中国版纳猪MHCI类P1分子全长的原核表达与纯化
摘要： 目的:获得原核表达的中国版纳猪SIAI类P1蛋白质分子.方法:PCR扩增去信号肽的SIAl类P1 cDNA序列,亚克隆至pCEMT载体,测序.将亚克隆的P1 cDNA片段插入表达载体pET42b(+),构建重组表达质粒pET-42b(+)/sla-p1,转化E-coli表达菌BL21-CodonPlus(DE3)-RIL,IFIG诱导P1-8×his融合蛋白表达,经包涵体洗涤,8mol/L尿素变性溶解,Ni2+亲和层析,梯度透析后,定量保存.SDS-PAGE、western-blotting鉴定目的蛋白的表达与纯化.结果:目的蛋白(分子量39.5 kD)表达量占细菌总蛋白15%,每升表达菌获得纯度95%的目的蛋白40mg～60mg.结论:成功建立猪SLA分子全长原核表达、纯化体系,为建立间接识别猪移植抗原SLAI类分子的人T细胞系及表位分析打下基础.
-
白血病CD34与MDR1表达的调控关系
目的:探讨白血病CD34分子与MDR1分子表达的调控关系.方法:采用流式细胞术双标记法检测30例白血病外周血细胞CD34分子和MDR1分子的表达.结果:白血病外周血细胞CD 34分子表达与MDR1分子表达密切相关(r=0.92,P＜0.01);经曲线回归分析表明,CD34分子表达调控着MDR1分子的表达,且呈一元二次曲线关系(R2=0.88);回归方程式为:MD R1= 1.79+0.94CD34-0.01CD342.结论: 在白血病外周血细胞中,CD34分子的表达调控MDR1分子的表达.
-
地塞米松对成纤维细胞增殖及表达细胞间粘附分子-1的影响
目的:探讨地塞米松(DEX)治疗口腔粘膜下纤维性变(OSF)等口腔粘膜疾病的机理.方法:分别从正常(NM)及OSF患者的口腔粘膜中培养出成纤维细胞(FB),向培养基中加入不同浓度的DEX培养48h后,用MTT法检测FB的增殖水平,并用细胞酶联免疫方法检测其细胞间粘附分子-1(ICAM-1)的表达水平.结果:DEX在10～150μg/ml的范围内以浓度-效应依赖关系抑制FB增殖;表示ICAM-1水平高低的OD值在OSF-FB为0.386±0.099,高于NM-FB的OD值0.324±0.030(P＜0.05);DEX可下调FB的ICAM-1表达水平.结论:DEX可能是通过抑制FB增殖和下调ICAM-1的表达而达到治疗OSF等口腔疾病的效果.
-
基质金属蛋白酶MMP-2、MMP-9与类风湿性关节炎关节破坏的关系
目的:观察血清基质金属蛋白酶MMP-2、MMP-9与类风湿性关节炎患者(Rheumatoid arthritis,RA)关节破坏的关系.方法:用双抗体夹心ELISA法测定90例未经治疗的早期RA患者及20例健康人血清中MMP-2、MMP-9,并分析其与RA患者X线表现积分(ΔLarsen)及健康评分(ΔHAQ)、CRP的关系.结果:血清MMP-2、MMP-9水平与C反应蛋白(CRP)、ΔLarsen、ΔHAQ显著相关,其相关系数及P值分别为r=0.40和0.46,P<0.01;r=0.28和0.31,P<0.05;r=0.30和0.34,P<0.01.18例初CRP正常的患者,MMP-2及MMP-9水平与观察12个月后出现关节侵蚀改变相关(r=0.59和0.48,P<0.05).回归分析发现,初无骨侵蚀改变的患者,Larsen积分显示的骨侵蚀进展与MMP-2含量密切相关(r=0.32,P<0.01).结论:血清MMP-2、MMP-9水平与RA患者的病情活动及早期关节的骨侵蚀显著相关,可以作为无骨破坏的早期RA患者出现骨侵蚀的有益预测指标.
-
新生儿严重细菌感染血浆降钙素原与CRP和IL-6临床价值对比研究
目的:比较新生儿败血症及败血症休克血降钙素原(PCT)与C反应蛋白(CRP)和白介素-6(IL-6)的变化,探讨血中前降钙素原作为新生儿严重细菌感染诊断指标的敏感性、可靠性及对预后评估的作用.方法:采用半定量固相免疫测定法测定108例新生儿败血症(40例合并败血症休克)的血浆PCT水平,并比较同期CRP和IL-6水平.结果:新生儿败血症患儿血浆PCT阳性检出率明显高于正常对照组;其中败血症休克组尤为明显;败血症休克患儿发生率及死亡率随PCT值升高而升高;PCT与血清CRP、IL-6水平呈正相关;PCT的敏感性(87.5%)、特异性(82.4%)、阳性预测值(74.5%)和准确性(84.3%)高.结论:新生儿败血症及败血症休克时PCT升高较早,且随病情的加重持续升高.PCT对新生儿败血症及败血症休克诊断指标的敏感性、可靠性及对预后评估优于CRP和IL-6.
-
测定血IL-2、IL-6水平以评估肾移植后的排斥反应
排斥反应是器官移植失败的重要原因.急性排斥反应是许多种细胞因子共同作用的结果.IL-2、IL-6与其密切相关,其水平检测对肾移植排斥反应的诊断、鉴别诊断起重要作用.
-
血小板提取液NPY与NT在血液透析中的表达及意义
目的:探讨血液透析(HD)过程血小板中神经肽Y(NPY)与神经降压素(NT)的含量变化及意义.方法:HD患者35例,对照组30例.采用放射免疫分析法测定血小板提取液和血浆中NPY及NT的含量.结果:与对照组比较,HD患者血小板提取液NPY含量明显降低,血浆中NPY含量明显增高,血小板提取液与血浆NT含量均显著升高.与HD前比较,HD后血浆NT与血小板NPY均明显增高,血小板中NT与血浆NPY明显降低,两者具有显著相关性.结论:在HD过程中,血小板释放的NPY可能是造成肾性高血压和肾血管痉挛的重要病理因素.
-
SAP基因注射干预小鼠SLE样综合征的发生
目的:研究SAP基因注射对SLE发病的干预作用,并进一步探讨SAP发挥作用的可能机制.方法:通过RT-PCR方法克隆SAP基因,构建其真核表达质粒pcDNA3-SAP,观察SAP基因注射对活化淋巴细胞免疫诱导小鼠产生的SLE样综合征的干预作用,以ELISA方法检测抗dsDNA抗体的产生情况,以免疫荧光法检测肾脏免疫复合物沉积;通过巨噬细胞吞噬实验观察SAP与DNA结合后对DNA清除的影响;用增殖实验检测巨噬细胞吞噬SAP结合的DNA后对预致敏淋巴细胞活化的影响.结果:SAP基因注射可有效干预小鼠SLE样综合征的发生,SAP与活化淋巴细胞DNA结合后可明显促进巨噬细胞对DNA的吞噬,并且巨噬细胞吞噬SAP结合的DNA后不引起预致敏淋巴细胞的增殖.结论:提示SAP通过促进DNA等自身抗原的有效清除干预SLE疾病的发生.
关键词： 血清淀粉样P成分(SAP) DNA 系统性红斑狼疮 基因注射 -
新生大鼠缺氧缺血性脑损伤caspase-3表达与自由基损伤机制的研究
目的：：研究缺氧缺血性脑损伤( HIBD）新生大鼠caspase-3表达与自由基损伤的机制。方法：建立7日龄新生大鼠HIBD模型，分为HIBD组和假手术组，两组分别于HI后6、12、24、48、72、96 h取脑组织，应用TUNEL法检测神经细胞凋亡，免疫组织化学法检测caspase-3蛋白的表达，硫代巴比妥酸法测定丙二醛( MDA）含量，黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶( SOD）含量。结果：HIBD组神经细胞凋亡数量及caspase-3的表达量6 h开始增多，48 h达高峰，各时间点两者均显著高于假手术组(P＜0.05）。 HIBD组MDA含量6 h增高，24 h达高峰，各时间点均较假手术组增高(P＜0.05）。 HIBD组SOD含量6 h下降，24 h降至低，各时间点均较假手术组降低(P＜0.05）。凋亡细胞数量与caspase-3蛋白表达量和MDA含量均呈正相关(r＝0.748、0.654，P均＜0.05），与SOD含量呈负相关(r＝-0.576，P＜0.05）。结论：HIBD时自由基损伤促进caspase-3的表达及神经细胞的凋亡。
-
MMP-9及HIF-1α在鼻NK/T细胞淋巴瘤表达中的作用研究
目的：研究鼻NK/T细胞淋巴瘤组织中基质金属蛋白酶-9（MMP-9)、缺氧诱导因子-1a（HIF-1a)的表达情况及其与患者临床病理特征的关系。方法：选取右江民族医学院附属医院经病理检查确诊为鼻NK/T细胞淋巴瘤患者，收集病理组织蜡块标本46例（病例组)、同期内镜检查取鼻甲黏膜组织经病理学证实为黏膜慢性炎症标本20例（对照组)，分别采用HE染色法和免疫组织化学法处理两组标本，观察两组标本的病理形态、MMP-9及HIF-1a的表达差异，并分析其与患者临床病理特征的关系。结果：病例组的HIF-1α表达阳性率67．39%（31/46)、对照组表达阳性率为6．52%（3/20)，病例组的HIF-1a表达显著的高于对照组（P<0．05)。病例组的MMP-9表达阳性率71．74%（33/46)、对照组表达阳性率为6．52%（3/20)，病例组的MMP-9表达显著的高于对照组（P<0．05)。 HIF-1a、MMP-9在阳性表达在Ann Arbor分期（Ⅲ~Ⅳ期)、发生淋巴结转移、血管浸润鼻NK/T细胞淋巴瘤患者的患者组织中出现高表达（ P<0．05)。结论：鼻NK/T细胞淋巴瘤患者组织中HIF-1α、MMP-9呈现高表达，并且与患者发生Ann Arbor分期（Ⅲ~Ⅳ期)、发生淋巴结转移、血管浸润具有一定的关系。
-
雌二醇对系统性红斑狼疮小鼠模型肾组织芳香酶表达的影响
目的:研究雌二醇对系统性红斑狼疮(Systemic lupus erythematosus,SLE)小鼠模型肾组织芳香酶表达的影响.方法:BALB/c小鼠卵巢切除后采用ConA活化的同系脾细胞诱导SLE,同时给予不同剂量苯甲酸雌二醇,并设立对照组.于4、6、8和10周用ELISA法检测外周血和肾组织雌二醇(Esaadiol,E2)水平,RT-PCR检测肾组织芳香酶mRNA的表达.结果:SLE模型小鼠外周血和肾组织E2水平随着外源性给予苯甲酸雌二醇剂量的加大而升高,与未进行SLE模型诱导的小鼠相比较,SLE模型鼠外周血和肾组织E2水平升高(P＜0.05);正常BAIB/c小鼠肾组织芳香酶mRNA低表达;随着SLE炎症的诱导及E2水平的升高,肾组织芳香酶mRNA的表达增加.结论:E2通过促进SLE小鼠模型肾组织芳香酶mRNA的表达影响SLE发生发展.
