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心肌顿抑中的氧化应激作用及氨基胍干预的效果
背景氧化应激的超氧阴离子(O-·2)可与细胞一氧化氮合酶(NOS)释出的一氧化氮(NO)结合,生成过氧亚硝酸阴离子(ONOO-).ONOO-是氧化应激各种产物[如O-·2、H2O2、羟自由基(·OH)等]之一,统称为反应性氧族(ROS).ROS在心肌顿抑中的作用研究不多,氨基胍作为NOS抑制剂对ROS的作用也不清楚.目的 探讨ONOO-在心肌顿抑发生中的作用和机制以及氨基胍的干预作用.方法 24条雄性杂种犬,随机分为4组:1)短顿抑组[左前降支冠状动脉(LAD)阻断15 min/再灌注120 min];2)长顿抑组(LAD阻断60 min/再灌注120 min);3)氨基胍组[LAD阻断60 min/再灌注120 min加一氧化氮合酶抑制剂氨基胍(100 mg/kg)干预];4)假手术组.在不同观察时间点测定超声心功能和冠状静脉窦血浆NO浓度.实验完毕后心肌标本行电镜检查,并行硝基酪氨酸免疫组化检查以证实是否有ONOO-生成.结果 1)LAD结扎后缺血心肌节段收缩期增厚百分率和左室射血分数显著下降,缺血心肌节段表现为矛盾运动;再灌注开始后心肌节段收缩功能和左室射血分数呈进行性改善,短顿抑组和氨基胍组心功能的恢复快于长顿抑组.2)短顿抑组和长顿抑组再灌注期血浆NO浓度明显升高,氨基胍组再灌注期血浆NO浓度无显著升高.3)短顿抑组顿抑心肌硝基酪氨酸免疫组化染色见阳性染色的心肌细胞灶;长顿抑组见较大、较多的强阳性染色心肌细胞灶,主要是胞浆尤其横纹处染色较深;氨基胍组顿抑心肌偶见心肌细胞弱阳性染色.4)透射电镜观察发现,短顿抑组心肌细胞偶见线粒体轻度脱颗粒;长顿抑组心肌细胞部分肌丝断裂,收缩带溶解,线粒体肿胀、脱颗粒,胞质水肿;氨基胍组心肌超微结构保存良好.结论 1)顿抑心肌生成NO增多伴ONOO-形成;2)ONOO-主要攻击的蛋白质对象是肌丝上的蛋白质;3)氨基胍抑制顿抑心肌过多的NO生成,显著减少ONOO-形成,并对顿抑心肌的超微结构和功能有明显保护作用.
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衰老对硝酸酯类药物引起活性氮介质和活性氧介质增高的影响
目的:以往研究显示,硝酸酯类药物和衰老都会引发体内活性氧介质(ROS)和活性氮介质(RNS)的增加,本研究旨在探讨年龄是否会影响硝酸酯类药物的这种促进作用.方法:75例不稳定心绞痛患者,分成32例中年组和43例老年两组.所有患者均给予硝酸酯类药物(50μg/min)48h.在试验开始时和用药48小时时,获取血样标本,对血样中的ROS[丙二醛(MDA),髓过氧化物酶(MPO)和还原性谷胱甘肽(GSH)]和RNS(硝基、亚硝基,NOx;过氧亚硝酸阴离子,ONOO-)]的水平进行检测.结果:硝酸酯类药物的使用,引起中年组血浆MDA水平[用药前(1.22±0.37) nmol/mL,用药后(1.61±0.47) nmol/mL,P＜0.05]增加60％;老年组MDA水平[用药前(2.07±0.77) nmol/mL,用药后(4.05±0.80) nmol/mL,P＜0.05],增加140％;GSH两组分别减少了9％和48％;硝酸酯类药物使用前,老年组血浆硝基化酪氨酸(398.29±117.0)nmol/L水平为仅为中年组(296.57±120.48)nmol/L的105％,药物使用48h后,老年组血浆硝基化酪氨酸水平(1 182.30±295.01) nmol/L增高到中年组(610.82±217.36)nmol/L,增高210％.结论:在硝酸酯类药物的使用过程中,除了药物本身增加机体内ROS和RNS,年龄增加能够促进硝酸酯类药物的这种作用.
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过氧亚硝酸阴离子在心肌顿抑发生中的作用
心肌顿抑发生的确切机制尚未阐明[1].近年研究提示[2],缺血再灌注心肌因一氧化氮合酶(NOS)表达增加引起一氧化氮(NO)生成增多,同时还产生大量超氧阴离子(O-2).NO与O-2反应形成的过氧亚硝酸阴离子(ONOO-)在某些急性心肌损害的发生中起着重要作用[3].本研究旨在通过犬心肌顿抑模型探讨ONOO-在心肌顿抑发生中的作用及其机制.
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血管内皮细胞氧化应激反应对细胞粘附分子表达的影响
目的通过对过氧亚硝酸阴离子所诱导的血管内皮细胞的氧化应激反应对内皮细胞表面粘附分子的影响的研究,探讨妊娠高血压疾病的发病机制.方法应用人类脐静脉血管内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)作为体外细胞模型.SIN-1(3-Morpholinosydnonimine-HCL)作为细胞培养液中过氧亚硝酸阴离子发生器,用以刺激培养的血管内皮细胞.以ELISA法检测血管内皮细胞表面粘附分子,包括细胞间粘附分子(intercelluar adhesion molecule,ICAM)、血管细胞粘附分子(vascularadhesionmolecule,VCAM)、P-选择素(P-Selectin)及E-选择素(E-Selectin)的表达水平.结果 SIN-1处理培养之血管内皮细胞0.5 h、1 h,2 h及4 h,细胞表面粘附分子在经SIN-1处理4 h后表达水平显著增加,呈时间依从性递增的趋势;SIN-1处理培养HUVEC 4 h后,血管细胞粘附分子(VCAM)、P-选择素及E-选择素的表达水平较未经SIN-1处理的HUVEC显著增加:VCAM(0.115±0.022)vs(0.035±0.011)(P<0.05);P-选择素(0.080±0.010)vs(0.034±0.001)(P<0.05);E-选择素(0.129±0.036)vs(0.037±0.004)(P<0.05)而ICAM的表达没有显著的变化(0.292±0.01)vs(0.220±0.019)P>0.05).当应用过氧亚硝酸阴离子清除剂MnTMPyP时,上述过氧亚硝酸阴离子对细胞表面粘附表达的上调作用消失.结论血管内皮细胞处于氧化应激状态时,细胞表面粘附分子的表达增加.
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过氧亚硝酸阴离子与心血管疾病
氧化应激及在氧化应激过程中产生的活性氧簇(ROS)与心血管疾病的发生发展有密切关系.过氧亚硝酸阴离子(ONOO-)作为一种重要的氧化应激产物及活性氧簇的一员,在其中发挥着重要的作用.本文对ONOO-与心血管疾病的关系做一综述,以期对下一步研究有所裨益.
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美蓝抗休克应用的研究进展
休克是由各种因素引起有效血容量不足、急性微循环障碍、组织灌注不足而导致以组织细胞缺血、缺氧、代谢障碍和器官功能受损为特征的综合征.重症难治性休克(RS)时顽固低血压经抗休克治疗仍难以回升.
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一氧化氮与心肌缺血再灌注损伤
NO在心肌缺血再灌注损伤(myocardial ischemia-reperfusion injury,MIRI)中起着十分重要的作用.NO对冠脉血管舒缩具有调控作用,能够有效维持冠脉循环血流,抑制血管平滑肌细胞增殖,防止血栓形成,对缺血再灌后心肌的转归及心肌功能的恢复起重要作用.然而,NO生成过多对心肌缺血会产生显著的不良作用,尤其是NO与氧结合生成大量的氧自由基,如过氧亚硝酸阴离子(peroxynitrite,ONOO-),这是一种氧化性很强、毒性很大的物质,其可导致细胞膜脂质过氧化及细胞其他成分的氧化损伤,直接损害心肌细胞和血管,而引起心肌细胞凋亡、坏死,使得心功能受损.所以,NO在心肌缺血再灌注损伤中是一把"双刃剑",现将NO的这种双重作用综述如下.
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肝肿瘤发生中过氧亚硝酸阴离子标志物作用
目的比较过氧亚硝酸阴离子(ONOO-)对正常人胚肝细胞株L-02和肝母细胞瘤细胞株HepG2 DNA损伤和细胞毒性差异,探索ONOO-在肝肿瘤发生中的作用及可能标志物.方法0.01,0.05,0.1 mmol/L ONOO-作用细胞后,检测ONCYO-对2株肝细胞的细胞生存率,超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)、过氧化氢酶(CAT)、丙二醛(MDA)含量变化,DNA损伤,生长抑制DNA损伤基因(GADD)表达的影响差异.结果ONOO-使2种肝细胞的生存率下降、SOD含量降低(P＜0.05)和CAT、GSH的显著变化,显著升高MDA的含量;DNA损伤程度和GADD45、GADD153基因表达水平在2株肝细胞均随着剂量的增加显著升高.2种肝细胞相比,各浓度组L-02细胞损伤程度大于HepG2细胞,但只有GADD基因表达水平差异有统计学意义(P＜0.05).结论ONOO-对正常肝细胞和肝癌细胞均显示细胞毒性作用,引起DNA损伤,诱导GADD表达.GADD基因表达水平在不同肝细胞中差异有统计学意义,可能是ONOO-细胞损伤效应的标志物.
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消可宁颗粒减少ONOO-形成保护高糖条件下内皮细胞的实验研究
目的:观察体外高糖培养条件下,消可宁颗粒对血管内皮细胞内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS)、诱导型一氧化氮合酶(induce nitric oxide synthase,iNOS)、一氧化氮(nitric oxide,NO)及过氧亚硝酸阴离子(peroxynitrite,ONOO-)的影响.方法:体外培养人脐静脉内皮细胞株ECV-304,分常规培养组、高糖对照组和不同浓度消可宁组,检测NOS和NO的吸光度,计算出活力或含量.用免疫组织化学方法检测ONOO-生成的标记物一硝基酪氨酸(nitrotyrosine,NT)的表达.结果与高糖对照组比较,消可宁组eNOS活力明显增加,iNOS活力降低,NO含量下降,NT表达减少.并具有剂量与时间依赖性.结论:消可宁可以抑制iNOS活性,并降低NO含量,减少血管内皮细胞内ONOO-形成而发挥抗氧化作用.
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原花青素对蛋白质硝基化的抑制作用及机理初探
目的 研究原花青素对蛋白质硝基化的抑制作用,初步探索其抑制机理.方法 以BSA为硝化底物、ONOO-1为硝化试剂,根据428 nm处吸光度的变化来反映硝基化蛋白含量的变化,进而研究原花青素对蛋白质硝基化的抑制作用.结果 通过对蛋白质硝基化反应各种影响因素的探讨,发现在37℃,pH 7.2,反应时间90 min以及BSA与ONOO-终浓度比为1:6时,硝基化反应进行为完全.分别在硝基化反应前、反应中以及反应后,向反应体系中引入不同浓度的原花青素的无水乙醇溶液,后发现在硝化反应发生前加入抑制剂,抑制硝化反应的效果为明显;当抑制剂终浓度为8.0×10-5mol/L时,抑制率可达66.89%.与褪黑素的比较实验显示,同条件下,二者对蛋白质硝化反应的抑制活性大体相当.抑制机理初步显示原花青素抑制蛋白质硝化反应的机理可能是部分清除ONOO-分解后的·OH或直接与ONOO-反应.结论 原花青素抑制蛋白质硝基化反应可能是其对抗心脑血管疾病的分子机制之一,为进一步开发原花青素成为新的临床药物和保健品提供理论支持.
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一氧化氮和过氧亚硝酸阴离子在心肌顿抑发生中的作用
目的探讨一氧化氮(NO)和过氧亚硝酸阴离子(ONOO-)生成在心肌顿抑发生中的作用和机制.方法 24条雄性杂种犬,随机分入4组:左前降支冠脉(LAD)阻断15 min/再灌注120 min(顿抑S组)、LAD阻断60 minn/再灌注120 min(顿抑L组)、LAD阻断60 min/再灌注120 min加氨基胍干预(氨基胍组)和假手术组.在不同观察时间点测定超声心功能和冠状静脉窦血浆NO浓度,实验完毕后心肌标本行硝基酪氨酸免疫组化检查和电镜检查.
