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一种新型快速检出分枝杆菌变色液体培养基的评价
结核病的早期发现主要靠实验室诊断,涂片抗酸染色(或荧光染色)找抗酸杆菌阳性率低(10%~20%);常用的固体培养基阳性率虽可达40%。但时间长。尽管BACTEC 460TB检测系统能快速检出分枝杆菌,但其仪器及试剂价格昂贵、且有放射性污染[1]。近年来,变色液体培养基在国外应用的越来越广泛[2]。我们将一种新型的分枝杆菌快速变色液体培养基与改良罗-琼(Lowenstein-Jensen,L-J)培养基进行了比较研究,现将结果报道如下。 一、材料 1.标准菌株:人型结核分枝杆菌、浅黄色分枝杆菌、草分枝杆菌、戈登分枝杆菌、堪萨斯分枝杆菌、胞内分枝杆菌、马耳摩分枝杆菌、爱知分枝杆菌、田鼠分枝杆菌、偶发分枝杆菌、副偶发分枝杆菌、龟分枝杆菌龟亚种、龟分枝杆菌脓肿亚种、耻垢分枝杆菌、次要分枝杆菌、非洲分枝杆菌、胃分枝杆菌、不产色分枝杆菌、金色分枝杆菌、新金色分枝杆菌、鸟分枝杆菌、瘰疬分枝杆菌、卡介苗和蟾蜍分枝杆菌由我们研究所保藏。 2.标本:141份临床标本,其中139份痰、1份伤口脓性分泌物和1份支气管肺泡灌洗液。 3. 快速变色液体培养基:由深圳市怡百世生物技术有限公司提供。其主要成分为磷酸盐缓冲液、谷氨酸钠、多种维生素、多种微量元素、甘油、马血清、变色剂以及甲氧苄氨嘧啶、氨苄青霉素、多粘菌素B、两性霉素B和萘啶酸等多种抗生素。 4. 改良罗-琼(L-J)培养基:按照文献[1]配制。 二、方法 1.取对数生长期的标准人型结核分枝杆菌和偶发分枝杆菌于含10%吐温80磨菌瓶中,磨菌混匀,用无菌磷酸盐缓冲液调其浊度为No1 MacFarland单位,再用无菌磷酸盐缓冲液作1∶10系列稀释,各分别接种100 μl于变色液体培养基和改良L-J培养基,37℃培养。当培养基变为紫红色或底层有紫色颗粒沉淀时,取少量液体涂片,进行金胺O荧光染色证实为分枝杆菌。 2. 标本处理:标本经2~4倍体积的4%NaOH消化20 min,离心10 min,沉淀经无菌磷酸盐缓冲液洗涤2次,再加入400 μl无菌磷酸盐缓冲液,混匀后,分别取200 μl接种于变色液体培养基和改良L-J培养基,37℃培养。 3.结果观察与报告:变色培养基接种后,每24 h观察1次,2周后每周观察3次,若培养基变为紫红色或底层有紫色颗粒沉淀,经荧光染色证实有分枝杆菌时,报告分枝杆菌生长阳性。改良L-J培养基接种后3 d、7d观察结果,以后每周观察1次。8周未见液体培养基变紫红色或底层有紫色颗粒沉淀,固体培养基上未见菌落,报告分枝杆菌培养阴性。
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复方羟氨苄头孢菌素分散片的研制及溶出度考察
目的制备复方羟氨苄头孢菌素分散片并考察其体外溶出度.方法以微晶纤维素为填充剂,聚乙烯聚吡咯烷酮为崩解剂,湿法制粒法制备分散片.以转篮法考察制剂的体外溶出度,测定样品的崩解时间和分散质量.用HPLC法测定药物含量.结果样品质量稳定合格,崩解时间小于2min,药物累积溶出百分率在20min内均可达90%.结论该制剂处方合理,制备工艺简单,值得推广.
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毛细管区带电泳色谱法测定增效联磺片含量的研究
目的:研究和寻找精密而简便地测定增效联磺片中磺胺甲唑、磺胺嘧啶及甲氧苄氨嘧啶3种成分含量的方法。方法:采用毛细管区带电泳法,以0.05 molL-1磷酸盐缓冲液(pH=6.0)作运行液,恒定电压20 kV(运行电流95 μA~105 μA),并与药品标准规定的方法相比较。结果:3种成分在3 min~8 min之内完全达到基线分离,各组分溶液浓度在70 μgml-1~750 μgml-1范围内,浓度与峰面积之间呈良好的线性关系。选用乙酰苯胺作内标物,可测定3种成分的含量,批内RSD均小于1%(n=9),3种成分的加样回收率不低于96.45%,RSD均小于3%(n=12)。结论:结果表明毛细管区带电泳(CZE)法准确可靠,方便易行,可进行增效联磺片中3种成分的含量测定,而药品标准中规定的方法只能测定两种磺胺药的总量和甲氧苄氨嘧啶的含量。
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双波长系数标准加入法测定抗菌优中磺胺甲口恶唑的含量
抗菌优是由磺胺类抗菌消炎药磺胺甲口恶唑(SMZ)和磺胺增效剂甲氧苄氨嘧啶(TMP)两组分组成的复方制剂.用紫外分光光度法不经分离对抗菌优中两组分或主要组分SMZ含量测定的方法在国内外已有不少报道,如双波长比值光谱法[1]、倍率减差双波长分光光度法[2]、吸收度线性组合法[3].本文作者在参考以上文献的基础上提出双波长系数标准加入法,对多组分药物进行定量分析,并用于抗菌优中SMZ的含量测定,获得了满意的结果.
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复方磺胺甲(口恶)唑片的胶束薄层色谱分析
以十二烷基硫酸钠(SDS)水溶液为展开剂、聚酰胺薄膜为固定相,对复方磺胺甲(口恶)唑片(复方新诺明)中两组分进行定量分析.磺胺甲基异(口恶)唑(SMZ)和甲氧苄氨嘧啶(TMP)分别在4.0~12.0 mmo/L和3.5~10.5 mmol/L范围内吸收峰面积和浓度呈良好的线性关系.相关系数分别为0.999 5和0.999 8,回收率分别为101.4%和99.5%,RSD(%)分别为0.58和1.60.
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选择HBV DNA多聚酶TP区VH抗体的一种新方法:蛋白片段互补法
目的:用PCA(Proteinfragment complementation assay,PCA,蛋白片段互补方法)选择HBV(Hepatitis B virus)多聚酶TP(Terminal protein,TP,末端蛋白)区VH(Variable fragments of heavy chain,VH,重链可变区)抗体.方法:用HepG2.2.15细胞分泌的HBV的多聚酶TP区作为抗原,用PCA方法进行VH抗体选择.抗原与抗体基因分别与二氢叶酸还原酶(DHFR)的两部分相连.特异性抗原、抗体相互识别,分别与他们相连的酶基因就会接触而恢复完整的DHFR酶活性,细菌得以存活.结果:对HBV DNA多聚酶TP区进行抗体选择,用PCA方法从抗体库中选择出3个对应抗体.3个TP区抗原特异性抗体有不同的氨基酸序列.结论:对HBV DNA多聚酶TP区进行抗体选择,用PCA方法可以从抗体库中较为简便的选择出对应抗体.PCA可以作为一个从抗体库中选择特异性抗体的强有力方法.
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消炎止痢灵片的质量标准研究
目的:建立消炎止痢灵片的质量标准.方法:采用TLC法对消炎止痢灵片中的苦参进行定性鉴别;采用HPLC法测定苦参碱、氧化苦参碱以及甲氧苄氨嘧啶的含量.结果:①方法专属性强.②在0.0845~1.0560μg范围内,苦参碱峰面积与进样量呈现良好的线性相关(r=0.9999),加样回收率为100.9%(RSD=2.3%);在0.0600~0.7500μg范围内,氧化苦参碱峰面积与进样量呈现良好的线性相关(r=0.9993),加样回收率为100.8%(R5D=2.4%).③在1.03~12.91μg范围内甲氧苄氨嘧啶峰面积与进样量呈现良好的线性相关(r=1.0000),加样回收率为100.6%(RSD=0.93%).结论:方法灵敏、准确,重现性好,可作为消炎止痢灵片的质量控制方法.
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褶合曲线分析法同时测定泻痢停片中两组份的含量
目的:建立泻痢停的含量测定方法.方法:应用计算机辅助褶合曲线分析法结合计算机信息处理技术,不经分离直接测定磺胺甲噁唑和甲氧苄氨嘧啶的含量.结果:磺胺甲噁唑在0~20μg/mL范围内线性良好,回收率为99.85%,相对标准偏差为0.53%;甲氧苄氨嘧啶在0~12μg/mL范围内线性良好,回收率为102.01%,相对标准偏差为3.14%.结论:该法简便、快速,结果可靠,重现性好.
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患有多种慢性病的老年病例讨论结果
1 治疗要求病人定期随访.针对病人目前的状况调整用药,即充血性心力衰竭、日益严重的高血压和关节炎.雷米普利增加到每天10 mg,因为高剂量的雷米普利治疗心力衰竭非常有效.华法林继续按周一、三、五4 mg,周二、四、六、日3 mg使用,监测血浆凝血酶原时间.停用呋塞米,增加托拉塞米(每天10mg),因为它易于吸收,对于心力衰竭病人有较强利尿作用.服用甲氧苄氨嘧啶/磺胺甲基异恶唑用于治疗尿路感染.这些药物使用的基本原理和可能发生的不良反应须对病人解释,并给予书面的用法说明.
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美国《Emerging infectious diseases》2006年第6期有关人兽共患病论文摘译
P.907 秘鲁和玻利维亚儿童体内共生的大肠杆菌多重耐药性研究//A. Bartoloni, L. Pallecchi, M. Benedetti,等应用快速筛选的方法,调查了秘鲁和玻利维亚4个城市社区1374名健康儿童粪便标本中多重耐药大肠杆菌的流行情况.高耐药率的抗生素包括氨苄青霉素(95%),甲氧苄氨嘧啶(94%)、四环素(93%)、链霉素(82%)、氯霉素(70%).低耐药率包括萘啶酮酸(35%)、卡那霉素(28%)、庆大霉素(21%)、环丙沙星(18%).头孢三嗪和氨基羟丁基卡那霉素A的耐药性不常见(<0.5%).在随机抽取的1080株耐药分离株中,有90%表现为多重耐药(MDR)表型.结合实验表明,2种为常见的多耐药表型(氨苄青霉素/四环素/甲氧苄氨嘧啶和氨苄青霉素/四环素/甲氧苄氨嘧啶/氯霉素)可以被完整地转移.常见的获得性耐药基因为blaTEM,tet(A),tet(B),drfA8, sul1,sul2和catl.这些发现强调了各种资源匮乏的社区中抗生素耐药性问题的严重性,这种耐药性的现象亟需加以监测和控制.
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双波长分光光度法测定增效黄连素胶囊中甲氧苄氨嘧啶和盐酸小檗碱的含量
目的本文提出以双波长分光光度法测定增效黄连素胶囊中甲氧苄氨嘧啶和盐酸小檗碱的含量的方法.方法样品经乙醇溶解,水稀释后,不经分离提取,直接在346nm波长处测定盐酸小檗碱,在325nm和285nm处用双波长法测定甲氧苄氨嘧啶的含量.结果平均回收率分别为99.2%和99.5%.结论本法操作快速简便、结果准确可靠,可作为增效黄连素胶囊含量测定的方法.
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高效液相色谱法测定增效黄连素胶囊中盐酸小檗碱和甲氧苄氨嘧啶的含量
目的建立了一种快速、准确的高效液相色谱法同时测定增效黄连素胶囊中盐酸小檗碱和甲氧苄氨嘧啶的含量的方法.方法采用十八烷基健合硅胶为固定相;甲醇:1mol@L-1醋酸铵溶液(60:40)为流动相;流速:0 5ml@min-1;检测波长290nm.结果盐酸小檗碱进样量在0.1 603-0.801 6μg范围内与峰面积呈良好的线性关系(r=0.9999),平均回收率为100.05%,RSD=0.2%(n=9);甲氧苄氨嘧啶在0.0816-0.4080μg范围内与峰面积呈良好的线性关系(r=0.9999),平均回收率为99.67%,RSD=0.3%(n=9).结论实验结果表明本法操作简便,重现性好,结果准确可靠,可以作为样品测定的方法.
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T-M培养基在阴道假丝酵母菌检测中的效果分析
淋病是古老的性病之一,在我国性传播性疾病(STD)中占首位,女性淋球菌感染及非淋病菌性尿道炎(NGU)均需做淋球菌培养来确诊或排除淋病.BIOCULT-GC测定系统是进口小包装的改良T-M培养基,其中马血和血清代替血红蛋白,培养基中加入黏菌素、甲氧苄氨嘧啶、万古霉素和茴香霉素,是淋球菌的专用培养基.
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甲氧苄氨嘧啶联合用药的研究及其不良反应防治
目的 研究甲氧苄氨嘧啶联合用药的情况及其不良反应的防治,为甲氧苄氨嘧啶的临床合理应用提供参考.方法 对近年来有关甲氧苄氨嘧啶的联合用药研究做系统检索,分类综述,总结已得成果,并结合临床实际调查找出存在问题,做出分析.结论 使用甲氧苄氨嘧啶时应严格掌握适应症,谨慎联合用药,减少不良反应的发生.
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止痢汤加甲氧苄氨嘧啶短疗程治疗细菌性痢疾的效果
我院采用止痢汤加氧苄氨嘧啶(TMP)短疗程治疗急性细菌性痢疾(菌痢)944例.1对象和方法1.1对象治疗组944例.男842例,女102例.年龄2~83岁,平均32岁.急性典型菌痢610例,急性非典型菌痢334例,大便培养痢疾杆菌阳性360例.对照组100例.
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千里光与甲氧苄氨嘧啶联用抗菌作用实验研究
目的探讨甲氧苄氨嘧啶(TMP)对千里光抗菌增效作用.方法采用琼脂稀释法对比研究了千里光、TMP及千里光与TMP联用对种5种不同细菌的体外抗菌作用.结果千里光与甲氧苄氨嘧啶配伍后,对实验所用4种细菌均有增效作用.结论 TMP与千里光联用具协同作用.
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增效依托红霉素胶囊的药效学与含量测定
目的:研究增效依托红霉素胶囊的药效与含量测定.方法:采用微生物效价法,在样品不经分离的情况下,测定增效依托红霉素胶囊中依托红霉素的含量. 培养基:Ⅱ号pH7.8;缓冲液:磷酸盐缓冲液,pH7.8;检定菌:枯草芽孢杆菌[CMCC(B)63501];抗生素浓度范围1~5 u*ml-1.结果:建立了增效依托红霉素胶囊中依托红霉素含量的测定方法.依托红霉素和TMP联用对大肠杆菌有相加作用.结论:依托红霉素和TMP联用可提高药效,具有一定的临床应用价值.
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二阶导数分光光度法测定复方磺胺甲(口恶)唑片中磺胺甲恶唑的含量
目的:建立复方磺胺甲(口恶)唑方法:采用二阶导数分光光度法不经分离直接测定复方磺胺甲(口恶)唑结果:相关系数为r=0.999 9,平均回收率为 101.8%,RSD为1.5%.结论:该方法简便,快速,结果准确.
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甘草与甲氧苄氨嘧啶对黄连抗菌增效作用比较
目的:探讨甘草与甲氧苄氨嘧啶对黄连抗菌增效作用特点.方法:采用琼脂稀释法进行抗菌作用研究.结果:黄连与甘草配伍,抗金葡菌作用增强4倍,抗水弧菌作用增强2倍.黄连与甲氧苄氨嘧啶配伍,对实验所用6种细菌均有增效作用.结论:甘草对黄连抗菌增效具一定的选择性,甲氧苄氨嘧啶对黄连具广谱抗菌增效作用.