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脱氧核酶对Period1 mRNA的体外切割及对小鼠吗啡奖赏效应的影响
目的研究脱氧核酶对Period1 mRNA的体外切割作用,及注射脱氧核酶对阿片类药物奖赏效应的影响.方法设计合成针对Period1(Per1)mRNA的脱氧核酶(DRz164),并构建pcDNA3.1(+)-Per1164体外转录载体;将体外转录产物和脱氧核酶按一定条件混合,检测脱氧核酶的体外切割效率.脑室注射DRz164,建立小鼠条件位置偏爱模型,观察脱氧核酶对吗啡奖赏效应的影响.结果 DRz164对Per1 mRNA组分有切割作用,在反应30、60、90和120 min的剪切百分率分别为36.4%、40.5%、47.8%和63%.给予DRz164后小鼠未能形成对吗啡的位置偏爱.结论 DRz164在体外能够切割per1 mRNA,在一定范围内剪切活性随时间延长而升高,小鼠脑室注射DRz164可拮抗吗啡所引起的奖赏效应,缓解对吗啡的精神依赖.
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100Hz电针对大鼠可卡因CPP重建的影响
目的:探讨100Hz电针对大鼠可卡因条件位置偏爱(Conditioned Place Preference,CPP)重建的影响.方法:采用可卡因诱导大鼠CPP重建模型,观察100 Hz电针对大鼠可卡因CPP重建的作用及选择性κ阿片受体拮抗剂nor-BNI对电针作用的影响.结果:100 Hz电针5次刺激抑制了可卡因(5 mg/kg)引燃CPP重建,nor-BNI(10μg/5μl)翻转了电针对可卡因CPP重建的抑制作用.结论:多次电针可通过κ阿片受体抑制可卡因引燃CPP的重建.
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丹参、黄芪小复方对吗啡依赖小鼠复吸行为的抑制作用
目的:研究丹参、黄芪小复方抑制吗啡依赖小鼠复吸行为的药理作用.方法:利用条件性位置偏爱(conditioned place preference,CPP)的方法,建立吗啡精神依赖小鼠复吸模型,给予丹参、黄芪小复方,研究其对吗啡依赖小鼠复吸行为的作用.结果:与吗啡对照组比较,在sc小剂量(3 mg·kg-1)吗啡引燃刺激前30 min应用丹参、黄芪小复方60、120 mg·kg-1急性治疗,可以使小鼠在伴药箱停留时间显著缩短(P<0.05);而丹参、黄芪小复方30 mg·kg-1急性治疗使小鼠在伴药箱停留时间有一定程度缩短,但无统计学意义(P>0.05).结论:丹参、黄芪小复方在一定程度上可以抑制吗啡引燃的吗啡依赖小鼠的复吸行为.
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l-THP对大鼠甲基苯丙胺对条件位置偏爱效应的影响
目的:研究左旋四氢巴马汀(l-tetrahydropalmatine,l-THP)对甲基苯丙胺诱导的大鼠条件位置偏爱(conditioned place preference,CPP)模型的干预作用,并初步探讨其神经生化机制.方法:结果:通过条件位置偏爱实验建立大鼠甲基苯丙胺精神依赖模型,用左旋四氢巴马汀和多巴胺受体拮抗剂干预模型的消退、重建过程,比较分析各组实验结果.CPP实验中大鼠对甲基苯丙胺有明显的偏爱效应,但大鼠腹腔注射l-THP未显示明显的偏爱效应,l-THP对实验大鼠不能诱导条件位置偏爱效应.l-THP能不同程度地促进甲基苯丙胺诱导的大鼠条件位置偏爱效应的消退,而且这一作用有可能呈现一定的剂量依赖性,而且可以在一定程度上抑制低剂量甲基苯丙胺引起的大鼠CPP效应的重建.结论:l-THP在大鼠甲基苯丙胺精神依赖CPP实验中能够影响模型的表达、消退、重建过程.而l-THP在CPP实验中却没有显示出依赖性潜力.
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与阿片制剂成瘾相关的中枢神经递质及其机制研究进展
近年来国际医学界已把吸毒界定为"以阿片类药物的滥用、成瘾、依赖为特征的反复发作性慢性脑病".因此药物成瘾是严重的社会、医学问题.有关成瘾机制多集中于对伏隔核(NAC)的研究,NAC是一个与动机、奖赏、摄食、药物成瘾等功能相关的脑区,据解剖和生物化学方面的差异可代表性的分为两大部分即核和壳.有确凿的证据证明:NAC的壳和核有着不同的功能.目前一致认为中脑边缘DA系统在调节滥用药物(包括可卡因、尼古丁、安非他明、鸦片制剂等)正性强化发挥关键作用,其解剖学通路起自中脑的VTA,投向包括NAC、杏仁核、中部基底前脑(mPFC)、终纹床核等一些脑区.近期的研究更加支持阿片制剂通过VTA和NAC的GABA能细胞发挥其成瘾效能.当前广泛采用4种行为学方法自我给药(SA)、自身脑刺激(ICSS)、条件位置偏爱(CPP)、条件性位置厌恶(CPA)直接或间接地测定药物强化相关的神经化学机制及相关解剖学脑区.仅在此集中回顾阿片制剂强化相关的神经化学物质DA及非DA物质的作用,包括阿片类物质、GABA、与鸦片强化相关的5-羟色胺、谷氨酸盐、乙酰胆碱和NAC的GABA能神经元功能.
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前边缘皮质生长激素抑制素神经元在吗啡引起的行为学改变中的作用
药物成瘾是一种由药物滥用所引起的慢性、复发性的精神疾病,主要特征是不计后果的强迫性用药.药物成瘾涉及多个脑区的神经可塑性改变.前边缘皮质(prelimbic cortex,PrL)是背内侧前额叶皮质的主要区域,有大量的锥体神经元,其兴奋性神经投射可以促进可卡因觅药行为.PrL还存在少量GABA能中间神经元,对PrL的兴奋性神经元功能、信息整合和传递起到重要的调控作用,而这一部分神经元在药物成瘾过程中的作用并不清楚.小清蛋白(parvalbumin,PV)和生长激素抑制素(somatostatin,SST)神经元是前额叶皮质中分布广泛的两类主要的抑制性GABA能中间神经元.本研究利用PV-Cre和SST-Cre的转基因小鼠,结合化学遗传学的方法探究PrL中间神经元在吗啡引起的行为学改变中的作用.结果显示,特异性抑制PrL脑区SST神经元可以显著增加小鼠的焦虑水平,但不影响小鼠的运动能力;抑制PrL脑区SST神经元降低小鼠吗啡诱导的活动性增强及条件位置偏爱;而抑制PrL脑区PV神经元则对小鼠的运动能力、焦虑水平及吗啡引起的行为学改变均没有显著影响.本研究通过对PrL脑区PV及SST中间神经元在吗啡诱导的行为学改变中作用的研究,为成瘾药物作用的细胞及神经基础提供了依据.
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Clobenpropit及组氨酸对大鼠吗啡诱导的条件位置偏爱重燃的作用
目的:研究组胺H3受体拮抗剂clobenpropit及组胺前体物质组氨酸对小剂量吗啡诱导的大鼠条件位置偏爱重燃的作用.方法:在吗啡诱导的大鼠条件位置偏爱表达、消退后,利用小剂量吗啡诱发复吸,然后评价clobenpropit及组氨酸对其的作用.clobenpropit干预组:在测试前15 min,大鼠腹腔内注射吗啡(1 mg/kg),合并脑室给予clobenpropit(2、5、10 μg/rat);组氨酸干预组:在给予吗啡(1 mg/kg)前1 h,腹腔内注射组氨酸(100、200、500 mg/kg);分别观察15 min测试时间大鼠各个阶段,各个处理组在伴药盒停留的时间.结果:脑室内注射clobenpropit(5、10 μg/rat)和腹腔内注射组氨酸(100、200、500 mg/kg),都可以显著抑制小剂量吗啡诱发的大鼠条件位置偏爱的重燃.结论:clobenpropit及组氨酸均能剂量依赖性地抑制小剂量吗啡诱导的大鼠条件位置偏爱的重燃,在一定程度上抑制吗啡的复吸过程,表明内源性组胺具有抑制吗啡复吸的作用.
关键词： 吗啡 条件位置偏爱 clobenpropit/药理学 组氨酸/药理学 重燃 -
甲基苯丙胺依赖对大鼠纹状体RGS4和mGluR5受体信号传导的影响
目的:研究甲基苯丙胺依赖不同时间对大鼠脑纹状体内G蛋白信号调节因子4(regulator of G-protein signaling 4,RGS4)和代谢型谷氨酸受体5(metabotropic receptor 5,mGluR5)信号传导的影响.方法:建立大鼠甲基苯丙胺(methamphetamine,METH)依赖一周组(1W)、两周组(2W)模型,Western blot技术检测大鼠纹状体内RGS4、mGluR5、G蛋白α亚单位蛋白Q(Gαq)、磷脂酶C-β1(phospholipase C-β,PLCβ1)表达水平.结果:METH依赖1W、2W组伴药箱停留时间比生理盐水对照组增加,提示METH依赖模型建成.模型组大鼠纹状体内RGS4蛋白表达水平较生理盐水对照组相比明显下调,而模型组mGluR5蛋白和Gαq蛋白、PLCβ1蛋白表达与生理盐水对照组比较均有不同程度上调,且2W组较1W组改变更明显.结论:METH给药可能导致大鼠脑纹状体内RGS4表达下调,mGluR5表达上调,还可使与mGluR5偶联的Gαq、PLCβ1表达均出现不同程度上调.且METH依赖时间越长,RGS4、mGluR5、Gαq、PLCβ1的表达水平变化越显著.
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M5受体参与激活吗啡奖赏大鼠腹侧背盖区nNOS表达
目的研究不同毒蕈碱受体亚型(M4,M5)对吗啡诱发大鼠奖赏效应的影响,同时观察腹侧背盖区(ventral tegmental area, VTA)神经型一氧化氮合酶(nNOS)表达的变化.方法实验通过侧脑室置管给药,采用反义寡核苷酸技术,免疫组织化学技术和条件位置偏爱(conditioned place preference, CPP)程序,研究M4,M5反义寡脱氧核苷酸干预下吗啡的奖赏行为,以及VTA内nNOS表达情况.结果吗啡(5 mg·kg-1)皮下注射,可以建立起稳定的大鼠对伴吗啡环境的位置偏爱,同时VTA内nNOS阳性神经元表达也显著增加.而M5反义寡脱氧核苷酸(M5-AS)(2 nmol)侧脑室预注射则可阻断吗啡诱发CPP的形成,同时也显著减少VTA内nNOS表达.在吗啡诱发的CPP形成后,侧脑室单次注射M5-AS(2 nmol)也可以逆转大鼠对伴吗啡环境的位置偏爱,同时也明显减少VTA内nNOS表达.相比之下,M4反义寡脱氧核苷酸(M4-AS)对吗啡诱发的CPP形成以及VTA内nNOS表达的影响均不明显.实验前后所有大鼠的运动活性并未发生显著改变,可排除运动活性对实验的影响.结论 M5毒蕈碱受体在大鼠吗啡诱发的条件位置偏爱形成过程中起重要作用;M5毒蕈碱受体可能是通过激活大鼠VTA内nNOS的表达,参与调控吗啡奖赏效应的.
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电针对海洛因心理依赖小鼠Ca2+浓度的影响
目的:观察电针刺激对海洛因心理依赖小鼠Ca2+浓度的影响.方法:用海洛因皮下注射联合条件位置偏爱(CPP)复制海洛因心理依赖模型,以电针刺激海洛因心理依赖小鼠模型"内关"、"三阴交",并点刺"四神聪",并用流式细胞技术检测其海马Ca2+浓度.结果:模型组平均荧光强度显著升高;针刺可显著降低海洛因心理依赖模型动物平均荧光强度;西药纳曲酮降低海洛因心理依赖模型动物平均荧光强度效果不显著;针刺对正常小鼠平均荧光强度改变不显著.结论:电针对CPP刺激诱发复吸具有抑制作用,电针对于淡化或消除海洛因心理依赖的记忆痕迹可能是通过降低Ca2+浓度而实现.
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孕晚期吗啡暴露子代鼠NR2 B亚基与吗啡条件位置偏爱易感性的关系
目的：探讨吗啡条件性位置偏爱（ CPP）不同易感性的孕晚期吗啡暴露的子代鼠脑伏隔核（ NAc）中N－甲基－D－天冬氨酸（ NMDA）受体NR2B亚基水平。方法：孕晚期SD大鼠48只随机分为吗啡组（ M组）和生理盐水组（ N组）。首剂量为2 mg／kg，逐日递增1 mg／kg，至6 mg／kg维持，头颈部皮下注射。 N组孕鼠以同样的方式注射等体积的生理盐水。取上述2组体质量接近的子代鼠各70只，正常喂养至8周龄。每组子代鼠采用恒量法（3 mg／kg）连续颈背部皮下注射吗啡7 d 进行条件位置偏爱（ CPP）训练，训练结束24 h后对CPP效应进行检测。根据吗啡条件化训练后CPP分值（ CPP测试值－CPP基数值）的大小将M组子代鼠分为高偏爱组（n＝10）、中偏爱组（n＝30）、低偏爱组（n＝10）。采用Western blotting 方法检测高，低偏爱组和N组子代鼠伏隔核区NR2B亚基的表达。结果：①预测试时，各组的CPP基数值的差异无统计学意义（P＞0．05）；吗啡高偏爱组CPP分值（552．6±132．6）s明显高于低偏爱组（223．4±55．14）s和N组子代鼠（42．93±31．78）s（P＜0．01），差异有统计学意义。②Western blotting结果示高偏爱组子代鼠的NR2B亚基表达量（0．81±0．01）均明显高于低偏爱组（0．64±0．01）和N组子代鼠（0．55±0．01，P＜0．01）。结论：产前吗啡暴露的子代鼠吗啡CPP易感性高可能与伏隔核的NR2B亚基水平上调有关。
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孕晚期吗啡暴露对子代鼠吗啡成瘾易感性的影响
目的：检测孕晚期吗啡暴露对子代鼠吗啡成瘾易感性的影响。方法：孕晚期SD大鼠48只随机分为吗啡组（ M组）和生理盐水组（ N组）。 M组孕鼠在孕12～18 d每天9∶00和17∶00两次皮下注射吗啡，首剂量为2 mg／kg，逐日递增1 mg／kg，至6 mg／kg维持。 N组孕鼠以同样的方式注射等体积的生理盐水。取上述2组体质量接近的子代鼠50只正常喂养至8周龄。每组子代鼠先采用恒量法（吗啡剂量3 mg／kg）连续颈背部皮下注射吗啡7 d进行条件位置偏爱（CPP ）训练，训练结束24 h后对CPP效应进行检测；之后继续采用递增法（吗啡首剂量4 mg／kg，逐日递增1 mg／kg）以同样方式注射吗啡连续训练7 d至10 mg／kg，训练结束24 h后对子代鼠再次进行CPP效应的检测。结果：①预测试时，两组的CPP基数值[分别为（99．2±22．96） s和（86．1±20．27）s]差异无统计学意义（P＞0．05）；经过7 d的吗啡恒量训练后，M组子代鼠CPP测试值（284．6±58．93）s相对于基线值（99．2±22．96）s明显增高（P＜0．01），而N组子代鼠CPP测试值（116．6±36．95）s与基线值（86．1±20．27）s相比无明显差异（P＞0．05）；继续经过7 d的吗啡递增量训练后，M组和N组子代鼠CPP测试值[分别为（432．3±74．21） s，（221．0±58．26）s]与CPP基线值[分别为（99．2±22．96）s，（86．1±20．27）s]相比均出现差异（P＜0．01，P＜0．01），M组子代鼠CPP测试值（432．3±74．21）s与N组（221．0±58．26）s相比差异有统计学意义（P＜0．05）；且M组子代鼠CPP分值（331．4±69．47）s明显高于N组子代鼠CPP分值（124．8±58．68）s（P＜0．05）。结论：孕晚期吗啡暴露可增加子代鼠对吗啡的成瘾易感性。
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不同给药剂量方案对吗啡所致条件位置偏爱的影响
条件性位置偏爱(conditioned place preference,CPP)实验是药物精神依赖性研究中常用的一种动物模型.就给药剂量方案而言,在以往的研究资料中,恒定剂量给药与每日递增剂量给药两种方式都曾被普遍应用.设计方案的不同影响了同类实验结论的一致性比较和交流,同时科学实验的操作标准化程度也不够高.相比较而言,恒定剂量给药的方法简便易行有助于提高实验效率.那么,不同的给药剂量方案是否会对CPP的形成及表达产生影响呢?本研究以吗啡所致大鼠CPP的形成及表达为例,就这一问题进行了实验研究.
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延胡索对吗啡依赖大鼠条件性位置偏爱效应的影响
目的 观察延胡索水提液对吗啡诱导条件性位置偏爱(CPP)效应的影响.方法 吗啡剂量递增颈背部皮下注射10 d,建立大鼠吗啡CPP模型.在CPP测试后当日,不同剂量延胡索水提液灌胃治疗.结果 在延胡索1 mg·kg-1,2 mg·kg-1组,大鼠吗啡CPP效应6 d消退,相比模型组(21 d消退)提前2/3时程.结论 延胡索单味中药能加速吗啡诱导CPP效应的消退,提示该药具有治疗吗啡精神依赖的潜能.
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不同剂量吗啡对C57小鼠成瘾行为学的影响
目的 观察不同剂量的片剂吗啡作用后,C57小鼠的成瘾行为学变化,为吗啡成瘾的研究提供参考.方法 用3月龄雄性C57小鼠分别腹腔注射0、5、10、15、20 mg/kg的吗啡,观察指标为竖尾反应持续的时间以及条件位置偏爱(Conditioned place preference)中的白箱时间差.结果 与对照组(0 mg/kg)相比,吗啡10、15和20 mg/kg组小鼠出现竖尾反应的时间有显著差异(P＜0.05);在条件位置偏爱实验中,与对照组相比,吗啡10、15、20 mg/kg剂量组逆转了小鼠偏爱呆在黑箱的天然倾向,白箱时间差有统计学差异.其中,吗啡10 mg/kg组P=0.049,而15 mg/kg组和20 mg/kg组(P＜0.001).结论 在吗啡剂量为10、15、20 mg/kg时,白箱偏爱明显形成,15 mg/kg是较为敏感而稳定的吗啡成瘾小鼠模型剂量,可作为敏感而又稳定的较低剂量.
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不同剂量可卡因对昆明小鼠成瘾行为学的影响
目的 研究昆明小鼠对不同剂量可卡因的敏感度,为昆明小鼠在神经科学领域的应用,特别是可卡因成瘾的研究提供参考.方法 同龄(8～12周)的雄性昆明小鼠,分别腹腔注射10 mg/kg、20mg/kg的可卡因,条件位置偏爱实验(Conditioned place preference)和行为敏化实验(Behavior sensitization)检测小鼠行为学变化,观察昆明小鼠在不同剂量可卡因刺激下的行为学变化,以此来确定昆明小鼠对不同剂量可卡因的敏感度.结果 在条件位置偏爱实验中,可卡因20 mg/kg剂量组(N=11)与可卡因10mg/kg剂量组(N=12)相比,第9天与第2天在白箱中的时间差score(post-pre)有统计学差异(P＜0.05)；而在行为敏化实验中,可卡因20mg/kg组(N=8)与可卡因10mg/kg组(N=12)相比,自主活动次数明显增加,有统计学差异(P＜0.05)；在第16天给予一针与之前同剂量的可卡因,可卡因20mg/kg组与可卡因10mg/kg组相比,自主活动次数有统计学差异(P＜0.05).结论 昆明小鼠在20mg/kg可卡因的刺激下,能产生更为明显的条件位置偏爱以及更加强烈的行为敏化反应,是较为理想的可卡因成瘾小鼠模型.
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针刺对海洛因依赖康复期小鼠欣快记忆激发的影响
目的:研究针刺对海洛因欣快记忆激发的抑制作用,为针刺防复吸提供依据.方法:经行为学筛选后的90只雄性昆明种小鼠,随机分为空白组、针空组、模型组、腧穴组、非穴组、纳曲酮组.按剂量逐日递增原则进行海洛因心理依赖造模,针刺"内关"、"三阴交"、"四神聪"穴,每日1次,10次为1疗程.运用计算机条件位置偏爱系统测试进行欣快记忆激发的行为学评价.结果:治疗后模型组条件位置偏爱时间较空白组和针空组延长,显著性差异,P＜0.01;腧穴组、纳曲酮组条件位置偏爱时间较模型组缩短,有显著性差异,P＜0.01;非穴组和模型组比较,无统计学差异,P＞0.05.结论:针刺能缩短小鼠海洛因心理依赖形成后在条件位置偏爱装置中偏爱箱中的停留时间,对环境激发海洛因欣快记忆具有一定抑制作用.
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脱氧核酶对Period1基因表达及其对小鼠吗啡精神依赖的影响
目的 研究脱氧核酶在细胞水平调节Period1基因表达的作用及注射脱氧核酶对小鼠吗啡精神依赖的影响.方法 设计合成Period1 mRNA的10-23型脱氧核酶(DRz164),将pcDNA3-Per1和DRz164在脂质体介导下转染NIH3T3细胞,通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR),流式细胞术(FCM)检测转染细胞内Period1基因表达水平.脑室注射DRz164,建立小鼠条件位置偏爱模型,观察对吗啡精神依赖的影响.结果 转染DRz164后,RT-PCR半定量检测Period1 mRNA与对照组相比减少42.4%.细胞内PER1蛋白表达减少57.2%.给予DRz164后小鼠未能形成对吗啡的位置偏爱.结论 脱氧核酶DRz164在胞内能够切割Period1 mRNA,抑制Period1基因表达,小鼠脑室注射DRz164可拮抗吗啡所引起的奖赏效应,缓解其对吗啡的精神依赖.
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东莨菪碱消除吗啡所致条件位置偏爱的形成
目的：研究记忆损害对条件位置偏爱的影响。方法：20只小鼠随机分为2组，一组给予吗啡(9mg/kg,s.c.)，并随机与条件位置偏爱箱的黑箱或白箱搭配20分钟，8小时后给予等量生理盐水，与另一箱体搭配同样时间。另一组在给予吗啡前20分钟给予注射东莨菪碱(2mg/kg,i.p.)，其余同第一组。训练5天，第6天进行位置偏爱检测，以头部位置为准记录小鼠在黑白箱体内停留的时间。结果：吗啡组的小鼠在药物搭配箱体内停留的时间显著长于在另一侧箱体内停留的时间，吗啡加东莨菪碱组的小鼠在两侧箱体内停留的时间无显著差异。结论：东莨菪碱能消除条件位置偏爱的形成。
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阳极损毁海马腹侧下托可减少成瘾大鼠的条件位置偏爱
目的:研究损毁腹侧海马下托(VSUB)是否能够阻止成瘾大鼠的条件位置偏爱. 方法:雌性SD大鼠,经过吗啡强化训练使其形成条件位置偏爱(CPP). CPP形成并稳定之后,将大鼠分成3组:损毁组20只,接受双侧VSUB的直流电损毁;假手术组10只,接受与手术组相同的手术操作,但不通电流;空白对照组10只,不作任何处理. 经过5 d的恢复,3组大鼠再次测定CPP 时间,确定其药物渴求的程度. 结果:行为学测试结束后,将样本灌注切片进行组织学评定,损毁组脑片组织缺损位置局限于VSUB区域. 损毁组大鼠伴药箱停留时间明显减少[(93.1±26.0) s],相对于假手术组[(10.1±4.5) s]和空白对照组[(5.1±4.1) s]的大鼠在伴药侧停留的时间减少量有显著性差异(P<0.05).结论:VSUB在大鼠对药物的渴求中起着非常重要的作用,损毁该部位可以阻止成瘾大鼠的条件位置偏爱.
