首页 > 文献资料
-
人参SQE基因干扰载体的构建及转化
目的 探讨SQE基因对人参皂苷合成的影响.方法 根据SQE基因保守区序列,分别设计合成其正反义片段引物行RT PCR扩增,扩增产物分别与pMD 18-T质粒连接后转化Ecoli DH5a,获得的pMD18-TSQE-S、pMD 18-TSQE-A重组质粒经双酶切后,将正反义片段与质粒pMHZ 112反向连接,转化E.coli DH5a,构建SQE基因RNAj双元表达载体pMHZ112-SQE.电击法将鉴定正确的重组质粒pMHZ112-SQE转化农杆菌GV3101感受态细胞,再利用农杆菌介导法转化人参愈伤组织,提取抗性人参愈伤组织细胞基因组DNA,进行PCR检测并计算抗性愈伤转化率;同时提取人参皂苷,采用HPLC方法检测抗性人参愈伤组织的皂苷含量.结果 结果显示总RNA较完整无降解,质量较好;RTPCR扩增产物正反义片段大小与预期一致;重组质粒pMD18-TSQE-S、pMD18-TSQE-A和pMHZ112-SQE分别经双酶切进行测序鉴定,结果表明目的 基因已插入重组质粒且连接方向正确.人参愈伤组织细胞基因组DNA的PCR检测结果显示1个菌落经2对引物扩增结果均呈阳性,证明构建的pMHZ112-SQE重组质粒已成功整合入植物基因组中,其抗性愈伤转化率为1%.转化pMHZ112-SQE重组质粒后,人参抗性愈伤组织中单体皂苷Rgl、Re、Rc含量明显下降,Rbl略有升高,实验组与对照组(转化空质粒)间Rgl、Re、Rbl、Rc的含量差异显著(均P < 0.05);而2组均未检测出Rb2和Rd.结论 成功构建了SQE基因RNAi双元表达载体,通过转化人参愈伤组织抑制SQE基因的表达,可以调控人参皂苷含量发生相应的改变.
-
γ-聚谷氨酸天冬氨酸-顺铂复合物的制备及其生物活性
目的 研究一种低毒性的顺铂复合物:γ-聚谷氨酸天冬氨酸-顺铂复合物(γ-PGAasp-CDDP),考察其体外性质和体内毒性,并探讨可能的作用机制.方法 γ-聚谷氨酸与天冬氨酸发生酰胺化反应制备γ-聚谷氨酸.天冬氨酸复合物,核磁共振对其结构进行表征;化学法制备γ-聚谷氨酸天冬氨酸-顺铂复合物;常规方法检测该复合物稳定性;透析法研究药物缓释效果;MTT法检测复合物体外抗肿瘤细胞活性;流式细胞仪检测其对细胞凋亡的作用;小鼠体内实验检测其体内毒性.结果 成功制备γ-聚谷氨酸天冬氨酸-顺铂复合物,顺铂的有效结合率达30%该复合物在常温中性环境下稳定;30 h时顺铂的累计释放率达到30%;细胞实验表明复合物对Bcap-37(人乳腺癌细胞)和BEL7404(人肝癌细胞)具有显著的杀伤作用,小鼠体内实验表明该复合物的毒性比游离顺铂低.结论 γ-聚谷氨酸天冬氨酸-顺铂复合物仍然保留了游离顺铂的生物活性,在杀伤肿瘤细胞、引起细胞凋亡的同时,大大降低了体内毒副作用,其作用机制可能与实体瘤组织的高通透性、滞留效应(EPR效应)以及药物缓释作用有关,因此该复合物具有潜在的临床应用价值.
关键词： 药物载体 药物释放系统 顺铂 γ-聚谷氨酸-天冬氨酸 -
丝素蛋白作为药物缓释载体的研究进展
药物缓释体系有利于提高药物疗效、降低毒副作用,可减轻病人多次用药的痛苦,对于提高临床用药水平具有重大意义[1],是近年来国际范围内研究的热门的领域之一.在药物缓释体系中,除药物本身外,药物载体也扮演着重要角色,合成高分子载体常常生物相容性不好,有时还含有痕量引发剂等毒性杂质,例如在聚乳酸的一般生产方法中使用了有机锡催化剂,会产生细胞毒性[2].
-
RNA干扰抑制EphA2癌基因在结肠腺癌HCT-8细胞系中的表达
目的利用RNA干扰(RNAi)技术抑制EphA2癌基因在结肠腺癌HCT-8细胞系中的表达,以期为肿瘤的基因治疗提供新的思路和手段.方法构建逆转录病毒表达载体pSIREN-EphA2,应用逆转录病毒载体介导的RNAi技术抑制EphA2癌基因在结肠腺癌细胞HCT-8中的表达,同时利用Western免疫印迹和免疫组织化学SP法分别检测转染后HCT-8细胞中EphA2蛋白的表达水平.结果从EphA2 mRNA序列中筛选出有效的siRNA序列,并设计了互补双链寡核苷酸发夹结构,成功构建了EphA2 siRNA的逆转录病毒表达载体,重组逆转录病毒载体pSIREN-EphA2 经酶切鉴定结果正确;测序分析证实插入的EphA2 siRNA的方向及序列正确.Western免疫印迹和免疫组织化学方法分析,与对照空载体及未转染细胞相比,重组pSIREN-EphA2转染的HCT-8细胞中EphA2蛋白表达水平明显降低,差异具有统计学意义 (P<0.001).结论通过逆转录病毒载体介导的RNAi能够抑制HCT-8细胞中EphA2的蛋白表达,为以EphA2为靶向的结直肠癌的基因治疗提供了新的思路和手段.
-
碳纳米材料在癌症诊疗中的应用进展
癌症的早期诊断与治疗一直是关注的焦点.纳米技术的快速发展为癌症早期诊断与高效无毒的药物治疗带来新的希望.通过构建稳定、高效、低毒的药物载体,并联合抗癌药物与分子探针,可改善药物在体内的分布代谢,达到靶向运输、活体示踪的效果.碳纳米材料因其独特结构和优异性质成为药物载体研究的热点.本文就不同种类碳纳米材料在癌症诊疗中的应用进展进行综述.
-
壳聚糖在医药领域的应用研究进展
简单概述了壳聚糖以及其结构组成，主要介绍壳聚糖在医药领域中的药理作用以及在药用辅料等方面的研究、应用及进展，为今后壳聚糖的研发提供了参考。
-
磁性氧化铁纳米颗粒在神经系统中的应用
随着人口老龄化,神经系统疾病越来越成为人类健康的隐患,目前的治疗手段疗效较差,病情反复率高.磁性纳米材料具有良好的磁导向性、生物相容性和生物降解性,在生物医学领域得到了广泛的作用.本文简单介绍了磁性氧化铁纳米颗粒的新制备技术,重点综述其在神经系统中的应用,并对其未来的前景提出展望.
-
外加磁场对半乳糖化白蛋白磁性阿霉素纳米粒在大鼠体内分布影响的研究
目的观察半乳糖化白蛋白磁性阿霉素纳米粒(ADR-GHMN)在正常肝脏中的靶向性,并观察ADR-GHMN在全身各脏器的分布特征及外加磁场对其分布的影响.方法大鼠正中开腹,肝动脉插管并固定,肝动脉注射125I-ADR-GHMN(相当于阿霉素0.5 mg/kg),左外叶加磁场,磁场应用30 min,移去磁场后,动物立即处死;对照组:肝动脉注射ADR-GHMN,左外叶不加磁场,30min后,移去磁场后,动物立即处死,立即取靶区肝、非靶区肝、肾、心、肺、小肠、脾及周围血作γ计数.肝组织作病理切片.结果注入的纳米粒75～85%分布于肝脏,其它脏器极少.病理切片显示磁区小动脉见大量纳米粒存在,对照组及非磁区肝中纳米粒很少见.结论ADR-GHMN在正常肝组织中有明显的磁靶向性;在磁场作用下,ADR-GHMN主要分布于肝脏,其它脏器含量很少;试验组肾、心、肺、小肠、脾及外周血于对照组的放射活性比较明显降低,表明磁性物质的存在使这些脏器的相对药物暴露明显减少.
关键词： 半乳糖化白蛋白磁性阿霉素纳米粒 药物载体 靶向治疗 肝脏 -
半乳糖化白蛋白磁性阿霉素纳米粒在正常大鼠体内的分布特征
目的观察半乳糖化白蛋白磁性阿霉素纳米粒(ADR-GHMN)在正常肝脏中的靶向性,并观察ADR-GHMN在全身各脏器的分布特征.方法使用放射示踪技术,用125I标记纳米粒.肝动脉注射,分别于注药后5、15、30、60、120min处死,立即取肝、肾、心、肺、小肠、脾、及周围血作γ计数.结果半乳糖化白蛋白磁性阿霉素纳米粒在注射后5 min后高,为15054.4 CPM/g,各时相前者的肝摄取率均为同时刻后者的2,3倍.两药在肝、肾、心、肺、小肠、脾、及周围血的分布有高度显著性(P＜0.05).结论半乳糖化白蛋白磁性阿霉素纳米粒在正常肝组织中有明显的主动靶向性,半乳糖化白蛋白磁性阿霉素纳米粒主要分布肝脏,其它的脏器含量少.
关键词： 半乳糖化白蛋白磁性阿霉素纳米粒 药物载体 靶向治疗 肝脏 -
半乳糖化白蛋白磁性阿霉素纳米粒制备工艺的优化
目的制备具有稳定磁性、能够携带化疗药物的半乳糖化白蛋白磁性纳米粒,并对纳米粒的磁性、药物含量、包封率、粒径大小等物理性质进行检测.方法运用正交试验设计方法设计实验,以粒径大小、纳米药物的载药量和包封率3个指标考察固化温度、固化时间、搅拌速度及糖化比率四个因素的四个水平,从中选出优化组合,并以优化组合重复实验,验证试验条件的稳定性以及实验的可重复性.先行制备半乳糖化白蛋白,将阿霉素、半乳糖化白蛋白、磁粉按一定比例混合,通过在精制棉仔油中超声乳化、加热变性固化、乙醚洗涤等工艺制作出载药纳米粒,用乙醇提取法提取纳米粒中的阿霉素,并用紫外分光光度计测定含量,激光粒度分析仪分析粒径大小.结果运用优化条件制备的纳米粒,其平均粒径为(197±32)nm,载药量(48.79±4.47)ug/mg,包封率(94.34±3.32)%.结论上述优化条件稳定,试验的可重复性高.
-
表达金黄色葡萄球菌肠毒素A基因的条件增殖型溶瘤腺病毒的构建
目的 构建表达超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素A(SEA)基因的条件增殖型溶瘤腺病毒pPE3-SEA.方法 将已构建好的携带SEA基因的非增殖溶瘤腺病毒载体质粒pDC318-SEA经SpeⅠ和SalⅠ双酶切后,将酶切下的超抗原SEA基因片段连接到同样经SpeⅠ和SalⅠ双酶切后的增殖型溶瘤腺病毒穿梭质粒pENTR12中,将鉴定正确的携带SEA基因增殖溶瘤腺病毒载体命名为pENTR12-SEA.增殖溶瘤腺病毒载体pENTR12-SEA与病毒骨架质粒pPE3-ccdB重组,通过Lipofectamine 2000共转染HEK293细胞,经同源重组产生重组腺病毒pPE3-SEA.结果 应用PCR验证、双酶切分析、序列测定表明,成功构建了携带SEA基因增殖型溶瘤腺病毒载体pENTR12-SEA,通过同源重组成功获得携带超抗原SEA基因片段的pPE3-SEA增殖型溶瘤腺病毒,且病毒滴度为2.5×1010 pfu/ml. 结论成功构建了表达超抗原SEA基因的条件增殖型溶瘤腺病毒pPE3-SEA,为以后进一步研究该病毒对肿瘤靶向治疗的作用提供了实验基础.
-
透明质酸载体靶向治疗消化系肿瘤的研究进展
透明质酸(hyaluronic acid,HA)是一种生物相容性好、可生物降解的天然线性多糖,近年来发现肿瘤细胞表面存在HA特异性受体.因此,利用HA及其衍生物的可降解性及细胞表面HA受体专一性等特性,将HA及其衍生物制成药物载体可达到药物缓释和靶向运输的目的.目前HA靶向治疗主要集中在前列腺、肺和头颈部肿瘤等方面,消化系肿瘤仅有结肠癌的报道,其肿瘤靶向性具体机制的诸多细节尚未搞清.本文主要评述了HA靶向载体的设计、性质及其在靶向治疗消化系肿瘤方面的进展,还对该体系的前景进行了预测.
-
重组高密度脂蛋白:治疗动脉粥样硬化及其他疾病的新靶点
心血管疾病是导致发达国家人群死亡的主要疾病.高密度脂蛋白(HDL)颗粒对心脏有保护作用,低水平的HDL与心血管疾病相关,故提高HDL水平可能会带来积极作用.采用重组高密度脂蛋白(rHDL)治疗可使粥样斑块消退,重塑斑块.据报告,rHDL可以改善2型糖尿病患者葡萄糖摄取,提高其胰岛素水平--其广泛应用前景令人鼓舞.rHDL强大的抗炎作用也被用于减少如类风湿性关节炎等疾病的炎症反应.此外,由于HDL是一种惰性颗粒,也可用作药物载体.本文讨论迄今为止关于rHDL治疗的相关资料,并展望其未来的应用前景.
-
无载体西罗莫司洗脱支架在小型猪冠状动脉模型中预防冠状动脉支架再狭窄的实验研究
目的 评价新型无载体西罗莫司药物洗脱支架(polymer-free sirolimus-eluting stent,PFSES)在小型猪冠状动脉模型中抑制新生内膜增殖的有效性和安全性.方法 金属裸支架(bare mental stent,BMS,n=13)、无载体纳米微孔裸支架(polymer-free bare mental stent,PFBMS,n=13)、聚合物载体西罗莫司洗脱支架(polymeribased sirolimus-eluting stent,PSES,n=13)以及PFSES(n=13)被分别随机置入26头小型猪的前降支(n=26)和回旋支(n=26).支架置入28天和90天后,复查冠状动脉造影评价管腔丢失.90天后处死部分动物(n=12)行塑料包埋硬组织切片染色组织形态学分析.结果 置入28天(n=24)及90天(n=12),PFSES与BMS相比,显著降低管腔丢失(0.69±0.49 mm比1.27±0.36 mm,P=0.041;0.77±0.44 mm比1.33±0.29 mm,P＜0.01).在90天组织形态学分析中,损伤积分相似的情况下,PFSES较BMS明显减少新生内膜面积(2.412±1.149 mm2比4.475±1.345 mm2,P＜0.05).PFSES炎症反应与BMS相似,且明显低于PSES.结论 PFSES在置入小型猪冠状动脉28及90天后,可以安全有效地抑制内膜增殖和预防支架内再狭窄.
-
可降解聚乳酸涂层西罗莫司洗脱支架在小型猪冠状动脉模型中的实验研究
目的 评价新型L605钴铬合金平台可降解聚乳酸共聚物载体西罗英司药物洗脱支架(bioabsorbable polymeric sirolimus-eluting stent, BPSES)在小型猪冠状动脉抑制新生内膜增殖的有效性和安全性.方法 金属裸支架(bare mental stent,BMS)18枚、单纯可降解聚乳酸共聚物涂层支架(bioabsorbable polymer-only stent,BPOS)18枚以及BPSES 18枚被分别随机置入18头小型猪的前降支(18枚)、回旋支(18枚)以及右冠状动脉(18枚).置入28天和90天,复查冠状动脉造影评价管腔丢失.置入7天、28天以及90天处死部分动物行塑料包埋硬组织切片染色组织形态学分析.结果 置入28天及90天,BPSES与BMS相比,显著降低管腔丢失(28天0.54±0.45 mm比1.11±0.45mm,P=0.048;90天0.42±0.34 mm比0.96±0.41 mm,P=0.024).在损伤积分相似的情况下,置入28天时BPSES较BMS新生内膜而积明显减少(0.90±0.40 mm2比1.88±0.71mm2,P=0.015),而在90天时亦可见此趋势.7天、28天和90天BPSES和BPOS炎症反应及内皮化程度与BMS相似.结论 BIASES在置入小型猪冠状动脉28天后,可以安全有效地抑制新生内膜增殖,90天时亦可见此趋势.
-
脂质体作为药物载体增强亚硒酸钠消退动脉粥样硬化
目的研究脂质体作为心血管药物载体包裹亚硒酸钠(Na2SeO3)治疗动脉粥样硬化(AS).方法32只雄性新西兰大耳白兔随机分成AS对照组,硒(Se)治疗组和含硒脂质体(Se-LPS)治疗组;超声法制备出特定含硒脂质体(Se-LPS).通过测量不同时段血浆Se含量的变化,了解脂质体的稳定性;通过测定不同组织谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活性,推测脂质体的靶向性;病理学方法检查各对比组主动脉粥样斑块的面积和厚度.结果Se-LPS治疗组,注入药液后1d,其血浆Se含量仍处动态(与用药4d后的相比,P＜0.05);其血液和心脏GSH-PX活性上升明显高于Se治疗组(P＜0.05),而其肾GSH-PX活性上升低于Se治疗组(P＜0.05).结论直径0.5～0.7μm的刚性脂质体具有一定靶向性,改变了Se的分布去向,适合作心血管药物的载体,包封Se后,消退AS斑块更明显.
-
脂质体前列腺素E1对急性肺损伤犬血流动力学和氧代谢的影响
脂质体前列腺素E1(lip-PGE1)用含肺磷脂的脂质体作为药物载体,能够增加PGE1扩张血管、抑制血小板聚集和改善炎症的作用[1].实验表明,无脂质体PGE1可以提高急性呼吸窘迫综合征(ARDS)患者的心输出量,但不能改善氧合[2-3].但lip-PGE1是否改善急性肺损伤时心输出量和氧合指标的报道尚少,我们的实验将观察lip-PGE1对油酸型急性肺损伤(OA-ALI)犬血流动力学和氧代谢的影响.
-
药物涂层球囊在冠状动脉分叉病变边支介入治疗中的临床应用
目的 探讨药物涂层球囊应用于冠状动脉分叉病变边支血管保护的可行性分析.方法 选择2015年3月～2016年3月在解放军总医院经冠状动脉造影证实冠状动脉分叉病变患者20例,Medina分型1,1,1;1,0,1;0,1,1,分别为11、5、4例.行PCI,于主支血管置入药物洗脱支架,边支血管用药物涂层球囊主动保护技术处理,术后即刻冠状动脉造影检查.术后6个月临床随访,统计患者主要心脑血管不良事件.结果 20例患者PCI成功率为100％. 20例患者主支置入药物洗脱支架,边支血管用药物涂层球囊主动保护技术处理,主支血管小管腔直径由术前(1.19±0.46)mm增加至术后(3.20±0.53)mm(P=0.001).分支血管由术前(1.36±0.66)mm增加至术后(1.78±0.61)mm(P=0.048).术后6个月患者无主要心脑血管不良事件发生.结论 药物涂层球囊主动保护技术应用于冠状动脉分叉病变边支血管保护安全、有效.
-
靶向治疗大肠癌的纳米药物及其载体进展
大肠癌是目前世界发病率第四位的恶性肿瘤,发病初期临床表现不明显,因此早期较难发现,诊断出时大多属于进展期.进展期的治疗多用化疗、介入治疗、放疗等方法,其中化疗在杀伤肿瘤细胞的同时,对正常机体细胞也有杀伤作用.近年来,各类新兴纳米靶向递送系统不断发展,由于纳米粒子可靶向定位于肿瘤组织,因而其在肠道肿瘤尤其是伴有转移的肠道肿瘤治疗中的应用越来越受到人们的重视.笔者针对目前纳米药物载体材料的类型、研究现状及其在大肠癌研究中的应用做一综述.
-
治疗骨髓炎的局部药物缓释系统分类及相关进展
局部药物缓释系统(drug delivery system,DDS)因其在局部能达到高的药物浓度,同时血药浓度低,不造成严重的毒副作用,为治疗骨髓炎提供了有效的治疗途径.开始应用于临床的局部载药系统是聚甲基丙烯酸甲酯(PMMA)庆大霉素珠,近年来随着载体材料尤其是可吸收材料的研究,越来越多的材料被用作药物载体应用于骨髓炎实验研究和临床治疗.下文中将这些材料作一分类,并阐述其研究现状和相关进展.
