病毒学报杂志
Chinese Journal of Virology 병독학보
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乙型脑炎病毒毒力基因定位的研究进展
乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)属于黄病毒科(Flaviviridae),简称乙脑病毒.该病毒能引起人类的急性脑炎,致死率在20%左右,另有50%的患者会遗留神经系统方面的后遗症.乙脑病毒流行于亚洲及太平洋地区,有季节性的特点,一般蚊虫滋生的7、8、9月是其发病高峰期.每年在亚洲的乙脑病例有50 000例左右,其中致死的有上万人之多,是亚洲公共卫生的一个大问题[1],因而对乙型脑炎病毒功能与结构的研究,尤其是对影响其毒力的功能域的定位,多年以来都是研究的热点.
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在传染性非典型肺炎患者组织和血液中发现冠状病毒
用RT-PCR从广东两例传染性非典型肺炎(非典型肺炎)死亡病例的肺和脾标本中,以及北京、辽宁和宁夏非典型肺炎患者血清中,扩增出冠状病毒核苷酸序列.这些PCR产物为冠状病毒RNA聚合酶基因部分片段,所有测定的序列和国内外SARS病毒序列相同.这些发现提示,冠状病毒和非典型肺炎关系密切,有助于确定我国非典型肺炎的病因.所建立的套式PCR方法可以用于检测临床标本.由于血液中存在SARS病毒,进行血清操作时需要注意安全保护.
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人源抗严重急性呼吸综合征(SARS)病毒基因工程抗体的初步研究
严重急性呼吸道综合征(severe acute respiratory syndrome,SARS)或称传染性非典型肺炎,已严重威胁人民健康和生命安全.快速研制一种可用于紧急预防SARS病毒感染的基因工程抗体预防制剂迫在眉睫.为此,运用噬菌体表面呈现技术,从多个SARS病人恢复期血中获得淋巴细胞,通过基因工程手段,构建了人源抗SARS病毒基因工程抗体文库,并筛选获得37株特异抗SARS病毒基因工程Fab抗体,其中11株人源抗体结合基因工程重组的SARS病毒核(N)蛋白,其中的1株在Western blot分析中与SARS病毒结合,识别SARS病毒N蛋白线性位点.对所获抗体的功能鉴定及基因分析正在进行中.人源抗SARS病毒基因工程抗体的获得,将对SARS疾病的特异性预防,治疗和诊断提供新的途径.
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抗汉坦病毒核蛋白单链抗体的构建与表达
汉坦病毒核蛋白在病毒各个基因组片段核糖核蛋白(RNP)复合物的形成,以及RNP复合物装配入病毒颗粒中发挥重要作用.体外研究表明,核蛋白与病毒RNA的特异性结合结构域位于第175～217个氨基酸残基,羧基端其它部分为非特异性结合结构域.为了在细胞内病毒复制的正常过程中研究核蛋白的功能,应用噬菌体表面呈现技术,分别从鼠杂交瘤细胞和人外周血淋巴细胞天然抗体库中,筛选出两株不同抗原结合位点的抗汉坦病毒核蛋白抗体L13 F3和H34Fab抗体,并在大肠杆菌中进行表达.L13 F3 Fab抗体的抗原结合位点位于核蛋白氨基端25～65个氨基酸之间,H34的抗原结合位点位于核蛋白的羧基端的一半.分别使重链可变区羧基端与轻链可变区氨基端通过9个氨基酸寡肽连接起来,构建成单链抗体,并在大肠杆菌内进行表达.通过酶联免疫吸附试验(ELSIA)、间接免疫荧光试验(IFA)和Western blot检测,确定所构建单链抗体与母抗体的抗原结合特性无差别.单链抗体分子量小,易于操作并保留了全部的抗原结合活性,是在细胞内探索汉坦病毒核蛋白功能的良好工具.
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感染性马传染性贫血病毒嵌合克隆的构建
在已有的全长感染性克隆pFD3的基础上,构建了新的低拷贝的全长克隆pLGFD3-8.按照疫苗制备过程中env基因的变化情况,采用基因替换和定点突变的方法,构建了一系列具有马传染性贫血病毒(EIAV)强毒株env基因及其主要突变特征的嵌合克隆.利用这些克隆转染FDD细胞,并用逆转录酶活性检测和PCR方法确定其感染性.结果发现,在FDD细胞中传代3次后,可在细胞培养物中检测到逆转录酶活性和原病毒DNA的存在,在电镜下可以观察到典型的EIAV病毒颗粒.这一结果为进一步研究马传染性贫血病毒致病的分子机制和免疫保护机理奠定了良好的基础.
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狂犬病病毒Vero细胞适应株3aG-V的致病性和免疫原性
狂犬病病毒3aG-V株是3aG-5在Vero细胞适应的毒株,对其在小鼠、豚鼠、家兔、犬的不同感染途径的致病性,小鼠、豚鼠、兔子上的免疫原性进行研究,同时进行纯毒及在中枢神经系统中能否形成尼氏小体试验,结果表明:狂犬病病毒3aG-V株潜伏期较长,在动物脑内不形成尼氏小体,为固定毒,其在实验动物上具有较弱的致病性和较好的免疫原性,可作为纯化Vero细胞狂犬病疫苗的生产用疫苗株.
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鸡传染性法氏囊病病毒超强毒上海株SH95基因组B片段的克隆与分子系统进化树分析
分离、纯化了鸡传染性法氏囊病病毒超强毒(vvIBDV)上海株(SH95)的病毒核酸dsRNA,应用随机引物将RNA反转录成cDNA,以此为模板一步扩增出全长基因组B片段,将其克隆入pGEM-T载体,并进行序列分析.克隆的B片段全长2 827个核苷酸,其编码的氨基酸与超强毒株HK46的同源性达98.18%(863/879).分子系统进化树分析表明,SH95超强毒株与美国变异株E的亲缘关系近,但与基于基因组A片段的系统进化分析完全不同,表明该毒株在发生过程中基因重配比基因重组发挥了更重要的作用.通过对14株IBDV编码氨基酸序列的分析、比较,推测B片段上11个独特的氨基酸位点可能与毒力相关.
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风疹病毒JR23株包膜糖蛋白E2的遗传与变异分析
为了探讨风疹病毒(rubella virus,RV)包膜糖蛋白E2的基因与蛋白的遗传与变异特点,利用DNAstar软件比较JR23株与GenBank中各参考株E2的基因与多肽序列,分析不同RV株E2基因之间的同源性及E2蛋白功能关键区的氨基酸变异.结果表明,RV E2基因序列比较保守,但JR23株E2基因序列与其它9个分离株之间有明显差异,变异主要集中在484nt～554nt.同源性为90.3％～92.6％之间,与美国疫苗株RA27／3同源性高,与美国疫苗株HPV77同源性低,GenBank中的参考株间同源性较高,在96.3％～100.0％之间.E2多肽变异集中于161aa～185aa,但在E2功能关键区,如N端序列、N联糖基化位点、胞质区等则无明显变异.表明RV E2基因序列相对保守,虽然JR23株与GenBank中各参考株的E2基因序列有明显差异,但JR23株E2蛋白在功能关键区表现出遗传稳定性.此结果为阐明RV分子流行病学特征提供了理论依据,也为研究RV分子进化特征及病毒与宿主细胞的相互作用奠定了坚实基础.
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鳜传染性脾肾坏死病毒主衣壳蛋白基因结构及序列分析
分析了鳜传染性脾肾坏死病毒(infectious spleen and kidney necrosis virus,ISKNV)的主衣壳蛋白(MCP)基因结构及其序列.对ISKNV DNA KpnI L酶切片段的序列分析结果发现,该序列中含有完整的MCP基因.ISKNV MCP基因完整读码框为1 362bp,GC含量为56.24%,编码一个长为453aa、分子量为49.61kD、等电点为6.25的推定蛋白.结构分析发现,该基因具有启动子元件TATA框和CAAT基序.根据对虹彩病毒MCP系统进化树和脊椎动物虹彩病毒的生物学特性的分析比较发现,ISKNV、RSIV、SBIV、GIV和ALIV等在养殖海、淡水鱼类中引起其脾、肾、固有层和表皮细胞肿大的虹彩病毒,是独立于蛙病毒属和淋巴囊肿病毒属的又一新脊椎动物虹彩病毒类群.
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肠道病毒71型外壳蛋白VP1在Pichia pastoris酵母中的表达
利用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增肠道病毒71型(EV71)外壳蛋白VP1基因,经序列测定证实后,构建重组表达质粒pPIC9K/VP1,转化Pichia pastoris酵母宿主菌GS115,甲醇诱导表达.SDS-PAGE分析显示:表达产物的分子量约为34kD,与天然VP1大小一致.凝胶薄层扫描分析显示:目的蛋白表达量占培养上清总蛋白的60%以上.ELISA实验表明,重组蛋白VP1具有较好的抗原性.使用饱和硫酸铵分级沉淀法初步纯化的表达产物,能够较特异性地与EV71感染者血清中的抗体产生反应,而且与抗柯萨奇病毒A16特异性抗体不产生反应.通过利用表达产物作为抗原,对156份血清的检测初步证实,重组蛋白VP1可以作为检测EV71感染的的检测用抗原.
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严重急性呼吸综合征(SARS)冠状病毒核蛋白的鉴定与分析
利用蛋白质组学技术,对纯化的严重急性呼吸综合征(SARS)冠状病毒颗粒所含核蛋白进行初步分离与鉴定.质谱分析结果终表明,SARS冠状病毒核蛋白的分子量位于47kD与52kD之间,所获得的SARS冠状病毒核蛋白的质谱分析数据覆盖了所预测病毒核蛋白氨基酸序列的87%,且符合率为100%.从而首次从蛋白质水平对SARS冠状病毒核蛋白的氨基酸序列进行了证实.
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鸡传染性支气管炎病毒H株纤突蛋白S1基因的克隆及其在毕赤酵母中表达
鸡传染性支气管炎病毒(IBV)河南分离株H,经SPF鸡胚增殖,差速离心纯化病毒,SDS-蛋白酶K法抽提病毒RNA.参照IBV Beaudette株纤突蛋白S1基因序列设计并合成引物,以其进行RT-PCR,成功地扩增出IBV H株S1基因.扩增产物经Bst YⅠ、HaeⅢ和PstⅠ酶切分析,结果表明,IBV H株S1基因的RFLP图谱与M41株S1基因的完全一致,初步断定IBV H株为Mass血清型.将IBV H株S1基因克隆于pGEM-T载体中进行序列分析,结果表明该基因全长为1 611bp(从ATG到S前体蛋白裂解位点),与标准株M41和Beaudette的S1基因序列相比较,同源率分别达到97.39%和97.27%.将IBV H株S1基因亚克隆到pPICZ-A表达载体,转化毕赤酵母中,SDS-PAGE实验证实了IBV H株S1基因在毕赤酵母中得以表达,进一步用鸡抗IBV血清做Westernblot检测,证实了表达产物的抗原特异性.
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鸡贫血病毒衣壳蛋白基因克隆、测序和比较
在1979年日本首次报道鸡贫血病毒(chicken anemia virus,CAV)以后,相继在各养禽业发达的国家分离到了CAV[1].我国于1992年哈尔滨兽医研究所在哈尔滨市郊分离到CAV[2],并在其它多个省份用血清学方法检测到该病毒[3].
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鹅源新城疫病毒血凝素-神经氨酸酶基因的序列分析
新城疫病毒(newcastle disease virus,NDV)是副粘病毒科腮腺炎病毒属的成员,基因组全长15 186个核苷酸(nt),编码6种结构蛋白,即基质蛋白(M)、核衣壳蛋白(NP)、磷蛋白(P)、大蛋白(L)、血凝素-神经氨酸酶蛋白(HN)及融合蛋白(F),其中HN和F位于病毒囊膜表面,前者负责识别细胞受体并介导病毒对细胞的吸附,后者则参与病毒的穿透、细胞融合和溶血等过程.NDV可以感染多种禽类,尤其是感染鸡以后可致严重发病,造成重大的经济损失;现有的文献记载一般认为水禽如鸭、鹅对NDV具有较强的抵抗力[1],感染后症状轻微或不表现临诊症状[2].然而1997年以来,我国华东地区部分省市陆续爆发一种被称为"鹅的禽副粘病毒感染"或"鹅副粘病毒病"的传染病[3,4],对养鹅业构成较大威胁.在本病的研究过程中,从江苏、浙江、广东等地的患病鹅群分离到数株NDV,并证实NDV是本病的一种主要病原[5].为进一步研究这些鹅源NDV的生物学特征,探讨其致病机理,我们测定了与NDV致病性和毒力密切相关的囊膜糖蛋白HN的基因序列,并对其进行了比较分析.
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减蛋综合征病毒四川分离株六邻体蛋白基因的序列分析
减蛋综合征(egg drop syndrome 76,简称EDS76)是由腺病毒科禽腺病毒属中Ⅲ群腺病毒,即减蛋综合征病毒(EDSV)引起的传染病,其主要特征是产生薄壳或无壳蛋,产蛋率严重下降.自1976年Van Eck等首次报道以来,我国和其它许多国家及地区都报道了此病的流行,成为当今世界范围内引起产蛋损失的主要原因之一[1,2].近年来,人们对病毒的基因组特性进行了较深入的研究,完成了标准株AV-127和弱毒株AAV-2的全序列测定[3,4].应用限制性核酸内切酶分析对不同毒株的基因组进行了比较,虽然EDSV只有一个血清型,但内切酶分析可将其分为不同的基因型[5].
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SEN病毒D亚型中国分离株基因克隆及序列分析
SEN病毒是新近发现的一种单链环状DNA病毒,无包膜[1].对SEN病毒进行系统发生分析显示有8个型(A～H).初步研究发现其中SENV-D型和SENV-H型可能与输血相关的非A～E肝炎的发生有某些关联[2].我们实验室首次证实在我国也存在SEN病毒感染[3],并对SENV-D型和SENV-H型部分序列进行了测定.在前期工作的基础上,从1例非A～E肝炎患者血清中克隆得到了1株SENV-D型病毒基因,并进行了序列测定.对SENV-D型中国株基因组的克隆分析有助于其检测方法及致病性的研究,并为研究SEN病毒的进化地位提供方便.
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汉滩病毒M片段的核苷酸序列变异和系统发生树分析
汉坦病毒(Hantavirus)是基因组分节段的负链RNA病毒,目前已可分为近20个型,而且有新的型别被不断发现,在我国流行的主要是汉滩型和汉城型,也可能有一些未被发现的其它型别.汉坦病毒不仅型别越来越多,而且即使在一个型别内,也往往存在明显的变异.现已知汉坦病毒和其它一些病毒一样,其基因组变异是一种十分普遍的现象[1,2].为了解湖北地区引起肾综合征出血热(HFRS)的汉滩病毒基因组的变异情况,从而为湖北地区HFRS的致病性、流行规律、HFRS的诊断和疫苗研制提供理论依据.应用RT-PCR和套式RT-PCR和序列分析方法对湖北地区HFRS毒株进行检测,并分别将核苷酸序列和基因组数据库中已知的核苷酸序列进行比较,并进行系统发生树分析.
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山东省玉米矮花叶病毒的生物学特性及基因组全序列测定
对山东省玉米矮花叶病毒原分离物(SD)进行了寄主范围、血清学等普通生物学鉴定,测定了该病毒的基因组核苷酸全序列.该病毒基因组RNA由9 596个核苷酸组成(不包括3′-polyA的长度),整个基因组按一个ORF编码一个3 063个氨基酸的多聚蛋白.序列比较表明,该病毒分离物(SD)与玉米矮花叶病河南分离物(HN,EMBL登录号:AF494510)核苷酸全序列同源性高,为98.2%,与已报道的甘蔗花叶病毒(SCMV)7个分离物同源性也高达79.5%～98.2%,但与玉米矮花叶病毒保加利亚分离物(MDMV-Bg,AJ001691)和高梁花叶病毒萧山甘蔗分离物(SrMV-XoS,AJ310197)的同源性仅为67.8%和69.3%,与约翰逊草花叶病毒(Z26920,JGMV)差异大.系统进化树分析也表明,该病毒与SCMV分离物位于同一进化簇,而与MDMV进化关系很远.
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昆虫抗杆状病毒活性物质的诱导及鉴定
用BmNPV感染家蚕3龄幼虫,取其血淋巴经(NH4)2SO4分级沉淀,得到病毒抑制因子(viral inhibitory factor,VIF)粗制样品Ⅰ和Ⅱ.通过TCID50测定检测其抗病毒活性,结果VIF样品Ⅰ和样品Ⅱ均表现出抗病毒活性.将样品Ⅰ、Ⅱ经DEAE-SepharoseFF柱初步纯化,测得主要活性峰分别为峰c1、峰b2.对样品Ⅰ、Ⅱ进行SDS-PAGE电泳分析表明,样品Ⅰ比其对照样品多出4条带,它们的分子量分别为:83.7kD、65.2kD、43.0kD、32.8kD;而粗VIF样品Ⅱ比其对照样品多出一个组份,并且有3个组份表达量增多,多出的组份分子量为36.0kD.对灭活指数高的峰b2作进一步电泳分析,证明存在5条带,其中有一条带可能是对应于样品Ⅱ上多出的那个组份.基于此初步证明,感染BmNPN的家蚕的免疫血淋巴中产生了抗病毒活性物质.
| 年 | 期数 |
| 2018 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2017 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2016 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2015 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2014 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2013 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2012 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2011 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2010 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2009 | 01 02 03 04 05 06 z1 |
| 2008 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2007 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2006 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2005 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2004 | 01 02 03 04 |
| 2003 | 01 02 03 04 |
| 2002 | 01 02 03 04 |
| 2001 | 01 02 03 04 |
| 2000 | 01 02 03 04 |
| 1999 | 04 |
