病毒学报杂志
Chinese Journal of Virology 병독학보
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
-
全球EV-A71的基因型分布
肠道病毒A组71型(EV-A71)是引起手足口病暴发流行的主要病原体,也是除脊髓灰质炎病毒以外为重要的人肠道病毒病原体.截止2017年2月,全球报道的EV-A71共包括7个基因型(A～G)和14个基因亚型,其中B基因型和C基因型是目前全球流行的优势基因型,目前已鉴定B基因型有8个基因亚型(B0～B7),C基因型有6个基因亚型(C1～C6).C4基因亚型中C4a进化分支是引起中国大陆近年手足口病大规模暴发流行的主要病原之一,也是引起手足口病重症和死亡的绝对优势病原体.本文对全球流行的EV-A71基因(亚)型的地理和年代分布、新基因型的发现进行了系统的归纳分析,为中国检测和监测引起HFMD流行的EV-A71基因型或亚型的动态变化提供基础数据.
-
犬瘟热病毒受体及其跨宿主感染
犬瘟热是由犬瘟热病毒(Canine distemper virus,CDV)感染引起的一种高度接触性传染病,其可跨宿主感染不同科属的多种动物并造成较高的死亡率,因此该病对养犬业、经济动物养殖业和野生动物保护业造成了很大危害.近年来,随着生态环境变化及病毒变异,CDV的宿主范围也不断扩大.目前已鉴定的CDV两种受体—SLAM和nectin-4,分别在宿主免疫细胞和上皮细胞上表达,二者与CDV血凝素(H)蛋白的相互作用是决定CDV跨宿主感染和病毒诱导宿主免疫抑制等致病性的基础.本文就近年来国内外对CDV受体及其跨宿主感染研究进展进行了综述.
-
腺相关病毒的受体研究进展
腺相关病毒的安全与长效特点,使其成为基因治疗中有前景的病毒载体之一.虽然第一个以该病毒为载体的基因药物Glybera已在欧盟获批上市,然而如何进一步提高载体的靶向性与产品纯度仍是当务之急.腺相关病毒的受体是介导病毒与靶细胞结合的分子基础,其与病毒的结合具有很强的特异性,因此相关受体的研究不仅有助于改善基因治疗的靶向性,亦能为高纯度病毒的亲和纯化带来希望.目前已有11种腺相关病毒的受体被发现,本文就其受体的发现过程、结构特点、功能应用等方面展开综述,为今后相关研究提供一些思路.
-
水痘-带状疱疹病毒糖蛋白N的单克隆抗体制备及初步研究
水痘-带状疱疹病毒(VZV)是水痘和带状疱疹的共同致病原,其糖蛋白N(gN)在子代病毒的组装、成熟和出胞过程中发挥重要作用.但是目前关于VZV gN的研究还很少,其蛋白性质和具体分子功能仍不清楚.本研究目的是制备抗VZV gN的单克隆抗体,对该蛋白在VZV感染细胞和人皮肤组织内的表达和分布情况进行初步探究.本研究选择抗原性和亲水性较强的gN区段基因,构建rGST-gN融合蛋白的原核表达质粒,将鉴定正确的重组质粒转化大肠杆菌后用IPTG诱导融合蛋白表达,经亲和层析柱纯化rGST-gN融合蛋白后使用PSP酶切除GST标签,将获得的重组蛋白rgN免疫BALB/c小鼠,使用杂交瘤技术制备其单克隆抗体;共获得24株稳定分泌抗VZVgN单克隆抗体的杂交瘤细胞株,选取其中一株性能优的12E10进行单克隆抗体生产纯化和抗体鉴定;单克隆抗体12E10为IgG2a亚型,其ELISA效价达到1:10 000;通过Western blot、免疫荧光及免疫组织化学染色方法鉴定,该抗体能够特异性识别细胞和组织中表达的VZV gN;本研究应用该抗体首次确定了gN在VZV感染细胞中的反式高尔基体定位,并且确定了gN在VZV感染人皮肤组织中的表达.以上工作为今后深入研究VZV gN功能奠定了基础.
-
基于功率谱的流感病毒蛋白质序列结构分析
基于经典HP模型,本文采用离散傅里叶变换获取蛋白质特征,利用分层聚类方法进行蛋白质序列的结构分析.其目的是将自动信号频谱分析技术与层次聚类方法相结合,并应用到蛋白质序列结构分析中.通过流感病毒HA和NA蛋白质序列的实验结果表明:应用该方法可得到非常好的分类结果.这些研究为基于大数据的蛋白质序列的自动信息提取和结构分析提供基础.
-
膜联蛋白A2对脑心肌炎病毒在BHK-21细胞中增殖的影响
膜联蛋白A2是一种参与调节多种病毒增殖的重要宿主蛋白.本研究通过构建过表达膜联蛋白A2的BHK-Anxa2细胞系及瞬时敲低膜联蛋白A2,探讨膜联蛋白A2对脑心肌炎病毒在BHK-21细胞中增殖的影响.通过RT-PCR从BHK-21细胞中扩增膜联蛋白A2全长cDNA,测序正确后克隆入pcDNA3.1整合表达载体中;用重组载体pcDNA3.1-Anxa2转染BHK 21细胞,经G418筛选获得抗性克隆,qRT PCR和Western blot试验证明BHK-Anxa2过表达膜联蛋白A2;EMCV感染试验证明BHK-Anxa2细胞中病毒滴度高于对照组.通过siRNA降低BHK-21细胞中膜联蛋白A2表达,EMCV感染试验证明膜联蛋白A2表达下降后EMCV增殖也随之下降.以上试验结果表明鼠膜联蛋白A2表达改变可导致病毒在BHK-21细胞中的增殖发生变化,提示膜联蛋白A2与EM-CV在BHK-21细胞中的增殖相关.
-
人冠状病毒OC43易感细胞系的高效筛选
为了筛选获得可用于人冠状病毒OC43 (Human coronavirus OC43,HCoV-OC43)分离与研究的细胞系,本研究利用表达海肾荧光素酶基因的重组HCoV-OC43 (rOC43-ns2DelRluc)对28种常见真核细胞系进行了易感性高效筛选研究,进一步利用亲本病毒HCoV-OC43-WT进行了细胞病变效应的观察,并采用荧光定量PCR进行复制动力学分析.实验结果显示:18种细胞对HCoV-OC43易感,HCoV-OC43在其中5种细胞中表现出较强的复制能力,包括BHK-21、293T、Huh7.0、RD等常见贴壁细胞.复制高峰在第5d出现,但HCoV-OC43感染的细胞系在6d内均未观察到典型细胞病变效应.本研究为今后HCoV-OC43的复制规律、致病机制的研究以及筛选广谱抗冠状病毒药物的提供了参考细胞系.
-
广西柳州18～45岁女性人乳头瘤病毒16/18型中和抗体流行率及其与宫颈病变相关性的研究
阐明广西柳州地区自然人群中18～45岁女性人乳头瘤病毒(HPV) 16/18型中和抗体和DNA流行情况,并探讨其与子宫颈癌癌前病变的相关性.2013年3月至7月在柳州市招募2 300名18～45岁女性,采集血清以假病毒中和试验(PBNA)法检测HPV16/18型中和抗体,同时采集宫颈脱落细胞进行液基细胞学诊断和HPV DNA检测,对细胞学异常者进行阴道镜检查,并对采集的组织学标本进行病理诊断.采用趋势性x2检验分析不同年龄段HPV DNA阳性率及HPV中和抗体阳性率的差异,Logistic回归分析筛选宫颈癌前病变的影响因素.广西柳州地区18～45岁女性自然人群中,HPV16 DNA或中和抗体阳性364例(15.8％,95％CI:14.4,17.4),HPV18 DNA或中和抗体阳性164例(7.1％,95％CI:6.1,8.3).CIN3在不同年龄组的卡方趋势检验有统计学意义(P=0.005),HPV16和HPV18型DNA阳性是CIN1+(宫颈上皮内瘤变1级及以上)、CIN2+(宫颈上皮内瘤变2级及以上)的主要危险因素,而自然感染产生的中和抗体与癌前病变未发现统计学相关性.HPV16/18型感染是宫颈癌癌前病变的主要危险因素,并未发现自然感染产生的中和抗体与其相关,表明接种疫苗仍是18～45岁女性预防HPV感染及癌前病变的主要方式.
-
EBNA1/IgA血清学状态及动态变化相关的鼻咽癌发病风险研究
分析EB病毒核抗原1-IgA抗体(EBNA1-IgA)的不同状态及变化趋势,并探讨人群的鼻咽癌发病风险.检测中山市小榄镇2009～2010年入组的16 695位30～59岁参加鼻咽癌筛查人群血清,按首次筛查和随访中EBNA1/IgA抗体状态将筛查人群进行分组,对照组为未参加筛查的两个镇区同年龄组人群,利用中山市肿瘤登记系统、死因登记系统随访至2014年12月31日,分析各组人群的鼻咽癌发病风险.与对照组相比,基线抗体阴性人群的发病风险比为0.46(95％CI 0.25～0.86),基线抗体阳性人群的发病风险比为31.1(95％CI 21.0～46.1);复查人群中上升组、持续阳性组的发病风险比分别为82.4(95％CI 36.1～188.2),26.4(95％CI 12.3～52.5),而下降组和波动组中未见病例.EBNA1/IgA基线阳性人群在5年中有很高的发病风险,复查人群中上升组和持续阳性组也有很高的发病风险,下降组和波动组发病风险较低.
-
2011～2015年中国银川地区男男性行为人群HIV-1感染率和新发感染率趋势研究
调查2011～2015年中国宁夏银川地区男男性行为人群MSM (Men who have sex with men,MSM) HIV-1感染率和新发感染率的变化趋势,为高危特殊人群干预防治提供科学策略.2011～2015年在银川地区进行MSM哨点监测,调查MSM人群社会人口学信息、性行为情况、艾滋病预防服务覆盖和近1年HIV检测情况等,采用趋势x2检验进行趋势分析;MSM确证结果为HIV-1阳性样本进行BED检测,计算新发感染率并进行x2检验.2011～2015年在银川地区每年均调查MSM人群400例,HIV感染率分别为3.8％ (95％ Cl:2.3％～5.6％)、7.3％(95％CI:5.1％～12.3％)、5.5％(95％Cl:3.5％～8.0％)、6.0％(95％Cl:4.6％～8.6％)和8.3％(95 ％C1:6.4％～12.6％),未见有上升趋势(P=0.335);梅毒感染率分别为7.0％(95％CI:5.8％～10.2％)、6.3％(95％CI:4.1％～10.0％)、5.5％(95％CI:4.3％～7.9％)、6.8％(95％CI:5.3％～12.9％)和5.0％(95％ Ch4.0％～7.7％),未见有上升趋势(P=0.315);近6个月与同性发生肛交行为的MSM中,安全套的使用率从2011年的40.8％下降至2015年的11.5％;近6个月与同性发生商业性行为的比例从2011年的16.0％至2015年的15.0％,而在同性商业性行为中安全套的使用率从85.9％上升至90.0％,近6个月与异性发生性行为的MSM中,从2011年41.5％至2015年24.3％,呈逐年减少趋势,与异性发现性行为安全套的使用率从38.0％下降至7.2％.2011～2015年新发感染率分别为2.88％(95％ CI:0.36％～5.40％)、5.70％(95％ CI:2.17％～9.23％)、5.19％ (95％CI:1.97％～8.41％)、5.73％ (95％ CI:2.35％～9.12％)、5.28％(95％ CI:2.01％～8.55％),卡方检验显示,P＞0.05(x2 =2.478,P=0.629),差异无统计学意义.银川地区MSM人群HIV感染率和新发感染率保持稳定态势;MSM人群存在严重的认知行为分离现象,MSMW人群是艾滋病防治中的重点难点人群.
-
EV71-B5亚型在亚太地区流行病学及进化分析
EV71-B5亚型自2003年首次报道以来,在亚太地区频繁引发手足口病(Hand,foot and mouth disease,HFMD)疫情,并可引起部分婴幼儿重症表现甚至死亡.为了阐明EV71-B5亚型在亚太地区的流行病学规律及进化特征,本文采用分子生物学软件(主要包括BioEdit、MEGA 5.0、Jmodeltest2.1.7、BEAST1.8.2、Tracer1.5、FigTree1.4.3、SPREAD1.0.7),对60条亚太地区的EV71-B5亚型序列进行进化分析及系统发育地理学分析.分析结果显示EV71-B5亚型可在同一地区(中国台湾、泰国等)频繁流行,近共同祖先的起源时间为2000年9月(95％CI:1999年8月～2001年9月),平均进化速度为4.045×10-3(95％CI:3.222×10-3～4.909×10-s);此外,迁移图谱表明EV71-B5亚型在亚太地区具有明显的迁移传播现象,中国厦门EV71-B5亚型分离株(JN964686)推测来源于新加坡地区(BF=3.17).这种现象提示我国需要加强对该亚型的监测力度,以免发生大范围暴发.
-
TGF-β/Smad信号通路在艾滋病患者CD8+T细胞功能损害中的作用
探讨TGF-β/Smad信号通路在艾滋病患者CD8+T细胞功能损害中的作用.在HIV感染者(CD4+T细胞计数≥200个/μL)和艾滋病病人(CD4+T细胞计数＜200个/μL)中各抽取30例,另以30例健康成人为对照.取研究对象的外周静脉血,流式细胞术检测CD8+T细胞CD28分子和磷酸化Smad2/3蛋白(p-Smad2/3),酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血浆中TGF-β1、IFN-γ和TNF-α.健康人、HIV感染者和AIDS病人CD8+ CD28+双阳性细胞占CD8+T细胞的比例分别为47.75％、47.40％和36.20％(中位数),AIDS病人低于正常人和HIV感染者(P＜0.05);p-Smad2/3阳性CD8+T细胞占CD8+T细胞的比例分别为79.15％、55.60％和60.60％(中位数),HIV感染者和AIDS病人低于健康人(P＜0.05);血浆TNF-α分别为(147.92±1.47) pg/mL、(60.04±1.78)pg/mL和(54.43±2.03)pg/mL,HIV感染者和AIDS病人低于健康人(P＜0.05);血浆TGF-p1和IFN-γ的组间差异无统计学意义.TGF-β/Smad信号通路可能参与了艾滋病患者CD8+T细胞的异常激活与功能损害.
-
与CIK细胞结合的肿瘤特异性增殖腺病毒KGHV400的构建
为了构建能与CIK细胞(Cytokine induced killer cell,CIK)结合的肿瘤特异性增殖腺病毒,我们用化学合成的35型腺病毒(Ad35)纤毛基因替换5型腺病毒(Ad5)骨架质粒的纤毛基因,获得5/35嵌合型腺病毒骨架质粒,然后与携带肿瘤特异性启动子hTERT(端粒酶逆转录酶基因启动子)和HRE(缺氧反应元件启动子)的穿梭质粒在HEK293细胞中同源重组,获得能与CIK细胞结合的肿瘤特异性增殖腺病毒KGHV400.分离人外周血单个核细胞,诱导培养成CIK细胞,与KGHV400共培养获得荷载KGHV400的CIK细胞.建立乳腺癌裸鼠移植瘤模型,经尾静脉注射荷载KGHV400的CIK细胞,在注射后第1d、2d、3d、5d、7d、14d解剖实验鼠,用免疫组化技术检测腺病毒六邻体蛋白在移植瘤、心、肝、脾、肾组织的表达.结果显示,构建的重组腺病毒KGHV400能高效率感染CIK细胞;荷瘤鼠尾静脉注射荷载KGHV400的CIK细胞后第1d,肿瘤细胞中即有腺病毒六邻体蛋白表达,之后表达逐渐增多,第14d仍有表达;脾脏在第1～14d检测到少量淋巴细胞中存在腺病毒六邻体蛋白;心、肝、肾组织未检测到该蛋白.对照组(尾静脉注射KGHV400)在注射后第1d、2d、3d、5d,肝、脾、肾组织中检测到存在腺病毒六邻体蛋白,但第7d后为转阴性;肿瘤细胞和心肌细胞未检测到腺病毒六邻体蛋白.我们的研究结果表明,重组腺病毒KGHV400是一种有用的肿瘤基因治疗载体.
-
诺如病毒GⅡ.17新变异株引致福建省2014～2015年病毒性胃肠炎暴发
本文旨在鉴定福建省2014～2015年冬季导致病毒性胃肠炎暴发的病原体,并对病原体进行分子特征研究.收集福建省2014～2015年胃肠炎暴发期间急性病例的标本,开展诺如病毒检测并对衣壳蛋白基因片段进行分子特征分析.共检测3起暴发疫情标本31份,检出GⅡ型诺如病毒阳性标本17份.测序结果证实有13份标本为诺如病毒GⅡ.17新变异株,与2014年日本毒株Kawasaki 323同源性高,在系统进化上形成一个新的独立的分枝,有别于近年来本地散发流行及全球暴发流行的优势基因型GⅡ.4.是福建省内首次检出诺如病毒GⅡ.17,并引起病毒性胃肠炎暴发.
-
2012～2014年中国西藏自治区5岁以下健康儿童肠道病毒携带状况分析
了解西藏自治区2012～2014年5岁以下健康儿童粪便标本中携带肠道病毒的血清型分布及流行特点.采集西藏自治区三地(拉萨、日喀则和山南地区)5岁以下健康儿童的粪便标本,同时收集相关流行病学信息.使用RD和L20B细胞进行病毒分离,将阳性分离株用肠道病毒分子定型法进行血清型鉴定.2012～2014年从西藏自治区5岁以下健康儿童中共采集了460份粪便标本(每名儿童采集1份),分离到肠道病毒共133株,包括脊髓灰质炎(脊灰)疫苗株33株,肠道病毒分离率为28.91％,非脊灰肠道病毒的分离率为21.74％.西藏自治区健康人群肠道病毒携带率和携带病毒的型别存在年代和地域的差异,但均以EV-B为主.其中在2012～2014年中,每年非脊灰肠道病毒谱中CV-B3是分离数量多的.2012～2014年西藏5岁以下健康儿童中没有检出脊灰野病毒和脊灰疫苗衍生病毒,维持了无脊灰状态.检出了多种非脊灰肠道病毒,CV-B3一直在西藏自治区尤其是拉萨市健康儿童中隐性传播.本研究不仅为我国维持无脊灰工作提供坚实的实验室依据,同时,对非脊灰肠道病毒的流行本底的研究,为西藏自治区非脊灰肠道病毒的暴发提供预测预警信息和科技支撑.
-
复制型埃博拉病毒样颗粒的表达和鉴定
为了研究埃博拉病毒的生物学特性及其与宿主的相互作用,构建无致病基因的复制型埃博拉病毒样颗粒(Transcription and replication competent virus-like particles,trVLPs)成为在BSL-2实验室中进行研究的理想途径.本研究目的是表达和鉴定复制型埃博拉病毒样颗粒(trVLPs).本研究利用埃博拉病毒7个蛋白的基因组片段(VP40、VP24、GP、VP35、VP30、L、NP)和一个报告基因片段重组构建了表达质粒,瞬时转染293T细胞,通过荧光素酶检测系统测定报告基因的表达活性确定了复制型埃博拉病毒样颗粒(trVLPs)的成功表达.进一步通过超离转染细胞的上清纯化得到病毒样颗粒(trVLPs),在透射电子显微镜下观察到了典型的丝状结构.对病毒样颗粒进行荧光标记并感染Vero细胞,在荧光显微镜下观察到细胞中出现点状和丝状的荧光信号.复制型埃博拉病毒样颗粒的成功表达为进一步研究埃博拉病毒的生物学特性以及与宿主相互作用机制提供了基础.
-
结核分枝杆菌Rv2645刺激ISG15的表达上升促进体外丙型肝炎病毒的增殖
为研究结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,M.tb)与丙型肝炎病毒(Hepatitis C virus,HCV)感染之间的相关关系,本文研究毒性毒株M.tb H37Rv的RD13区中的Rv2645基因对免疫细胞中干扰素刺激基因(Interferon-stimulated gene 15,ISG15)表达的影响,进而探讨ISG15的表达与HCV感染之间的相关性.利用携带Rv2645基因的无毒牛结核分枝杆菌卡介苗(Bacille calmette guerin,BCG)(即rBCG∶∶Rv2645,rBCG)与亲本BCG分别感染小鼠或刺激小鼠巨噬细胞系RAW264.7,运用RT-qPCR以及蛋白印迹的方法检测,比较rBCG与BCG感染对小鼠CD4+T细胞及RAW 264.7细胞中ISG15的mRNA及蛋白质表达的影响.同时克隆ISG15真核表达质粒和ISG15的沉默表达质粒-ISG15-shRNA,运用RT-qPCR及蛋白印迹分别检测ISG15过表达及沉默后,对HCV感染的人肝癌细胞系Huh7.5.1中HCV的mRNA、HCV非结构蛋白NS3及核心蛋白Core的表达.我们发现相对于BCG,携带Rv2645的BCG感染之后脾脏CD4+T细胞及体外RAW 264.7中ISG15的mRNA及蛋白质的水平明显升高.此外,ISG15过表达导致Huh7.5.1中HCV的mRNA、NS3蛋白及Core蛋白的水平明显升高,而ISG15沉默后ISG15和HCV的mRNA的水平明显下调.本研究首次发现M.tb Rv2645能上调小鼠CD4+T细胞及巨噬细胞中ISG15的表达;而ISG15能促进Huh7.5.1中HCV增殖.本研究对阐明M.tb毒性菌株H37Rv的Rv2645基因的功能,以及为研究MTB感染与HCV感染的分子机制提供参考依据.
-
干扰素诱导跨膜蛋白3rs12252单核苷酸多态性与乙型流感临床严重程度的相关性研究
为了研究干扰素诱导的跨膜蛋白3 (Interferon-induced transmembrane protein 3,IFITM3)rs12252单核苷酸多态性(Single nucleotide polymorphism,SNP)与乙型流感临床严重程度的相关性,在吉林省和湖南省收集了181名乙型流感轻症病例和83名乙型流感重症病例全血标本,提取两组病例基因组DNA并扩增相应的目的片段后,采用Sanger测序的方法对ITIM3 rs12252 SNP进行基因分型.同时选用千人基因组103名中国北京地区汉族人(CHB)为一般人群对照.统计分析结果表明,轻症病例IFITM3 rs12252基因型频率分布与一般人群对照无显著性差异,但重症病例rs12252 CC基因型频率显著高于一般人群对照组.乙型流感重症病例IFITM3 rs12252 C等位基因频率显著高于轻症病例(P＜0.05),携带rs12252-C等位基因发展为乙型流感重症的风险是rs12252-T等位基因的1.818倍(Odds Ratio=1.818,95％CI:1.241～2.664).并且重症病例中rs12252 CC基因型频率显著高于轻症病例(P＜0.05),表明rs12252 CC基因型与乙型流感重症相关.
-
河北省石家庄市手足口病流行中健康人肠道病毒带毒情况及病原分析
为了解河北省石家庄市健康儿童中肠道病毒带毒情况及血清型构成,对2010～2012年石家庄市的3个县区1 223例0～6岁的健康儿童及406名监护人(健康成人)采集咽拭子和粪便标本进行核酸检测鉴定肠道病毒血清型,并进行分子流行病学分析,为肠道病毒感染相关疾病的防控和治疗提供基础资料.1 223名健康儿童的标本检测结果中,肠道病毒(Enterovirus,EV)阳性的283例,阳性率为23.14％(283/1 223).其中,以非肠道病毒71型非柯萨奇病毒A组16型的EV(Other-Enterovirus,other-EVs)阳性为主,占EV阳性的62％(175/283),而引起手足口病常见的EV病原体肠道病毒71型(Enterovirus A71,EV71)和柯萨奇病毒A组16型(Coxsackievirus A16,CVA16)阳性率较低,分别占19％(55/283)和18％(51/283);将结果为other-EVs阳性的175名健康儿童的标本全部进行病毒分离鉴定,共分离到25株病毒,分离率为14.29％(25/175),其中柯萨奇病毒B组5型(CoxsackievirusB5,CVB5)分离率高,为40％ (10/25)、柯萨奇病毒B组13型(Coxsackievirus B3,CVB3)分离率为24％ (6/25)、埃可病毒21型(Enteric cytopathic human orphan virus 21,ECHO21)分离率为16％ (4/25)、其他EV株分离率为20％(5/25).提示,应加强对CVB3和CVB5等other-EVs的监测.
-
细胞病变型牛病毒性腹泻病毒对宿主细胞自噬作用的研究
细胞自噬(Autophagy)是一种真核生物细胞内损伤的细胞器和长寿命蛋白通过双层膜结构的自噬小泡包裹后,送入溶酶体或液泡中进行降解并得以循环利用的高度保守的分解代谢过程.本研究旨在了解细胞病变型(CEP)牛病毒性腹泻病毒(BVDV NM)对宿主细胞MDBK细胞自噬作用的影响.实验使用BVDV NM株感染宿主细胞MDBK,在不同时间点分别通过透射电镜观察自噬体形成、报告荧光GFP-LC3自噬底物检测以及Western blot方法鉴定细胞自噬标记物LC3-Ⅰ/LC3-Ⅱ和P62的表达等试验方法对自噬进行检测.结果显示,感染BVDV NM株的MDBK细胞出现了明显的细胞病变;透射电镜能观察到细胞中存在大量的双层膜结构的自噬泡;转染GFP-LC3荧光质粒后,在感染病毒的细胞内出现增多的聚集绿色荧光自噬小体;此外,随着BVDV NM株感染MDBK时间的延长可以发现LC3-Ⅰ/Ⅱ蛋白的量逐渐增加以及P62蛋白的降解.试验表明BVDV NM株感染MDBK可以促进细胞自噬的发生.
关键词： 牛病毒性腹泻病毒(BVDV) 细胞自噬 -
鸭肠炎病毒感染鸭脾脏的转录组分析
为探明鸭肠炎病毒(Duck enteritis virus,DEV)感染鸭脾脏的转录组情况,本研究以DEV GZ株经腿部肌肉接种50 d鸭,于接种后66h采集鸭脾组织样本,提取总RNA,采用Illumina HiSeq 2000TM对试验组和对照组样品进行测序,筛选DEV感染鸭脾脏组织的差异表达基因,对其进行生物信息学GO功能分类和KEGG信号通路分析.结果显示,差异表达基因共511个,其中表达上调312个,表达下调199个.GO功能分类结果显示,差异表达基因主要涉及氧运输、整合素活化、补体激活等生物学过程,胞外区、血红蛋白复合物、细胞外间隙等细胞组分,氧转运活动、氧结合、核糖体的结构成分等分子功能.KEGG分析表明这些差异表达基因参与ECM受体相互作用、核糖体、CAMs、JAK-STAT信号通路、细胞因子和细胞因子受体相互作用、PPAR信号通路、神经活性配体/受体相互作用信号通路.本研究为深入探究DEV与鸭脾脏组织互作、宿主抗病机制及相关功能基因的筛选奠定了基础.
-
马疱疹病毒1型囊膜蛋白gD多克隆抗体制备及亚细胞定位
本研究通过间接免疫荧光技术,确定了EHV-1囊膜蛋白gD单独表达于BHK-21细胞内的亚细胞定位情况,为其亚细胞定位机制及病毒二级囊膜的研究奠定了基础.以EHV-1基因组为模板,利用PCR方法扩增gD部分基因,并构建其原核表达载体pET28-gD,转入BL21(DE3)感受态细胞内进行诱导表达,利用Ni-NTA亲和层析法纯化gD重组蛋白;以纯化的重组蛋白为抗原免疫实验小鼠并制备抗囊膜蛋白gD的多克隆抗体;分别以间接ELISA方法及Western blot方法检测抗体效价及反应性;人工转染pVAX-Kozak-gD重组质粒至BHK-21细胞,利用IF技术对囊膜蛋白gD进行亚细胞定位.结果表明:成功表达了大小约29 kD的gD重组蛋白;制备的多克隆抗体效价为1∶102 400,能较好地与囊膜蛋白gD真核表达产物特异性结合;通过IF方法确定囊膜蛋白gD大部分呈斑点状分布于宿主细胞核周围的胞质中,极少量定位于细胞核内.
-
流式细胞术检测人巨细胞病毒活动性感染检测方法的建立及检测效果评价
探讨流式细胞术检测人巨细胞病毒活动性感染检测方法的可行性及效果评价.分离人外周血白细胞,以商品化的小鼠抗人巨细胞病毒pp65抗原单克隆抗体为一抗,FITC标记的羊抗小鼠IgG抗体为二抗,采用流式细胞术对外周血人巨细胞病毒pp65抗原进行检测.同时采用间接免疫荧光法对外周血人巨细胞病毒pp65抗原进行检测.采用配对x2检验对两种方法的检测效果进行评价.临床送检的65份疑似为人巨细胞病毒感染病人外周血标本中,间接免疫荧光法检出阳性9份,流式细胞术检出阳性11份,两种方法阳性检出率差异无统计学意义(P＞0.05).采用流式细胞术可定量检测外周血人巨细胞病毒pp65抗原,与间接免疫荧光法检测结果无统计学差异,可在临床推广使用.
-
上海出入境检验检疫局发现我国首例库波热病毒
针对西非安哥拉回国的不明原因发热病人,筛查其可能携带的传染病病原体.采用荧光PCR的方法对口岸重点关注的黄热病毒、寨卡病毒、登革病毒等病原体进行筛查;采用深度测序的方法,搜索病毒库、细菌库、寄生虫库,进行序列比对筛查各类病原体,采用全基因组测序的方法获得病原体全基因组序列.2017年1月2日凌晨1点,上海出入境检验检疫局国家国境口岸卫生监督检测重点实验室接到一份紧急样本,样本来自1名安哥拉回国的28岁男子.该男子在安哥拉当地医院初筛黄热病阳性,该男子要求自行回国治疗.针对病人的血液样本和尿液样本,开展黄热病毒、登革病毒、寨卡病毒、裂谷热病毒、基孔肯雅病毒、西尼罗病毒、流行性乙型脑炎病毒、疟原虫等多种虫媒病原体的荧光PCR检测,结果显示阴性.通过对血液样本的深度测序发现,该病人感染了一种新型的弹状病毒,中文命名为库波热病毒,并获得了库波热病毒全基因组序列,与尼日利亚发现的库波热病毒比较,同源性为96％.
-
高致病性A(H5N8)亚型禽流感病毒NA基因核酸检测方法的建立
建立以Real-time PCR为基础的新型高致病性A(H5N8)亚型禽流感病毒NA基因检测方法.针对2016年6月起频繁暴发的H5N8禽流感疫情,从GenBank和Global Initiative on Sharing All Influenza Data(GISAID)下载2014年以来的H5N8亚型禽流感病毒的NA序列,通过序列比对,在相对保守区域设计适用于实时荧光逆转录聚合酶链式反应(rRT-PCR)的引物和探针.选用28株不同NA亚型的流感病毒进行特异性验证,结果显示本文设计的引物探针组合能够特异性检测高致病性H5N8亚型禽流感病毒的NA基因.灵敏度检测结果显示,本文设计的引物探针组合能检出低23个拷贝的RNA.本文建立了高致病性H5N8亚型禽流感病毒NA基因特异性荧光定量检测方法,与世界卫生组织(WHO)推荐的A型流感病毒M基因、H5基因检测引物探针的低检测限一致,可以组合用于H5N8亚型禽流感病毒的检测.
-
一株烟草青枯雷尔氏菌烈性噬菌体RS-PⅡ-1的分离及全基因组分析
分离鉴定一株侵染烟草青枯雷尔氏菌的烈性噬菌体,观察其形态特征,并进行全基因组测序与分析,为采用噬菌体疗法防治烟草青枯病提供技术储备.以烟草青枯菌TB15-15为宿主菌,从土壤中筛选分离得到噬菌体;分离得到的噬菌体经纯化浓缩,采用透射电子显微镜观察其形态特征;提取噬菌体DNA,进行全基因组高通量测序,分析其全基因组的结构特征,比较基因组分析明确其进化关系.以TB15-15为宿主菌,从长期种植烟田土壤中分离得到一株青枯雷尔氏菌烈性噬菌体.电镜观察显示,该噬菌体属于有尾噬菌体目、短尾噬菌体科.基因组全长42 042 bp,GC含量为63.2％,含有46个开放阅读框,比较基因组分析确定该噬菌体为一株新的青枯雷尔氏菌烈性噬菌体,命名为RS-PII-1.以烟草青枯菌为宿主菌,分离到一株新的青枯雷尔氏菌烈性噬菌体RS-PⅡ-1,明确了其形态和基因组特征,为防治青枯病的噬菌体疗法奠定基础.
| 年 | 期数 |
| 2018 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2017 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2016 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2015 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2014 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2013 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2012 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2011 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2010 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2009 | 01 02 03 04 05 06 z1 |
| 2008 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2007 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2006 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2005 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2004 | 01 02 03 04 |
| 2003 | 01 02 03 04 |
| 2002 | 01 02 03 04 |
| 2001 | 01 02 03 04 |
| 2000 | 01 02 03 04 |
| 1999 | 04 |
