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波动性高糖诱导大鼠胰岛β细胞凋亡的研究
近年来,胰岛细胞凋亡成为糖尿病研究的一大热点.葡萄糖毒性在糖尿病慢性高血糖状态下可诱导胰岛β细胞凋亡,但以往的研究多集中于慢性持续性高糖的作用,而对于更符合糖尿病患者实际情况波动性高糖的作用报道较少,且具体作用机制不清.因此,我们于2009年7月至2010年4月通过观测大鼠胰岛细胞株(Ins-1)细胞凋亡情况及检测氧化应激相关因子,探讨波动性高糖对胰岛β细胞凋亡的影响及可能机制.
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川芎嗪对高糖诱导后人腹膜间皮转化生长因子-β1和结缔组织生长因子表达的影响
腹膜纤维化致超滤丧失是持续不卧床腹膜透析(CAPD)患者退出腹膜透析治疗的主要原因之一[1],多种因素与其发生、发展密切相关,其中高糖透析液的生物不相容性起重要作用.研究证实,高糖能上调腹膜间皮细胞(HPMCs)转化生长因子(TGF)-β1和结缔组织生长因子(CTGF)的表达[1-2],而后两者是参与腹膜纤维化的重要细胞因子[1-2].本实验采用体外技术直接观察川芎嗪对高糖刺激下HPMCs TGF-β1和CTGF表达的影响,探讨川芎嗪在防治腹膜纤维化中的作用及其机制.
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大黄素对高糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞TGF-β1/ERK1/2及FN蛋白表达的影响
目的 探讨大黄素(emodin,EMO)对高糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞(glomerular mesangial cells,MCs)转化生长因子-β1(TGF-β1)/细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)及细胞外基质(extracellular matrix,ECM)FN蛋白表达的影响.方法 将常规培养的MCs分为正常组(NG,5.56 mmol/L葡萄糖)、 甘露醇组(MA,5.56 mmol/L葡萄糖+24.44 mmol/L甘露醇)、溶剂组(0.1% DMSO+30 mmol/L葡萄糖)、高糖组(HG,30 mmol/L葡萄糖)及大黄素干预组(1 μmol/L、10 μmol/L EMO+30 mmol/L葡萄糖).CCK-8检测细胞增殖情况;Western blotting检测各组细胞TGF-β1、p-ERK1/2、FN蛋白表达.结果 与正常组比较,高糖培养48 h MCs增殖显著(P<0.05,P<0.01),p-ERK1/2、TGF-β1、FN蛋白表达明显增高(P<0.05);与高糖组比较,大黄素干预组能抑制MCs增殖,并显著降低p-ERK1/2、TGF-β1、FN蛋白表达(P<0.05或P<0.01).结论 大黄素能抑制高糖诱导下的MCs细胞增殖,下调TGF-β1、p-ERK1/2、FN蛋白表达,从而发挥对糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)的防治作用.
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G 蛋白偶联胆汁酸受体1激活对高糖诱导小鼠心肌细胞肥大的影响
目的：探讨 G 蛋白偶联胆汁酸受体1（TGR5）激活对高糖诱导小鼠心肌细胞肥大的影响。方法原代培养小鼠心肌细胞，将细胞分为对照组、高糖组、高糖＋INT-777（TGR5受体激动剂）组、高糖＋INT-777＋TGR5 shRNA（以 TGR5干扰慢病毒包装）组。采用图像分析系统测定各组细胞表面积，通过 RT-PCR 及 Western blotting方法检测 TGR5干扰慢病毒效率，RT-PCR 检测各组促肥大因子（心房钠尿因子、β-肌球蛋白重链）mRNA 表达变化。结果成功培养小鼠心肌细胞。与对照组比较，高糖组心肌细胞表面积及促肥大因子 mRNA 表达增加（P 均＜0．05）。激活 TGR5后，由高糖导致的心肌细胞表面积及促肥大因子 mRNA 表达的增加受到抑制（P 均＜0．05）。与激活 TGR5组比较，干扰 TGR5基因后，心肌细胞表面积及促肥大因子 mRNA 表达明显增加（P 均＜0．05）。结论激活 TGR5受体可以抑制高糖诱导的心肌细胞肥大及促肥大因子 mRNA 表达，可能是糖尿病性心肌病重要的药物治疗靶点。
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高糖诱导的人近端肾小管上皮细胞损伤及机制的研究
目的:观察高糖诱导人近端肾小管上皮细胞(HK-2)损伤及机制.方法:细胞生长融合至约80％时,用DMEM低糖培养基无血清同步化48 h,然后分为以下7组.①正常糖对照组(5.5 mM低糖DMEM培养基,NG)；②高糖1组(15mM高糖DMEM培养基,HG1);③高糖2组(30 mM高糖DMEM培养基,HG2);④高糖3组(45 mM高糖DMEM培养基,HG3);⑤高糖4组(60 mM高糖DMEM培养基,HG4);⑥等渗1组(30 mM甘露醇DMEM培养基,HM1)；⑦等渗2组(45 mM甘露醇DMEM培养基,HM2).观察不同糖浓度(5.5～45 mM)刺激HK-2细胞24 h,观察IκBα和p65蛋白表达规律.MTT比色法检测细胞活力.Western blot法检测IκBα和p65蛋白表达.结果:高糖2组、高糖3组、高糖4组浓度呈依赖性对HK-2活力存在显著的抑制作用(P＜ 0.05,P＜0.01)；高糖2组、高糖3组浓度的甘露醇对HK-2活力没有明显的抑制作用(P＞0.05).IκBα蛋白表达随着葡萄糖浓度的升高而依次降低,而p65蛋白表达呈浓度依赖性升高,高糖2组、高糖3组的葡萄糖与正常糖对照组比较,差异有显著性或非常显著性意义(P＜ 0.05,P＜0.01).结论:高糖诱导的HK-2毒性损伤呈一定的浓度依赖关系,其机制与NF-κB通路的激活有关,与渗透压作用无明显关联.
关键词： 糖尿病肾病 近端肾小管上皮细胞(HK-2) IκBα p65 高糖诱导 -
氯沙坦通过ERK1/2丝裂原活化蛋白激酶途径抑制高糖诱导的小鼠系膜细胞结缔组织生长因子表达
糖尿病肾病(DN)是糖尿病严重的慢性并发症之一,其主要病理特征是由细胞外基质(ECM)增多引起的肾小球硬化.血管紧张素(Ang)受体拮抗剂氯沙坦可有效地延缓肾小球硬化,被用于DN的治疗.高糖可诱导肾脏系膜细胞结缔组织生长因子(CTGF)的表达,从而促进ECM积聚和组织器官的纤维化.丝裂原活化蛋门激酶(MAPK)作为真核细胞胞质内的信号转导终末通路,与DN的发病密切相关[1].本研究观察高糖是否通过ERK1/2 MAPK途径调节小鼠系膜细胞CTGF的表达,以及氯沙坦对CTGF的作用是否也与ERK1/2 MAPK通路相关.
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丙酮酸乙酯对高糖诱导大鼠肾小球系膜细胞增殖、基质金属蛋白酶-2及层粘连蛋白表达的影响
目的 探讨丙酮酸乙酯(EP)对高糖诱导大鼠肾小球系膜细胞株(HBZY-1细胞)增殖、基质金属蛋白酶(MMP)-2及层粘连蛋白(FN)表达的影响.方法 将HBZY-1细胞分为NG组、HG组、EP1组、EP2组、EP3组,分别加入5.6 mmol/L葡萄糖、30.0 mmol/L葡萄糖、30.0 mmol/L葡萄糖+1.0 mmol/L EP、30.0 mmol/L葡萄糖+3.0 mmol/L EP、30.0 mmol/L葡萄糖+5.0 mmol/L EP.比较5组HBZY-1细胞干预后12 h、24 h、48 h的增殖情况,以及干预后24 h MMP-2、FN的表达水平.结果 在各个时间点,HG组细胞的增殖能力均高于其他4组细胞(均P<0.05).与NG组比较,HG组MMP-2表达水平降低,而FN表达水平升高(均P<0.05).HG组、EP1组、EP2组、EP3组MMP-2表达水平依次升高,FN表达水平依次降低(均P<0.05).结论 EP可抑制高糖诱导的HBZY-1细胞过度增殖,并可上调MMP-2、下调FN表达.
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糖肾康含药血清对高糖诱导小鼠肾小球系膜细胞增殖及周期的影响
目的:观察糖肾康含药血清对高糖诱导小鼠肾小球系膜细胞(GMCs)增殖及周期的影响,阐明作用机制.方法:30只SPF级雄性SD大鼠随机分为正常对照组、糖肾康4.6g/kg组、糖肾康13.8g/kg组、糖肾康41.4g/kg组和罗格列酮0.36mg/kg组5组,分别灌胃等体积生理盐水、糖肾康生药4.6g/kg、13.8g/kg、41.4g/kg和罗格列酮0.36mg/kg,1次/d,连续灌胃7d后腹主动脉取血制备含药血清;小鼠肾小球系膜细胞在高糖(30mmol/L葡萄糖)诱导下经含药血清治疗,分为正常血清组、高糖对照组、10％罗格列酮0.36mg/kg含药血清组、10％糖肾康4.6g/kg、13.8g/kg、41.4g/kg含药血清组,治疗24h、48h、72h和96h后,采用MTT法测定细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期,划痕标记荧光染料示踪技术检测细胞间隙连接通讯功能(GJIC),RTq-PCR技术检测Cx43、DAG、IP3和PKC的mRNA的表达.结果:(1)与高糖对照组比较,10％糖肾康13.8g/kg、41.4g/kg含药血清组A值在24h、48h、72h和96h各时间段均明显下降,且糖肾康各剂量含药血清组A值从72h开始下降程度优于10％罗格列酮0.36mg/kg含药血清组.(2)与高糖对照组比较,含药血清治疗到72h时,G0/G1期细胞百分比升高,S期百分比降低,细胞增殖指数明显降低;与10％罗格列酮0.36mg/kg含药血清组比较,10％糖肾康41.4g/kg含药血清组效果更优.(3)与高糖对照组比较,10％罗格列酮0.36mg/kg含药血清组和10％糖肾康13.8g/kg、41.4g/kg含药血清组均能改善肾小球系膜细胞的细胞间隙连接通讯功能,10％糖肾康41.4g/kg含药血清组优.(4)与高糖对照组比较,10％罗格列酮0.36mg/kg含药血清组和10％糖肾康13.8g/kg、41.4g/kg含药血清均能降低DAG、IP3、PKC的mRNA,升高CX43mRNA,10％糖肾康41.4g/kg含药血清组优.结论:糖肾康能够抑制高糖环境下肾小球系膜细胞增生,调节细胞周期,改善细胞间隙连接通讯功能功能,促进增殖细胞凋亡,治疗早期糖尿病肾病,其可能机制是糖肾康阻断了DAG/PKC信号通路,增加了Cx43表达,改善了细胞间隙连接通讯功能.
