病毒学报杂志
Chinese Journal of Virology 병독학보
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植物双生病毒的复制及转录调控研究进展
双生病毒(Geminiviruses)是一类具有孪生颗粒形态的植物病毒,颗粒大小约为18nm×30nm.双生病毒成员众多,大致可分为三个亚组.双生病毒通常以粉虱或叶蝉为媒介进行传播,侵染范围十分广泛,对农业生产造成巨大的危害.感病植株一般表现为花叶、曲叶、黄化等症状,严重地影响了植物的正常生长.近几年,属于双生病毒亚组Ⅲ的棉花曲叶病毒(Cotton leaf curl virus,CLCuV)在印巴次大陆广泛流行,严重时可使棉花绝收.双生病毒基因组DNA为单链环状形式,长度约为2 400nt～3 000nt.对双生病毒基因组结构、遗传表达机制,及其分类和进化进行深入的了解,有助于揭示寄主植物与病毒相互间的作用方式,进而为防治由双生病毒引起的植物病害奠定基础.本文就上述内容的新进展作一简要综述.
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PCR检测中国对虾暴发性流行病毒靶基因的克隆和序列分析
An explosive epidemic disease of shrimp had occurred in China and the south Pacific coast. The causative agent is a new baculovirus called hypodermal and hematopoietic necrosis baculovirus (HHNBV) in China, and the pathogen is very much similar to Japanese panaeid rod-shaped DNA virus (PRDV) which caused mass mortality of shrimp. In order to distinguish both HHNBV and PRDV at molecular level, we have sequenced the PCR-targeted DNA fragment of HHNBV. One pair of PCR primers were prepared based on the PRDV DNA. The sequence of the PCR-targeted DNA of HHNBV is 975bp in length, and shares 99.7% homology with the PRDV. The sequence of PCR-targeted DNA of HHNBV-XIA differs from PRDV DNA in deleting three nucleotides (CAT) at 510～512 site. These characteristics of the sequence classified HHNBV and PRDV as strains of different genotypes.
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大麦黄矮病毒GAV株系外壳蛋白基因的克隆和序列分析
The Barley yellow dwarf virus (BYDV) GAV isolate was preserved at the Institute of Plant Protection of the Chinese Academy of Agricultural Sciences. The cDNA of BYDV GAV coat protein (CP) gene was amplified from the extracted RNA of BYDV GAV by using the polymerase chain reaction (PCR), and cloned into pGEM-7zf(+). Its complete nucleotide sequence has been determined by means of Sanger's dideoxy-mediated chain-termination method. The result showed that BYDV GAV CP gene has 600nt. It shares 97.5% and 96.5% identity with CP gene of BYDV MAV-PS1 in terms of nucleotide and amino acid sequences respectively.
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闽南地区TT病毒的变异及经输血传播的初步证据
TT virus(TTV)DNA was tested by nested-PCR from sera of hepatitis patients and volunteer blood donors in Minnan area. The amplified segment was a 189 base pair region in TTV ORF2. A total of six sequences were obtained from three non-A to G hepatits patients and two from volunteer blood donors. The sequences were found to be with 82.9% to 99.3% homology to TTV Japanese strain and Chinese strain. The divergence of sequence in these six segments varied from 0.7% to 17.1%, which indicated that the TTV had been existing for a long time in this area. In the serum of a non-A to G hepatitis patient who was negative for TTV DNA in the 14th day of disease course turned to be positive in the 30th day, two TTV sequences were obtained which showed 92.1% nucleotide homology. It indicated that different TTV strains can co-exist in the same person. This patient's blood had been transfused ten times between the collection of his TTV negative sample and his positive serum sample. Seven of the blood donors were traced and sampled for sera, of which three were positive for TTV. For all 161 patients tested, the history of exposure to blood products was associated with an increased risk of TTV infection(relative risk, 3.0; 95% confidence intervals, 1.89～4.81).
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中国大麦黄花叶病毒分离物的分子变异
13个供试的中国和英国大麦黄花叶病毒(BaYMV)分离物,经RNA1和RNA2全基因组不同区域DNA片段单链构象多态性分析(SSCP),外壳蛋白基因和RNA2 70kD基因5'端705碱基序列分析,以及此705碱基DNA片段限制性内切酶图谱分析结果,它们的RNA1和RNA2彼此无一相同,其中RNA2变异比RNA1更大.由于变异十分复杂,且没有规律性,因而当前通用的分子生物学技术尚不能简单地用于BaYMV致病性分化或株系区分和检测.
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肛门生殖器区肿瘤组织中HPV的快速检测和分型
迄今已发现的人乳头瘤病毒(HPV)型已超过77型,其中至少有30个型与泌尿生殖道肿瘤有关.所以HPV的检测与分型对于泌尿生殖道肿瘤的病因和预后将是非常重要的.HPV有很大的异质性,故用常规的诊断技术来测定未知标本中的HPV基因型有一定困难.为此,我们应用了反向点杂交法(RDB)来检测HPV分型.即用7种序列特异性寡核苷酸探针分别对应7型HPV(HPV6B、11、16、18、31、33、35),这些探针被合成后依次固定在一条尼龙膜上形成7个点,再与样品DNA序列的PCR产物进行杂交.结果7型HPV中任一型阳性都可以在一条尼龙膜上鉴别出来.我们收集来自广州各大医院的标本,共计177例(除20例食道癌标本来自河南省外),用RDB来检测HPV和分型.结果如下:子宫颈癌86例,其中鳞癌68例,HPV阳性59例(86.76%);腺癌18例,HPV阳性8例(44.44%);尖锐湿疣42例,HPV阳性39例(92.86%);慢性宫颈炎29例,HPV阳性1例(3.45%);食道癌20例,HPV阳性7例(35.00%).
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检测中国对虾非包涵体型杆状病毒的PCR方法的建立
中国对虾非包涵体型杆状病毒(PcNOBV)是中国大陆养殖的中国对虾(Penaeus chinensis)暴发性流行病--白斑综合征的主要病原,与台湾流行的PmNOBⅢ、泰国的PmNOBⅡ及日本的RV-PJ(＝PRDV)有相似的致病特征、形态学及组织病理学特征.为了解PcNOBV与PmNOBⅢ两种地域分布邻近的毒株基因水平的关系,并建立早期、敏感、特异的检测技术,利用氯化铯密度梯度超速离心技术分离纯化了PcNOBV核衣壳,根据台湾地区分离的PmNOBⅢ的基因序列设计一对引物,从纯化的PcNOBV DNA及自然发病的中国对虾、日本对虾和斑节对虾组织DNA中成功地扩增出长为355bp的目的片段,可检测出3.4pg的PcNOBV DNA.从健康对虾组织提取的DNA未能扩增出目的片段.扩增片段序列与PmNOBⅢ相应的基因序列相同.该结果从分子水平证实PcNOBV与PmNOBⅢ存在基因同源性,同时表明聚合酶链式反应(PCR)可以作为检测PcNOBV的一种敏感、特异、早期、快速的诊断手段.
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柯萨奇B3病毒基因在重组痘苗病毒中的表达
将编码柯萨奇B3病毒(CVB3)衣壳蛋白VP1和VP2的基因,分别克隆到具有7.5k启动子的痘苗病毒表达载体pGJP5上;将CVB3衣壳蛋白全基因克隆到具有T7启动子的痘苗表达载体pTM1上,并筛选到相应的重组痘苗病毒VVP1、VVP2和VVP/4/2/3/1.VVP1和VVP2稳定表达产物为CVB3衣壳蛋白VP1和VP2,而VVP/4/2/3/1的产物VP4/2/3/1为一无分泌性的多聚蛋白,且这三种表达产物均属无分泌性蛋白.为了表达成熟的CVB3衣壳蛋白,将去除5′端非编码区的CVB3全基因克隆到具有T7启动子的痘苗表达载体pTM1上,利用重组痘苗病毒VT7所提供的T7RNA聚合酶,在哺乳动物细胞中进行了暂时表达研究.Western blot分析提示,VP1、VP2和VP3蛋白得到成熟表达,且发现表达产物具有分泌性.本研究将为今后研究CVB免疫性打下基础.
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传染性法氏囊病病毒中国强毒株A节段cDNA基因的克隆和序列分析
以来自哈尔滨传染性法氏囊病病毒(IBDV)强毒株(Harbin毒株,H)的基因组RNA为模板,用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)的方法得到了其A节段的全长cDNA片段,分5＇端(1 659bp)和3'端(1 444bp)上下两段分别克隆到pGEMB®-T载体上,测定了其核苷酸顺序,在长为3 101 bp中含有两个阅读框ORF A1和ORF A2,分别编码1 012个氨基酸的前体蛋白(VP2-4-3)和145个氨基酸的VP5,ORF A1和ORF A2有部分的重叠.将核苷酸序列及推测出的氨基酸序列与已报道的IBDV血清Ⅰ型和Ⅱ型毒株的相应序列进行了比较,结果表明:H毒株与其它血清Ⅰ型毒株之间,在核苷酸水平上存在25bp-267bp的差异;在氨基酸水平上存在17～40个氨基酸的差异.在VP2-4-3内比较显示,H毒株与P2、Cu-1之间氨基酸的差异小为1.7%,H毒株与UK661之间氨基酸的差异大为3.9%.变异主要发生在VP2的可变区(206-350位氨基酸),在H毒株所特有的12个氨基酸当中,该区就占5个,代表1.76%的变异.VP4、VP3和VP5区各有两个特有氨基酸的替代,分别代表0.74%、0.69%和1.38%的变异.序列分析显示,H毒株在抗原性和毒力上均存在着变异,然而,它既不同于欧洲、日本和以色列分离的超强毒,也不同于美国的变异株.与其亲缘关系近的是欧洲的较早期的分离株,但是在可变区,尤其是在两个亲水区又有明显的突变.
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引起产科新生儿腹泻暴发的轮状病毒株VP4 VP7编码基因与其毒力关系的探讨
克隆并测定了引起产科新生儿腹泻暴发的P2[6]、G4型轮状病毒(BN株)VP4的VP8片段和VP7编码基因的核苷酸序列,并据此推导出其氨基酸序列.与相应标准株和地方株(包括有毒株和无毒株)比较的结果表明,所测VP8序列与相同型别(P2[6])的标准株M37(无毒株)和ST3(无毒株)、地方株N16(无毒株)和VE7156(有毒株)之间的同源性为92.8%～98.6%,胰酶作用位点各毒株间相同;位于aa49、aa50、aa52、aa53、aa78处的氨基酸在有毒株与无毒株间(包括BN株)不同,但分别保守.VP7基因与同型(G4)标准株ST3(A亚型/无毒株)和VA70(B亚型/有毒株)、意大利地方株PV5249(A亚型/有毒株)和北京地方株CR117(有毒株)、同型猪有毒株Gott之间的同源性为91.4%～97.8%,其中与A亚型的同源性为95.5%～96.3%,而与B亚型的同源性为91.4%,提示VP7为G4A亚型,位于aa38、aa78、aa145、aa238位点的氨基酸在有毒株与无毒株之间不同,但分别保守.分析了虽为P2[6]型却反常地引起新生儿腹泻暴发毒株(BN)的VP8与VP7基因的变异情况,并对轮状病毒毒力与VP4、VP7基因变异的相互关系进行了讨论,为慎重确定轮状病毒疫苗候选毒株提供理论依据.
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酵母双杂合系统在丙型肝炎病毒NS5A研究中的应用
酵母双杂合系统是在酵母细胞中研究蛋白-蛋白相互作用的新技术.应用该技术,以丙型肝炎病毒(HCV)非结构蛋白5A(NS5A)为"诱饵",筛检了人肝癌细胞HepG2来源的cDNA文库,获得了7个NS5A结合蛋白的基因克隆.报道了其中两个粜钥寺?#2、#16)的结果,并对"人核小体组装蛋白相关蛋白"(Human nucleosome assembly protein-related protein,hNRP)和"载脂蛋白A-I"(Apolipoprotein A-I)与NS5A结合的生物学意义进行了讨论.
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HIV-1 SH01分离株在MT4细胞的超微结构特征和形态发生学研究
用外周血单个核细胞混合培养法分离到的HIV-1 SH01株,具有典型的HIV颗粒的形态学特征,核心颗粒呈锥形,可见芽生释放的全过程.偶尔可在胞装空泡内见到HIV颗粒,同时还有细胞碎片和溶酶体结构,故此类空泡实际为HIV吞噬泡.另一少见的现象是溶酶体摄取并消化HIV颗粒,在HIV-1 SH01株感染7天或持续感染的MT4细胞中均可见到,后者尤为普遍.在HIV-1 SH01株持续感染的MT4转化细胞中,经过溶酶体消化的HIV残体依稀可见,但同时也存在吞噬溶酶体膜溶解的现象.可见,非特异性免疫在清除体内HIV方面的作用值得作进一步的研究.此外,在HIV-1 SH01株感染7天的MT4细胞的胞浆基质中,还可见到一种类病毒样颗粒,其性质有待进一步确定.
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应用异源双链泳动分析法快速确定(HIV-1)基因亚型
应用异源双链泳动分析法(Heterouduplex mobility assay,HMA),对来自我国云南、四川、新疆、浙江、广东、福建、天津7省市73份HIV感染者样品,进行了HIV-1膜蛋白(env)基因片段亚型分析.通过HMA能确定亚型的有70份,占样品总数的95.89%(70/73).其中A亚型2.86%(2/70),F亚型2.86%(2/70),泰国B亚型18.58%(13/70),欧美B亚型8.56%(6/70),C亚型38.57%(27/70),E亚型28.57%(20/70).为了检验结果的准确性和探讨3份样品不能用HMA分型的原因,进一步对样品进行序列测定和系统树分析,并将两者结果的相互比较,两者对HIV-1分型显示出高度的一致性,其亚型一致率达95.89%(70/73).而3份样品不能确定亚型的原因主要是,其env基因区段与相应的参考亚型质粒毒株相比变异太大.这提示,为了提高HMA分型的敏感性,应不断地选择代表性好的毒株构建参考亚型质粒.
| 年 | 期数 |
| 2018 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2017 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2016 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2015 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2014 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2013 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2012 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2011 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2010 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2009 | 01 02 03 04 05 06 z1 |
| 2008 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2007 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2006 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2005 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2004 | 01 02 03 04 |
| 2003 | 01 02 03 04 |
| 2002 | 01 02 03 04 |
| 2001 | 01 02 03 04 |
| 2000 | 01 02 03 04 |
| 1999 | 04 |
