病毒学报杂志
Chinese Journal of Virology 병독학보
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施马伦贝格病在德国的流行现状及总结
施马伦贝格病是由施马伦贝格病毒(Schmallenberg virus,SBV)引起的,感染牛、羊等反刍动物的一种新发的虫媒病毒性传染病.该病毒感染成年动物后症状轻微,如产奶减少、发热、腹泻等;但在怀孕的特定时期感染则可能导致较严重的后果,如胎畜畸形或死胎等.该病于2011年底在德国首发,随后迅速传遍欧洲.德国作为该病的首发国家,对于该病进行了详细的研究,其国内的流行趋势也能代表欧洲的流行情况及研究进展.为此,作者就德国施马伦贝格病的流行现状进行介绍,以期为我国该病的防控提供参考.
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MicroRNA调控乙型脑炎病毒复制及发病机制的研究进展
流行性乙型脑炎病毒(JEV)是具有严重危害的人畜共患病病原,感染人后入侵中枢神经系统,致死或者留下永久性神经系统后遗症.JEV还可以感染猪群,造成种猪繁殖障碍,仔猪脑炎,给养猪业带来损失.MicroRNA作为一种在转录后水平发挥基因调控功能的非编码小分子RNA,参与到细胞生长、分化、凋亡和代谢等生命过程,并且在病毒感染入侵及宿主细胞的抗病毒方面起着重要的调节作用.此文综述了当前已证实的microRNA对JEV复制及发病机制的调控作用研究.了解宿主microRNA在JEV感染过程中的可能导致识别阻断JEV复制或细胞特异性调节病毒载体靶向的新机制,并提出了防控JEV的可能途径.
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痘病毒ANK/F-box蛋白的生物学特性及泛素化相关功能
锚蛋白重复序列(ANK)和F-box结构域蛋白是痘病毒编码的大分子蛋白家族之一,大小在400～650个氨基酸之间,其N-末端有5～10个ANK重复序列,C-末端包含与F-box结构域相类似的保守序列,具有将底物募集到细胞SCF泛素连接酶复合物上的功能.研究表明,痘病毒的大多数ANK/F-box蛋白能够与Skp1、Cul1相互作用,靶向细胞的SCF1复合物.抑制NF-κB信号通路是这些蛋白的一个重要功能.此文着重阐述了痘病毒ANK/F-box蛋白的特征以及泛素化相关功能的研究概况.
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单颗粒示踪技术及其在病毒侵染机制研究中的应用
病毒侵染宿主细胞是一个复杂的动态过程,且涉及病毒与细胞多种成分的相互作用,病毒侵染机制研究对研制抗病毒药物以及病毒性疾病的预防和治疗至关重要.单颗粒示踪技术是可视化研究生物动态过程的重要工具,能够研究病毒在活细胞中的侵染行为,现已成为病毒侵染机制研究的有效手段.此文综述了单颗粒示踪技术中病毒标记物、标记方法、活细胞成像及分析进展,以流行性感冒病毒和人免疫缺陷病毒为例阐述了该技术在病毒侵染机制研究中的应用,对该技术的应用前景进行了展望.此文旨在为病毒侵染机制研究介绍新的技术手段、推动病毒学研究.
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植物RNA病毒不依赖帽子翻译机制的研究进展
真核生物系统中,mRNA 5 '末端帽子结构通过结合翻译起始因子eIF4E进而招募40S核糖体亚基,对蛋白翻译的起始调控至关重要,而3'末端poly(A)尾则通过介导mRNA环化提高翻译效率.然而,许多植物RNA病毒的基因组缺乏5'帽子结构,甚至3 '末端也不带poly(A)尾,这些病毒进化产生了位于基因组RNA5 '末端或3'末端的不依赖帽子翻译元件.本文将重点讨论位于植物病毒基因组RNA 3'末端的不依赖帽子翻译元件(Cap-independent Translation Element,3'CITE),就其结构特征、调控翻译起始和RNA环化等方面的研究进展进行了综述.
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人类免疫缺陷病毒1型gp140包膜蛋白三聚体在哺乳动物细胞中的高效表达及其性质鉴定
本研究目的是通过优化1型人类免疫缺陷病毒(HIV-1) gp140编码基因的密码子和克隆设计,从而实现在293T哺乳动物细胞中高效表达,并对纯化获得的gp140蛋白进行抗原性质鉴定.在本研究中选择HIV-1 B亚型NL4-3全基因序列为模板进行gp140克隆构建,通过密码子优化、信号肽替换、增加柔性1inker、三聚体折叠序列等方法优化设计.通过HIV-1转录反式激活因子tat共转HEK293T细胞进行gp140蛋白表达,采用镍柱纯化.SDS-PAGE、Western blot、ELISA、负染电镜等结果显示目的蛋白纯度高于70％,每升培养基可获得0.5 mg gp140蛋白,并且具有良好的抗原活性,电镜下呈现三聚体结构.通过弗氏佐剂与目的蛋白混合免疫Balb/c小鼠,检测小鼠免疫血清显示gp140蛋白能有效刺激机体产生免疫应答.本研究通过优化表达获得B亚型HIV-1 NL4-3 gp140蛋白,为HIV-1病毒包膜蛋白结构和重组疫苗研究奠定基础.
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河南省哨点医院2009～2015年5岁以下腹泻儿童轮状病毒分子流行病学特征研究
为分析2009年～2015年河南省5岁以下腹泻儿童A组、B组、C组轮状病毒的感染状况及分子流行病学特征,本研究采集了河南省两个监测哨点医院5岁以下儿童腹泻病例的粪便样本(每份3～5ml)2 317份,双抗体夹心法检测A组轮状病毒;巢式多重RT-PCR进行基因分型,二步法多重RT-PCR检测B/C组轮状病毒,同时对阳性病例流行病学资料进行统计分析.2 317份腹泻样本共检出阳性样本869份,总阳性率35.0％,混合感染率2.5％.其中A组轮状病毒746份,阳性率32.2％;B组轮状病毒44份,阳性率1.9％;C组轮状病毒79份,阳性率3.4％;混合感染样本58份,混合感染率2.5％.A组轮状病毒阳性率的季节性特征显著,监测年度存在9～11月份(秋季)和3～5月份(春季)两个较显著高峰.A组轮状病毒G分型以G1、G2、G3、G9为主;P分型以P[8]、P[4]为主;型别组合以G1 P[8]、G3P[8] 、G2P[4]、G9P[8]为主,还存在G13P[8]、G234P[8]、G39P[8]、G389P[6][8]混合感染型别.河南省5岁以下腹泻患儿中以A组轮状病毒感染为主,B/C组轮状病毒感染率较低,且存在与A组混合感染模式;秋季和春季为高发季节,秋季高于春季且存在混合感染病例;大部分感染病例无发热、呕吐、脱水症状,出现发热、腹泻、呕吐、脱水等临床症状的病例多以轻症为主.
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2013～2014年我国输入性B3基因型麻疹病毒的基因特征分析
研究2013～2014年中国大陆分离到的输入性B3基因型麻疹野毒株的N蛋白羧基端核苷酸和氨基酸特征.应用MEGA6.0软件对2013～2014年输入我国的B3基因型麻疹病毒、GenBank下载的WHO参考株、2013～2014年全球流行的B3基因型麻疹病毒代表株和中国疫苗株泸191(S191)构建基于N蛋白COOH端450个核苷酸片段序列的亲缘性关系树、分析其核苷酸和氨基酸差异.13株B3基因型中国分离株间的核苷酸序列和氨基酸序列同源性分别为99.7％～100％和100％;与B3基因型WHO参考株的核苷酸和氨基酸同源性分别为96.6％～96.8％和95.3％～97.3％;与2013～2014年流行的B3基因型的麻疹野病毒代表株的核苷酸和氨基酸同源性分别在90.0％～100％和87.9％～100％;与S191的核苷酸和氨基酸同源性分别为93.3％～93.5％和87.2％.本研究对积累我国麻疹病毒分子流行病学基线数据具有很重要的意义,随着我国进入麻疹消除加速阶段,将会监测到更多的非本土基因型的输入,需要进一步加强病毒学监测,防止输入性麻疹野病毒在我国扩散和传播.
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稳定表达脑心肌炎病毒先导蛋白N2a细胞系的建立与鉴定
为建立稳定表达脑心肌炎病毒先导蛋白的N2a细胞系,本研究应用脂质体介导DNA转染法,将表达脑心肌炎病毒(EMCV)先导(L)蛋白的重组质粒pNTAP-B-L转染至N2a细胞中,通过筛选G418抗性单克隆细胞,建立能够稳定表达融合蛋白TAP tag-L的N2a细胞系;利用免疫印迹试验(Western blotting)和间接免疫荧光试验(IFA)对融合蛋白TAP tag-L的表达及细胞内定位情况进行鉴定检测.结果表明EMCV的L基因已经整合进N2a细胞基因组DNA中且L蛋白在获得的阳性N2a细胞中稳定表达,表达产物TAP tag-L主要分布在细胞浆内.建立的稳定表达L蛋白的N2a细胞系,为进一步研究先导蛋白功能及EMCV感染过程中与宿主细胞(N2a)相互作用蛋白的筛选奠定了基础.
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2014年山东省柯萨奇病毒B5型的分子流行病学研究
为了解山东省柯萨奇病毒B5型(Coxsackievirus B5,CV-B5)的分子进化特征,本研究对山东省2014年1～12月无菌性脑膜炎(Aseptic meningitis,AM)病例标本和环境污水监测标本进行肠道病毒(Enterovirus,EV)分离,阳性分离物采用分子生物学方法鉴定型别,并对CV-B5的VP1区序列进行系统进化树分析.结果显示,2014年AM病例中分离到69株CV-B5,占EV分离株43.95％;环境污水中分离到159株CV-B5,占非脊髓灰质炎EV分离株34.49％.上述CV-B5分离株具有季节性特征,夏秋季高峰明显.系统进化树分析表明,本研究分离株属于A、B两个基因簇,各簇之内AM和环境污水分离株之间有密切的亲缘关系,且环境污水分离株具有一定的地域聚集性.A、B基因簇的组内遗传距离分别为0.026、0.030,A基因簇与B基因簇组间遗传距离为0.085,提示CV-B5在山东地区存在2个传播链共循环,同时可能存在CV-B5跨地区传播和流行.本研究结果证明环境监测具有对EV相关疾病的预警能力.
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麻疹病毒沪191株反向遗传系统的建立
建立麻疹病毒沪191株(MV-S191)反向遗传系统.提取MV-S191的RNA,RT-PCR分7段扩增出麻疹病毒反基因组cDNA,通过酶切、连接,拼接出MV-S191全长反基因组,并分别在其3'端和5'端引入丁型肝炎病毒核酶序列(HdvRZ)和锤头核酸酶序列(HamRZ),克隆到pT7-MCS载体,获得pT7MVs191.在MV-S191的P-M基因间区域插入绿色荧光蛋白(GFP),获得pT7MVs191-ATU-GFP,同时构建表达麻疹病毒核蛋白(N)、磷蛋白(P)和大蛋白(L)的3个辅助质粒.将pT7MVs191、pT7MVs191-ATU-GFP分别与辅助质粒通过脂质体介导共转染BSRT7细胞,热休克3h.转染3d后,取上清,感染Vero-SLAM细胞.经RT-PCR、显微镜检测绿色荧光蛋白表达及合胞体形成,在该系统中成功拯救到两种有感染活性的病毒.成功建立了MV-S191的反向遗传系统,为以麻疹病毒为载体进行新疫苗的研发奠定了基础.
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单纯疱疹病毒Ⅱ型CTCF结合位点抑制启动子功能
为了找到CTCF在单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV-2)中的结合位点,并探讨其基因表达调控作用.对比HSV-1与HSV-2全基因组中CTCF结合序列区别;生物信息学分析HSV-2全基因组;Jaspar在线预测CTCF结合位点;依据CTCF结合的序列特点预测结合位置;PCR扩增预测位点并插入pGL3-promoter构建重组载体;重组载体转染人胚胎肾细胞(293T)双荧光检测验证预测位点转录调控效应.预测得到三个CTCF结合位点分别位于潜伏相关转录本(LAT)上游(CTUL)、下游(CTa'm)及内含子(CTRL)位置;扩增目的片段并构建重组载体,双酶切及测序验证成功;双荧光检测显示LAT内含子(pGL3-promoter-CTRL)及下游(pGL3-promoter-CTa' m)结合位点重组载体转染组与pGL3-promoter载体转染组相比,荧光强度明显减弱,差异有统计学意(P＜0.001),但与pGL3-basic组相比,并没有完全沉默荧光霉素的表达;上游结合位点重组载体(pGL3-promoter-CTUL)转染组与pGL3-promoter 相比无明显差异(P＞0.05).HSV-2 LAT序列内含子及下游序列上存在CTCF结合位点,具有减弱基因启动子功能的效应,可能在HSV-2维持潜伏中发挥作用.
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甘肃省2013～2016年手足口病病原学监测分析
本研究对甘肃省2013～2016年手足口病病原监测结果进行分析,以了解甘肃省这几年病原谱的构成,主要病原的流行特点,为进一步做好手足口病防控工作提供依据.2013～2016年,甘肃省监测网络实验室对7 171份标本进行了核酸检测,对其中3373份阳性标本开展了病毒分离培养,对得到的阳性分离株进行全长VP1区核苷酸序列测定及其分子特征分析.检测到核酸阳性标本4 314份,EV71为1 153份,占病原构成的27.73％,CVA16为1 452份,占33.66％,其他肠道病毒为1 709份,占39.62％.重症病例124例,阳性97例,其中EV71为23例,占病原构成的23.71％,CVA16为9例,占9.28％,其他肠道病毒为64例,占65.98％,EV71+CA16混合型为1例,占1.03％;死亡病例2例,均为EV71.2013年以其他肠道病毒为主要病原,占36.76％(347/944);2014年以CVA16为主,占52.83％(625/1 183);2015年和2016年均以其他肠道病毒为主,分别占57.04％(531/931)和48.25％(606/1 256).分离到的病毒株除了EV71和CVA16,其他肠道病毒以CVA6、CVA10和CVA4为主.2013～2016年中,不同年份流行的病原不尽相同,不同地区流行的主要病原也存在地区差异.对流行的几种主要病原的VP1区分析结果表明:C4a基因亚型EV71在甘肃省仍然持续流行;CVA16的流行则是B1b基因亚型占据优势,B1a基因亚型逐渐消失;甘肃省流行的CVA6和CVA10与国内流行的毒株亲缘关系相近,且存在不同的传播链.
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流感病毒M2e与白喉毒素无毒突变体CRM197融合蛋白的抗原性和免疫原性分析
流感病毒严重威胁人类健康且流行株不断变化,传统疫苗对流感预防具有局限性.流感病毒M2蛋白胞外区(M2e)氨基酸序列高度保守,可诱导产生特异性抗体,是通用流感疫苗研究的主要靶标之一.白喉毒素突变体(CRM197)是一种理想的蛋白载体,可增强小分子抗原的免疫原性,商业化的肺炎球菌疫苗采用CRM197结合形式提高多糖分子的免疫原性.本实验通过重组蛋白融合的方式,将M2e与CRM197(aa 1～535)、CRM197-N190(aa 1～190)、CRM197-N389(aa 1～389)的C端或N端进行融合表达,并考察融合蛋白的反应活性以及免疫原性.融合蛋白中的M2e和CRM197均具有反应活性;超速离心分析和四聚体特异构象单抗反应均表明融合蛋白(CRM197-N190)-M2e及M2e-(CRM197-N190)主要以类似M2e天然构象的四聚体形式存在;融合蛋白可与多株流感M2e特异性单抗以及CRM197特异性单抗反应,M2e融合至CRM197 N末端形成的重组蛋白的反应活性高于C端融合蛋白;相比融合GST,与CRM197-N190的融合显著增强了M2e蛋白的免疫原性,为流感通用疫苗研究提供了新思路.
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基于肿瘤基因作用的妊娠妇女调节性免疫细胞与巨细胞病毒的相关性研究
研究基于肿瘤基因作用的妊娠妇女调节性免疫细胞与巨细胞病毒的相关性.收集2015年5月～2016年9月四川省人民医院就诊的妊娠患者,病例纳入标准:年龄范围在22～40岁;初次妊娠患者;排除前置胎盘、先兆流产和妊娠高血压等异常妊娠患者;排除合并慢阻肺、糖尿病、艾滋病等慢性疾病患者;排除艾滋病和乙肝病毒等感染患者;排除长期吸烟、酗酒患者.梯度离心的方法分离患者外周血的淋巴细胞.CD4、CD25和Foxp3流式抗体标记调节性T细胞(Treg细胞);CD19和TGF-β流式抗体标记调节性B细胞(Breg细胞);CD4、CXCR5和Foxp3流式抗体标记滤泡调节性T细胞(Tfr细胞).结果表明,对照组共有30例正常妊娠患者,年龄在22岁至37岁之间;CMV感染组包括30名CMV感染的妊娠患者,年龄在22岁至39岁之间.CMV感染组中CD4+ CD25+Foxp3+的Treg细胞、CD19+ TGFβ+的Breg细胞和CD4+ CXCR5+ Foxp3+的Tfr细胞比例均显著的低于对照组,分别下降了31.9％、78.5％和65.1％,结果具有统计学差异(P＜0.05).CMV感染后,妊娠患者体内Treg细胞、Breg细胞和Tfr细胞等调节性免疫细胞的比例均显著下降,可能对胎儿的生长发育造成影响.
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siRNA沉默HPV18-E7基因表达对人宫颈癌HeLa细胞凋亡和增殖的影响
研究小干扰RNA(siRNA)沉默18型人乳头瘤病毒(Human papillomavirus 18,HPV18) E7基因对人宫颈癌HeLa细胞凋亡和增殖的影响.培养人宫颈癌HeLa细胞株,构建靶向E7基因的两条siRNA,转染HeLa细胞株(实验组:分为siE7-1组和siE7-2组),以不做任何处理的HeLa细胞作为空白对照组(NC),转染无功能siRNA的HeLa细胞作为阴性对照组(Scramble,SCR).转染48 h后,采用实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测转染E7 siRNA 后HeLa细胞mRNA含量变化;采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测E7蛋白表达量变化;流式细胞术Flow cytometry (FCM)检测HeLa细胞凋亡情况;克隆形成和CCK-8检测HeLa细胞生长增殖情况.与NC组相比,siE7-1组和siE7-2组E7基因mRNA表达明显下调,差异有统计学意义(P＜0.01);转染48 h后,与NC组相比,siE7-1和siE7-2实验组HeLa细胞内HPV18-E7蛋白表达水平明显下降(P＜0.05);转染48 h后,siE7-1组和siE7-2组的细胞凋亡率分别为17.78％和36.44％,与NC组相比明显增多,差异有统计学意义(P＜0.01),细胞凋亡结果提示siRNA沉默E7促进HeLa细胞凋亡;CCK-8实验结果显示siE7-1组和siE7-2组细胞生长增殖抑制,差异有统计学意义(P＜0.01);克隆形成实验结果与CCK-8实验结果一致,siE7-1组和siE7-2组HeLa细胞形成的克隆数明显少于NC组,细胞生长增殖抑制(P＜0.01).研究结果表明,沉默E7基因促进人宫颈癌HeLa细胞凋亡,抑制增殖,为宫颈癌治疗提供潜在靶点.
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稳定表达乙型流感病毒血凝素蛋白细胞的构建
获得稳定表达乙型流感病毒血凝素蛋白的HEK-293-HA细胞株.采用RT-PCR方法扩增乙型流感病毒的HA基因,将其克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+)上,构建pcDNA3.1(+)-HA重组质粒.将已鉴定正确的pcDNA3.1(+)-HA质粒与辅助质粒PLV-EF1a-EGFP(2A) Puro通过脂质体介导法共转染HEK293细胞,经嘌呤霉素筛选后得到重组细胞株HEK293-HA,通过流式细胞术法(FCM)来检测细胞中HA的表达情况.所得到的重组细胞经扩大培养后再连续培养15代,采用间接免疫荧光法(IFA)和蛋白免疫印迹法(WB)来检测HA蛋白表达的稳定性.结果表明重组质粒pcDNA3.1(+)-HA经双酶切及测序鉴定正确;共获得3株高表达阳性细胞株.细胞扩大培养后连续传代培养15代后进行Western blot和IFA检测结果表明,重组细胞的HA蛋白得到稳定的表达.已成功获得了能稳定表达乙型流感病毒血凝素蛋白的HEK-293-HA细胞,可为乙型流感病毒HA蛋白的进一步研究提供良好的基础.
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人博卡病毒2型VP1U突变对sPLA2活性的影响
对HBoV2 VP1U蛋白进行原核表达并检测其sPLA2活性,对其关键氨基酸进行突变,检测突变对sPLA2活性的影响.构建重组质粒pMD18T-VP1U,选取VP1U蛋白4个关键氨基酸为突变点,分别进行原核表达,蛋白纯化后用sPLA2试剂盒检测sPLA2活性,对比突变前后VP1U蛋白sPLA2活性有无变化.野生型HBoV2 VP1U蛋白的sPLA2活性为0.243μmol/min/mL,具有sPLA2活性;突变体L19P、P21R、D42H及Y45N蛋白的sPLA2活性分别为野生型蛋白的1.2％、1.2％、0.82％、0.41％.野生型HBoV2 VP1U蛋白具有sPLA2活性,突变体蛋白均几乎完全丧失了sPLA2活性,提示19、21、42、45位4个氨基酸是维持sPLA2活性的关键氨基酸.该研究为靶向抗病毒药物的研究提供了理论基础.
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云南省2009～2015年边境地区麻疹病毒分子流行病学监测
对2009～2015年在云南省边境地区流行的麻疹病毒进行分子流行病学研究,为边境地区麻疹防控策略的制定提供重要的实验室数据.本研究使用Vero/SLAM细胞对云南边境地区麻疹患者中采集的临床标本进行麻疹病毒分离,使用RT-PCR方法扩增阳性病毒核蛋白羧基末端的676个核甘酸,并进行序列测定和分析,随后基于N基因羧基末端450个核苷酸序列进行基因分型以及核苷酸和氨基酸变异分析.云南省自2004年开始开展麻疹病毒学监测,2009～2015年在边境地区共检测到麻疹病毒99株,其中H1a基因型病毒39株(39.4％),为本土流行株;A基因型3株(3.0％),为疫苗相关病例毒株;D9基因型51株(51.5％),D11基因型6株(6.1％),D基因型的比例高达分离毒株的57.6％,均为境外输入的基因型毒株.境外D9和D11型流行株的输入,对边境地区的麻疹疫情防控带来了一定的影响,特别是D9基因型一定时间段内在云南边境形成了持续流行,应引起足够的重视.
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Tet-On3G系统调控人巨细胞病毒蛋白pUL23稳定表达的人胚肺成纤维细胞(HELF)系的建立
人巨细胞病毒(Human cytomegalovirus,HCMV)为疱疹病毒家族一员,易导致免疫力低下或缺陷的人群严重疾病,目前对HCMV编码的皮层蛋白pUL23功能的相关报道很少.本研究应用Tet-On3G诱导表达系统,在人胚肺成纤维细胞(Human embryonic lung fibroblast,HELF)建立诱导表达HCMV病毒蛋白pUL23细胞模型.将病毒基因UL23和阳性对照基因EGFP分别定向插入应答慢病毒载体pLVX-TRE3G中,获得pLVX-TRE3G-UL23-3×Flag、pLVX-TRE3G-EGFP重组慢病毒载体.运用二代慢病毒包装系统与Lenti-X293T包装细胞系,制备收获慢病毒后感染人胚肺成纤维细胞HELF.遗传霉素(Geneticin,G418)和嘌呤霉素(Puromycin,Puro)抗性筛选后多西环素(Doxycycline,Dox)诱导外源基因表达.感染后的细胞在96孔板有限稀释法成单克隆,分别采用RT-PCR与Western blot技术检测病毒UL23基因在mRNA水平与蛋白水平的表达量,筛选出当诱导时高效表达且未诱导时低表达的单克隆细胞;并评估Dox诱导剂量与诱导时间对外源蛋白pUL23表达的影响.限制性内切酶与测序显示重组质粒pLVX-TRE3G-UL23-3×Flag、pLVX-TRE3G-EGFP序列和方向正确.病毒蛋白pUL23在感染细胞中能够被诱导表达;当Dox浓度高于400ng/mL时pUL23蛋白表达量不再随Dox剂量增高而增高.在Dox诱导2h后,RT-PCR结果表明在921bp处有特定条带(UL23-3×Flag基因)与此同时,Western blot实验也检测到pUL23蛋白.这些结果表明,成功构建重组慢病毒载体,包装成慢病毒感染后,病毒基因UL23能够在人胚肺成纤维细胞中诱导表达.Dox的佳工作浓度为400ng/mL,佳诱导时间为12h至24h之间.这将为进一步研究病毒蛋白pU23的功能奠定基础.
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马立克病毒基因缺失疫苗与商品化疫苗的分子鉴别方法
为了对马立克病毒(MDV)meq基因缺失疫苗株SC9-1与商品化MD疫苗CVI988/Rispens株、814株和HVTFC-126株进行分子鉴别,本研究根据疫苗株SC9-1与其它MD疫苗株的基因组差异,分别针对Ⅰ型MDV meq基因以及SC9-1基因组中的禽网状内皮组织增殖症病毒-长末端重复序列(REV-LTR)插入片段,设计三对PCR扩增引物,同时合成针对meq基因和REV-LTR片段的地高辛标记探针,通过PCR扩增和斑点杂交方法区分SC9-l株与其他疫苗株.结果表明,使用针对meq基因的引物F1/R1进行PCR扩增,SC9-1株、CVI988/Rispens株、814株分别扩增出184bp、1 297bp、1 297bp目的片段,HVT FC-126株没有条带;使用针对meq基因的引物F2/R2进行PCR扩增,CVI988/Rispens株、814株均扩增出746bp目的片段,SC9-1株、HVT FC-126株均没有条带;使用针对REV-LTR片段设计的引物F3/R3进行PCR扩增,SC9-1株扩增出512bp目的片段,CVI988/Rispens株、814株、HVT FC-126株均没有条带.同时,使用针对meq基因的探针进行斑点杂交,CVI988/Rispens株、814株均显示阳性结果,SC9-1株、HVT FC-126株均为阴性;使用针对REV-LTR的探针进行斑点杂交,SC9-1株显示阳性结果,CVI988/Rispens株、814株、HVT FC-126株均为阴性.因此,利用本研究设计的特异性PCR引物以及探针,通过PCR扩增和斑点杂交方法可有效区分SC9-1与其他商品化MD疫苗.
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牛冠状病毒BCV-Aks-01新疆南疆株全基因组序列测定及其分子特征分析
为掌握牛冠状病毒(Bovine coronavirus,BCoV) BCV-Aks-01新疆南疆株的全基因组序列、分子结构特征及遗传变异情况.本研究以新疆南疆某牛场BCV-Aks-01阳性样本为基础,以GenBank中BCoV参考株设计扩增引物和测序引物,提取样本中病毒核酸,对BCV-Aks-01株进行全基因组扩增、测序、构建系统发生树及序列分析.结果表明,BCV-Aks-01新疆南疆株为BCoV,其全基因组长为30 975bp,与GenBank收录的参考株比较,核苷酸同源性高达98.8％,属于β类冠状病毒2a亚类,具有β类冠状病毒共同结构特征.首次获得BCV-Aks-01新疆南疆株全基因组序列并阐明了其基因组分子结构特征.
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齐多夫定和单克隆抗体联合应用去除疫苗毒种中REV的污染
禽网状内皮组织增生症病毒(REV)在禽弱毒疫苗中的污染被认为是REV感染的途径之一,去除疫苗毒种中REV的污染是生产合格疫苗的前提,此前我们研究证实了某IBDV疫苗毒种存在REV的污染,本研究试图通过核苷类逆转录酶抑制剂类药物齐多夫定(Azidothymidine,AZT)和针对REV的单克隆抗体(McAb)单独或联合应用来去除疫苗毒种中REV的污染.将污染REV的IBDV疫苗毒种接种DF-1细胞后,分别经5μg/mL的AZT,5％的McAb或两者联合应用干预后,毒种中污染的REV复制受到了明显的干扰,特别是经过AZT与McAb联合应用两次干预后,检测REV为完全阴性,毒种经检验合格.本研究通过AZT与McAb联合应用成功净化了IBDV疫苗毒种中REV的污染,为解决类似问题提供了新的思路.
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北京地区2007～2015年鲤春病毒血症病毒感染流行病学研究
为监测鲤春病毒血症(SVC)在北京地区的流行现状和特征,2007～2015年,从北京市9个区县采集673份样品,使用细胞分离法和聚合酶链式反应(PCR)进行检测,分离到的SVC病毒株,扩增糖蛋白部分基因片段,进行测序和做进化树分析.结果显示,2007～2015年北京市SVCV以散在性流行为主;发现28个SVCV分离株,阳性检出率为4.16％;28个SVCV分离株与美国的SVC分离株和在中国其它地方的SVC分离株在进化方向上一致,而与欧洲的SVC分离株明显不同.为预防控制SVC的发生和流行,应加强对水产苗种的管理,认真开展疫情监测与调查研究工作.
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引起甘肃省一起病毒性脑炎疫情的ECHO30全基因组序列分析
为了解引起2015年甘肃省酒泉市瓜州县病毒性脑炎疫情的ECHO30的基因特点,分析其重组变异和进化规律,对从患者脑脊液标本中分离到的3株ECHO30进行全基因序列测定和分析,采用Simplot3.5.1软件进行重组分析,并利用MEGA6.0软件构建系统进化树.结果表明,本次疫情中分离到的ECHO30与E30/SD/2010/CHN株的相似度高(92％～99％).重组分析表明甘肃ECHO30株在非结构蛋白区P2区和P3区出现了多处重组现象.由于对当地流行的肠道病毒谱不清楚,虽然发现此次流行的病毒存在重组,但是对重组片段的来源尚不明确,因此需要加强对甘肃省流行肠道病毒的本底调查工作和遗传背景的研究工作.
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药用植物柴胡病毒病病原物的分子鉴定
利用非序列依赖性扩增(Sequence independent amplification,SIA)方法对所采柴胡病样进行分子鉴定.序列测定及分析发现,伴有花叶症状的柴胡受到黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)和蚕豆萎蔫病毒2号(Broad bean wilt virus 2,BBWV2)的复合侵染.为明确柴胡CMV分离物(CMV-SXCH)和柴胡BBWV2分离物(BBWV2-CH)的分类地位,进一步克隆CMV-SXCH的CP、MP和BBWV2-CH的LCP、SCP;序列比对发现,CMV-SXCH与CMV亚组ⅠB中株系xJ2相似性高,其核苷酸和氨基酸序列同源性分别为99.1％、99.5％;BB-WV2-CH与BBWV2中的K株系相似性高,核苷酸和氨基酸序列同源性分别为95.4％、99.2％.系统进化树分析表明,CMV-SXCH与大多数CMV中国分离物聚类为一簇,同属于CMV亚组ⅠB;BBWV2-CH与BBWV2韩国K株系聚类为一簇,亲缘关系近.
| 年 | 期数 |
| 2018 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2017 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2016 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2015 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2014 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2013 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2012 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2011 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2010 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2009 | 01 02 03 04 05 06 z1 |
| 2008 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2007 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2006 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2005 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2004 | 01 02 03 04 |
| 2003 | 01 02 03 04 |
| 2002 | 01 02 03 04 |
| 2001 | 01 02 03 04 |
| 2000 | 01 02 03 04 |
| 1999 | 04 |
