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转基因水稻潮酶素标记基因在大鼠体内的代谢
目的本研究利用转基因水稻潮酶素标记基因(hpt)为模式基因,研究了hpt在大鼠消化道中降解的特点及影响因素,初步探索hpt在大鼠消化道内降解的规律性.
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转基因水稻潮酶素标记基因在大鼠体内代谢的初步研究
目的 初步探索hpt在大鼠消化道内降解的特点和肝脏、肾脏转移的可能性.方法 48只成年雄性SD大鼠随机分为8组,每组6只,6组作为转基因组,2组作为非转基因组,分别喂饲转基因饲料和非转基因饲料两周.所有动物于试验结束当天喂饲后2、4、6、8、10和24h处死动物,取胃、空肠、回肠下段、盲肠、直肠的内容物.另取20只雄性SD大鼠随机分为2组,每组10只,转基因大米饲料与非转基因饲料喂饲大鼠4周,取其肝脏、肾脏.用PCR方法检测hpt片段在肠道和肝、肾脏器中的代谢情况.结果 hpt基因在胃内容物中有少量未被降解之外,在小肠、盲肠及直肠内容物中,基因大部分已被降解.hpt基因在肠道的降解存在时间和片断依赖型.在试验周期内,肝、肾脏器中未捡出hpt基因片断.结论 转基因水稻hpt基因在大鼠消化道内很容易降解,且不能在肝、肾脏器中被捡出.
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转基因作物标记蛋白潮霉素磷酸转移酶活性的测定方法
潮霉素磷酸转移酶(HPT)是转基因作物中重要的标记蛋白,其活性的测定对含有该标记基因的转基因作物的植株构建、基因沉默、标记基因去除及安全性分析等具有重要的作用.本文综述了潮霉素磷酸转移酶活性测定的几种方法,包括放射化学法、抑菌生长法及酶耦联法,其中放射化学法用于检测组织粗提蛋白中的HPT活性,而其他两种方法适用于纯化过的HPT蛋白活性的检测.
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转基因食品中标记基因的生物安全性研究进展及对策
标记基因是帮助对转基因生物体进行筛选和鉴定的一类外源基因,虽然它们仅在植物筛选的早期阶段发挥作用,但会存留在成熟的转基因作物中,因此其安全性研究不容忽视.本文着重对转基因食品中标记基因的生物安全性进行综述,分析其可能的风险及危害,总结了当前已被认可安全使用的标记基因.此外,对转基因食品进行强化标识是加强其市场管理的重要举措,其基础是要开发出准确可靠的转基因成分鉴定技术.文中对终去除转基因食品中标记基因的方法也进行了介绍,以彻底消除其安全性隐患.
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应正确把握遗传研究中有关病例对照研究的前提条件
病例对照研究是目前疾病关联分析中应用较多的方法.遗传研究中的病例对照研究是基于群体中无亲缘关系的病例组与表现型正常的对照组在某个易感候选基因或标记基因出现不同的频率而设计的.
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带有标记基因自删除系统的穿梭载体的构建与功能鉴定
构建一个具有标记基因自动删除功能的穿梭质粒载体pZL-EGFP,用于快速准确地筛选符合临床试验要求的携带有外源目标基因的重组痘苗病毒MVA(rMVA).为构建pZL-EGFP,将原有穿梭质粒pSC11的标记基因由LacZ置换成EGFP基因,并在EGFP基因的两侧插入TKL的同源序列.pZL-EGFP与MVA病毒共转染BHK-21细胞后经10代传代,一次噬斑筛选以获得携带有外源基因且EGFP已被删除的rMVA.终获得的rM-VA通过PCR和Western Blot方法对pZL-EGFP的功能进行鉴定.成功构建出具有标记基因自动删除功能的穿梭质粒载体pZL-EGFP,包装获得的重组痘苗病毒可在传代过程中自动删除标记基因EGFP.基因删除未影响重组病毒的活力,外源蛋白的表达具有良好的稳定性.pZL-EGFP能与MVA病毒在BHK-21细胞内发生同源重组并包装出rMVA,其携带的标记基因可在病毒传代过程中通过分子内同源重组被自动删除,基因删除不影响重组病毒的活力及外源基因的表达,这为进一步的研究奠定了坚实的基础.
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论文投递中关于统计学方法应用的一点体会
总结多次投稿经验,其中在统计方法上用到关于病例随访资料分析,结合统计学基本内容,谈一点体会.下面简单介绍实验的背景及存在的问题.1 本实验方法将种瘤后5天的40只大鼠随机分为5组,每组8只,A组为Ad.hTNF组;B组为Ad.hIL-2组;C组为Ad.hTNF+Ad.hIL-2组;D组为标记基因重组腺病毒(Ad.LacZ)对照组;E组为培养液对照组.
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绿色荧光蛋白报道基因转染鼻咽癌细胞系CNE1后的表达:用做转染报道基因的可行性鉴定
目的:将经过"人类化"改造的绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)基因质粒导入鼻咽癌CNE1细胞系内,观察GFP报道基因转染鼻咽癌细胞系CNE1后的表达情况.方法:实验于2004-07/2007-07在广东医学院病理学实验室完成.将带有GFP报道基因的质粒PAT-GFP及PAT-GFP-LMP1在电容960 μ F,280 V条件下电导转染到鼻咽癌CNE1细胞系中,用选择培养液(嘌呤霉素筛选)继续换液培养直至长出抗性细胞克隆,胰酶消化收集细胞.存488 nm光激发下,用荧光显微镜检测及流式细胞仪观察转染细胞在活的、固定后或裸鼠体内移植后3组细胞的GFP的表达情况并计算转染效率,并用免疫组化法及Western blot法观察插入目的基因LMP1的表达情况.结果:温度在28～32℃的条件下活细胞有GFP基因稳定而持续地表达,但表达较低,表达率为(16.20±1.70)%,且目的基因LMP1的插入明显影响GFP基因的表达,表达率为(3.48±0.28)%,而在固定后或裸小鼠体内移植后均无表达;目的基因LMP1则能稳定而持续地表达.结论:绿色荧光蛋白报道基因GFP在CNE1细胞系中能稳定而持续地表达,且不影响插入目的基因的表达,可用做转染报道基因.
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绿色荧光蛋白GFP在转化细胞和肿瘤细胞中的表达
目的 在肿瘤基因治疗研究中建立一个用绿色荧光蛋白(green fluorescent protein，GFP)为标记基因的合适条件。方法 用带有GFP突变体的质粒转染到表达细胞，观察GFP瞬时表达的情况：1．直接测定GFP在COS-7细胞中的表达并观察表达的稳定性；2．比较不同启动子驱动的pcDNAa-EGFP和pSVKa-S65T两种质粒在不同肿瘤细胞中的转染效率；3．用LacZ基因与GFP基因共转染48h后，通过FACS分选测定两种基因在同一细胞中的表达情况。结果 在不同条件下的活细胞中有GFP基因表达，且表达具有稳定性，表达持续约2周左右；CMV启动子和SV40启动子调控的GFP对不同肿瘤细胞株的转染效率有差异。当两种基因共转染后用FACS分选，选出GFP细胞带有LacZ基因细胞在1：4时可达85％以上。结论 通过GFP表达可连续而直接地观察活细胞中的基因表达，利用GFP可快速地挑选带有靶基因的细胞。
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GFP报道基因在鼻咽癌细胞系CNE-2Z中的表达
目的观察GFP报道基因在鼻咽癌细胞系CNE-2Z中的表达.方法将带有GFP报道基因的载体质粒pPAT-GFP和3种带有GFP报道基因及目的基因抗端粒酶核酶基因teloRZ的不同质粒pGFPuro-teloRZ 2.1、pGFPuro-teloRZ 7.1、pGFPuro-teloRZ 7.7,转染到鼻咽癌CNE-2Z细胞系中,用荧光显微镜及流式细胞仪检测转染细胞在固定后的活细胞中GFP基因的表达情况.结果 GFP基因在活细胞中有表达,而在固定后无表达,且目的基因的插入影响GFP基因的表达.结论 GFP基因在转染了含目的基因质粒的鼻咽癌CNE-2Z细胞中稳定表达,可以在CNE-2Z细胞株和抗端粒酶模板区核酶的研究中作为质粒转染和基因表达的报道基因.
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定量Bcr/ab1融合基因在慢性骨髓增殖性疾病中的表达及意义
慢性粒细胞白血病(CML)因染色体t(9,22),产生bcr/abl融合基因,其蛋白产物能激活酪氨酸激酶,抑制CML细胞凋亡.因而bcr/abl融合基因作为CML的标记基因,已用于CML的临床诊断和微小残留病变检测.真性红细胞增多症(PV),原发性血小板增多症(ET),慢性特发性骨髓纤维化(1MF)与CML同属慢性骨髓增殖性疾病(CMPD),具有重叠的临床特征,但自然病程和治疗方法不同,因此,有必要在各疾病间进行鉴别.我们对CMPD患者进行了bcr/abl融合基因检测,现将结果报告如下:
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服用非甾体抗炎药与不同基因型个体结直肠癌发病风险的关系
为了寻找与规律服用阿司匹林或非甾体抗炎药（NSAIDs）后结直肠癌的发病风险有关的常见标记基因，本研究纳入了1976—2003年间于美国、加拿大、澳大利亚和德国进行的5项病例对照研究和5项队列研究中的8634例结直肠癌患者和8553例非结直肠癌患者，分析规律服用阿司匹林或NSAIDs与不同单核苷酸多态性（SNPs）结直肠癌发病风险的关系。研究结果发现，与未规律服用阿司匹林和或NSAIDs相比，规律服用后结直肠癌的发病风险降低［28％比38％，OR＝0．69（95％ CI：0．64～0．74），P＝0．000］。 Logistic回归分析结果显示，MGST1基因附近的12号染色体短臂1区2带3号亚带（12p12．3）的SNP位点rs2965667的基因型与服用阿司匹林或NSAIDs存在明显的交互作用（P＝0．000）；其中rs2965667 TT基因型的个体服用阿司匹林或NSAIDs较未服用者的结直肠癌发病风险下降［28％比38％，OR＝0．66（95％ CI：0．61～0．70），P＝0．000］，而罕见的TA基因型或AA基因型（二者仅占4％）个体服用阿司匹林或NSAIDs后的发病风险增加［35％比29％；OR＝1．89（95％ CI：1．27～2．81）；P＝0．002］。单纯分析结直肠癌患者发现，IL16基因附近的15号染色体长臂2区5带2号亚带（15q25．2）的SNP位点rs16973225的基因型与服用阿司匹林或NSAIDs存在明显的交互作用（P＝0．000）；其中rs16973225AA基因型的个体服用阿司匹林或NSAIDs较未服用者的结直肠癌发病风险下降［28％比38％，OR＝0．66（95％ CI：0．62～0．71），P＝0．000］，但对于少见的AC基因型或CC基因型（二者仅占9％）个体，是否服用阿司匹林或NSAIDs并不影响结直肠癌的发病风险［36％比39％，OR＝1．89（95％ CI：0．78～1．20），P＝0．76］。
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标记基因在造血干/祖细胞基因转导中的研究
造血干细胞的研究和应用,为一些血液系统疾病,恶性肿瘤和遗传病的治疗带来了希望.造血干细胞能自我更新,能多向分化,是永不枯竭的造血源泉,是基因转移理想的靶细胞,然而,显微镜无法分辨造血干细胞,而只能借助单克隆抗体等免疫学方法.
