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线粒体分裂蛋白1在大鼠心肌缺血/再灌注损伤中的作用
目的 探讨线粒体分裂蛋白1(Drp1)在大鼠心肌缺血/再灌注损伤(IRI)中的作用.方法 健康雄性Wistar大鼠24只,按随机数字表法分为假手术组、IRI模型组、Drp1抑制剂组,每组8只.采用结扎冠状动脉左前降支制备心肌缺血30 min、再灌注损伤模型;假手术组只穿线,不进行结扎.Drp1抑制剂组于术前15 min静脉注射1.2 mg/kg线粒体分裂抑制剂1(mdivi-1).复灌3 h后,测定各组大鼠血流动力学、血清心肌酶、线粒体膜电位、过氧化氢(H2O2)、活性氧簇(ROS)、ATP生成等.处死大鼠取心脏,测定梗死面积与缺血面积比值(AI/AAR),蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)测定心肌组织Drp1和细胞色素C(Cyt C)表达.结果 与假手术组比较,IRI模型组左室舒张期末压(LVEDP)、心肌肌钙蛋白I(cTnI)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH)、AI/AAR、H2O2、ROS、Drp1蛋白、胞质Cyt C水平明显增加,左室收缩期末压(LVESP)、射血分数(EF)、短轴缩短率(FS)、线粒体膜电位、ATP生成、线粒体Cyt C表达量均明显下降.与IRI模型组比较,Drp1抑制剂组LVEDP明显下降〔mmHg(1 mmHg=0.133 kPa):8.83±1.20比16.48±1.80〕,LVESP、EF、FS明显增加〔LVESP(mmHg):116.80±9.78比87.80±8.82,EF:0.78±0.11比0.58±0.07,FS:(48.6±4.1)％比(32.4±3.2)％〕;心肌酶、H2O2、ROS均明显降低〔cTnI(ng/L):31.9±8.8比49.2±13.7,CK-MB(U/L):4.83±1.30比7.48±2.20,LDH(U/L):1327.80±280.20比1858.80±324.80,H2O2:6.40±1.40比8.90±1.50,ROS:41916.3±6295.3比65182.6±3777.8〕,AI/AAR明显减小(0.38±0.01比0.62±0.01),线粒体膜电位和ATP生成量明显增加〔线粒体膜电位:0.78±0.13比0.38±0.07,ATP(μmol/g):150.8±12.3比103.7±8.4〕,Drp1表达明显降低(0.50±0.02比0.79±0.05),线粒体Cyt C表达明显增加(0.64±0.04比0.21±0.01),胞质Cyt C表达明显降低(0.48±0.03比0.78±0.04),差异均有统计学意义(均P<0.05).结论 大鼠心肌IRI时,线粒体分裂增加,线粒体功能明显下降;Drp1抑制剂能抑制线粒体分裂,改善线粒体功能,进而改善心脏功能.
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HMGB1对大鼠心肌缺血/再灌注损伤后内质网应激的影响
目的 探讨高迁移率族蛋白B1(HMGB1)对心肌缺血/再灌注(I/R)损伤后内质网应激(ERS)的影响.方法 按随机数字表法将40只雄性SD大鼠分为假手术组、I/R模型组、基因沉默(HMGB1-siRNA)组和空载体(Scrambled-siRNA)组,每组10只.结扎冠状动脉(冠状)血流30 min、再灌注2 h建立心肌I/R损伤大鼠模型;假手术组不进行结扎.各组分别于术前24、12、0 h采用水压法经尾静脉相应注射磷酸盐缓冲液(PBS)、HMGB1-siRNA或Scrambled-siRNA混合液各1 mL进行预处理;再灌注2 h后取血并处死大鼠取心肌组织.采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL-6、IL-8)水平;用免疫组化法检测心肌损伤部位HMGB1蛋白表达;用蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)和实时荧光定量反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)分别检测心肌组织HMGB1以及ERS相关因子,如糖调节蛋白78(GRP78)、增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶12(caspase-12)的蛋白和mRNA表达.结果 I/R可使大鼠血清炎性因子水平和HMGB1阳性细胞以及心肌组织GRP78、CHOP、caspase-12的蛋白和mRNA表达较假手术组明显增加.HMGB1-siRNA预处理后可致大鼠血清炎性因子水平较I/R模型组明显降低〔TNF-α(ng/L):783.4±203.4比963.9±214.1,IL-6(ng/L):358.8±94.8比452.3±103.7,IL-8(ng/L):180.5±73.6比347.3±90.3,均P<0.05〕,HMGB1阳性细胞以及心肌组织GRP78、CHOP、caspase-12的蛋白和mRNA表达也明显低于I/R模型组(HMGB1蛋白:1.59±0.26比3.21±0.40,GRP78蛋白:2.59±0.28比4.21±0.42,CHOP蛋白:2.01±0.23比3.21±0.43,caspase-12蛋白:1.48±0.22比3.01±0.48;HMGB1 mRNA:2.35±0.26比4.67±0.45,GRP78 mRNA:6.59±0.26比11.21±0.40,CHOP mRNA:2.01±0.43比5.21±0.63,caspase-12 mRNA:4.48±0.32比8.41±0.52,均P<0.05).Scrambled-siRNA组各指标与I/R模型组比较差异均无统计学意义.结论 HMGB1可能参与了大鼠心肌I/R损伤中ERS的激活,从而加重心肌细胞损伤.
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胰岛素干预和二氮嗪后处理对糖尿病 大鼠缺血/再灌注心肌的影响
目的：探讨二氮嗪后处理对糖尿病大鼠缺血/再灌注（I/R）损伤后心肌的保护作用及可能机制，以及用胰岛素调控血糖在正常范围对其心肌保护作用的影响。方法健康雄性SD大鼠126只，通过一次性腹腔注射链脲佐菌素（STZ）60mg/kg复制糖尿病大鼠。按随机数字表法将糖尿病大鼠分为7组，每组18只。以结扎冠状动脉左前降支30min后恢复血流120min制备心肌I/R模型；假手术（Sham）组只穿线、不结扎。I/R组、二氮嗪后处理组（DZ组）、渥蔓青霉素（WNT）组分别于缺血25min后输入0.1%二甲亚砜（DMSO）、二氮嗪7mg/kg、渥蔓青霉素15μg/kg各2mL；Sham组输入0.1%DMSO；DZ+WNT组于输入二氮嗪前5min输入渥蔓青霉素；胰岛素干预组（RI组）持续泵入胰岛素维持血糖在4～6mmol/L；RI+DZ组在维持血糖的基础上，于缺血25min后输入二氮嗪。各组连续监测血流动力学指标；实验结束后取心肌组织，苏木素-伊红（HE）染色后光镜下观察组织病理学改变，蛋白质免疫印迹试验（WesternBlot）检测磷酸化蛋白激酶B（p-Akt）、磷酸化糖原合成酶激酶-3β（p-GSK-3β）表达。结果与Sham组比较，各实验组心功能显著降低，心肌组织损伤严重。与I/R组比较，各干预组心功能无明显改善，且胰岛素维持正常血糖后心功能及心肌损伤反而进一步加重。以Sham组的表达结果作为基数1，I/R组、DZ组、RI组、RI+DZ组p-Akt表达差异均无统计学意义（灰度值：1.07±0.09、1.03±0.07、1.07±0.07、1.02±0.08比1.00，均P＞0.05）；WNT组、DZ+WNT组p-Akt表达显著低于Sham组和I/R组（灰度值：0.54±0.06、0.51±0.05比1.00和1.07±0.09，均P＜0.05）；I/R组、DZ组、WNT组、DZ+WNT组p-GSK-3β表达与Sham组比较差异均无统计学意义（灰度值：0.97±0.08、1.00±0.11、0.98±0.06、0.97±0.09比1.00，均P＞0.05）；RI组、RI+DZ组p-GSK-3β表达显著高于Sham组和I/R组（灰度值：1.68±0.08、1.70±0.05比1.00和0.97±0.08，均P＜0.05），且RI+DZ组p-GSK-3β表达显著高于DZ组（灰度值：1.70±0.05比1.00±0.11，P＜0.05）。结论二氮嗪后处理对糖尿病大鼠I/R心肌无保护作用，再灌注过程中未见磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B（PI3K/Akt）信号通路的激活，用胰岛素干预血糖维持在正常范围反而会加重糖尿病大鼠I/R心肌损伤的程度。
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二氮嗪后处理对应激性高血糖非糖尿病 大鼠缺血/再灌注心肌的影响
目的：观察二氮嗪后处理对应激性高血糖（SHG）非糖尿病大鼠缺血/再灌注（I/R）心肌的保护作用，并探讨其可能机制。方法按随机数字表法将60只健康雄性SD大鼠分为假手术（Sham）组、I/R组及低、中、高剂量二氮嗪后处理组（LIPO、MIPO、HIPO组），每组12只。采用结扎左冠状动脉前降支（LAD）30min、再灌注120min方法制备SHG心肌I/R损伤大鼠模型，以缺血30min血糖达到10mmol/L为合格模型；Sham组只穿线、不结扎LAD。缺血25min后LIPO、MIPO、HIPO组经股静脉输注4、7、10mg/kg二氮嗪〔溶于0.1%二甲亚砜（DMSO）〕2mL；Sham组、I/R组输注等量DMSO。连续监测血糖、血流动力学指标；再灌注120min测定血清肌酸激酶（CK）和乳酸脱氢酶（LDH）含量，氯化三苯四唑（TTC）染色分析心肌梗死面积，电镜下观察心肌细胞超微结构，蛋白质免疫印迹试验（WesternBlot）检测磷酸化蛋白激酶B（p-Akt）、磷酸化糖原合成酶激酶-3β（p-GSK-3β）表达。结果与Sham组比较，I/R组大鼠血糖明显升高，心率（HR）减慢，心肌收缩/舒张功能减退，心肌酶升高，心肌梗死面积增加，电镜下心肌组织水肿明显，线粒体肿胀，嵴断裂，糖原颗粒消失。再灌注120min后，与I/R组相比，HIPO组血糖进一步升高（mmol/L：16.93±3.22比14.65±3.61，P＜0.05）；LIPO组左心室内压下降大速率（-dp/dtmax）有所改善（mmHg/s：-1055±16比-982±10，P＜0.05），梗死面积明显缩小〔（32.45±3.54）%比（41.30±3.21）%，P＜0.05〕；MIPO组和HIPO组左心室收缩压〔LVSP（mmHg，1mmHg＝0.133kPa）：60±2、74±4比54±4〕、左心室舒张期末压〔LVEDP（mmHg）：24.6±1.5、18.9±1.3比27.9±1.6〕、左心室内压上升大速率〔+dp/dtmax（mmHg/s）：1049±37、1262±75比975±17〕、-dp/dtmax（mmHg/s：-1068±21、-1321±63比-982±10）均有不同程度改善（均P＜0.05），肌酸激酶〔CK（kU/L）：10.7±0.5、11.0±1.3比12.9±1.0〕、乳酸脱氢酶〔LDH（kU/L）：6.8±0.2、7.8±0.1比8.8±0.1〕明显降低（均P＜0.05），梗死面积减小〔（31.24±2.45）%、（30.81±2.68）%比（41.30±3.21）%，均P＜0.05〕，电镜下观察心肌组织损伤有所修复。与Sham组相比，I/R组p-Akt、p-GSK-3β水平明显降低（灰度值：0比0.187±0.018，0.110±0.045比0.200±0.081，均P＜0.05）；与I/R组相比，HIPO组p-Akt以及LIPO、MIPO、HIPO组p-GSK-3β水平均显著升高（灰度值：0.101±0.009比0，0.180±0.057、0.270±0.062、0.280±0.039比0.110±0.045，均P＜0.05）。不同剂量二氮嗪后处理对HR无明显影响。结论 I/R心肌存在SHG时可显著抑制PI3K/Akt-GSK-3β信号通路的活性，中、高剂量二氮嗪对合并SHG的I/R心肌具有保护作用，且中剂量不引起血糖明显增高；二氮嗪可能部分通过PI3K/Akt-GSK-3β信号通路作用于GSK-3β，使其磷酸化并抑制其活性而发挥心肌保护作用。
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生长激素释放肽对全脑缺血/再灌注损伤大鼠海马组织的保护作用及对谷氨酸/γ-氨基丁酸敏感神经元放电活动的影响
目的 探讨生长激素释放肽(Ghrelin)对全脑缺血/再灌注(I/R)大鼠海马神经元的保护效应及其作用机制.方法 按随机数字表法将雄性SD大鼠分为假手术(Sham)组、I/R组、生理盐水(NS)+I/R组和Ghrelin+I/R组,每组42只.夹闭双侧颈内动脉15 min、再灌注60 rmin制备全脑I/R模型;Sham组仅暴露颈动脉,不做任何处理.Ghrelin+I/R组、NS+I/R组于I/R前经侧脑室注射Ghrelin或NS 1μL.实验结束后取部分大鼠脑组织,采用化学比色法测定海马组织丙二醛(MDA)、髓过氧化物酶(MPO)和谷胱甘肽(GSH)水平,测量梗死面积,观察组织病理学改变.其余大鼠采用单细胞外记录神经元放电方法,分别观察海马CA1区谷氨酸(Glu)和γ-氨基丁酸(GABA)敏感神经元(Glu-N、GABA-N)的放电活动.结果 与Sham组比较,I/R模型大鼠海马组织MDA、MPO显著增高,GSH显著降低,海马组织梗死面积明显增加,固缩神经元细胞数明显增多;而NS+I/R组与I/R组各指标比较差异均无统计学意义.与NS+I/R组比较,Ghrelin+I/R组海马组织MDA、MPO显著降低[MDA (nmol/g):16.4±4.2比24.5±6.7,MPO(nmol/g):6.4±1.8比10.2±2.9,均P＜0.05],GSH显著升高(μmol/g:2.65±0.72比1.66±0.50,P＜0.05),海马组织梗死面积明显缩小[(43.9±9.5)％比(77.0±12.7)％,P＜0.01],固缩神经元细胞数明显减少(个:36.2±4.5比47.1±6.1,P＜0.01).电生理研究结果显示,I/R模型大鼠海马CA1区Glu-N和GABA-N放电频率较Sham组明显增加;NS+I/R组Glu-N和GABA-N放电活动与I/R组比较差异无统计学意义.与NS+I/R组比较,Ghrelin+I/R组海马CA1区Glu-N放电频率(Hz)显著降低(缺血时:3.81±0.67比4.98±0.33,再灌注时:3.01±0.37比3.77±0.41,均P＜ 0.05),GABA-N放电频率(Hz)显著增加(缺血时:5.62±0.54比3.62±0.39,再灌注时:4.81±0.48比3.71±0.21,均P＜0.05).结论 在I/R损伤过程中,Ghrelin对海马组织可能具有神经元保护效应,该效应可能与降低神经元兴奋性有关.
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高迁移率族蛋白B1介导内质网应激在脑缺血/再灌注损伤中的作用
目的 以“缺血/再灌注-高迁移率族蛋白B1-内质网应激”(I/R-HMGB1-ERS)为切入点,探讨HMGB1参与脑I/R损伤中ERS的机制.方法 取出生1～3d乳鼠脑组织,体外培养脑细胞,待细胞传代至第3代用于实验.将细胞分为两组:空白对照组细胞正常培养,不予任何处理;缺氧/复氧组以99.9％氮气培养细胞60 min(缺氧),开放瓶口复氧120 min模拟I/R模型.利用小干扰RNA (siRNA)沉默HMGB1基因(将siRNA和转染试剂Lipofectamine 2000混合物梯度转染至细胞中)作为HMGB 1-siRNA转染组,并设空白对照组(未经任何处理)和阴性对照组(转染对照siRNA).采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)检测细胞中HMGB1和ERS相关分子的mRNA及蛋白表达.结果 ①缺氧/复氧组细胞内HMGB1和ERS相关分子葡萄糖调节蛋白78 (GRP78)、C/EBP同源蛋白(CHOP)、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶12(caspase-12)的mRNA及蛋白表达均较空白对照组明显升高(以空白对照组数值为基数1,HMGB1 mRNA:3.19±0.48比1,t=2.183,P=0.008;GRP78 mRNA:2.07±0.33比1,t=3.292,P=0.016;CHOP mRNA:1.93±0.28比1,t=2.573,P=0.021;caspase-12 mRNA:2.42±0.42比1,t=2.261,P=0.027;HMGB1蛋白:2.28±0.36比1,t=2.042,P=0.009;GRP78蛋白:1.33±0.24比1,t=2.781,P=0.016:CHOP蛋白:1.67±0.34比1,t=2.174,P=0.021;caspase-12蛋白:1.36±0.44比1,t=3.192,P=0.008).说明ERS相关分子参与了细胞缺氧/复氧过程.②siRNA沉默HMGB1基因后,缺氧/复氧模型细胞内HMGB1和ERS相关分子的mRNA及蛋白表达水平均较空白对照组和阴性对照组明显下调(以空白对照组数值为基数1,HMGB1 mRNA:0.27±0.12比1、1.02±0.04,GRP78 mRNA:0.16±0.13比1、0.96±0.04,CHOP mRNA:0.47±0.09比1、0.98±0.07,caspase-12 mRNA:0.31±0.11比1、1.05±0.02;HMGB1蛋白:0.23±0.04比1、1.08±0.01,GRP78蛋白:0.14±0.09比1、1.35±0.03,CHOP蛋白:0.32±0.10比1、0.93±0.06,caspase-12蛋白:0.27±0.09比1、0.97±0.08;P＜0.05或P＜0.01).说明HMGB1参与ERS的过程可能与GPR78、CHOP、caspase-12等分子有关.结论 缺氧/复氧脑细胞内HMGB1和ERS相关分子表达水平均显著上调,而沉默HMGB1基因可明显抑制上述分子的表达水平,“I/R-HMGB1-ERS”路径可能参与脑I/R损伤的发生机制.
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自噬在血红素氧合酶1抑制大鼠肝脏缺血/再灌注损伤中的作用
目的 探讨自噬在血红素氧合酶1(HO-1)减轻肝缺血/再灌注(I/R)损伤中的作用.方法 按随机数字表法将40只健康雄性SD大鼠分为5组,每组8只.以肝左叶和中叶缺血1 h/再灌注6h制备肝部分I/R损伤模型;假手术(Sham)组只开腹,不进行肝脏I/R.钴原卟啉(CoPP)组于I/R前24h腹腔注射HO-1诱导剂CoPP 5 mg/kg,而锌原卟啉(ZnPP)组和6-氨基-3-甲基嘌呤(3-MA)组分别在CoPP预处理后、I/R前1h腹腔注射HO-1抑制剂ZnPP 25 mg/kg或自噬抑制剂3-MA 30 mg/kg.于再灌注6h取下腔静脉血和肝组织,采用全自动生化分析仪检测血清丙氨酸转氨酶(ALT)水平;苏木素-伊红(HE)染色后光镜下观察肝组织病理学改变并进行病理评分;原位末端缺刻标记试验(TUNEL)检测肝细胞凋亡情况并计算凋亡指数(AI);电镜下观察肝组织自噬体形成情况;反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测肝组织HO-1、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3(caspase-3)及自噬相关基因Beclin-1、Atg-5的mRNA表达;胆红素生成法检测肝组织HO-1活性.结果 与Sham组比较,I/R组血清ALT明显升高(U/L:560.3±73.6比49.1±13.8,P＜0.01),HE染色显示肝组织损伤严重,肝组织病理评分显著升高(分:12.0±2.0比1.3 ±0.9,P＜0.01),TUNEL检测显示凋亡细胞明显增多,AI和caspase-3 mRNA表达明显增加[AI:(19.38±3.07)％比(3.25±1.28)％,caspase-3 mRNA(2-△△CT):4.62±0.40比1.05±0.15,均P＜0.01],而HO-1表达和自噬表达差异均无统计学意义.与I/R组比较,CoPP组肝脏损伤程度明显减轻[ALT(U/L):223.3±34.4比560.3±73.6,病理评分(分):5.6±2.3比12.0±2.0,AI:(11.38±2.39)％比(19.38±3.07)％,caspase-3 mRNA(2-△△CT):2.42±0.33比4.62±0.40,均P＜0.01],HO-1表达及肝细胞自噬增加[HO-1 mRNA (2-△△Cr):3.01±0.71比1.14±0.20,HO-1活性(pmol·mg-1·h-1):259±37比113±26,自噬体计数(个):8.75±0.87比1.25±0.71,Beclin-1 mRNA(2-△△CT):2.85±0.28比1.15±0.11,Atg-5 mRNA (2-△△Cr):2.44±0.25比1.14±0.12,均P＜0.01].给予ZnPP后可消除CoPP预处理增加自噬表达及减轻肝损伤的作用;而给予3-MA则不影响CoPP预处理后HO-1的表达及活性增加,但可抑制自噬表达,同时也消除了CoPP预处理的保护作用.结论 HO-1可调控肝I/R时自噬的表达,而自噬可能介导了HO-1减轻肝脏I/R损伤的作用.
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腹腔镜胆囊切除术对机体氧化应激的影响
目的探讨腹腔镜胆囊切除术(LC)对机体氧化应激的影响.方法 LC和开腹胆囊切除术(OC)患者各25例.手术前、手术结束时、手术后24 h分别检测患者丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)水平并进行比较.结果与术前相比,两组患者手术结束时MDA皆增高,但LC组增高明显(P＜0.01);术后24 h LC组恢复至术前水平(P＞0.05),而OC组继续增高(P＜0.01).手术结束时两组SOD皆降低,但LC组降低明显(P＜0.01);术后24 h LC组恢复至术前水平(P＞0.05),而OC组继续降低(P＜0.05).两组比较,LC组术后24 h MDA水平明显偏低(P＜0.05),而SOD活性明显偏高(P＜0.05).结论腹腔镜手术由于气腹造成缺血/再灌注损伤,导致氧化应激现象产生,但术后恢复速度比开腹胆囊切除术快.
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硫化氢对肠缺血/再灌注损伤大鼠核转录因子-κB及下游基因表达的影响
目的 探讨硫化氢(H2S)对肠缺血/再灌注(I/R)损伤大鼠核转录因子-κB (NF-κB)及下游基因表达的影响.方法 雄性Wistar大鼠24只,按随机数字表法分为假手术组(Sham组)、I/R组,I/R+硫氢化钠(NaHS)组(NaHS组),每组8只.NaHS组在再灌注前10 min静脉注射(静注)100 μmol/kg NaHS后按1 mg· kg-1·h-1持续静注直到再灌注2h,Sham组和I/R组静注等体积的生理盐水.用原位末端缺刻标记试验(TUNEL)观察回肠上皮细胞凋亡情况,并计算凋亡指数(AI),蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)检测回肠组织NF-κB蛋白及NF-KB磷酸化(pNF-κB)水平,酶联免疫吸附试验(ELISA)测定血白细胞介素(IL-1、IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,敏感硫电极法测定血H2S水平,动态浊度法测定血内毒素水平.采用直线相关分析法分析pNF-κB、TNF-α、IL-6、IL-1与H2S、AI、内毒素及内毒素、AI与H2S的相关性.结果 Sham组未见凋亡细胞,I/R组可见较多的棕褐色凋亡回肠黏膜腺上皮细胞,AI明显增加[(39.62±4.50)％比(4.30±1.09)％].NaHS组可见较稀疏的棕褐色凋亡回肠黏膜腺上皮细胞,AI较I/R组明显降低[(24.41±2.76)％比(39.62±4.50)％,P＜0.01].与Sham组比较,I/R组NF-κB蛋白表达降低(灰度值:0.82±0.08比0.87±0.07),pNF-KB(灰度值:0.82±0.07比0.15±0.02)、TNF-α(ng/L:49.02±1.62比4.08±0.94)、IL-6 (ng/L:437.08±12.43比227.97±12.92)、IL-1(96.12±12.35比47.97±9.68)、内毒素均明显升高(U/L:0.710±0.071比0.302±0.069),H2S明显降低(μmol/L:24.38±2.69比42.57±7.18);与I/R组比较,NaHS组TNF-α(ng/L:39.27±1.54)、IL-6(ng/L:349.43±17.20)、IL-1 (ng/L:67.38±14.57)、pNF-κB (0.78±0.09)、内毒素(U/L:0.558±0.074)均降低,NF-κB蛋白表达(灰度值:0.84±0.06)和H2S水平升高(μmol/L:35.27±3.14).pNF-κB、TNF-α、IL-6、IL-1与H2S呈负相关(r值分别为-0.637、-0.778、-0.819、-0.675,均P＜0.01),与AI呈正相关(r值分别为0.672、0.643、0.759、0.556,均P＜0.01),与内毒素呈正相关(r值分别为0.680、0.580、0.720、0.560,均P＜0.01),内毒素、AI与H2S呈负相关(r值分别为-0.790、-0.843,均P＜0.01).结论 提示H2S能降低TNF-α、IL-6、IL-1及pNF-κB水平,减轻肠I/R损伤大鼠回肠黏膜上皮细胞凋亡、内毒素血症,对大鼠小肠I/R损伤起保护作用.
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参麦注射液治疗心肺复苏后患者心肌损伤的临床观察
目的 观察参麦注射液对心肺复苏(CPR)患者心肌损伤的影响,并探讨其可能的作用机制.方法 选择青岛市海慈医院2010年1月至2016年12月就诊的心搏呼吸骤停患者62例,将患者按简单随机方法分为常规治疗对照组30例和参麦治疗组32例.两组患者均给予CPR基本生命支持,同时给予复苏常用药物治疗;参麦治疗组在常规治疗基础上静脉滴注(静滴)参麦注射液100 mL,每日1次.治疗7 d进行疗效评价.于治疗前和治疗1、3、7 d取血测定两组患者心肌损伤标志物肌酸激酶同工酶(CK-MB)、心肌肌钙蛋白T(cTnT)、N末端B型钠尿肽前体(NT-proBNP)水平,并观察两组室性心动过速、心室纤颤(室颤)及房室传导阻滞等心律失常发生率;采用床旁二维超声心动图测定两组患者左室射血分数(LVEF)、每搏量(SV)、心排血量(CO).结果 常规治疗对照组治疗1 d CK-MB、cTnT表现为一过性升高,治疗3 d后较治疗前明显降低,治疗7 d达到低水平;NT-proBNP治疗后持续降低,LVEF、SV、CO治疗后持续升高;参麦治疗组治疗后CK-MB、NT-proBNP持续降低,cTnT先升高后逐渐降低,治疗后7 d达到低水平,LVEF、SV、CO先降低后升逐渐升高,治疗后7 d达到高水平;参麦治疗组治疗后3、7 d CK-MB、cTnT、NT-proBNP均明显低于常规治疗对照组〔治疗3 d:CK-MB(U/L)为51±1比82±3,cTnT(μg/L)为2.5±0.3比3.9±0.2,NT-proBNP(ng/L)为5810±103比15965±152;治疗7 d:CK-MB(U/L)为27±2比56±3,cTnT(μg/L)为1.2±0.3比2.9±0.2,NT-proBNP(ng/L)为2834±123比4832±76〕,LVEF、SV、CO均明显高于常规治疗对照组〔治疗3 d:LVEF为0.47±0.03比0.45±0.02,SV(mL)为45±5比39±4,CO(L/min)为3.7±0.2比3.6±0.2;治疗7 d:LVEF为0.59±0.02比0.51±0.03,SV(mL)为55±4比45±2,CO(L/min)为5.3±0.3比4.6±0.4,均P<0.05〕.两组患者CPR后均有心律失常发生,参麦治疗组治疗1 d心律失常发生率与治疗前比较差异均无统计学意义(均P>0.05),治疗3、7 d后心律失常发生率均较治疗前明显下降,治疗7 d达低水平,且参麦治疗组治疗后降低程度较对照组更显著〔室性心动过速:9.4%(3/32)比20.0%(6/30),室颤:9.4%(3/32)比20.0%(6/30),房室传导阻滞:18.8%(6/32)比36.7%(11/30),均P<0.05〕.结论 参麦注射液对CPR后患者心肌损伤有一定保护作用,其机制可能与降低CK-MB、cTnT、NT-proBNP水平,进而改善LVEF、SV、CO有关.
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超声微泡介导微小RNA-146a基因在缺血/再灌注肝损伤大鼠中的表达与作用
目的 评价肝组织微小RNA-146a(miR-146a)表达与大鼠缺血/再灌注(I/R)肝损伤的关系.方法 按随机数字表法将144只SD大鼠分为对照组(N组)、假手术组(S组)及I/R组,各组再分为4个亚组(n=12),分别在实验前1 h静脉给予220μL生理盐水(A组)、20μL miR-146a模拟剂+200μL生理盐水(B组)、20μL miR-146a模拟剂+200μL超声微泡造影剂(C组)、20μL miR-146a抑制剂+200μL超声微泡造影剂(D组).通过制备载miR-146a的超声微泡造影剂,运用超声靶向破坏微泡,于实验前及实验后24 h检测血浆丙氨酸转氨酶(ALT)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量,用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测肝组织miR-146a表达,用蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)检测肝组织Toll样受体4(TLR4)、白细胞介素-1受体相关激酶1(IRAK-1)、IL-6、TNF-α蛋白表达,光镜下观察肝组织细胞损伤情况.结果 实验前各组以及实验后24 h N组和S组血浆ALT、IL-6、TNF-α含量差异均无统计学意义,病理观察也无明显肝组织细胞损伤.实验后24 h,与S组比较,I/R A组和D组肝组织miR-146a表达显著下降(miR-146a/U6 snRNA:0.51±0.13、0.22±0.09比1.01±0.02,均P<0.01),血浆ALT、IL-6、TNF-α含量及肝组织TLR4、IRAK-1、IL-6、TNF-α表达量显著升高〔ALT(U/L):103.23±26.64比44.16±18.55,176.46±7.26比49.74±6.83;IL-6(μg/L):64.28±16.19比17.68±7.54,88.49±3.23比15.58±2.38;TNF-α(μg/L):31.28±2.57比5.58±3.35,59.12±8.74比5.27±1.37;TLR4/GAPDH:2.43±0.36、3.23±0.71比0.96±0.24;IRAK-1/GAPDH:2.34±0.52、3.14±0.63比0.76±0.21;IL-6/GAPDH:1.02±0.22、1.11±0.16比0.98±0.37;TNF-α/GAPDH:2.05±0.48、2.86±0.27比0.59±0.16;均P<0.01〕,且以I/R D组升高更为显著(均P<0.01);病理显示肝组织细胞损伤明显;而I/R B组和C组转染miR-146a模拟剂后肝组织miR-146a表达量显著升高(miR-146a/U6 nsRNA:1.56±0.31、2.40±0.53比1.01±0.02,均P<0.01),肝组织TLR4、IRAK-1、IL-6、TNF-α的表达量显著下降(TLR4/GAPDH:0.77±0.18、0.65±0.27比0.96±0.24,IRAK-1/GAPDH:0.61±0.14、0.47±0.20比0.76±0.21,IL-6/GAPDH:0.80±0.13、0.54±0.22比0.98±0.37,TNF-α/GAPDH:0.41±0.14、0.16±0.03比0.59±0.16,均P<0.01),且以C组结合超声微泡后表达更为显著(P<0.01),病理显示肝组织细胞损伤也更为轻微,B组和C组血浆ALT、IL-6及TNF-α含量也与S组差异无统计学意义.结论 超声微泡能高效转染miR-146a模拟剂和抑制剂于肝组织细胞;miR-146a可能负调控TLR信号通路介导的I/R肝损伤.
关键词： 微小RNA-146a 缺血/再灌注 肝 超声微泡 基因转染 -
谷红注射液对大鼠脑缺血/再灌注损伤后ATP酶活性和炎症反应的影响
目的 探讨谷红注射液(GHI)对大鼠脑缺血/再灌注(I/R)损伤后ATP酶活性和炎症反应的影响,以评价药物对脑I/R损伤的保护作用.方法 按随机数字表法将72只雄性SD大鼠分为假手术(Sham)组、I/R组、尼莫地平组(10 mL/kg)以及GHI低、中、高剂量组(GHI-L组:2.5 mL/kg,GHI-M组:5.0 mL/kg,GHI-H组:10.0 mL/kg),每组12只.采用线栓法致大脑中动脉闭塞(MCAO)制备局灶性脑缺血模型,缺血1.5 h后再灌注;Sham组除不插入尼龙线外,其他操作相同.各给药组分别于再灌注0、12、24 h经尾静脉给药;Sham组及I/R组给予等量生理盐水.各组于末次给药后12 h进行神经功能评分;用氯化三苯四唑(TTC)染色观察脑梗死情况;定磷法测定脑组织中Na+-K+-ATP酶和Ca2+-ATP酶活性;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清白细胞介素-6(IL-6)、单核细胞趋化因子-1(MCP-1)、一氧化氮(NO)含量.结果 与Sham组比较,I/R组大鼠神经功能评分明显降低,脑梗死严重,ATP酶活性显著降低,血清炎症因子含量显著升高.与I/R组比较,GHI-L组、GHI-M组、GHI-H组、尼莫地平组神经功能评分显著升高(分:9.03±0.63、10.54±2.55、12.33±1.87、12.06±1.89比8.17±1.05,均P<0.05),脑梗死体积明显缩小〔(18.51±1.80)%、(15.98±1.34)%、(8.61±1.16)%、(8.09±0.96)%比(26.52±2.07)%,均P<0.01〕,脑组织ATP酶活性明显增高〔Na+-K+-ATP酶(μmol·mg-1·h-1):5.10±0.30、5.34±0.26、6.19±0.17、5.86±0.31比3.98±0.35,Ca2+-ATP酶(μmol·mg-1·h-1):3.68±0.44、4.43±0.29、5.03±0.27、4.17±0.30比1.87±0.46,均P<0.01〕,血清炎症因子水平明显下降〔IL-6(ng/L):51.61±5.55、43.88±4.05、39.71±2.22、41.28±2.66比60.11±6.61,MCP-1(ng/L):227.82±7.07、201.58±13.10、177.23±10.46、126.80±8.49比296.01±12.85,NO(μmol/L):54.48±3.23、46.84±2.69、41.15±2.80、48.62±2.34比65.25±3.88,均P<0.05〕.结论 谷红注射液可呈剂量依赖性地改善大鼠脑I/R损伤后脑组织的能量代谢,抑制炎症级联损伤,这可能是其对脑缺血损伤保护作用的机制.
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牛磺酸对大鼠缺血心肌血管新生作用的研究
目的:研究牛磺酸对大鼠缺血心肌血管新生的作用并探讨其作用机制.方法:选用健康雄性Wistar大鼠80只,随机分为4组,每组20只:缺血再灌注模型组,低、中、高剂量牛磺酸处理组.缺血再灌注模型组口服生理盐水10 mL/kg,每日1次,连续7d.低、中、高剂量牛磺酸处理组牛磺酸200、400、800 mg/kg,每日1次,口服给药,连续7d.采用大鼠心脏冠状动脉缺血再灌注的方法,连续监测心电图,观察牛磺酸对大鼠心肌缺血再灌注后心律失常、心肌梗死范围的影响,并观察牛磺酸对血清中血管内皮生长因子(VEGF)、低氧诱导因子-α(HIF-α)、血小板-内皮细胞粘附分子(CD34)以及心肌组织中VEGF含量的影响.结果:与对照组比较,随着牛磺酸剂量的增高可明显降低动物室性早搏(VPC)和室性心动过速(VT)的发生率,心肌梗死范围也显著减小,同时在光镜下观察各组随牛磺酸剂量的递增可促进心肌间的血管新生.牛磺酸高、中、低剂量组大鼠血清中VEGF、HIF-α、CD34与心肌中的VEGF活性明显升高(P＜0.01).结论:牛磺酸对大鼠缺血心肌血管新生具有促进作用.
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丹酚酸B对急性心肌缺血/再灌注损伤大鼠心肌保护作用的机制研究
[目的]通过观察丹酚酸-B对心肌缺血再灌注损伤大鼠的实验观察探讨其作用机制.[方法]将实验动物分为5组,假手术组、模型组、卡托普利组、复方丹参片组、丹酚酸-B组分别给于不同处理因素.[结果]丹酚酸-B可降低RI大鼠血浆AT-1、ET、TXA2、TNF、Ca2+水平,提高PGI2、SOD水平,明显优于复方丹参片组及模型组(P＜0.05).[结论]丹酚酸-B具有较好的RI心肌细胞保护作用.
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茶黄素对大鼠心脏缺血/再灌注损伤的保护作用
结论 茶黄素具有明显的抗心肌缺血/再灌注损伤作用,此作用与茶黄素的抗氧化作用有关.
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预处理对在体大鼠心肌细胞的保护作用
目的探讨缺血预处理对心肌细胞的保护作用. 方法在体大鼠心肌细胞缺血/复灌模型中,观察缺血预处理对心肌细胞再次长时间缺氧/复氧或缺血/复灌损伤的保护作用(LDH释放、MDA、SOD的含量和心肌梗死范围及心律失常等). 结果在体大鼠心肌缺血预处理组梗死范围和血清LDH较缺血复灌组减少(P＜0.01),预处理组MDA较缺血复灌组也显著降低(P＜0.01).而且无论是再次的缺血还是复灌期室性心律失常的发生率预处理组明显低于非预处理组(P＜0.01). 结论缺血预处理可以减少再次长时间的缺血/复灌对心肌的损伤.
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挤压伤至股骨干骨折对大鼠海马 CA1区形态学变化
目的：观察挤压伤（ CS）至股骨干骨折后缺血／再灌注（ I／R）引起的SD大鼠海马CA1区形态学的变化特征。方法建立大鼠CS模型，SD大鼠双侧后肢挤压6 h，再灌注0、6、12、24 h，4％多聚甲醛灌注，用刀片把脑组织从正中矢状位分为左右两半，自上丘至视交叉节段取脑组织，一半用于高尔基染色，一半制备成石蜡切片，分别用于HE染色和Nissl染色。结果挤压伤至股骨干骨折I／R后开始出现大鼠海马神经元疏松紊乱、肿胀变性，形态结构受损，凋亡数目增加，神经元大量丢失，海马CA1区树突棘密度减少，挤压再灌注12 h为显著，24 h上述形态有所改善，但仍低于正常水平。结论 I／R引起SD大鼠海马CA1区神经元细胞受损，受损程度在解压后12 h达到高峰。
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丙氨酰-谷氨酰胺双肽对缺血／再灌注肠损伤兔肠黏膜炎性反应的影响
目的：观察丙氨酰—谷氨酰胺双肽对缺血／再灌注损伤兔肠道黏膜损伤后中性粒细胞浸润及黏膜组织中炎性反应水平的影响。方法选择健康成年新西兰兔30只，按随机数字表法分为治疗组与对照组各15只。采用完全夹闭阻断肠系膜上动脉1h后再开放恢复肠系膜上动脉血流方法制作缺血／再灌注肠损伤模型后，治疗组健康成年新西兰兔肠缺血／再灌注肠损伤模型建立前2h及模型建立后2h，通过耳缘静脉分别给予丙氨酰—谷氨酰胺双肽1次，剂量为1．0 g／kg。对照组同期相同时间点分别给予等量的葡萄糖生理盐水静脉注射。缺血／再灌注模型成功后4小时，空气栓塞法处死新西兰兔。苏木素—伊红染色光镜下观察损伤肠组织的病理学变化，依据Chiu 6级评分法计算肠损伤程度评分。测量小肠黏膜组织中肿瘤坏死因子－α（TNF－α）、白介素－6（IL－6）水平变化。取肠系膜上静脉血进行中性粒细胞计数（ PMN），测定PMN呼吸爆发的强度变化。结果缺血／再灌注损伤兔模型建立后，对照组肠道黏膜肉眼观小肠黏膜充血、肿胀，可见斑点状糜烂，部分见炎性渗出物，光镜下肠壁组织间中性粒细胞浸润，血管内皮肿胀，基底层结构不清。小肠绒毛数量减少，高度降低，形态不规则，肠上皮黏膜细胞大小不一，排列紊乱，黏膜层厚度变薄，隐窝结构不清楚，小肠腺体萎缩。观察组小肠黏膜充血、肿胀明显减轻，未见点状或片状糜乱。光镜下小肠绒毛数量未见明显减少，形态基本正常，黏膜层厚度正常及基底层结构清晰，炎性细胞浸润较少。治疗组的肠损伤程度评分为（2．15±0．93）分低于对照组的（4．98±0．85）分，治疗组TNF－α、IL－6水平明显低于对照组，PMN低于对照组，差异均有统计学意义（P＜0．05）。结论丙氨酰—谷氨酰胺双肽能减少缺血再灌注损伤后肠黏膜中性粒细胞浸润程度，减轻中性粒细胞活化强度，保护肠黏膜屏障功能。其机制可能与降低了损伤肠壁中TNF－α与IL－6水平，抑制了肠壁氧化应激反应引起的炎性反应损伤，降低了肠壁毛细血管通透性有关。
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牛磺酸干预对糖尿病大鼠心肌缺血/再灌注损伤的保护作用
目的 探讨牛磺酸对糖尿病大鼠心肌缺血/再灌注损伤的保护作用.方法 链脲佐菌素致糖尿病大鼠被随机分为 缺血/再灌注(I/R)、缺血预适应(IPC)和牛磺酸干预(TAU)3组.TAU组灌胃3%牛磺酸溶液300 mg/(kg·d),IPC和I/R组给予等 体积蒸馏水.4周后各组均经历心肌缺血/再灌注损伤,IPC组于缺血前行心肌缺血预适应.连续监测心电图,测定心肌梗 死范围.结果 与I/R组比较,TAU与IPC组ST段抬高幅度降低,室早出现时间推迟,持续时间缩短,室速、室颤发生率降 低,心肌梗死范围缩小.结论 牛磺酸可减轻糖尿病大鼠心肌缺血/再灌注损伤.
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格列苯脲对缺血预适应心肌再灌注心律失常的影响
目的 探讨KATP 通道抑制剂格列苯脲对心肌缺血预适应心律失常的影响.方法 将SD 大鼠随机均分为心肌缺血预适应组( IPC 组) 、格列苯脲组(GLC组) 、格列苯脲+ IPC 组(G-P 组) 和对照组(C 组),(均n=12).心肌缺血预适应由3 次5 min 缺血/10 min 再灌注组成.所有大鼠均接受30min 缺血/60min 再灌注.使用medlab501H 多功能动物生理功能记录仪Ⅱ导联记录心脏室性心律失常.结果 IPC 可减少缺血/ 再灌注所致的室性心律失常的发生,但这种保护作用不能被格列苯脲所阻断.结论 格列苯脲对IPC 的心律失常有影响.
