免疫学杂志
Immunological Journal 면역학잡지
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人淋巴细胞抑制素基因克隆与表达的研究
目的获得人SPN基因,构建SPN的原核表达载体.方法采用RT-PCR的方法从激活的人外周血淋巴细胞的总cDNA中得到l493bp的人SPN基因,NdeⅠ、BamHⅠ双酶切后定向克隆到原核表达载体pET-11-c中,全自动测序仪测序,转化宿主菌BL21后,IPTC诱导,SDS-PAGE电泳分析.结果成功克隆到人SPN基因,并构建表达质粒,SDS-PAGE电泳证实目的蛋白表达.结论为进一步研究SPN的免疫抑制机理和作用以及探讨SPN作为新型生理性免疫抑制剂的可能性打下了坚实的基础.
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脱抗原牛角胎骨移植家兔后的特异性免疫反应
目的研究脱抗原水牛角胎移植后的免疫排斥反应和成骨效应.方法以日本大耳白兔为动物模型,分别植入经30%H2O2、0.6 mol/L HCl脱抗原脱钙,30%H2O2脱抗原不脱钙2种温和方法处理的水牛角胎至兔左侧肢骨缺损处.体外检测外周血特异性T淋巴细胞转化率和ELISA检测血清特异性抗角胎IgG抗体.结果脱抗原脱钙处理显著地降低了角胎的抗原性,与对照相比,未见受体对移植物产生显著的特异性细胞和体液免疫反应(P＞0.05),尤其是脱抗原不脱钙角胎效果更佳.两者成骨效果均良好.结论脱抗原角胎是一种免疫原性低、成骨效果好、来源方便的骨移植材料.
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可激活人γδT细胞的结核杆菌耐热多肽抗原的初步纯化与活性鉴定
目的对结核杆菌耐热多肽抗原(Mtb-Ag)的蛋白组成进行定性分析,并观察Mtb-Ag及其纯化组分刺激人外周血γδT细胞和αβr细胞增殖反应的量效关系.方法用快速蛋白液相色谱仪(FPLC)定性分析Mtb-Ag的蛋白组成,并用不同剂量的Mtb-Ag及其纯化组分体外刺激健康人外周血PBMC,培养9 d后经流式细胞仪检测细胞表型.结果Mtb-Ag经FPLC MonoQ离子交换柱分析存在20种蛋白成分.Mtb-Ag在合适刺激剂量时对人γδT细胞发挥优势扩增;当剂量过大则对αβT细胞发挥优势扩增;其分离纯化的含大分子蛋白的蛋白峰Ⅰ随着刺激剂量增加而对αβT细胞的扩增表现显著增强趋势;而其分离的含低分子多肽的蛋白峰Ⅱ随着刺激剂量增加则对γδT细胞扩增表现显著增强趋势,并且其活性明显高于蛋白峰Ⅰ,同时其对αδT细胞的扩增效应并不明显,并显著低于Mtb-Ag和蛋白峰Ⅰ.结论Mtb-Ag刺激γδT细胞扩增时应选择合适的刺激剂量,其所含的低分子多肽抗原能特异性激活γδT细胞,而其所含的大分子蛋白抗原则特异性激活αδT细胞.
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人IL-18结合蛋白AcDNA的克隆及在COS-7细胞中的表达
目的克隆人IL-18结合蛋白A(hIIL-18 BPa)的cDNA,观察其在COS-7中的表达.方法采用RT-PCR自人白血病细胞株jurkat中获得hIL-18 BPa的cDNA,将其克隆至T-vector中,经测序确证后,将该基因定向插入真核表达载体pcDNA3.1(+)中.脂质体介导法将其转染C05-7细胞,72 h后收集上清纯化,用BCA法测定hIL-18 BPa的含量,用ELISA法测定其活性.结果获得的IL-18 BPa的cDNA序列与gene bank登录的cDNA序列一致.上清液中hIL-18 BPa含量为1.4 mg/L,并具有良好的生物学活性.结论成功克隆hIL-18 BPa基因,并实现了在COS-7细胞中的瞬时表达,为研究其活性奠定了基础.
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抗人CD16单克隆抗体可变区基因的克隆和表达
目的克隆抗人CD16单克隆抗体重、轻链可变区(VH,VL)基因并合成单链抗体(ScFv)基因.方法从分泌抗人CD16单克隆抗体的杂交瘤细胞B88-9中提取总RNA,应用RT-PCR技术获得抗CD16单克隆抗体的VH、VL基因.用连接肽(Linker)将VH和VL连接成具有VH-Linker-VL结构的ScFv基因,将其克隆到表达载体pcDNA3.1(+),并转染COS-7细胞.结果VH基因长度为354bp,属于鼠抗体可变区重链基因家族Ⅰ(B)亚群;VL基因长度为333 bp,属于鼠抗体可变区kappa轻链基因家族Ⅲ亚群.采用夹心ELISA方法检测到ScFv的表达.结论抗人CD16单克隆抗体VH与VL基因的克隆和ScFv基因的构建为基于CD16的导向免疫治疗奠定了基础.
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迟缓爱德华菌全菌及外膜蛋白的免疫力比较
目的比较观察Et ATCC15947株的全菌(WCB)及外膜蛋白(OMP)对小鼠和鲫鱼免疫效果.方法用全菌凝集试验及ELISA测定抗体滴度,以迟发性变态反应(DTH)观察细胞免疫情况.结果免疫小鼠抗体滴度14 d时,以全菌组高,而在28 d时以OMP+LPS组高.保护率分别是:OMP+沙门氏菌IPS＞全菌组＞OMP＞OMP+FCA.免疫鲫鱼第1周OMP+LPS注射组即能测到抗体,而全菌组则需2～3周,但强化免疫后均能升高至相似的滴度,浸泡组则只在刚免疫的2～3周可测到低滴度的凝集抗体.保护率:OMP+LPS注射组＞全菌注射组＞全菌浸泡组.结论给小鼠和鲫鱼注射全菌和OMP均能提供良好的免疫保护,在有佐剂LPS存在下,OMP效果更好.
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甲胺磷人工抗原的合成和鉴定
目的合成和鉴定甲胺磷人工抗原.方法用磷酸化方法偶联氧、硫二甲基硫代磷酰氯到牛血清蛋白上,然后做一系列的实验,如:测定磷、紫外、31P核磁共振光谱和免疫小鼠等.结果人工抗原的偶联比是16,人工抗原的紫外光谱图与牛血清蛋白质相比发生改变,人工抗原和标准甲胺磷的31P核磁共振光谱具有相同的化学位移峰,被免疫的小鼠产生了抗甲胺磷的抗体.结论甲胺磷人工抗原合成成功,为其免疫测定方法的建立提供了条件.
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腺病毒介导HAV结构基因表达及其产物的免疫学性质检测
目的探讨重组腺病毒免疫实验动物后的抗体反应.方法利用RT-PCR方法,从HAV-L8株的RNA中扩增出结构蛋白vp3+vp1基因,克隆到穿梭质粒pXCX2 NotⅠ上.采用磷酸钙-DNA共沉淀技术,将E1区缺失的复制缺陷型腺病毒载体pJM17与pXCX2-CMV-HAV共转染293细胞.结果通过胞内同源重组,经RT-PCR、免疫荧光染色和蛋白印迹鉴定表明,获得了复制缺陷型重组腺病毒rAdHAV.纯化后的rAdHAv滴度为1×109.0 TCID50/mL.昆明种小白鼠口服rAdHAV后,诱导产生了抗HV IgG.结论复制缺陷型腺病毒可望成为发展口服病毒疫苗的有效载体系统.
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Bcl-2家族不同分子分别介导地塞米松在不同类型人骨髓瘤细胞系上的凋亡效应
目的研究3种Bcl-2家族抗凋亡蛋白(Bcl-2、Bcl-xl、Mcl-1)在地塞米松(dexamethasone,DEX)诱导的不同类型人骨髓瘤细胞系凋亡过程中的作用.方法采用MTT方法观察DEX对骨髓瘤细胞生长的影响;采用碘化丙腚(propidium iodide,PI)染色和流式细胞术分析骨髓瘤细胞经DEX处理后的凋亡情况;采用免疫印迹方法检测Bcl-2家族3种抗凋亡蛋白在骨髓瘤细胞凋亡过程中的表达改变情况.结果DEX能够诱导IL-6依赖型骨髓瘤细胞系XG-7和IL-6非依赖型骨髓瘤细胞系Sko-007发生典型的细胞凋亡反应;同时XG-7细胞中Bcl-xL和Mcl-1的表达在DEX处理后明显下调;而同样条件下Sko-007细胞中则出现了Bcl-2的降解.结论Bcl-2家族不同抗凋亡蛋白可分别介导DEX在不同骨髓瘤细胞系上的凋亡效应.
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TH1/TH2平衡的体外诱导转换及其对嗜酸性粒细胞功能的影响
目的探索TH1/TH2平衡的体外诱导作用及其对嗜酸性粒细胞(Eos)功能的影响.方法取人肝素抗凝外周全血,加入结核菌素纯蛋白衍生物(pmiffed proteinderivative,PPD)10μg/mL,培养3、5、7 d,用ELISA方法检测上清IL-4和γ-IFN的含量.取3 d上清培养液加入到肝素抗凝全血中,体外培养72 h,IL-5作为阳性对照.用流式细胞术分析CDl6阴性细胞群体中CD69的表达和碘化丙啶(PI)染色情况.结果应用PPD体外诱导全血产生较高水平的γ-IFN,IL-4含量未测出;培养体系中加入PPD诱导上清液明显抑制了Eos和IL5活化的Eos CD69的表达并诱导其凋亡.结论PPD体外成功诱导TH1/TH2平衡的转换;PPD诱导上清液具有活化Eos和诱导其凋亡的作用.
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基于α-病毒复制酶的高效小鼠P815肿瘤疫苗的构建和表达
目的克隆小鼠肥大细胞瘤P815细胞株的肿瘤特异P1A基因于含α-病毒复制酶的真核表达载体pSMART中,以制备P815肿瘤DNA疫苗.方法RT-PCR方法扩增P1A基因,以含α-病毒复制酶的哺乳细胞高效表达质粒pSMART为载体,构建重组肿瘤DNA疫苗.重组体经酶切和测序后,再用脂质体转化293人胚肾细胞,ECL western-blot法和免疫组化法鉴定转化细胞中P1A基因的表达.结果正确构建了P1A/pSMART重组质粒,并且在转化此质粒的293细胞中检测出了P1A的表达.结论成功构建了重组P1A/pSMART肿瘤DNA疫苗,可以进行下一步的肿瘤动物模型的疫苗接种及疗效观察.
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特异性CTL胞毒作用与HLA型别关系探讨
目的探讨特异性CTL胞毒作用与靶细胞的HLA型别关系.方法本实验以特定HLA型别、EB病毒转化的B淋巴母细胞(EBV-LCL)与同种异体单个核细胞(PBMC)混合培养,激活同种抗原特异性细胞性T细胞(CTL);观察其对携带不同HLA型别的EBV-LCL靶细胞的杀伤活性.结果用EBV-LC11致敏的效应细胞1对EBV-LCL2的杀伤效应比对EBV-LCL3强;用EBV-LCL2致敏的效应细胞2对EBV-LCLl的杀伤效应比对EBV-LCL3强;用EBV-LCL3致敏的效应细胞3对EBV-LCL1、2几乎无杀伤效应.结论特异性CTL对不同HLA型别的靶细胞的胞毒作用存在差异,这不仅仅与HLA型别关联,而可能取决于抗原肽与MHC所组成的抗原综合信息.
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KIR2DL4-IgFc融合蛋白基因真核细胞表达载体的克隆及鉴定分析
目的构建人KIR2DL4-IgFc段融合蛋白基因真核细胞表达载体.方法用RT-PCR从孕妇蜕膜组织单个核细胞的总tmRNA中逆转录扩增KIR2DL4胞外段cDNA,经Nhe I和BamHI双酶切后,定向插入真核细胞表达载体CD5lnegl中,然后经酶切和测序鉴定.结果限制性内切酶酶切和序列分析表明已成功构建CD5lnegl-KIR2DL4载体.结论本研究成功构建KIR2DI4-IgFc融合蛋白真核细胞表达载体,为研究KIR2DL4与其配体之间的关系奠定了基础.
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双氢青蒿素对卡氏肺孢子虫肺炎大鼠肺泡巨噬细胞凋亡的影响
目的检测双氢青蒿素对卡氏肺孢子虫肺炎(PCP)大鼠肺泡巨噬细胞凋亡的影响.方法以醋酸可的松皮下注射wistar大鼠建立PCP动物模型,用60mg/kg双氢青蒿素治疗实验大鼠,杀鼠取肺,用胶原酶消化法分离肺泡巨噬细胞,用PI和TUNEL法检测其凋亡,同时设有正常大鼠对照组.结果感染组和治疗组大鼠肺泡巨噬细胞凋亡率显著高于正常对照组,治疗组大鼠肺泡巨噬细胞凋亡率明显低于感染组.结论卡氏肺孢子虫感染引起大鼠肺泡巨噬细胞发生凋亡,经双氢青蒿素治疗后PCP大鼠肺泡巨噬细胞凋亡降低.
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HLA-B40组等位基因多态性和血清学分型不明确标本分析
目的利用DNA分型技术调查上海汉族人群HLA-B40组等位基因多态性并比较配型标本中HLA-B40抗原血清学和DNA分型的结果.方法采用反向PCR-SS0P技术进行DNA分型,可检出HLA-B*4001-4011等11个等位基因.结果所有样本DNA分型均获成功,无假阳性和假阴性结果出现.质控DNA分型结果与uCLA结果相符.上海地区汉族人群共检出B*4001-4003、4005-4007、4011等等位基因,未检出B*4004、4008-4010等等位基因.296名无关个体中HLA-B40*组等位基因频率为0.1402.血清学方法检测HLA-B40组抗原错误率为12.82%(10/78).结论该技术用于HLA-B40分型分辨率高,分型结果较血清学方法更加精确,可确保HLA分型的准确.
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急性冠脉综合征病人肺炎衣原体抗体滴度的临床价值
目的探讨肺炎衣原体TWAR IgG、IgM抗体滴度对急性冠脉综合征(ACS)的临床预测价值.方法应用间接微量免疫荧光法,测定了102例ACS组病人和60例对照组受试者血清TWARIgG、IgM抗体滴度,并随访6个月.结果ACS组TWAR IgG既往感染阳性率和平均几何滴度均显著高于对照组,P＜0.01.高抗体水平发生ACS风险相对增高.ACS病人随访中,非感染者心血管事件发生率较感染者明显降低,P＜O.05.结论肺炎衣原体感染与ACS有关.TWAR IgG抗体滴度对判断ACS病人预后有较好的临床价值.
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白血病异基因造血干细胞移植后TCR Vβ亚家族基因谱的研究
目的了解白血病病人异基因外周血干细胞移植后1年以上患者TCR VβT细胞免疫功能重建的情况.方法采用RT-PCR扩增5例CML和1例AML-M3a移植后(12～56个月)患者外周血的单个核细胞的TCR Vβ24个亚家族基因,分析其TCR Vβ亚家族的表达.结果经24个Vβ引物所分别进行的RT-PCR检测TCR Vβ各亚家族基因的表达情况,发现6例病人外周血与正常人表达24个Vβ亚家族有明显的不同,病人的部分Vβ亚家族T细胞仍未能重建,仅表达5～22个亚家族基因.结论移植后1年以上患者尽管CD3+T细胞已恢复,但外周血TXR Vβ亚家族基因谱的表达仍不完全,T细胞免疫功能仍未完全重建.
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小鼠IL-18 cDNA克隆及在H22肝癌细胞中的初步表达
目的构建小鼠白细胞介素-18(mIL-18)逆转录病毒载体,实现mIL-18在小鼠H22肝癌细胞中表达.方法用RT-PCR方法从小鼠肝脏细胞中扩增出mIL-18 cDNA,克隆到载体pBluscript中,测序后亚克隆到逆转录病毒载体pLNCX中.pLNCX/mIL-18重组子用脂质体介导的方法转染PA317包装细胞,用400μg/mL G418进行筛选.挑取筛选得到的阳性克隆扩大培养,取上清感染NIH3T3细胞和H22肝癌细胞.用感染后的H22细胞上清诱导小鼠脾细胞IFN-γ生成能力来检测H22细胞分泌mIL-18的情况.结果用NIH3T3细胞测得病毒滴度为1.5×105克隆形成单位CFU/mL,转染后的H22肝癌细胞上清对小鼠脾细胞具有显著的IFN-γ诱生作用.结论pLNCX/mIL-18重组子构建成功,初步证明转染后的H22肝癌细胞能够表达IL-18.
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夹心免疫PCR方法检测蓖麻毒素
目的建立了双抗夹心免疫PCR的检测技术,检测极微量的抗原.方法以亲和素作为连接分子连接生物素化抗体和生物素化DNA,应用于免疫PCR中,检测极微量的抗原.结果建立了双抗夹心免疫PCR的检测技术,检测蓖麻毒素的灵敏度达0.1 pg/mL,与夹心ELISA方法比较灵敏度高103倍.结论建立的免疫PCR系统灵敏度高,可用于各种微量抗原的检测.
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影响人干细胞因子基因高效表达的因素探讨
目的分析SD序列长度、基因起始码ATG和终止码TAA上下游处RNA的二级结构及密码子偏性等影响表达效率的主要因素,以期实现重组人干细胞因子在原核细菌中高效表达.方法分析并修改编码人SCF氨基酸的密码子,分段合成改造后的基因,PCR一次性完成拼接,将基因克隆到pBV-220载体上,诱导表达.结果天然人SCF基因在pBV-220载体的表达占菌体总蛋白的9.5%,基因改造后SCF占菌体总蛋白的27%,表达的蛋白能够为SCF的单克隆抗体所识别,初步纯化的sCF蛋白纯度大于80%,能够促进Mo7e细胞的增殖活性.结论密码子偏性是影响SCF在原核细菌中高效表达的主要因素,通过改变密码子偏性能过实现高效表达.
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柱凝集技术Coombs试验效果评价
目的探讨柱凝集技术间接抗人球法在交叉配血和不规则抗体筛检试验中的可靠性.方法应用CAT法、凝聚胺法(polybrene)和试管间接抗人球法(TCT)3种技术对20份阴性血清和30份已知阳性血清进行了间接抗人球试验,对其中5份阳性血清进行了灵敏度测试.结果3种方法对30份阳性血清的阳性检出率分别为:CAT法100%、polybrene法93.3%、TCT法76.7%.灵敏度测试结果为CAT法＞polybrene法＞TCT法.结论CAT法在日常配血和不规则抗体筛检试验中,是一种灵敏度较高的可靠方法,提倡在输血领域推广应用.
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多发性硬化患者血和脑脊液淋巴细胞CD95和CD95L的变化
多发性硬化(multiple sclerosis,MS)是以中枢神经系统脱髓鞘和炎细胞浸润为特征的自身免疫性疾病.细胞凋亡在自身免疫性疾病的作用已引起重视[1],膜蛋白CD95通过与其配体CD95L的结合是触发凋亡的主要途径.本研究的目的是观察MS患者外周血(PB)和脑脊液(CSF)中淋巴细胞CD95和CD95L的表达水平.
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等电聚焦免疫印迹技术在α1-ACT蛋白表型分析中的应用
传统的薄层等电聚焦免疫固定技术在实验后期的免疫固定过程中所花费的抗体较多[1].本研究在分析人α1-ACT蛋白表型中对等电聚焦免疫固定和等电聚焦免疫印迹2种技术进行了比较,旨在为临床和基础研究寻找一种更敏感的、经济的蛋白分离分析方法.
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一种新型免疫细胞—NKT细胞
NKT细胞(naturla killer T cells)是一类表达NK细胞表面分子标志的α/βT淋巴细胞,具有迅速分泌大量细胞因子的能力,能够对效应细胞提供早期的辅助以及在一些免疫反应中调控TH1或TH2辅助细胞的分化.NKT细胞识别由CDld分子提呈的抗原,其作用机理既不同于NK细胞也不同于T、B淋巴细胞,在一些自身免疫性疾病,肿瘤监视及抗肿瘤方面有着非常重要的作用.
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广谱模式识别分子To11-like receptor 2的研究进展
TLR-2(Toll-like receptor 2,TLR-2)是哺乳动物TLRs(Toll-like receptors,TLRs)家族的一员,作为细胞表面的天然受体蛋白,主要参与病原微生物产物的识别及炎症信号传导,介导天然抗感染免疫;近又发现其参与机体对非感染因子所致炎性组织损伤的识别.通过对TLR-2参与的识别和细胞内信号传导机制的研究,可为深入探讨抵御微生物感染的机制、对自身正常与非正常组织的识别提供新的思路.
关键词： Toll-like receptor 2 天然免疫
| 年 | 期数 |
| 2018 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 12 |
| 2017 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2016 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2015 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2014 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2013 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2012 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2011 | 01 02 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2010 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2009 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2008 | 01 02 03 04 |
| 2007 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2006 | 01 02 03 04 05 06 z1 |
| 2005 | 01 02 03 04 05 06 z1 |
| 2004 | 01 02 03 04 05 06 z1 |
| 2003 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2002 | 01 02 03 04 05 06 z1 |
| 2001 | 01 02 03 04 05 06 z1 |
| 2000 | 01 02 03 04 05 06 Z1 |
| 1999 | 01 02 03 04 |
