中国医药生物技术杂志
Chinese Medicinal Biotechnology 중국의약생물기술
- 主管单位： 中华人民共和国卫生部
- 主办单位： 中国医药生物技术协会
- 影响因子： 0.36
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 1673-713X
- 国内刊号： 11-5512/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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基因Hath1表达对结肠癌细胞的抑制作用
目的 研究 Hath1 基因对结肠癌细胞体外增殖的抑制作用.方法 用trizol试剂提取肿瘤细胞总RNA,定量逆转录PCR法检测Hath1在结肠癌细胞和正常组织细胞中的表达:MTS和流式细胞仪法分别检测Hath1在结肠犏细胞中的增殖率和凋亡百分率:构建IEC-6稳定表达Hath1siRNA细胞系,检测Hath1 siRNA 对IEC-6细胞生长的影响.结果 在正常人的小肠与结肠组织及大鼠小肠上皮细胞IEC-6中有着比较高水甲的Hath1的表达,而在4株结肠癌细胞中Hath1的表达都很低.在表达Hath1的4株结肠癌细胞SW480、HT29、LS174T、SW620中,其细胞增殖率分别被抑制了38.5%、23.4%、55%、35.6%.在LS174T细胞中Hath1不能有效地诱导肿瘤细胞发生凋亡,但是可以显著地提高肿瘤细胞对化疗药物的敏感性.siRNA 干扰试验进一步证明了Hath1起到肿瘤抑制基因的作用.结论 Hath1不能有效地诱导肿瘤细胞发生凋亡,但是可以显著地提高肿瘤细胞对化疗药物的敏感性.
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以Apo A-Ⅰ为靶点的基因表达上调剂筛选模型的建立
目的 建立靶向人Apo A-Ⅰ转录调控序列的高通量药物筛选模型,用于筛选Apo A-Ⅰ基因表达上调剂.方法 以人基因组DNA为模板,PCR扩增Apo A-Ⅰ上游的启动子序列,克隆至荧光素酶报告基因质粒pGL4.17上游,采用脂质体介导的方法将重组质粒转染人肝癌细胞HepG2,在G418抗性存在的条件下,通过有限稀释法筛选稳定转染细胞株.对溶剂浓度和药物作用时间进行条件优化,应用阳性化合物染料木素评价模型有效性,通过检测荧光素酶的表达活性变化来筛选人Apo A-Ⅰ基因表达上调剂.结果 通过PCR成功扩增了人Apo A-Ⅰ基因上游的启动予序列,构建了相应的重组荧光素酶报告基因质粒pGL4-ApoP,并建立稳定转染细胞株ApoP-Luc HepG2.对筛选条件优化后,应用阳性化合物进行评价,筛选窗相关系数Z'因子为0.68,大于0.5,适于进行高通量筛选.应用该筛选模型对5000余种化合物进行筛选,4个黄酮类化合物和白藜芦醇显示出较好的活性,半数有效浓度均小于10μg/ml.结论 成功建立了人Apo A-Ⅰ基因表达上调剂筛选模型,并利用该模型筛选到5个活性化合物.
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Ubc9基因重组腺病毒的构建及其在HeLa细胞中的表达
目的 构建携带Ubc9基因的重组腺病毒质粒pAdEasy-1/Ubc9,制备含13bc9基因的重组腺病毒Ad-Ubc9,并使Ubc9在HeLa细胞中高效表达.方法 PCR法扩增目的 Ubc9基因:用pemⅠ酶切将穿梭质粒pAdTrack-CMV-Ubc9线性化;将线性化的穿梭质粒pAdTrack-CMV-Ubc9与腺病毒骨架质粒pAdeasy-1在感受态BJ5183菌内进行同源重组,筛选阳性重组子pAdEasy-1/Ubc9;再用PacⅠ酶切pAdEasy-1/Ubc9使之线性化,线性化的重组腺病毒质粒经脂质体转染HEK293细胞,进行重组腺病毒的包装和扩增.收集重组腺病毒,感染HeLa细胞,用Western blot方法检测Ubc9在HeLa细胞中的表达.结果 通过Pac Ⅰ酶切证实携带Uboc9基因的腺病毒载体构建成功,包装出携带Uboc9基因的腺病毒能有效感染HeLa细胞.结论 利用细菌内同源重组方法成功地构建了携带Ubc9的重组腺病毒载体,并能在HeLa细胞中高效表达.
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重组质粒PUDK-PmL-IR-GM的体内免疫激活作用
目的 构建携带融合蛋白基因PSA-IZ-mCD40L(PmL)和GM-CSF基因的重组质粒载体pUDK-PmL-IR-GM,并评价其小鼠体内免疫激活作用.方法 采用类似基因合成的方法将前列腺特异性抗原基因、异亮氨酸拉链基因和鼠源性CD40配体基因连接并扩增获得融合蛋白基因PmL.将GM-CSF、PmL和核糖体内部进入位点基因依次克隆到DUDK载体,获得重组质粒pUDK-PmL-IR-GM.分别于第1、11、21和35天免疫小鼠,末次免疫后10 d分离小鼠脾脏T淋巴细胞.采用流式细胞术检测T淋巴细胞亚群:MTT法检测前列腺特异性抗原刺激下的T淋巴细胞增殖效应;非放射性细胞杀伤检测试剂盒检测对LNCaP细胞的特异性杀伤作用.结果 PCR成功扩增GM-CSF基因和融合蛋白基因PmL,并将其克隆至pUDK载体上,以核糖体内部进入位点连接,得到重组质粒 pUDK-PmL-IR-GM.pUDK-PmL-IR-GM免疫小鼠后,T淋巴细胞性能检测显示:CD4+T淋巴细胞与CD8+T淋巴细胞的比值较对照组明显升高(P<0.05);前列腺特异性抗原刺激后,其增殖能力明显增强(与阴性对照相比,P<0.01),且明显高于其他免疫组(P<0.01):其对LNCaP细胞杀伤效率大于25%,且明显强于pUDK免疫组(P<0.05).结论 成功构建重组质粒载体pUDK-PmL-IR-GM,并证实其能在一定程度激活小鼠T淋巴细胞的特异性免疫反应.
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注射用头孢拉宗钠的体内外抗菌活性研究
目的 评价注射用头孢拉宗钠的体内外抗菌活性.方法 选取663株临床分离致病菌为实验菌,以头孢美唑、头孢西丁、头孢替坦、头孢米诺、头孢唑啉、头孢呋辛、头孢哌酮、头孢吡肟为对照药物,分别采用平皿二倍稀释法测定药物低抑菌浓度(MIC)、低杀菌浓度(MBC)、绘制杀菌曲线(KCs)并行诱导耐药实验,观察头孢拉宗的体外抗菌作用;建立小鼠腹腔感染模型,评价头孢拉宗皮下给药对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、肺炎克雷伯杆菌感染小鼠的体内疗效.结果 头孢拉宗对多种革兰阴性菌具有较高的抗菌活性,尤以对大肠埃希菌和肺炎克雷伯杆菌的抗菌活性更为突出,其MIC50、MIC90分别为0.5、8μg/ml,对产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌和肺炎克雷伯杆菌的抗菌活性也较强,其MIC50、MIC90分别为4、8 μg/ml;头孢拉宗对革兰阴性菌的抗菌作用大多优于头孢西丁、头孢美唑、头孢唑啉、头孢哌酮、头孢替坦和头孢呋辛,而对革兰阳性菌的抗菌活性较弱,与头孢替坦和头孢米诺相近.MBC和KCs测定结果表明,头孢拉宗对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、肺炎克雷伯杆菌均具有杀菌作用.以1/4 MIC剂量诱导20 d后,头孢拉宗对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌和肺炎克雷伯杆菌的抗菌活性无明显改变.头孢拉宗皮下给药对大肠埃希菌ATCC25922、大肠埃希菌1515、肺炎克雷伯杆菌7、肺炎克雷伯杆菌9613感染小鼠的体内疗效明显优于头孢美唑和头孢唑啉(均P<0.01);对金黄色葡萄球菌感染小鼠的体内疗效与头孢美唑相近(P>0.05),但弱于头孢唑啉(P<0.01).结论 注射用头孢拉宗钠对多数革兰阴性菌,特别是大肠埃希菌和肺炎克雷伯杆菌具有较强的体外抗菌活性;同时对大肠埃希菌、肺炎克雷伯杆菌、金黄色葡萄球菌腹腔感染小鼠的体内疗效也较好.
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雌激素对人脐带来源间充质细胞骨架和超微结构的影响
目的 研究在17β-雌二醇(E2)作用下人脐带间充质干细胞骨架、超微结构的形态学变化,并分析其骨架蛋白的表达情况及其可能的机制.方法 用三酶法分离培养人脐带问充质干细胞,流式细胞仪检测所得细胞表型.E2处理48 h后,用激光共聚焦显微镜观察肌动蛋白和纽蛋白的表达情况;用透射电子显微镜观察细胞超微结构的变化.结果 分离得到的人脐带间充质干细胞纯度达到95%以上;E2对肌动蛋白的形成和分布没有影响,但使纽蛋白的分布集中于核周:在E2作用下,人脐带问充质干细胞出现老化,自噬体增多,线粒体出现代偿性增加.结论 E2能改变人脐带间充质干细胞的细胞骨架和超微结构,从而可能影响其功能.
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戊型肝炎与疫苗
戊型肝炎是一种由戊型肝炎病毒(hepatitis E virus,HEV)引起的急性胃肠道传播的传染病.戊型肝炎的症状与甲型肝炎类似,但病死率更高,症状更重,对孕妇、胎儿、老年人和慢性肝病患者的危害更大.孕妇病死率高达15%～25%",幸存的孕妇极易发生流产、早产和死胎.早在1955年12月,印度新德里由于自来水水源受患者或动物粪便污染,引起29 000例黄疸型肝炎流行.
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固体脂质体纳米粒制备方法的研究进展
固体脂质纳米粒(solid lipid nanoparticles,SLN)又称固体脂质体,是一种室温下为固态的天然或合成的脂质体或类脂纳米粒子.SLN的研究始于20世纪90年代,是一种以硬脂酸、卵磷脂、三酰甘油等脂类原料为基质,将药物包裹于类脂核中制成50～1000nm粒径的固体脂质粒子给药体系.
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维护国家生物安全的新思考
现代生物科技是指人们以现代生命科学为基础,结合先进的工程技术手段和其他基础学科的科学原理,按照预先的设计改造生物体或加工生物原料,为人类生产出所需产品或达到某种目的[1].现代生物科技在揭示生物特征规律、造福人类的同时,也使得传统生物安全问题呈现出新的特点.
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新型细胞色素P450氧化酶的发现与筛选
细胞色素P450是一类被广泛研究的依赖于血红素的氧化酶,因它在还原状态下能与CO结合形成复合物,在450 nm附近有大吸收峰而命名为细胞色素P450[1].P450首先在哺乳动物肝微粒体中被发现.迄今为止,已经命名的P450有12 000多个.P450广泛分布于真核生物和原核生物中,在内源和外源化合物的代谢中发挥重要作用[2].
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合成生物学的特征及应用
20世纪,人们对生命的认识逐步深入,通过以分子生物学为核心的技术方法诠释如遗传、发育、疾病及进化等生命现象,获得了大量关于基因和蛋白质等生命体基本组成元件的结构和功能信息.扎根在这样的知识土壤中,以天然的生物元件为素材,以分子生物学和遗传工程等现代生物技术为支撑平台,在寻求思维和技术创新的需求下,合成生物学(synthetic biology)研究破土而出.
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优化反向PCR法对hTF转基因小鼠整合位点旁侧序列分析
自1982年世界上首次通过转基因动物技术获得"巨鼠"[1]以来,转基因动物的研究发展迅速.随着多种转基因动物的成功获得,研究者设想利用动物表达外源基因,以动物个体作为一个反应器来生产有价值的蛋白质.
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永州黄姜提取物抗肿瘤效果研究
黄姜学名盾叶薯蓣(Dioscorea Zingiberensis C.H.Wright),为薯蓣科薯蓣属(Dioscrea.L)草质缠绕性藤本植物[1].黄姜提取物中主要活性成分为薯蓣皂苷(Diosgenin),又称薯蓣皂素.研究表明,薯蓣皂苷具有溶血、降血脂、抗菌、消炎、脱敏、修复病变组织、刺激肝素细胞生长及促进胆汁分泌等作用[2].近年来国内外学者对薯蓣皂苷作为甾体激素药物和甾体避孕药的主要中间体的研究较多,但对其抗肿瘤的效果研究甚少,特别是对湖南省黄姜主要产区永州出产的黄姜暂无系统研究.本文以永州的黄姜为原材料,以其提取物进行体外抗肿瘤的实验.
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我国生物专利申请中的问题分析和应对研究
编者按知识产权,特别是专利在促进我国医药生物技术研发和产业发展中的作用是不言而喻的.尤其是我国加入世贸组织以后,医药企业实现由仿制向自主创新的模式转变将成为大势所趋,为了能及时有效地保护科研成果,申请专利是佳选择.为了帮助广大医药工作者了解医药及生物领域知识产权保护的政策和法规细则,提高发明专利申请文件的撰写质量,了解专利局的审查实践,更好地做好专利申请工作,我刊特邀了中国专利技术开发公司及相关专家撰写了系列讲座,希望能够对医药企业,科研院所的相关工作人员提供一定的帮助.
