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羟基红花黄色素A的研究进展
红花(Carthamus tinctorius L.) 为菊科植物干燥的花.具有活血通经、祛瘀止痛的功效, 是传统的活血化瘀类中药.红花中明确的化学成分有200多种,主要含色素、黄酮类化合物、酚酸、脂肪酸、挥发油、多炔及其他成分.色素主要包括红色素和黄色素,红花黄色素是其主要的水溶性成分,属于查耳酮类化合物.
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HPLC-DAD法同时测定肾衰宁胶囊中9种成分的含量
目的 建立HPLC-DAD法同时测定肾衰宁胶囊中9种成分(太子参环肽B、盐酸小檗碱、橙皮苷、大黄素、大黄酚、丹参酮ⅡA、β-蜕皮甾酮、羟基红花黄色素A、甘草苷)的含量.方法 采用Venusil ASB C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为甲醇-乙腈(50∶50,A)-0.1％甲酸水溶液(B),梯度洗脱,洗脱程序如下:0～15min(10％B),15～45 min(10％～50％B),45～60 min(50％～60％B),60～85 min (60％～80％B),85～100 min (10％B);流速为0.9 mL·min-,柱温35℃.结果 85 min内9个成分分离度良好,在各自的检测范围内浓度与峰面积呈良好的线性关系,r均＞0.9980,加样回收率为98.4％～102.2％,RSD均＜1.5％.结论 该法简便可行,结果可靠,可为本制剂多指标成分的质量控制提供参考.
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HPLC法测定愈伤灵胶囊中尿囊素与羟基红花黄色素A的含量
目的 分别建立一种测定愈伤灵胶囊中尿囊素与羟基红花黄色素A含量的方法.方法 采用高效液相色谱法,色谱柱为Thermo Syncronis HILIC柱(4.6 mm×250 mm,5μtm).以乙腈-水(98∶2)为流动相,191 nm为检测波长测定尿囊素含量;以乙腈-0.7％磷酸(15∶85)为流动相,337 nm为检测波长测定羟基红花黄色素A含量.结果 尿囊素在37.62～1254 ng内与峰面积线性关系良好,r为0.9999,平均回收率为99.0％;羟基红花黄色素A在48.14～722.06 ng内与峰面积线性关系良好,r为0.9997,平均回收率为95.8％.结论 本方法专属性强、重复性好,能有效地控制愈伤灵胶囊中土鳖虫与红花的质量,对愈伤灵胶囊质量标准的提高有一定参考价值.
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高效液相色谱法测定红花逍遥片中4种有效成分的含量
目的 建立同时测定红花逍遥片中芍药苷、芍药内酯苷、羟基红花黄色素A和甘草酸含量的高效液相色谱法.方法 采用SHIMADZU LC 20AD高效液相色谱仪,Welch(MLtimateXB-C18,4.6mm×250 mm,5μm)色谱柱,以乙腈(A)-0.1％磷酸水溶液(B)为流动相,梯度洗脱,流速为1.0mL·min-1,检测波长为403 nm(0～10min,检测羟基红花黄色素A)、230 nm(10～15 min,检测芍药苷和芍药内酯苷)、237 nm(30～45 min,检测甘草酸),柱温为25℃.结果 红花逍遥片处方中4个成分芍药苷、芍药内酯苷、羟基红花黄色素A和甘草酸浓度分别在0.0094～0.1880 mg·mL-1 (r=0.9997)、0.0037～0.0744 mg· mL-1(r=0.9996)、0.000 27～0.005 40 mg· mL-1(r=0.9998)、0.0050～0.1010 mg·mL-1 (r=1.000)与峰面积呈良好的线性关系;平均回收率(n=6)分别为98.7％、98.2％、100.7％、100.8％.结论 该方法准确可靠、重复性好,可用于红花逍遥片处方的质量控制.
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高效液相色谱法测定跌打活血酊中羟基红花黄色素A和阿魏酸的含量
目的 建立高效液相色谱法测定跌打活血酊中羟基红花黄色素A和阿魏酸的含量.方法 使用ODS2 C18(4.6 mm×150 mm,5 μm)色谱柱,其中羟基红花黄色素A的色谱务件:以甲醇-0.7％磷酸溶液(25∶75)为流动相,流速为1 mL·min-1,检测波长为403 nm,柱温为30℃,进样量为10 μL;阿魏酸的色谱条件:以乙腈-0.085％磷酸溶液(17∶83)为流动相,流速为1 mL·min-1,检测波长为316nm,柱温为35℃,进样量为10μL.结果 羟基红花黄色素A在0.0478～2.39μg与峰面积线性关系良好(r2=0.9996),样品的平均加样回收率为98.6％;阿魏酸在0.028 35～2.835 μg与峰面积线性关系良好(r2=0.9998),样品的平均加样回收率为99.1％.结论 建立的方法具有操作简便、结果准确、灵敏度高等优点,可用于控制跌打活血酊的质量.
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羟基红花黄色素A的现代研究新进展
羟基红花黄色素A(Hydroxysafflor yellow A,HSYA)是中药红花提取物中主要的水溶性成分之一,HSYA的活性相继被发现,国内外利用现代分析仪器和分子生物学技术对其结构和作用机制以及相关作用靶点开展了较为深入系统的研究.本文从HSYA的提取、分离、纯化、含量测定、稳定性、药动学以及药理作用等来综述近几年国内外对HSYA的研究成果,以期对HSYA的进一步开发利用提供依据.
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羟基红花黄色素A对雌激素效应相关蛋白表达的影响
目的 探讨羟基红花黄色素A(hydroxysafflor yellow A,HSYA)对雌激素效应相关蛋白表达的影响.方法 培养雌激素受体阳性细胞T47D和特异性雌激素受体(estrogen receptor,ER)阴性细胞SK-BR-3,将1×10-7mol/L-1×10-9mol/L三种梯度浓度的HSYA作用于两种细胞,通过蛋白质免疫印迹法检测雌激素受体ERα 及ERβ、细胞外调解蛋白激酶1/2(ERK1/2)及p-ERK1/2、孕激素受体(progesterone receptor,PR)、抑癌基因P27等蛋白的表达情况.结果 与空白对照组相比,在T47D细胞中,高浓度的HSYA促进了ERα、ERβ、ERK1/2、p-ERK1/2、PR的表达,抑制了P27的表达(P<0.01);在SK-BR-3细胞中,HSYA显著抑制了ERK1/2的表达,但对p-ERK1/2的表达影响不明显(P>0.05).结论 HSYA在细胞内影响雌激素效应相关蛋白的表达情况不同,可能是通过调节ER表达及激活ERK信号通路而发挥雌激素样作用.
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注射用红花黄色素A对急性心肌缺血犬的保护作用
目的:观察注射用羟基红花黄色素A的抗心肌缺血作用.方法:36只体质量为10.0 ～13.0 kg的健康Beagle犬,雌雄各半,随机分为6组,即假手术组、模型组、注射用红花黄色素(5.0 mg/kg)阳性对照组及羟基红花黄色素A低(1.25 mg/kg)、中(2.5 mg/kg)、高(5.0 mg/kg)剂量组,每组6只.采用结扎冠状动脉前降支法致Beagle犬急性心肌缺血,经静脉给药后,用心外膜电图标测法计算心肌缺血程度及心肌缺血范围,检测血清中磷酸肌酸激酶(CK)和乳酸脱氢酶(LDH)及血浆中肌钙蛋白T(cTnT)水平.观察注射用羟基红花黄色素A对心肌缺血损伤的保护作用.结果:注射用羟基红花黄色素A可显著降低心肌缺血程度(∑-ST)及范围(N-ST),并能显著降低血清CK、LDH及血浆中cTnT水平.结论:注射用羟基红花黄色素A对急性心肌缺血犬具有显著的保护作用.
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羟基红花黄色素A对大鼠脑缺血-再灌注损伤的保护作用及机制
目的:研究羟基红花黄色素A对大鼠脑缺血-再灌注损伤的保护作用及机制.方法:缺血前给予羟基红花黄色素A(2、4、8 mg/kg),舌下静脉给药3d,末次给药lh后制备大鼠大脑中动脉阻断短暂局灶性缺血模型.脑缺血2h再灌注24 h后,用伊文思兰法(EB)测定血脑屏障的损伤程度.比色法测定缺血脑组织髓过氧化酶(MPO)和一氧化氮合酶(NOS)的活性,酶免法测定血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素6(IL-6)、白介素1β(IL-1β)的含量.结果:羟基红花黄色素A能减轻脑缺血-再灌注后神经损伤症状,抑制MPO和NOS活性,降低脑缺血-再灌注后血清中IL-6、IL-1β、TNF-α含量.结论:羟基红花黄色素A可通过抑制脑缺血-再灌注过程中炎症介质释放,降低脑缺血-再灌注所致脑损伤.
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均匀设计法优选红花提取工艺
目的:确定红花水提工艺条件.方法:以羟基红花黄色素A浸出量为指标,采用均匀设计法优选红花提取工艺条件.结果:以水为溶剂提取2次,加水量分别为12倍、10倍,提取时间分别为60、50min,可使药材中羟基红花黄色素A基本浸出.结论:试验结果可为红花提取工艺的确定提供实验依据.
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红花查尔酮异构酶基因的克隆分析表达及HSYA动态累积关系
目的:克隆红花中查耳酮异构酶(Chalcone-flavonone isomerase,CHI)基因,进行生物信息学分析、开花1～7d CHI表达量及羟基红花黄色素A(hydroxysafflor yellow A,HSYA)含量分析,为红花中CHI功能验证、黄酮类成分合成及调控机制研究提供基础.方法:克隆CHI序列,通过生物信息学预测CHI特性,使用Real-time PCR检测红花开花1～7 d CHI的相对表达量,HPLC检测HSYA动态累积的百分含量,并进行关联分析.结果:克隆获得红花CHI序列全长,检测得到红花开花1 ～7 d CHI的相对表达量及HSYA动态累积的百分含量.CHI表达量及HSYA动态累积百分含量呈现相似的变化趋势:均在1～4 d逐渐升高,在第4天达到高峰,第5～7天急剧降低.结论:此研究可为红花中CHI功能验证、黄酮类成分合成及调控机制研究提供基础.
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不同海拔梯度新疆红花品质分析研究
目的:分析不同海拔梯度新疆红花的有效成分含量,探讨不同海拔环境对新疆红花品质的影响.方法:红花样品采集自昌吉地区、伊犁地区、塔城地区的不同海拔,并将不同地区的海拔划分为9个范围,运用HPLC和紫外分光光度法分别测定红花中羟基红花黄色素A、山柰素及总黄酮的含量.结果:新疆不同海拔梯度红花中羟基红花黄色素A的含量为1.00％ ～ 1.86％,山柰素的含量为0.0531％ ～0.2390％,总黄酮的含量为0.1489％～1.0169％,不同海拔梯度红花中山柰素及总黄酮的含量差异较大,其中海拔在1 000～1 250 m的昌吉地区含量高,红花品质较优.结论:该方法可以用于红花中羟基红花黄色素A、山柰素和总黄酮的含量测定,不同海拔高度红花样品含量测定结果为新疆红花质量标准建立提供进一步实验依据.
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红花黄色素滴眼液中羟基红花黄色素A的含量测定
目的 研制红花黄色素滴眼液,并建立该制剂中羟基红花黄色素A的含量测定方法.方法 按处方制备红花黄色素滴眼液,用高效液相色谱法(HPLC)测定红花黄色素中有效成分羟基红花黄色素A的含量,以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂,以甲醇-乙腈-0.7％磷酸溶液(26:2:72)为流动相,检测波长为403 nm,流速为1.0 mL·min-1.结果 该制剂制备工艺简单,可以过滤除菌,并无菌分装至5 mL的聚丙烯药用滴眼剂瓶中.羟基红花黄色素A在6.012～16.032 μg·mL-1范围内呈良好的线性关系,r=0.999 9,平均回收率为99.93％,RSD为0.92％(n=9).该色谱方法重现性高,耐用性好,对照品溶液和供试品溶液在室温放置24 h内基本稳定.结论 该制剂制备工艺简单,且含量测定方法可靠、准确,质量稳定,可用于老年性黄斑变性(AMD)的治疗.
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同时测定血府逐瘀汤中3种主要成分的含量
目的 建立以高效液相色谱法(HPLC)同时对血府逐瘀汤中羟基红花黄色素A、芍药苷和柚皮苷等3种主要成分进行含量测定的方法.方法 采用Kromasil C18(250 mm×4.6 mm,5 μm)色谱柱;以甲醇-乙腈(26:2)-0.7%磷酸为流动相,进行梯度洗脱;检测波长为403、283、230 nm;流速为1 ml/min.结果 3种成分分离效果良好,羟基红花黄色素A、芍药苷、柚皮苷加样回收率分别为101.1%(相对标准偏差值RSD=2.1%)、99.9%(RSD=1.1%)、102.1%(RSD=1.3%).结论 本法简单、快捷,适用于测定血府逐瘀汤中羟基红花黄色素A、芍药苷和柚皮苷的含量.
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羟基红花黄色素A与芍药苷联用对脑缺血再灌注大鼠脑组织p-AKT蛋白的影响
目的 探讨羟基红花黄色素A(HSYA)与芍药苷(PF)联用对脑缺血再灌注大鼠脑组织磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)的影响.方法将160只SD大鼠随机分成HSYA组(5 mg·kg-1)、PF组(5 mg·kg-1)、预防治疗组(HSYA+PF,各5 mg·kg-1)、治疗组(HSYA+PF,各5 mg·kg-1)、银杏内酯组(5 mg·kg-1)、模型组、假手术治疗组(HSYA+PF,各5 mg·kg-1)、假手术空白组.采用右侧大脑中动脉线栓法(MACO)复制急性局灶性脑缺血再灌注模型,预防治疗组从造模前3 d开始通过尾静脉注射给药,余各组造模后连续给药7 d.再灌注6 h后及取材前进行神经行为评分;氯化三苯基四氮唑(TTC)染色观察并测定脑梗死面积百分比;HE染色观察各组大鼠海马区病理组织学变化;免疫组化法检测脑组织皮层区p-AKT蛋白表达情况.结果与假手术组比较,其余各组首次神经行为评分均显著增加(P<0.05);与模型组比较,预防治疗组首次神经行为评分显著降低(P<0.05),各给药组治疗后神经行为评分显著降低(P<0.05).与假手术组比较,模型组脑梗死面积百分比显著增大(P<0.05);与模型组比较,各给药组脑梗死面积百分比显著减小(P<0.05).与模型组比较,预防治疗组、治疗组、银杏内酯组的脑组织皮层内p-AKT阳性细胞表达率显著升高(P<0.05),而HSYA组、PF组与模型组的差异无统计学意义(P>0.05);与治疗组比较,预防治疗组的p-AKT阳性细胞表达明显增加(P<0.05).结论HSYA与PF联用较单用对脑缺血再灌注损伤有更强的保护作用,这可能与其上调PI3K/AKT通路中p-AKT蛋白的表达量有关,且预防用药的保护作用更强.
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RP-HPLC法测定桃红四物汤提取物中9种水溶性活性成分的含量
目的 建立RP-HPLC法同时测定桃红四物汤中苦杏仁苷、 羟基红花黄色素A、 梓醇、 地黄苷A、 阿魏酸、 芍药苷、 原儿茶酸、 绿原酸、 没食子酸9种水溶性活性成分的含量测定方法.方法 采用Hypersil GOLD AQ(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱;乙腈-水(0.05%H3PO4)为流动相,梯度洗脱;流速:1 mL·min-1;柱温:30℃;检测波长:215 nm.结果 桃红四物汤中苦杏仁苷、 羟基红花黄色素A、 梓醇、 地黄苷A、 阿魏酸、 芍药苷、 原儿茶酸、 绿原酸、 没食子酸分别在6.47~129.40,4.01~80.19,2.51~50.16,3.03~60.66,1.05~21.00,5.03~100.50,0.90~18.02,0.46~9.12,0.32~6.30μg·mL-1范围内浓度与峰面积呈良好线性关系,相关系数分别为0.9990,0.9997,0.9995,0.9996,0.9998,0.9999,0.9998,0.9994,0.9996.结论 该方法准确、 可靠、 快速,可用于桃红四物汤中9种水溶性活性成分的质量控制.
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HPLC-DAD法同时测定痛经丸中5种成分的含量
目的：建立同时测定痛经丸中丹参素、川芎嗪、芍药苷、羟基红花黄色素A和阿魏酸5个化学成分含量的方法。方法采用高效液相色谱-二级管阵列检测器（HPLC-DAD）法，Waters Symmetry C18色谱柱（250 mm×4.6 mm，5μm），以甲醇（A）和0.2%甲酸水溶液（B）为流动相进行梯度洗脱；流速为0.6 mL·min-1；柱温30℃；检测波长为280 nm（0～16 min），254 nm（16～19 min），403 nm（19～22 min），320 nm（22～30 min）。结果丹参素、川芎嗪、芍药苷、羟基红花黄色素A和阿魏酸分别在0.012～1.2μg、0.021～2.08μg、0.0212～2.12μg、0.0124～1.24μg、0.008～0.8μg质量浓度范围内与其峰面积呈良好的线性关系（r≥0.9997）；平均加样回收率均大于98.0%；RSD为0.73%～1.40%。结论该方法快速、准确、重复性好，可用于痛经丸的质量控制。
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HPLC法研究当归-红花单煎及共煎液中有效成分含量的变化
目的 研究和探讨当归-红花单煎及共煎液中有效成分阿魏酸和羟基红花黄色素A含量的变化,初步探索两味中药配伍应用的变化规律.方法 采用Phenomenex C18柱(4.6 mm×150 mm,5 μm),以甲醇-0.05%磷酸水溶液(pH=2.45,25:75)为流动相;流速:1.0 mL/min;柱温:30℃;进样温度:5℃;检测波长分别为320 nm、403 nm.测定追踪当归-红花共煎液与单煎液中主要有效成分阿魏酸和羟基红花黄色素A含量的变化.结果 阿魏酸回归方程为Y=3.837 2X+0.0219(r=0.999 8),在0.5～10.0μg/mL范围内线性关系良好,平均加样回收率为92.68～101.13%,RSD小于3.2%;羟基红花黄色素A回归方程为Y=1.364 7X-0.371 4(r=0.999 9),在5.0～100.0 μg/mL范围内线性关系良好,平均加样回收率为100.17～102.97%,RSD小于2.8%;当归红花共煎液中阿魏酸含量比当归单煎液中平均升高142.64%,羟基红花黄色素A含量比红花单煎液中平均升高145.37%.结论 当归-红花共煎液中阿魏酸和羟基红花黄色素A的含量高于各单煎液中含量,两者配伍具有一定的合理性.该法快速、简便、准确,可为评价提取物中阿魏酸和羟基红花黄色素A的质量提供依据.
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HPLC法同时测定补阳还五汤中毛蕊异黄酮苷、芍药苷、羟基红花黄色素A的含量
目的 建立补阳还五汤中毛蕊异黄酮苷、芍药苷、羟基红花黄色素A的含量测定方法.方法 采用高效液相色谱法,色谱柱:Kromasil C18(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相:甲醇-乙腈(26:2)为流动相A,0.7%磷酸为流动相B,梯度洗脱;检测波长:毛蕊异黄酮苷为260 nm,芍药苷为230 nm,羟基红花黄色素A为403 nm;柱温:35℃.结果 毛蕊异黄酮苷在0.0539～1.0780μg范围内线性关系良好,r=0.999 5,平均回收率为99.4%,RSD=1.5%;芍药苷在0.4160～8.3200μg范围内线性关系良好,r=0.999 8,平均回收率为100.6%,RSD=1.7%;羟基红花黄色素A在0.0418～0.8352μg范围内线性关系良好,r=0.999 5,平均回收率为101.0%,RSD=1.9%.结论 本方法简单快捷,适用于测定补阳还五汤中毛蕊异黄酮苷、芍药苷、羟基红花黄色素A的含量.
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羟基红花黄色素A对脑缺血再灌注损伤大鼠脑组织中PDGF含量及PI3K、Akt蛋白表达的影响
目的 探讨羟基红花黄色素A对脑缺血再灌注损伤大鼠脑组织中血小板衍生因子(PDGF)含量及PI3K、Akt蛋白表达的影响.方法 120只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、给药1组(羟基红花黄色素A组)、给药2组(羟基红花黄色素A+PDGF β受体拮抗剂组)、给药3组(PDGF β受体拮抗剂组),每组各24只.采用线栓法制备脑缺血再灌注损伤大鼠模型,并给予相应药物治疗.比较各组大鼠的神经功能缺失评分、脑梗死面积、脑组织含水量、脑组织与血清中PDGF含量及PI3K、Akt蛋白的表达.结果 与假手术组比较,模型组神经功能缺失评分、脑梗死面积及脑组织含水量均显著增高(P<0.05).与模型组比较,给药1组神经功能缺失评分、脑梗死面积及脑组织含水量均显著降低(P<0.01).但给药2组和给药3组各项指标与模型组比较差异无统计学意义(P>0.05).与假手术组比较,模型组脑组织及血清PDGF含量显著增高(P<0.01).与模型组比较,给药 1 组脑组织及血清 PDGF 显著增加(P<0.01).但给药2组和给药3组脑组织及血清PDGF与模型组比较差异无统计学意义(P>0.05).与模型组比较,给药1组PI3K、Akt阳性细胞吸光度均显著增加(P<0.01).但给药2组和给药3组PI3K、Akt阳性细胞吸光度与模型组比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 羟基红花黄色素A对缺血性脑损伤的神经保护作用可能通过PDGF介导的PI3K/Akt信号转导通路的激活来发挥作用.
关键词： 脑缺血 再灌注损伤 羟基红花黄色素A PI3K/Akt信号通路 PDGF
