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过表达IL-18诱导舌鳞癌细胞凋亡机制的初步研究
目的:探究白介素18(IL-18)的过表达对舌鳞癌细胞活性和凋亡的影响.方法:构建稳定转染人IL-18cDNA的舌鳞癌CRL1623细胞系,免疫荧光、qPCR和Western Blot证实IL-18的过表达;流式细胞术、吉姆萨染色和MTT法检测转染后CRL1623细胞活性的改变;qPCR检测凋亡相关基因的表达;用稳转的CRL1623细胞建立舌鳞癌细胞裸鼠移植瘤模型,体内观察IL-18过表达对移植瘤生长的影响.结果:过表达的IL-18可以诱导CRL1623细胞凋亡.与对照组相比,实验组IL-18的表达量上调,caspase 3、7和9的表达量增加并被活化,IFN-γ和细胞色素C的mRNA表达量上调.与对照组裸鼠相比,实验组裸鼠移植瘤的生长受到了抑制(P＜0.05).结论:IL-18能够通过启动经典的凋亡途径诱导舌鳞癌细胞凋亡.
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重离子辐照对人舌鳞癌Tca8113细胞细胞周期及VEGFmRNA的影响
目的:观察重离子对人舌鳞癌Tca8113细胞细胞周期及VEGFmRNA表达的影响.方法:分别用0、1、4Gy的重离子及X线辐照体外培养的人舌鳞癌Tca8113细胞,流式细胞技术观察细胞周期的变化;原位杂交法检测VEGFmRNA表达.结果:流式细胞术结果,OGy组未出现阻滞,重离子照射组剂量1Gy时,12 h出现G2/M期阻滞,4Gy时在36、48 h出现G2/M期明显阻滞,X线照射组在1Gy时未出现阻滞,4Gy时,24、36 h出现G2/M期阻滞,与0Gy组相比,差异有统计学意义(P＜0.05).原位杂交结果,与0Gy组相比,1Gy时经重离子及X线辐照后Tca8113细胞VEGFmRNA表达降低,4Gy时,重离子组VEGFmRNA表达明显降低,X线组4Gy辐照后VEGFm-RNA阳性表达率与重离子组1Gy差异无统计学意义.结论:重离子较X线对舌鳞癌细胞细胞周期及VEGFmR-NA影响更明显,有更可靠的抑癌效果.
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L-18转染人舌癌CRL1623细胞及抗瘤作用的初步探讨
目的:初步探讨IL-18基因转染治疗舌鳞癌的应用价值及抑瘤机制.方法:我们将人IL-18基因克隆至pcDNA3.1(+)并转染CRL1623细胞,以未转染细胞和空载体转染的CRL1623 (pCDNA3.1/CRL1623)作为对照；随后在空载体pCDNA3.1(+)和pILl8转染后24,48和72 h时,测定caspase3/7的活性；在空载体pCDNA3.1(+)和pIL18转染48 h时,对IL-18和IFN-γ进行实时定量检测；SPSS16.0统计分析,使用t检验,P＜0.05有统计学意义.结果:通过检测24,48和72 h的细胞增殖情况发现,与非转染细胞、转染了空载体pcDNA3.1(+)的细胞相比,IL-18转染细胞caspase3/7活性显著提高.而且,与未转染细胞相比,IFN-γ在IL-18转染后48h的表达水平显著提高.结论:IL-18在调控舌鳞状细胞癌中扮演着重要角色,并可能在该癌症的治疗中起着重要的作用.
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β-catenin表达下调对舌鳞状细胞癌Tca8113细胞周期、细胞凋亡和细胞迁移的影响
目的:探讨β-catenin表达下调对Tca8113细胞增殖、周期、凋亡和迁移的影响.方法:用脂质体2000将β-catenin siRNA转染舌鳞状细胞癌Tca8113细胞,Western blotting技术检测转染后Tca8113细胞中β-catenin蛋白的表达,CCK-8试剂分析转染后对细胞增殖能力的影响；流式细胞术检测下调β-catenin表达对Tca8113细胞周期及细胞凋亡的影响；Boyden chamber实验分析β-catenin表达下调对Tca8113细胞迁移能力的影响.结果:β-catenin siRNA能明显下调Tca8113细胞中β-catenin蛋白的表达,显著抑制Tca8113细胞的增殖.β-catenin siRNA组中的G0/G1期的细胞百分比明显高于未处理组和对照siRNA组.此外,β-catenin siRNA组中细胞凋亡的比率明显高于未处理组和对照siRNA组,其凋亡变化与caspase-3和bax蛋白表达的上调和bcl-2表达的下降密切相关.与未处理组和对照siRNA组相比,β-catenin siRNA组中Tca8113细胞的迁移能力显著下降,组间具有统计学意义.结论:β-catenin在舌鳞状细胞癌的发生发展中可能具有重要的作用.
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核因子一κB/p65siRNA介导的舌鳞状细胞癌Tca8113细胞凋亡及相关分子机制
目的:研究下调核因子κB (nuclearfactor-kappa B,NF-κB)/p65基因的表达对舌鳞状细胞癌Tca8113细胞凋亡的影响,并探讨Tca8113细胞凋亡可能的分子机制.方法:利用脂质体2000将终浓度为100 nmol/L的p65 siRNA转染舌鳞状细胞癌Tca8113细胞,通过RT- PCR检测0、24、48和72 h p65 mRNA的表达,并通过流式细胞术检测转染前后细胞凋亡变化,通过Caspase-GloOR-3/7,-8和-9检测试剂盒分析caspase-3/9活性,用Western blotting技术检测p65、bcl-2和bax蛋白表达.结果:Tca8113细胞转染p65 siRNA后,在48h p65mRNA的相对表达量为0.181±0.028,显著低于未处理组0.595±0.038和对照siRNA组0.613士0.067(P＜0.05).流式细胞术结果显示,p65 siRNA能促使Tca8113细胞凋亡,其早期凋亡比率为(23.16±1.72)%,显著高于未处理组和对照siRNA组(P＜0.01).转染48 h后,p65和bcl-2蛋白的相对表达水平明显下调,而促凋亡蛋白bax的表达显著上升,并伴随着caspase-3/9活性的显著上升.结论:NF-κB信号途径中的p65亚基可能在舌鳞状细胞癌凋亡中发挥重要作用,该研究有望为舌鳞状细胞癌的分子靶向治疗提供理论依据.
关键词： 核因子一κB信号途径 舌鳞状细胞癌 小干扰RNA 细胞凋亡 -
PD184352对舌鳞状细胞癌细胞增殖及ERK蛋白表达的影响
目的:体外观察PD184352对人舌癌细胞Tca8113细胞增殖及ERK蛋白表达的影响.方法:采用MTT比色试验法观察PD184352对Tca8113细胞增殖的影响,免疫细胞化学观察ERK蛋白的表达.结果:随着PD184352作用浓度和作用时间的增加,其对舌癌细胞增殖抑制率显著增高(P＜0.05).当100 μmol/L的PD184352刺激Tca8113细胞72 h后,对舌鳞状细胞癌细胞抑制率达到69.2%.加入PD184352后ERK蛋白在舌鳞状细胞癌细胞系Tca8113中表达降低(P＜0.05),随着浓度的增加而更为明显.结论:体外PD184352对Tca8113细胞增殖有抑制作用,该作用可能与及抑制ERK蛋白表达有关.
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放疗对舌鳞癌Tca 8113细胞多药耐药蛋白及耐药性的影响
目的:探讨放疗对舌鳞癌Tca 8113细胞和耐药的Tca 8113/CBDEA细胞耐药性的影响.方法:应用免疫组化SP法检测放疗对P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)、多药耐药相关蛋白1(multidrug resistance associate protein 1,MRP1 )和谷胱甘肽硫-转移酶π(glutathione S-tranferase π,GST-π)表达的影响和检测放疗对细胞内阿霉素浓度的影响.结果:Tca 8113/CBDEA细胞在放疗后4 h P-gp,MRP1,GST-π耐药蛋白表达无明显上升,24 h耐药蛋白的表达明显升高(P＜0.01),Tca 8113细胞的耐药蛋白表达在4 h和24 h时均有明显上升(P＜0.01).放疗以后肿瘤细胞内阿霉素(ADM)浓度有明显下降.结论:放疗可引起舌鳞癌细胞的耐药.提醒我们对舌癌患者进行放疗和化疗的方案设计时应考虑此点.
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肾移植术后实施舌癌手术麻醉1例
1 病例报告患者,女,47岁,58 kg,ASA分级Ⅱ级.因舌溃疡反复发作,疼痛加剧,抗炎治疗效果不佳入院.临床诊断:右舌鳞状细胞癌;同种异体肾移植术后;肾性高血压.该患者因双侧肾功能衰竭行右侧同种异体肾移植术15年余,术后持续口服环孢素,硫唑嘌呤,醋酸泼尼松.口服缬沙坦降压,血压控制在140～150/80～90 mmHg水平.舌癌术前移植肾功能良好,血肌酐、尿素氮均在正常范围,ECG示:V4、V5、V6T波低平,其余常规化验均未见异常.术前活检示舌鳞状细胞癌.行右舌颌颈联合根治术、血管化左前臂皮瓣转移缺损修复术.
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长链非编码RNA HOTAIR对舌鳞状细胞癌增殖及迁移侵袭能力的影响
目的:探讨长链非编码RNA HOTAIR对舌鳞状细胞癌细胞系增殖及迁移侵袭能力的影响.方法:采用脂质体介导小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)敲低HOTAIR的表达,将无意义序列设为对照,采用定量反转录聚合酶链反应(quantificational revere transcriotion-polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测沉默效果.噻唑蓝(methyl thiazol tetrazolium,MTT)法检测各组细胞增殖能力的变化,划痕实验、Transwell实验检测各组细胞侵袭迁移能力的变化.结果:2株细胞系中HOTAIR成功敲低,差异具有统计学意义(P＜0.001);在MTT实验中,与对照组比较,实验组细胞24、48、72、96 h时吸光度(A)值均降低(P＜0.05);Transwell实验中实验组穿膜细胞数明显少于对照组(P＜0.001),划痕实验中实验组的迁移距离少于对照组(P＜0.001).结论:HOTAIR促进了舌鳞状细胞癌细胞Tca-8113、TSCCA的增殖、迁移与侵袭,参与了舌癌的发展过程.
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DEK基因的小干扰RNA转染对舌鳞状细胞癌细胞增殖和凋亡的影响
目的:RNA干扰DEK基因表达对舌鳞状细胞癌(简称鳞癌)细胞增殖凋亡的影响.方法:采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测舌鳞癌组织中DEK基因的表达;体外培养人舌鳞癌细胞系Tca8113和CAL-27,将合成的阴性对照小干扰RNA(siRNA,阴性对照组)及DEK-siRNA(转染组)转染至细胞,不经特殊处理的细胞为空白对照组,分别在转染48 h后,用细胞计数试剂盒(CCK-8)法、流式细胞术及Western blot等方法检测DEK对Tca8113和CAL-27细胞增殖、凋亡及DEK、B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)、B细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白(bax)、磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)蛋白表达影响.结果:舌鳞癌组织中DEK基因明显升高,与癌旁组织比较差异有统计学意义(P＜0.05);与空白对照组比较,DEK-siRNA转染Tca8113和CAL-27后DEK的表达水平明显降低,细胞增殖活力降低,凋亡率增加,Bcl-2、PI3K、p-Akt蛋白表达均显著下调,bax蛋白表达显著上调(P＜0.05).结论:抑制DEK基因表达可通过PI3K/Akt信号通路降低舌鳞癌细胞增殖,诱导细胞凋亡.
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二维及三维培养对人舌鳞状细胞癌TCA8113细胞株生物学特性的影响
目的:比较二维及三维方式培养的人舌鳞状细胞癌(简称鳞癌)TCA8113细胞株对细胞的增殖、组织形态及乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)活性的影响,为体外舌鳞癌的研究提供培养方法.方法:倒置显微镜和苏木精-伊红(hematoxylin and eosin,HE)染色观察二维及三维培养的人舌鳞癌TCA8113细胞的形态;噻唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法观察两种培养体系中细胞的增殖;酶联免疫吸附试验(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测两种培养体系中LDH活性的改变.结果:倒置显微镜和HE染色观察到三维培养体系中TCA8113细胞成团生长;与二维培养体系比较,三维培养体系中细胞较长时间保持良好的增殖状态,LDH的活性较二维培养的细胞活性显著增高.结论:TCA8113细胞藻酸盐凝胶三维培养体系较二维培养体系能更好地体现细胞的生物学特性.
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舌鳞状细胞癌相关差异基因的生物信息学及预后分析
目的:通过生物信息学方法利用GEO(gene expression omnibus)和TCGA(The cancer genome atlas)数据库分析舌鳞状细胞癌(tongue squamous cell carcinoma,TSCC)发生、发展的相关分子标志物及其预后.方法:从NCBI (美国国立生物技术信息中心)的GEO数据库下载相关芯片数据(GSE78060),运用GEO2 R进行差异表达基因筛选,GO及KEGG对差异表达基因进行相关功能及通路富集分析,同时使用STRING及Cytoscape软件构建相互作用网络,筛选出核心基因(Hub gene),结合TCGA数据库附带的临床信息对Hub gene进行预后分析.结果:筛选出筛选出861个差异基因,其中上调342个,下调519个.GO、KEGG分析及蛋白相互作用网络筛选出现VEGFA、ITGA3、COL1 A1、COL17 A1为Hub gene.生存分析显示高表达VEGFA、ITGA3是预后的危险因素.结论:VEGFA、ITGA3可以作为TSCC发生、发展的相关生物标志物,与TSCC患者预后相关,为TSCC的进一步研究提供依据.
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Id－1和Ki67在TSCC中的表达及其临床意义
目的：探讨舌鳞状细胞癌（TSCC）组织中分化抑制因子－1（Inhibitor of differentiation－1，Id－1）和Ki67的表达，及其与临床病理参数的关系。方法：应用免疫组织化学SP法检测65例TSCC中Id－1，Ki67的表达。结果：65例TSCC中Id－1有43例（66．2％）阳性表达，36例Ki67（55．4％）阳性表达。 Id－1和Ki67阳性表达与TSCC病理分级，淋巴结转移及TNM分期显著相关（P＜0．05，x2检验），与性别、年龄无关（P＞0．05，x2检验），Ki67阳性表达还与肿瘤大小有关（P＜0．05，x2检验）。Id－1和HIF－1α阳性表达呈正相关（P＜0．05，x2检验）。结论：Id－1和Ki67与TSCC的分化，增殖和转移密切相关，在其发生发展过程中扮演重要角色。联合检测Id－1和Ki67的表达有利于TSCC病程分级，对其临床治疗及预后评估能够提供有效帮助。
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重离子辐照对舌癌细胞MMP-9的作用及意义
目的:探讨重离子束辐照对舌癌细胞Tca8113中基质金属蛋白酶-9 (MMP-9)的作用及意义.方法:采用重离子束12C6+及常规X射线对舌癌细胞Tca8113进行辐照,用Western-blot法检测细胞中MMP-9的表达,观察不同射线对MMP-9的影响.结果:和空白对照组比较,在相同时间点,不同剂量的X射线对细胞中MMP-9的表达影响不明显(P＞0.05).低剂量重离子束对舌癌细胞中MMP-9的表达没有明显影响(P＞0.05),而高剂量重离子束辐照后细胞中MMP-9的表达明显降低(P＜0.05).结论:和常规X线比较,重离子束对舌癌细胞中MMP-9的表达抑制具有更高的生物学效应.
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TSCC中Id－1，HIF－1α的表达意义及与血管生成的关系
目的：探讨舌鳞状细胞癌（Tongue squamous cell carcinoma，TSCC）组织中分化抑制因子－1（Inhibitor of dif－ferentiation－1，Id－1）和乏氧诱导因子－1α（Hypoxia－inducible factor－1α，HIF－1α）的表达及与微血管密度（microvessel density，MVD）的关系。方法：应用免疫组织化学SP法检测65例TSCC中Id－1，HIF－1α，CD34的表达并计数MVD。结果：65例TSCC中Id－1有34例（52．3﹪）阳性表达，43例HIF－1α（66．2﹪）阳性表达。 Id－1和HIF－1α表达与TSCC病理分级，淋巴结转移及TNM分期显著相关（P＜0．05，χ2检验），并且与MVD值相关（P＜0．05）。在TSCC中Id－1和HIF－1α表达呈正相关（P＜0．05）。结论：Id－1和HIF－1α与TSCC的恶性进展密切相关，共同参与肿瘤血管生成的过程。联合检测可作为判断TSCC恶性潜能的重要生物指标。
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3．0TMRI在舌鳞状细胞癌术前诊断和临床评估中的应用价值
目的：探讨3．0 T高场强MRI成像技术在舌鳞状细胞癌术前诊断和临床评估中的应用价值。方法：回顾性分析本院经手术和病理证实为舌鳞癌的26例病例术前3．0 T MRI影像资料。结果：3．0 T MRI可以清晰显示舌鳞癌及其侵犯的范围，同时了解颌下及颈部淋巴结情况，对TN分期具有重要意义。结论：3．0 T MRI对舌鳞癌的显示和诊断具有高分辨率、多方位及多序列成像优势，可以很好地显示舌鳞癌发生的位置、大小、病变侵及范围以及扩散途径，有助于术前病变性质的判断及肿瘤分期的评估。舌鳞癌检查首选高场强MRI。
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热放疗对舌鳞癌Tca8113细胞及其耐药细胞株耐药性的影响
目的 探讨热放疗对舌鳞癌Tca 8113细胞和耐药的Tca 8113/CBDEA细胞耐药性的影响.方法 实时定量逆转录PCR(RT-PCR)检测热放疗对Tca 8113细胞和耐药的Tca 8113/CBDEA细胞多药耐药基因1(MDR1)、多药耐药相关蛋白1基因(MRP1)和谷胱甘肽硫-转移酶π基因(GST-π)表达的影响和检测热放疗对细胞内阿霉素浓度的影响.结果 Tca 8113/CBDEA和Tca 8113细胞热放疗后耐药基因MDR1的表达在4 h和24 h无明显改变(P>0.05).MRP1基因的表达在4 h和24 h组均有明显下降(P<0.05),GST-π基因表达在4 h组Tca 8113和Tca 8113/CBDEA的表达无明显改变(P>0.05),在24 h组有明显下降(P<0.05).热放疗以后肿瘤细胞内阿霉素(ADM)浓度有明显上升.结论 热放疗联合应用抑制了放疗造成的耐药基因表达上升,增加了细胞内的药物浓度,热放疗联用不会促使肿瘤细胞产生MDR.
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舌鳞癌中hTERT与PTEN表达的相关性研究
目的:探讨舌鳞状细胞癌组织中hTERT与PTEN蛋白表达的相关关系,为治疗原发性舌鳞癌提供理论依据.方法:采用免疫组织化学技术及原位杂交技术,对原发性舌鳞癌组织、癌旁组织(正常组织)中hTERT和PTEN蛋白表达进行检测.利用计算机图像分析技术,将二者中hTERT和PTEN蛋白水平进行半定量分析.在此基础上,应用有关统计学方法,评价hTERT与PTEN之间是否存在相关性及其相关程度.结果:舌鳞癌中hTERT和PTEN蛋白的阳性检出率分别为74.5%(37/50)和39.1%(20/50).且随着肿瘤恶性程度的增加,hTERT的表达升高,PTEN的表达下降,二者之间存在相关性(P<0.01).结论:抑癌基因PTEN在舌鳞状细胞癌中对hTERT活化的可能存在抑制作用,PTEN的缺失可能引起hTERT表达水平增高从而导致舌癌的发生.
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舌鳞状细胞癌中Cyclin D1和CDK4的表达及意义
目的:分析细胞周期素D1(CyclinD1)和细胞周期素依赖激酶4(CDK4)在舌鳞状细胞癌中的表达及意义.方法:用免疫组织化学方法检测CyclinD1和CDK4在39例舌癌和15例正常舌黏膜中的蛋白表达,及其与组织学分级和颈部淋巴结状态之间的关系.应用χ2检验分析舌癌中CyclinD1和CDK4与在正常舌黏膜中表达的差异,应用Spearman等级相关分析CyclinD1和CDK4的表达关系.结果:CyclinD1、CDK4在舌癌中的阳性表达率分别为69.2%、61.5%,均高于正常舌黏膜,有显著性差异(P<0.01),CyclinD1和CDK4在舌癌中的表达成正相关(P<0.05),伴有颈部淋巴节转移组的阳性表达率高于无转移组,有显著性差异(P<0.05).结论:CyclinD1和CDK4在舌癌组织中呈过表达,并与其发生、发展密切相关.
关键词： 细胞周期素D1 细胞周期素依赖激酶4 舌鳞状细胞癌 免疫组织化学 -
VEGF-C及受体在舌鳞癌中的表达及临床意义
目的研究舌癌组织中血管内皮生长因子C(vascular endothelial growth factor C VEGF-C)及其受体 VEGFR-3(flt-4)的表达情况,分析其在肿瘤淋巴转移中的作用.方法采用RT-PCR法分析22例新鲜舌癌标本VEGF-C/flt-4mRNA的表达情况,免疫组化SP法分析55例石蜡标本中VEGF-C/flt-4蛋白表达情况,统计分析其与临床病理特点之间的关系.结果 VEGF-CmRNA表达阳性率为72.7%(16/22),VEGF-C和flt-4mRNA的表达高度一致(p<0.01).VEGF-C蛋白阳性率为52.7%(29/55),明显高于正常组织和良性病变.与肿瘤病理分级、肿瘤颈淋巴结转移显著相关;flt-4的阳性率为41%(23/55),和VEGF-C阳性表达高度一致;VEGF-C阳性组5年生存率显著低于VEGF-C阴性组.结论 VEGF-C/flt4在舌癌表达高于正常组织和良性病变;与肿瘤的预后密切相关.在肿瘤淋巴转移中可能丘重要作用.
关键词： 血管内皮生长因子-C 血管内皮生长因子受体-3 淋巴转移 舌鳞状细胞癌
