病毒学报杂志
Chinese Journal of Virology 병독학보
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表达猪圆环病毒2型Cap蛋白重组复制缺陷型人5型腺病毒的构建及小鼠免疫试验
构建表达猪圆环病毒2型Cap蛋白重组复制缺陷型人5型腺病毒,评价其对小鼠免疫效果.本研究将编码PCV2-Cap蛋白的ORF2克隆到腺病毒表达系统穿梭质粒,构建了重组穿梭质粒pacAd5CMV-Cap.将被限制性内切酶PacⅠ线性化后的骨架质粒和重组穿梭质粒共转染HEK293AD细胞,两者在真核细胞内同源重组并包装出携带PCV2-Cap基因的复制缺陷型重组人5型腺病毒,命名为rAd5-Cap;以同样方法重组获得了不含任何靶基因的野生型重组腺病毒wt-rAd5.病毒增殖稳定后,rAd5-Cap与wt-rAd5滴度可达到108.5 TCID50/mL左右;一步增殖实验证明,相对于wt-rAd5,rAd5-Cap中Cap基因的引入几乎没有给重组腺病毒增殖造成影响.RT-PCR和间接免疫荧光实验显示,rAd5-Cap能够有效介导PCV2-Cap蛋白在真核细胞HEK293AD细胞中表达.以107TCID50的rAd5-Cap肌肉注射接种小鼠,14d后小鼠血清中产生可检测水平的针对Cap蛋白的体液免疫应答,并且至少在免疫后28d之前抗体水平持续加强.对重组腺病毒的分子生物学鉴定和在小鼠上的初步免疫试验结果表明,重组腺病毒rAd5-Cap可介导Cap蛋白在真核细胞中的表达,并且表达的靶蛋白具有较好的免疫原性,为进一步将其开发成新型PCV2疫苗奠定了基础.
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RelB对HIV-1 Vpr转录激活及诱导细胞G2/M期停滞功能影响的初步研究
Vpr是人类免疫缺陷病毒(Human Immunodeficiency Virus type 1,HIV-1)的辅助蛋白之一,在病毒复制及AIDS进程中起重要作用.为了研究Vpr完成其生物学功能的分子机制,本研究利用酵母双杂交技术,从人的cDNA文库中筛选,并经免疫共沉淀技术证实NF-κB通路中的重要蛋白RelB与Vpr存在相互作用;发现RelB蛋白能促进Vpr介导的对NF-κB报告基因的激活,也能促进Vpr对HIV-1 LTR的反式激活作用.利用流式细胞技术发现RelB促进Vpr诱导细胞周期G2/M期停滞.上述结果表明,RelB辅助Vpr完成其转录激活以及调控细胞周期的功能.
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采用高通量测序技术分析尾病毒目噬菌体基因组末端序列特点
证明噬菌体高通量测序中高频出现的序列即是噬菌体基因组的末端序列.在T3噬菌体基因组末端连接特异性序列接头,然后进行高通量测序,同时将不加接头的T3基因组也进行高通量测序,对测序结果进行生物信息学比较分析.采用类似高通量测序技术分析N4样噬菌体的全基因组序列.加接头的序列与无接头序列中的高频序列完全一致,证明了高通量测序过程中得到的高频序列就是加接头的基因组末端序列,同时证明T4样噬菌体的末端具有序列特异性而非完全随机,此外我们还发现N4样噬菌体基因组左侧末端具有唯一序列,而其基因组右侧末端不均一.高通量测序技术方便快捷,可用于噬菌体基因组末端和全基因组序列的同时测定.
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家蚕质型多角体病毒荧光定量PCR检测方法的建立
根据GenBank报道的家蚕质型多角体蛋白基因的保守序列设计特异性引物扩增118 bp核苷酸片段,使用含有目的基因片段的重组质粒标准品绘制标准曲线,建立家蚕质型多角体病毒的实时荧光定量PCR检测方法.结果表明,标准曲线中模板拷贝数(X)与Ct值(Y)关系为Y=-3.582 lgX+38.748,相关系数R2=0.999,构建的实时荧光定量PCR检测方法具有良好的敏感性、特异性和重复性,可用于家蚕质型多角体病毒病的快速检验及该病的流行性调查研究.
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中国国内首次发现Nam Dinh病毒
2009~2011年,课题组在深圳市龙岗区的致倦库蚊标本中检测到我国首株Nam Dinh病毒(Nam Dinh Virus,NDiV).本研究通过细胞培养、SYBR Green Ⅰ实时定量荧光RT-PCR和RT-PCR方法对深圳NDiV的细胞易感性和分子进化特征进行分析.结果发现4批致倦库蚊标本可以引起C6/36细胞病变.4株深圳分离株的SYBR Green Ⅰ实时定量荧光RT-PCR检测结果均出现“S”型扩增曲线与特异性的熔解曲线.对分离株的RNA依赖的RNA聚合酶(RNA-dependent RNA polymerase,RdRp)基因与部分ZmHell (Zn module+ Superfamily 1 Helicase)基因进行扩增均可以在2%琼脂糖电泳显示到目的条带.4株深圳分离毒株的RdRp基因核苷酸和氨基酸序列与越南代表株NDiV(02VN178)的同源性均达99%以上.系统进化树分析表明,4株深圳NDiV株与越南NDiV代表株的亲缘性近,属于同一个进化分支上.据文献检索表明,本文发现的NDiV为国内首次报道.
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猪繁殖与呼吸综合征病毒HuN4-F112弱毒株NSP2区表达猪瘟病毒E2基因表位的研究
建立共表达猪瘟病毒(Classic swine fever virus,CSFV) E2蛋白主要中和性抗原表位基因的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)反向遗传操作平台,为进一步研究PRRSV作为病毒载体提供实验数据.本研究在PRRSVHuN4-F112疫苗株感染性分子克隆的基础上,采用突变PCR技术将CSFV E2蛋白的主要中和性抗原表位基因插入HuN4-F112弱毒株PRRSV已鉴定出的两个NSP2蛋白的复制非必需区,经基因片段的克隆、拼接,构建了两株含有CSFV E2蛋白的主要中和性抗原表位基因的感染性PRRSV cDNA克隆psk-HuN4-F112-Δ508-532+ E2和psk-HuN4-F112-Δ480-532+ E2.用限制性内切酶Swa Ⅰ分别将两株共表达的感染性克隆线性化,之后通过细胞外转录获得病毒RNA,用脂质体法分别将病毒RNA转染BHK-21细胞包装出病毒粒子,再分别将其转接到MARC-145细胞传代拯救出两株病毒.分别对两株拯救病毒进行RT-PCR扩增、酶切和序列分析鉴定.结果表明,两株拯救病毒含有不同于亲本病毒的分子标记(拯救病毒基因组的14 667位因同义突变产生的MluⅠ酶切位点)和插入基因序列.间接免疫荧光试验表明,CSFV E2蛋白主要中和性抗原表位基因均能在两株拯救的PRRSV中表达,且能够在其传代过程中稳定遗传.病毒生长特性结果比较显示两株拯救病毒与亲本病毒在MARC-145细胞上具有相似的增殖特性.本研究构建了两株共表达CSFV E2蛋白主要中和性抗原表位基因的PRRSV感染性克隆并获得了拯救病毒,且外源基因能在拯救病毒中稳定表达,为进一步开发新型PRRSV二联疫苗提供了有效的反向遗传操作平台.
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稳定表达流感病毒基质蛋白2的哺乳动物细胞系的建立
本研究构建了稳定表达甲型流感病毒基质蛋白2(M2)的哺乳动物细胞系.应用PCR方法扩增A/PR/8/34(H1N1)株流感病毒M2基因,将其克隆至真核表达载体pcDNA5/FRT(pDF)上,构建出pDF-M2重组质粒.将鉴定正确的pDF M2与表达Flp重组酶的pOG44质粒共转染Flp-In-CHO细胞,通过体内同源重组使目的基因整合到宿主细胞染色体上.筛选具有Hygromycin B抗性的重组细胞株命名为CHO-M2.以间接免疫荧光法(IFA)和Western blot法检测M2的表达,共获得15株高表达M2蛋白的重组细胞株.这些重组细胞株在连续培养10代后,PCR方法仍可检测到M2基因的存在,IFA也检测到蛋白的稳定表达.本研究成功获得了稳定表达甲型流感病毒M2的哺乳动物细胞系,为M2蛋白的功能研究和非复制型流感病毒疫苗的研制提供了新的工具.
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贵州省2011年急性胃肠炎诺如病毒的哨点监测及其基因特征分析
为了解贵州省2011年诺如病毒的基因型,监测了2011年5月至12月于贵州省人民医院就诊的急性胃肠炎病例,收集粪便标本,采用荧光定量逆转录-聚合酶链反应(Real-time RT-PCR)初步鉴定,并对阳性株的VP1基因区克隆及测序.检测标本70份,GⅠ型诺如病毒阳性1株,阳性率1.43%,GⅡ型诺如病毒阳性34株,阳性率48.57%,获得7份GⅡ型诺如病毒VP1基因序列,3株为GⅡ.4亚型,为新型变异株(GⅡ4 2011),与GⅡ4 2006b变异株的亲缘关系近,有1个氨基酸位发生了回复突变;4株为GⅡ.3亚型,分为2个基因簇,1簇与2008~2009年韩国株(HM635118)及上海株(GU991355)的亲缘关系近,1簇与2010年日本株(AB629943)及2007年印度株(EU921389)等的亲缘关系近,有4个氨基酸位点易发生回复突变.
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2011~2012年度中国B型流感病毒病原学特征分析
为了解本监测年度我国B型流感病毒的流行特点,明确流行株与国际疫苗株和国内代表株的匹配情况,本文对2011年4月至2012年3月流感监测年度中国大陆流感监测网络分离的B型流感毒株进行了抗原性和基因特性研究.结果表明2011年4月至2012年3月我国大陆B型流感病毒主要以Victoria系流感病毒为主,Victoria系病毒主要位于分支1,并且存在着HA1与NA基因分支间的重配,但不同分支间抗原性无显著差异,72.8%的病毒与本年度使用的疫苗株B/Brisbane/60/2008疫苗株抗原性类似.本监测年度疫苗组分中不含有Yamagata系组分,大部分Yamagata系流感病毒中与国内代表株B/湖北伍家岗/158/2009 (97.8%)和B/四川安岳/139/2011(85.2%)抗原性类似;基因特性分析显示绝大部分流行的B型Yamagata系流感病毒均与B/湖北伍家岗/158/2009和B/四川安岳/139/2011在同一分支,且没有发现HA1与NA基因分支间重配的病毒.上述监测结果表明本年度所使用的疫苗株与我国流行的病毒匹配,我们所筛选的国内代表株能够代表我国各地流行株的病原学特征.
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细胞自噬与病毒感染
自噬是广泛存在于真核细胞内的一种溶酶体依赖性降解途径,在维持细胞存活、更新、物质再利用和内环境稳定中起着重要作用.目前已经发现大量新的自噬相关基因,同时发现自噬在病毒感染过程中发挥着重要的抗病毒作用:自噬可以将胞质中的病毒转运到溶酶体中,降解病毒;也可以将病毒核酸转运至胞内感受器上激活天然免疫;还可以将病毒抗原递呈给MHCⅡ类分子激活适应性免疫.自噬参与胞内微生物感染具有双重作用.一方面,自噬能够降解入侵的微生物,即以异源吞噬(xenophagy)的方式清除胞内的病原体;另一方面,有些微生物能够通过某些机制逃避自噬而利于自身存活.本文就细胞自噬及其与不同病毒感染关系的新研究进展进行综述.
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逆转录病毒及逆转录酶检测方法研究评述
逆转录病毒常被作为载体,用于目的蛋白的表达或目的基因的嵌合.尽管,实验室选用的都是非感染性病毒,但并不能排除这些病毒不会对人类造成伤害.逆转录病毒的监督和检测具有非常重要的意义.逆转录酶活性又是逆转录病毒存在活性的重要标志.因此,本文将有关逆转录病毒及逆转录酶检测的方法做一综述,望对研究者有参考意义.
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埃博拉病毒侵染细胞机制的研究进展
埃博拉病毒能在人类和非人灵长类中引起严重的埃博拉出血热,病死率可高达90%,并且目前还没有针对埃博拉病毒有效的疫苗或者是治疗手段.面对埃博拉病毒带来的挑战,针对埃博拉病毒的相关研究已经成为病毒学的热点问题.其中,关于埃博拉病毒侵染细胞机制的科学研究对于开发病毒疫苗以及新型治疗药物有非常关键的作用.因此,本综述拟就埃博拉病毒侵染细胞机制方面的研究进展进行总结.
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人巨细胞病毒博弈宿主免疫进展
人巨细胞病毒(HCMV)感染在人群中极其普遍,病毒一旦侵入机体,将长期存在于体内,且具有潜伏-活化的生物学特性.在病毒与宿主共同进化的漫长过程中,病毒靶向性的产生了多种免疫逃避机制,通过编码病毒自身免疫调节分子,参与调控机体主要组织相容性复合体、细胞免疫、体液免疫、细胞因子及趋化因子等方面的功能,以躲避宿主的免疫杀伤作用.HCMV的免疫调节基因被认为在病毒的致病机制中扮演重要角色.本文将对近年来有关HCMV的免疫调控机制研究作一综述,从病毒编码的免疫调节分子功能的角度并结合本实验室的相关研究成果,探讨病毒与宿主免疫的相互作用过程,从病毒干预宿主免疫关键分子作用的角度映射机体对抗病毒的免疫机理.
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新近发现的冠状病毒研究进展
冠状病毒是自然界中广泛存在的一大类家族,人和多种动物易感.人冠状病毒感染后,通常引起普通感冒症状,严重者能造成死亡.冠状病毒广泛的宿主性以及自身基因组的结构特征使其在进化过程中极易发生基因重组,呈现遗传多样性;新亚型及新的冠状病毒在此过程中不断出现.本文针对新近出现的冠状病毒,尤其是SARS样冠状病毒(SARS-like-CoVs)以及2012年发现的新型人冠状病毒EMC (HCoV-EMC)的基因组结构特征及冠状病毒跨种属传播机制的新研究进展作简要论述.
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人博卡病毒及其在中国的流行现状
人博卡病毒(Human bocavirus,HBoV)属于细小病毒科,博卡病毒属.HBoV是除细小病毒B19和人细小病毒4(Human parvovirus,PARV4)外,目前所发现的与人类疾病有关的细小病毒之一.至今已有4种不同的HBoV相继报道,分别为HBoV1、HBoV2、HBoV3和HBoV4.HBoVs感染的发生率差异较大,且患者的临床表现各不相同,常与其它病原体共检出.本文就有关HBoVs的报道,从HBoVs的生物学性状、流行特征、致病机制、系统进化分析及其在我国的流行现状进行了阐述和讨论.
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2011 | 01 02 03 04 05 06 |
2010 | 01 02 03 04 05 06 |
2009 | 01 02 03 04 05 06 z1 |
2008 | 01 02 03 04 05 06 |
2007 | 01 02 03 04 05 06 |
2006 | 01 02 03 04 05 06 |
2005 | 01 02 03 04 05 06 |
2004 | 01 02 03 04 |
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2000 | 01 02 03 04 |
1999 | 04 |