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散发性乳腺癌中BRCA1和cyclinB1的表达
目的探讨BRCA1和cyclinB1在散发性乳腺癌的表达及意义.方法应用免疫组化S-P法检测20例乳腺腺病和52例散发性乳腺癌中BRCA1和cyclinB1的表达.结果所有乳腺腺病中BRCA1均呈阳性表达,散发性乳腺癌中BRCA1表达率和强度均下降(P《0.01),BRCA1表达下降或丧失与散发性乳腺癌组织学分级有关(P《0.05).cyclinB1在乳腺腺病和散发性乳腺癌中表达阳性率分别为35.0% (7/20)和69.2%(36/52),差别有统计学意义(P《0.01),cyclinB1过表达与组织学分级和肿块大小有关(分别P《0.01,P《0.05).在散发性乳腺癌中BRCA1与cyclinB1的表达呈负相关(P《0.01).结论 BRCA1的表达下降或丧失和cyclinB1的过表达参与散发性乳腺癌的发病及进展.
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细胞周期标记物在肿瘤中的应用
肿瘤的发生与多因素、多基因调控的改变有着密切联系.其中细胞周期标记物,在肿瘤的诊断、预后评估等方面具有重要的应用前景.本文就近年来常见的细胞周期标记物微小染色体维持蛋白、Geminin、cyclinB1和丝氨酸10磷酸化组蛋白3(Histone H3 phosphorylated on Serine 10,H3S10ph)在肿瘤中的单独或联合使用进行综述.
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基于微流控芯片技术橙皮苷抗肺肿瘤作用机制研究
目的 探究橙皮苷诱导人肺癌细胞A549凋亡的作用机制.方法 基于微流控芯片技术采用Hoechst 33342/PI染色法检测橙皮苷对肺癌细胞A549凋亡坏死的影响;流式细胞术检测橙皮苷对肺癌细胞周期及凋亡的影响;实时荧光定量PCR技术检测相关基因VEGF、PI3K及PTEN的表达;Western blot 技术检测橙皮苷诱导肺癌细胞中PI3K-Akt信号通路相关蛋白PI3K、Akt、PTEN及凋亡蛋白Bcl-2、周期蛋白Cyclin B1的表达. 结果 橙皮苷作用于细胞G0/G1期及S期,阻滞细胞分裂,并呈现浓度依赖性诱导肺癌细胞凋亡,其细胞凋亡坏死率由正常对照组的(6.7±0.6)%增至(27.9±1.1)%;经橙皮苷诱导后的肺癌细胞中VEGF和PI3K基因表达相对降低,抑癌基因PTEN表达相对增加.Western blot 结果显示,经橙皮苷诱导的肺癌细胞中凋亡蛋白Bcl-2及周期蛋白Cyclin B1相对表达降低,PI3K-Akt信号通路蛋白Akt表达量与对照组比较明显减少,PI3K蛋白表达量相对增加,PTEN表达量无明显变化.结论 橙皮苷可能是通过干扰PI3K-Akt信号通路,阻碍肿瘤细胞的分裂并促进凋亡蛋白的产生,从而诱导肺癌细胞 A549 凋亡.
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DADS对Chk1/2基因高表达人胃癌MGC803细胞G2/M期的影响
目的：在建立Chk1/2基因高表达人胃癌MGC803细胞基础上,探讨DADS对Chk1/2高表达MGC803细胞G2/M期的作用。方法分别采用集落形成实验、流式细胞术、RT-PCR、Western blot 等方法,检测 DADS 对 Chk1/2高表达MGC803细胞增殖、细胞周期分布、Chk1与Chk2 mRNA与蛋白、p-Chk1与p-Chk2及CDC25C与cyclinB1的表达。结果软琼脂集落形成实验显示,30 mg · L-1 DADS作用Chk1与Chk2高表达MGC803细胞组集落形成率均明显低于对照组与空载体组(P <0．05)。流式细胞术显示,30 mg·L-1 DADS作用12、24、36、48 h后,Chk1/MGC803细胞G2/M期分别为41．3%、57．4%、68．9%、42．9%,较MGC803细胞与Chk2/MGC803细胞明显增加( P<0．05)。而Chk2/MGC803细胞与MGC803细胞差异没有显著性( P>0．05)。 RT-PCR显示, Chk1/MGC803与 Chk2/MGC803细胞 Chk1与 Chk2 mRNA水平较对照组无明显变化；并且, Western blot显示, Chk1与 Chk2总蛋白及 p-Chk2的表达无明显改变,但 p-Chk1呈时间依赖性上调,CDC25C与cyclinB1呈时间依赖性下调( P<0．05)。结论 DADS可阻滞Chk1/MGC803细胞于G2/M期,与上调磷酸化Chk1和下调CDC25C与cyclinB1有关。
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革皮氏海参总皂苷对小鼠骨髓细胞周期和细胞凋亡的影响
目的 研究革皮氏海参总皂苷对环磷酰胺(cyclophosphamide,Cy)诱导的骨髓抑制模型小鼠骨髓细胞细胞周期和细胞凋亡的影响.方法 通过腹腔注射Cy建立小鼠骨髓抑制模型,灌胃不同剂量的革皮氏海参总皂苷(10和30 mg(kg·d)-1),1次/d,连续16 d.采用流式细胞术检测革皮氏海参总皂苷对小鼠骨髓细胞周期分布和凋亡的影响,逆转录聚合酶链式反应(reverse ranscription polymerase chain reaction,RT-PCR)技术检测小鼠骨髓细胞cyclinB1、bcl-2和bcl-xl基因mRNA表达水平.结果 革皮氏海参总皂苷能明显增加骨髓有核细胞数;促进骨髓细胞周期由S期进入G2/M期,提高G2/M期关键因子cyclinB1 mRNA的表达水平;明显降低细胞凋亡率,提高抑制凋亡基因bcl-2和bcl-xl mRNA表达量.结论 革皮氏海参总皂苷明显促进骨髓细胞增殖.其作用机制可能通过促进细胞进入增殖活跃期,抑制细胞凋亡,达到促进小鼠骨髓造血的作用.
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p27蛋白及cyclin B1在慢性胃病及胃癌患者胃粘膜中的表达及其临床意义
目的 研究p27蛋白及cyclin B1在慢性胃病及胃癌患者胃粘膜组织中的表达水平,探讨p27蛋白及cyc-lin B1的表达与胃癌演变的关系.方法 采用免疫组织化学SP法,检测慢性非萎缩性胃炎、慢性萎缩性胃炎、肠上皮化生、非典型增生及胃癌患者胃粘膜组织中p27与cyclin B1的表达水平,并进行临床分析.结果 在慢性非萎缩性胃炎、慢性萎缩性胃炎、肠上皮化生、非典型增生、胃癌的演变过程中,p27蛋白表达水平呈现逐级降低的变化规律,cyclin B1表达水平呈现逐级升高的变化规律,两者的变化呈负相关.结论 p27蛋白及cyclin B1在胃粘膜中的表达水平与慢性胃病、胃癌前病变、胃癌的发生发展有关,其在胃癌的演变过程中起着重要的作用.
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Stat5与CyclinB1在非小细胞肺癌组织中的表达及相关性
目的 探讨信号转导与转录激活因子5(Stats)与细胞周期素CyclinB1在非小细胞肺癌和正常肺组织中的表达及关系,进一步探讨Stat5、CyclinB1与非小细胞肺癌发生发展的关系.方法 利用SABC免疫组织化学技术检测35例非小细胞肺癌(NSCLC)组织及10例肺正常组织中Stat5和CyclinB1的表达.结果 Stats、CyclinB1在非小细胞肺癌组织中的表达水平明显高于肺正常组织(P<0.01).Stat5蛋白和CyclinB1蛋白在NSCLC组织中的表达与患者的性别、年龄、组织分化程度无关.Stat5蛋白与组织学类型有关,在腺癌组织中的表达强度明显高于鳞癌,差异有统计学意义(P<0.01).CyclinB1蛋白与TNM分期有关,在Ⅲ、Ⅳ期癌组织中的表达强度明显高于Ⅰ、Ⅱ期,差异有统计学意义(P<0.05).Stat5与CyclinB1的表达呈显著相关性(P<0.01).结论 Stat5、CyclinB1可能在肺癌的发生发展中发挥重要作用,CyclinB1的表达可能由Stat5调控.
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山奈酚对CNE-2细胞周期及CyclinB1、Cdk1mRNA表达的影响
目的:观察山奈酚对鼻咽癌CNE-2细胞周期分布及细胞周期素B1(CyclinB1)、细胞周期依赖性蛋白激酶1(Cdk1)表达的影响.方法:分别用0、20、40、60、80和100 μmol/L的山奈酚处理CNE-2细胞.处理24、48和72 h后,应用MTT法测定CNE-2细胞活力;处理24和48 h后用流式细胞术检测细胞周期;处理24 h后用RT-PCR技术检测细胞CyclinB1及Cdk1 mRNA的表达水平.结果:随山奈酚作用剂量的增加和作用时间的延长,CNE-2细胞活力逐渐降低(F浓度=385.194,F时间=237.324,F浓度×时间=13.757,P<0.001,细胞被阻滞于G2/M期(P<0.05);CNE-2细胞中CyclinB1和Cdk1 mRNA的表达量随山奈酚作用浓度的增加而逐渐降低(F=95.682、154.871,P<0.001).结论:山奈酚可能通过下调CNE-2细胞CyclinB1和Cdk1 mRNA的表达水平,诱导G2/M期阻滞,抑制其增殖.
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PCNA、p53及CyclinB1 mRNA在兔肝内胆管结石胆管组织中的表达
目的通过检测PCNA、p53及和CyclinB1 mRNA在兔肝内胆管结石胆管组织中的表达,探讨肝内胆管结石发生的分子机制.方法建立肝内胆管结石动物模型,采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)的方法检测30例胆管结石兔和20例正常兔胆管组织CyclinB1 mRNA的表达水平,采用免疫组织化学法检测胆管组织PCNA和p53的表达,应用流式细胞仪测定细胞周期和细胞凋亡情况.结果胆管结石兔胆管组织PCNA表达阳性率40%,明显高于对照组0,两者相比差异有统计学意义(P<0.01),胆管结石兔胆管组织p53表达阳性率0,对照组p53表达阳性率0,两者相比差异无统计学意义(P>0.05),胆管结石兔胆管组织CyclinB1 mRNA表达水平(0.436±0.133)与正常对照组(0.178±0.085)比较差异有统计学意义(P<0.01),胆管结石兔胆管G1/S期细胞比例(50.11±6.34)%,与正常组(75.23±5.29)%比较差异有统计学意义(P<0.05),G2/M期细胞比例(35.59±4.68)%,与正常组(15.35±3.76)%比较差异有统计学意义(P<0.05),胆管细胞增殖指数(18.87±1.66),与正常组(5.32±0.41)比较差异有统计学意义(P<0.05),细胞凋亡率(15.24±0.87)%,与正常组(2.33±0.36)%比较差异有统计学意义(P<0.05).结论 PCNA、p53及 CyclinB1 mRNA表达与肝内胆管结石生物学行为密切相关,胆管细胞大量增殖在肝内胆管结石形成中发挥重要作用,但细胞增殖与恶性细胞的无限增殖有根本的区别.
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宫颈癌中survivin的表达及临床意义
目的探讨调亡抑制基因survivin在宫颈癌组织中的表达及临床意义.方法应用免疫组化方法检测survivin和cyclinB1蛋白在56例宫颈癌和18例正常宫颈组织中的表达,并将结果进行了相关分析.结果 69.6%(39/56)宫颈癌中表达survivin基因, 而在正常宫颈组织为16.7%(3/18)(P<0.01);survivin基因表达与宫颈癌组织细胞类型及分化程度无明显相关关系,但与年龄、临床分期和淋巴结转移有关.宫颈癌组织中cyclinB1表达与survivin表达显著相关.结论 cyclinB1和survivin在细胞周期中有协同作用,它们的过度表达可能是宫颈癌癌细胞G2/M过渡的促进因素.survivin基因有可能成为宫颈癌基因治疗的靶点.
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CyclinB1在非小细胞肺癌中的表达及意义
为研究非小细胞肺癌组织中CyclinBl表达与非小细胞肺癌临床病理特征的关系,随机收集非小细胞肺癌标本44例(其中鳞癌24例、腺癌20例)及11例肺癌患者正常肿组织标本,采用免疫组织化学S-P法显示CyclinB1的表达并结合肺癌的临床病理特征进行了分析.
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eIF3 P170对发育心肌细胞周期的调控及其机制
目的：探讨eIF3 P170，cdc2，cyclinD1，cyclinB1在小鼠发育心肌细胞细胞周期中的表达及eIF3 P170与cdc2， cyclinD1，cyclinB1之间的相关关系。方法：取不同时间点小鼠心肌细胞，RT-PCR检测eIF3 P170，cdc2，cyclinD1和cyclinB1 mRNA的表达。结果：eIF3 P170，cdc2，cyclinD1和cyclinB1 mRNA的表达在胚胎第13，15，18天(G13，G15， G18)及小鼠出生后第1，2，3，5天(P1，P2，P3，P5)的表达均较强，在小鼠出生后第5天表达达到强(P5与其他各时间点比较，P<0.05)，而后表达逐渐减弱，在出生后第30天(P30)的表达降至弱(P30与其他各时间点比较， P<0.05)。eIF3 P170与cdc2，cyclinD1和cyclinB1 mRNA表达之间具有正相关关系。结论：eIF3 P170，cdc2，cyclinD1和cyclinB1 mRNA的表达在胚胎期及出生早期均较强，在小鼠出生后第5天达到强，之后逐渐下降。
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DADS活化HL-60细胞G2/M检查点与cyclinB1亚细胞分布的关系
目的 研究二烯丙基二硫(DADS)诱导人急性髓性白血病细胞系HL-60细胞G2/M期生长阻滞的分子机制. 方法 采用MTT 法检测DADS对细胞增殖活性的影响、流式细胞术检定细胞增殖周期、蛋白印迹法检测细胞内cyclinB1表达水平. 结果 DADS呈浓度依赖性抑制HL-60细胞增殖活性,且DADS(20 μmol/L)与ATRA(10-6mol/L)对HL-60细胞增殖活性影响相近(P＜0.01),DADS(20 μmol/L)作用12 h后能引起G2/M期细胞百分数增高并达到大值,上调cyclinB1的表达水平并诱导cyclinB1细胞质定位. 结论 DADS能启动HL-60细胞G2/M检查点,它的激活与cyclinB1细胞质定位有关.
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姜黄素诱导肾癌786-O细胞G2/M期阻滞及其分子机制的研究
目的 研究姜黄素对肾癌786-O细胞生长抑制作用及其分子机制.方法 MTT(四甲基偶氮唑盐)法检测姜黄素对肾癌细胞786-O生长影响;流式细胞术分析姜黄素对786-O细胞周期的影响;免疫印迹检测细胞周期相关靶基因表达水平.结果 姜黄素能够呈浓度依赖方式显著抑制肾癌786-O细胞生长活力;细胞周期分析表明姜黄素对786-O细胞具有G2/M期阻滞效应;免疫印迹结果证明姜黄素处理后786-O细胞P53、P21蛋白均上调表达,相应Cyclin B1蛋白表达维持较低水平.结论 姜黄素作用于786-O细胞导致细胞周期G2/M期阻滞,其机制可能依赖于P53和P21蛋白信号通路.
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鼻咽良恶性病变中EBV-LMP1、CyclinB1、P34cdc2和Survivin的表达及意义
目的:探讨P34cdc2、CyclinB1和Survivin在鼻咽粘膜慢性炎、鼻咽癌和颈部淋巴结转移灶中的表达及意义,并分析与EBV-LMP1表达的相互关系.方法:应用免疫组化检测30例鼻咽粘膜慢性炎、30例鼻咽癌和30例鼻咽癌颈部淋巴结转移灶中LMP1、P34cdc2、CyclinB1和Survivin的表达.结果:LMP1、P34cdc2、CyclinB1和Survivin在鼻咽粘膜慢性炎中的阳性率分别为20.0%(6/30)、10.0%(3/30)、10.0%(3/30)和3.3%(1/30);在鼻咽癌中的阳性率分别为63.3%(19/30)、73.3%(22/30)、50.0%(15/30)和36.7(11/30),与鼻咽粘膜慢性炎比较差异均有显著性(P＜0.01);在鼻咽癌颈部淋巴结转移灶中的阳性率分别为70.0%(21/30)、80.0%(24/30)、76.7%(23/30)和43.3%(13/30),与鼻咽粘膜慢性炎比较差异均有显著性(P＜0.01),与鼻咽癌相比较均有所增高,但仅CyclinB1有统计学意义(P＜0.05).在鼻咽癌及其颈部淋巴结转移灶中,LMP1与P34cdc2和CyclinB1的表达均有显著相关性(分别P＜0.01,P＜0.05).结论:鼻咽癌中存在P34cdc2、CyclinB1和Survivin蛋白过表达,LMP1与P34cdc2和CyclinB1可能协同致病.
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二甲双胍对小鼠睾丸间质细胞的体外抑制作用及其机制研究
目的 探讨二甲双胍在小鼠睾丸发育中的作用及其分子机制.方法 不同浓度二甲双胍作用于小鼠睾丸间质细胞(TM3),采用MTT法、Annexin V-FITC/PI法及流式细胞术检测二甲双胍对TM3细胞增殖、凋亡及周期的影响.采用real-time PCR检测细胞周期关键调节蛋白cyclin B1和cyclin D1的变化,Western Blot分析二甲双胍抑制TM3细胞增殖中AMPK蛋白的变化.结果 MTT结果显示二甲双胍可显著抑制TM3细胞的体外增殖能力;Annexin V-FITC/PI染色法显示二甲双胍未诱导该细胞发生凋亡;流式细胞术检测发现二甲双胍可诱导TM3细胞周期阻滞在G2/M期;real-time PCR显示二甲双胍可下调cyclin B1和cyclin D1 mRNA的表达;Western Blot显示二甲双胍显著增加TM3细胞中AMPK在Thr172位点的磷酸化水平.结论 二甲双胍显著抑制TM3细胞的体外增殖并通过诱导TM3细胞周期阻滞在G2/M期,激活AMPK信号通路,发挥其对TM3细胞的体外抑制作用.
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VX-680对T24细胞增殖的抑制作用及对CyclinD1和CyclinB1表达的影响
目的:探讨Aurora A激酶抑制剂VX-680对人膀胱癌T24细胞增殖的抑制作用及对CyclinD1和CyclinB1 mRNA表达的影响及意义.方法:体外培养T24细胞,分别给予不同浓度及不同作用时间的VX-680,采用MTT法检测细胞增殖能力;RT-PCR检测T24细胞CyclinD1和CyclinB1 mRNA的表达水平.结果:MTT结果显示:100～500 nmol/L VX-680作用24、72 h均对T24细胞有明显抑制作用,呈浓度依赖性且72 h时抑制效果更显著;100～500 nmol/L VX-680作用72 h后,各组T24细胞CyclinD1和CyclinBmRNA的表达水平下调,呈浓度依赖性.结论:Aurora激酶抑制剂VX-680可能通过下调CyclinD1和CyclinB1 mRNA表达显著抑制人膀胱癌T24细胞增殖,且具有浓度依赖性.
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氯化两面针碱对KB及KBV200细胞周期的影响及其机制
目的:研究氯化两面针碱抑制人口腔鳞癌细胞KB及其耐药株KBV200增殖的作用及机制.方法:应用MTT比色法测定氯化两面针碱对细胞增殖的抑制作用;流式细胞术(FCM)检测氯化两面针碱对细胞周期的影响;RT-PCR技术和免疫细胞化学法检测cdc2和cyclinB1的mRNA水平及其蛋白表达.结果:氯化两面针碱在体外呈浓度依赖性显著抑制KB及KBV200细胞的生长,48 h IC50分别为(2.36±0.22) mg/L和(2.43±0.19) mg/L;与对照组相比,经3 mg/L氯化两面针碱作用, KB及KBV200 G0/G1期、S期细胞明显减少,G2/M期细胞显著增多(P＜0.01);cyclinB1的转录与表达降低(P＜0.01),而cdc2的转录与表达未见明显变化(P＞0.05).结论:氯化两面针碱有可能通过下调cyclinB1的转录与表达来诱导KB细胞及其耐药株KBV200的G2/M期阻滞,从而抑制其增殖.
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大蒜素联合长春新碱对膀胱癌BIU-87细胞增殖和凋亡的影响
目的:探讨大蒜素联合长春新碱对膀胱癌BIU-87细胞增殖和凋亡的影响.方法:实验分为大蒜素组、长春新碱组、大蒜素联合长春新碱组(联合用药组),以未用药物处理的BIU-87细胞为空白对照组.利用CCK-8法分别评价大蒜素和长春新碱对BIU-87细胞体外生长的抑制作用,通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、免疫细胞化学法和Western blot法检测4组细胞中CDK1和CyclinB1的mRNA和蛋白表达水平的变化,流式细胞术检测细胞凋亡情况.结果:大蒜素和长春新碱对膀胱癌BIU-87细胞的生长均有明显的抑制作用,呈浓度依赖性;联合用药组能明显降低BIU-87细胞中CDK1和CyclinB1的mRNA和蛋白的表达,与空白对照组相比差异均有统计学意义(P<0.05);同时能诱导细胞凋亡,联合用药组细胞凋亡率为(54.89±0.27)%,与空白对照组(3.81±0.63)%、大蒜素组(19.20±0.26)%、长春新碱组(25.39±0.31)%比较差异有统计学意义(P<0.05).结论:大蒜素可增强长春新碱对膀胱癌BIU-87细胞增殖抑制作用,两者具有协同抗肿瘤作用;大蒜素诱导细胞凋亡的机制可能与下调CDK1和CyclinB1的表达有关.
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CyclinB1在非霍奇金淋巴瘤中的表达及诊断价值
目的:探讨CyclinB1在良、恶性淋巴疾痛表达差异以及在恶性淋巴瘤中表达与多种预后因素的相互关系,并分析其表达的临床意义.方法:采用免疫组织化学ABC法,检测CyclinB1在83例非霍奇金淋巴瘤(NHL)组织及20例淋巴结反应性增生(RH)组织中的表达情况.结果:CyclinB1在NHL中的表达显著高于RH组织中的表达(P＜0.01);NHL中CyclinB1在Ⅲ+Ⅳ期的表达显著高于Ⅰ+Ⅱ期(P＜0.05),在有结外受侵的NHL患者中明显高于无结外受侵的患者(P＜0.05),在侵袭性NHL显著高于惰性NHL(P＜0.05).结论:CyclinB1可能参与NHL的进展.检测CyclinB1的表达情况,有助于NHL和RH的鉴别诊断,对判断NHL的恶性程度有一定的临床价值.
