为(58.68±4.50)%、(61.23±5.72)%、(63.47±6.38)%,GFAP阳性细胞率(1.47±0.23)%.结论:丹参注射液在体外可以将大鼠MSCs诱导分化为神经元样细胞.
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ATRA诱导HPV16型亚基因永生化人宫颈上皮细胞分化的实验研究
目的:研究ATRA对HPV16型亚基因(E6、E7)永生化人宫颈上皮细胞(H8细胞)的诱导分化作用及机制.方法:H8细胞经ATRA处理后,用MTT法测定ATRA的抗增殖效应,光镜、电镜观察细胞形态变化,流式细胞术(FCM)检测细胞周期,免疫组化SABC法检测增殖细胞核抗原Ki67表达水平的变化,PCR-ELISA法检测端粒酶活性变化,荧光免疫细胞化学检测HPV和E6蛋白表达变化.结果:ATRA使H8细胞增殖抑制;细胞形态朝良性方向分化;细胞堆积于G1期,S期细胞减少;细胞核内Ki67的表达水平下降;端粒酶活性下降.结论:ATRA对H8细胞有明显诱导分化作用,这种作用可能是通过抑制增殖,阻滞细胞周期,降低端粒酶活性来实现的.
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CD34+细胞体外定向诱导分化的实验研究
目的:探讨造血生长因子不同组合方式对CD34+细胞体外定向诱导分化作用.方法:应用阴性分选策略,以StemsepTM系统从正常人骨髓细胞中分离CD34+造血干/祖细胞(HSC/HPC),在液体培养体系加入不同组合细胞因子对CD34+细胞进行诱导,检测细胞总数、CD71+细胞和CD15+细胞比例及粒单系祖细胞和红系祖细胞扩增数量.结果:液体培养体系中,以FL+Tpo+SCF+IL-3+Epo细胞因子组合对CD34+细胞向红系细胞的诱导分化能力强,2w后CD71+细胞比例为61.20%±5.31%,BFU-E、CFU-E分别扩增27.12±3.95和30.65±40.26倍.以FL+Tpo+SCF+IL-3+GM-CSF+G-CSF细胞因子组合对CD34+细胞向粒系细胞的诱导分化能力强,2w后CD15+细胞比例为56.18%±6.57%,CFU-GM扩增29.87±10.52倍.结论:合理组合生长因子,可定向诱导CD34+细胞生成大量血细胞,将有助于满足临床应用的需要.
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骨髓间充质干细胞体内诱导分化为心肌细胞的初步实验观察
目的:初步观察MSCs体内诱导分化为心肌细胞的能力.方法:从大鼠双侧股骨骨髓获得MSCs,在体外纯化、扩增后,DAPI进行细胞标记,然后注射到急性心肌梗塞模型鼠和正常大鼠的心肌组织内,饲养2～4周后,处死动物在注射点获取心肌标本,初步采用HE染色和电镜观察形态学的方法对分化的心肌细胞进行鉴定,并用免疫组化法从组织学上对转化心肌细胞进行心肌特异性抗原的检测.结果:MSC进行DAPI的标记效率高,电镜观察与宿主心肌细胞间形成了闰盘,组化检测有心肌特异性抗原的出现.结论:在宿主心肌组织内,MSCs具有分化为心肌细胞的能力.
关键词： 骨髓间充质干细胞(MSCS) 心肌细胞 诱导分化
