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束缚应激致大鼠心肌损伤的线粒体膜机制探讨
目的观察束缚应激对大鼠心肌细胞线粒体膜生物学特性和功能的影响,探讨应激性心肌损伤的线粒体膜机制.方法建立应激动物模型,分别束缚不同时间后处死所有大鼠,检测线粒体PTP开放程度、膜流动性的改变、膜脂质过氧化水平及线粒体呼吸功能变化.结果束缚应激导致线粒体膜PTP开放、膜流动性降低、膜脂质过氧化物生成增多及线粒体呼吸功能损害,且随着束缚时间增加,以上各项指标改变加剧.结论束缚应激所致的线粒体膜损伤及其效应是应激性心肌损伤的重要机制.
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束缚应激对局灶性脑缺血小鼠行为的影响
目的观察束缚应激对局灶性脑缺血模型小鼠运动行为的影响.方法采用阻断左侧大脑中动脉(MCAO)缺血/再灌注小鼠模型,缺血后1周开始束缚应激(每天2h,共2周),应激结束后即行抑郁行为测试.结果束缚应激使局灶性脑缺血小鼠的自发运动明显减少,蔗糖水偏好比降低,而强迫游泳不动时间显著延长,与正常对照组比较差异显著(P＜0.01).结论施加束缚应激后,局灶性脑缺血小鼠出现明显的抑郁行为,可考虑将其作为一种脑卒中后抑郁(PSD)动物模型,为进一步研究其生物学机制创造条件.
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三种中药复方对慢性束缚应激大鼠下丘脑—垂体—肾上腺轴的调节
从神经、内分泌角度来探讨慢性束缚应激的发生机制及中药的调节作用.用慢性束缚应激制作大鼠模型,通过旷场试验及鼠尾悬挂实验评估大鼠应激后行为.应用放射免疫分析方法检测血浆促肾上腺皮质激素和血清皮质醇及下丘脑β-内啡肽水平变化.通过对中药复方(逍遥散、金匮肾气丸、四君子汤)防治作用的观察从多角度探讨中药复方的作用机理.逍遥散可增加糖皮质激素的含量,四君子汤可增加束缚应激＜7 d组β-内啡肽的含量而金匮肾气丸则降低束缚＜21 d组β-内啡肽的含量.说明各种中药复方在一定程度上调节了慢性束缚应激模型动物的的行为表现,而且使应激激素呈现不同的动态变化趋势,提示各种中药复方参与慢性束缚应激内在调节.
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束缚应激大鼠AMPA受体和相关蛋白变化及逍遥散对其影响
目的 观察慢性束缚应激状态下海马及杏仁体AMPA受体和相关蛋白的变化及逍遥散的作用.方法 使用捆绑的方法制作慢性束缚应激动物模型,并用逍遥散进行干预,分别于7 d后和21 d后检测模型大鼠海马CA1区、基底外侧杏仁核(BLA)谷氨酸受体2/3(GluR2/3)、N-乙基顺丁烯二酰亚胺敏感性的融合蛋白(NSF)、PKC作用蛋白1(PICK1)的积分吸光度(IOD)和阳性神经元数.结果 7 d模型组大鼠海马CA1区和BLA GluR2/3 IOD较7 d正常组显著增高(P＜0.01,P＜0.05);7 d模型组海马CA1区GluR2/3阳性神经元数及PICK1 IOD较7 d正常组增高(P＜0.05,P＜0.01),7 d治疗组(逍遥散)上述指标与7 d模型组相比有显著差异(P＜0.01,P＜0.05),与7 d正常组比较无差异;21 d模型组与21 d正常组比较,海马CA1区GluR2/3 IOD显著降低(P＜0.05)、NSF IOD升高(P=0.06),BLA GluR2/3阳性神经元数增多(P=0.090)、PICK1阳性神经元数减少(P=0.075),21 d治疗组上述指标与正常组比较无显著性差异.结论 7 d和21 d束缚应激对AMPA受体影响的变化趋势不同,海马CA1区与BLA的变化趋势也不一致,逍遥散对21 d束缚应激状态下AMPA受体的变化调节较强.
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针刺不同穴位对不同应激模型大鼠迟发反应期IL-2影响的实验观察
目的 通过观察针刺、束缚和致病因子对白细胞介素-2(IL-2)水平变化的影响及其作用规律,探明大鼠免疫功能失调状态下IL-2水平变化的特点,以揭示针刺免疫调控的机理.方法 以佐剂性关节炎(AA)和束缚应激模型作为研究对象,对任脉六穴和关元穴进行电针刺激,采用放免法测定血清IL-2水平.结果 与正常组比较,AA模型组、束缚模型组血清IL-2含量呈增高趋势,无显著性差异;与AA模型组、束缚模型组比较,AA六穴组、束缚六穴组和AA关元组、束缚关元组血清IL-2含量均有升高,AA关元组呈显著性差异(P＜0.01),束缚关元组呈显著性差异(P＜0.05).结论 针刺可上调AA模型大鼠、束缚模型大鼠血清IL-2的水平,对机体的免疫功能进行调节;关元穴的作用明显.
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束缚应激致福利损伤小鼠肝脏中钙调蛋白的表达
目的 研究束缚应激对小鼠肝脏内钙调蛋白表达的影响.方法 选取3周龄ICR小鼠20只,随机分为对照组和束缚应激组,记录实验期间的个体增重和饲料消耗,束缚结束采血测定与福利相关的免疫和神经内分泌指标,及主要肝功能指标,采用Western Bolt法检测小鼠肝脏内钙调蛋白(CaM)和钙-钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMK Ⅱ)的蛋白表达水平.结果 与对照组相比,束缚组小鼠的体增重和饲料能耗比(FER)显著降低(P＜0.01),脾脏和胸腺的脏器指数显著降低(P＜0.01,P＜0.05),血清中皮质酮(CORT)和促肾上腺皮质激素(ACTH)以及主要肝功能指标谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)、碱性磷酸酶(ALP)均显著升高(P ＜0.01,P＜0.05),肝脏中CaM和CaMKⅡ的相对表达显著上升(P＜0.05).结论 束缚应激致实验小鼠福利受损时,CaM和CaMKⅡ参与了小鼠福利损伤过程.
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束缚应激的研究进展
应激(stress)是指机体在受到强烈的内外环境因素的刺激时所出现的非特异性全身反应.从进化的角度来看,机体为了能应对在生长过程中遇到不可避免的内外环境因素的刺激,需要产生相应的反应,从而才能在变动的环境中维持机体的适应能力.研究应激对于理解应激对机体的影响非常重要,随着对应激研究的深入,应激动物模型成为研究的基本工具,其中束缚应激作为一种非损伤性刺激,能够较好地模拟人类生活中“无法控制”的拥挤、挫折等生活状态,既与人类产生应激及其导致的心身性疾病过程相似,又能够适应应激状态由急性转入慢性的发展趋势.因此,束缚应激已经引起研究者的广泛关注并逐渐成为应激研究中的热点之一.近年的研究使人们对束缚应激有了更为深入的了解,但是束缚应激对机体的影响及其作用机理仍有诸多不清楚的地方.本文将对近年来国内外有关束缚应激研究的进展(主要从分类、方法、对机体的影响及其作用机制等方面)进行综述.
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乙酸联合束缚应激对大鼠内脏敏感性及肠道肥大细胞状态的影响
目的：探讨腹泻型肠易激综合征动物模型的建立方法及模型评估。方法将30只成年SD大鼠随机分为乙酸刺激加束缚应激组（n＝10只），束缚应激组（n＝10只），和正常对照组（n＝10只）。采用乙酸刺激加束缚应激方法建立IBS动物模型，进行大便情况评估和直肠敏感性测试，盐酸甲苯胺蓝染色观察肠道肥大细胞数量及脱颗粒现象。结果在实验第7天，模型组大鼠粪便点数较正常组增多，差异有统计学意义（ P＜0.05）；乙酸联合束缚应激组稀便数较其余两组增多，差异有统计学意义（ P＜0.05）。乙酸联合束缚应激组大鼠直肠敏感性较其余两组增高，差异有统计学意义（ P＜0.05）。乙酸联合束缚应激组大鼠肠道肥大细胞的数量较正常组增多，差异有统计学意义（P＜0.05），乙酸联合束缚应激组大鼠肠道肥大细胞可见脱颗粒现象。组织学分析显示各组大鼠均无明显的炎症性表现。结论乙酸联合束缚应激可增加大鼠内脏敏感性，并且使大鼠肠道肥大细胞数量增多，细胞脱颗粒现象增强。该综合造模方法能够较好的模拟人类IBS的发病形式，为我们进一步研究IBS的发生发展机制提供了理想的动物模型基础。
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束缚应激对大鼠血脂及肝脏PPARα、L-CPT-Ⅰ mRNA和蛋白表达的影响
目的 观察束缚应激后大鼠血脂和肝脏过氧化酶体增殖物激活型受体(PPARα)、肝型肉碱棕榈酰转移酶-Ⅰ(L-CPT-Ⅰ)mRNA和蛋白的变化,初步探讨应激与血脂的关系.方法 健康雄性Wistar大鼠,分为正常对照组(C)、束缚1周组(R1)、束缚2周组(R2)和束缚4周组(R4),每组8只.全自动生化仪测定血脂水平,铜显色法测定血清中游离脂肪酸(FFA)水平.分别用RT-PCR和Western Blot方法检测肝脏PPARα及其靶基因L-CPT-ⅠmRNA和蛋白表达水平.结果 束缚应激组皮质醇和去甲基肾上腺素水平均明显高于对照组(P＜0.01).R1、R2、R4组大鼠血清FFA分别为(836.33 ±90.32)、(795.01±62.12)、(829.56±72.64) μmol/L,均明显高于C组[(620.83±52.21) μmol/L,P＜0.01].同样,R1、R2、R4组大鼠血清TG和HDL-C均明显高于C组(P＜0.05,P＜0.01).与C组相比,R1、R2、R4组大鼠肝脏中PPARα和L-CPT-Ⅰ mRNA和蛋白表达均增加(P＜0.01).各应激组间这些指标变化差异均无显著性(P＞0.05).结论 束缚应激后大鼠血清FFA、TG和HDL-C水平升高,这可能与其肝脏PPARα及L-CPT-Ⅰ表达增加有关.
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应激对大鼠海马金属硫蛋白亚型表达的影响
目的: 观察应激对大鼠海马脑区金属硫蛋白亚型表达的影响. 方法: 以束缚为应激原建立心理应激动物模型.将动物随机分为四组:正常对照组(Ctr)、束缚1 w组(R1)、束缚2 w组(R2)和束缚4 w组(R4).取动物脑和肝脏以镉饱和法测定金属硫蛋白含量,取海马组织提取总RNA,以RT-PCR检测金属硫蛋白亚型MT-1 mRNA和MT-3 mRNA,并取血测定血浆皮质醇和IL-6水平. 结果: 束缚应激后,大鼠体重增长明显减慢,血浆皮质醇、IL-6水平显著高于Ctr组;海马脑区两种亚型金属硫蛋白mRNA的表达水平升高,脑和肝脏金属硫蛋白含量也明显增加. 结论: 束缚应激可影响海马金属硫蛋白的表达,使其在蛋白质水平和mRNA水平均出现明显升高,其可能机制是,在应激条件下皮质醇和IL-6等因子的上调对这种应激蛋白的表达发挥了诱导作用.
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补充烟酰胺对束缚应激大鼠旷场行为的影响
目的:研究不同烟酸营养状况对应激大鼠行为的影响.方法:100只雄性Wistar大鼠按体重分为10组:对照组、对喂组、缺乏组、低剂量烟酰胺(NAM)补充组和高剂量NAM补充组及此5组对应的21 d束缚应激组.测定大鼠24 h尿N1-甲基烟酰胺(NMN)排泄量、旷场行为、血浆皮质醇、NO和肝脏NOS含量.结果:应激大鼠24 h尿N1-甲基NMN排泄量减少.烟酸缺乏和应激都可阻碍大鼠体重增加.对照组和低剂量NAM补充组大鼠在旷场实验中的潜伏期相对较短.应激大鼠血浆皮质醇和NO含量比对照组高;高剂量NAM补充组大鼠的血浆皮质醇含量较低.补充NAM大鼠肝脏NOS含量较高.结论:束缚应激可增加大鼠烟酸消耗;适量补充NAM有助于提高大鼠的应激适应性.
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组蛋白去乙酰化酶抑制剂对大鼠应激性心肌损伤的保护作用
目的:观察组蛋白去乙酰化酶抑制剂在应激性心肌损伤发生过程中的作用.方法:健康雄性Wistar大鼠随机分为3组(n=6),用束缚应激方法建立慢性应激性心肌损伤模型,采用组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素A(TSA)干预,观察TSA对应激性心肌损伤的保护作用.Western blot检测实验各组大鼠心肌的组蛋白乙酰化水平,采用分光光度法动态监测大鼠血清乳酸脱氢酶(LDH)和肌酸激酶同工酶-MB(CK-MB)活性以及心肌组织Caspase3活性,Nagar Olsen染色观察心肌的早期损伤.结果:束缚应激可以显著降低大鼠心肌的组蛋白乙酰化水平(P＜0.05),而TSA干预可以抑制应激所致的心肌组蛋白乙酰化水平降低(P＜0.05);束缚应激可以引起大鼠血清LDH和CK-MB活性、心肌组织Caspase 3活性显著升高(P＜0.05),发生心肌早期损伤,而TSA干预可显著降低束缚应激引起的LDH(P＜ 0.05)、CK-MB活性(P＜0.05)、Caspase 3活性升高(P＜0.05).结论:组蛋白去乙酰化酶抑制剂TSA对应激性心肌损伤具有一定的保护作用.
关键词： 组蛋白去乙酰化酶抑制剂 束缚应激 心肌损伤 大鼠 -
AMPA受体和相关蛋白在束缚应激大鼠相关脑区的表达变化及逍遥散对其影响
目的:观察海马及杏仁核α-氨基羟甲基恶唑丙酸(AMPA)受体亚基和相关调节蛋白在束缚应激状态下蛋白表达变化及逍遥散的调节作用.方法:使用每天捆绑3 h的方法制作慢性束缚应激动物模型,并用逍遥散进行干预,分别于7 d后和21 d后用western blot方法检测各组大鼠海马CA1区、CA3区、齿状回(DG)和杏仁核的AMPA受体亚基GluR2/3及N-乙基顺丁烯二酰亚胺敏感性的融合蛋白(NSF)、PKC作用蛋白1(PICK1)蛋白表达的情况.结果:7 d应激可使DG和杏仁核的GluR2/3、NSF表达显著降低(P均<0.1315),使PICK1在CA1区的表达量显著增多(P<0.05),逍遥散对PICK1变化显示出一定调节作用.21 d应激可使CA1区的GluR2/3、NSF表达升高,其中GluR2/3有显著性差异(P<0.01),而在杏仁核表达有降低趋势,逍遥散对其均有显著调节作用(均为P<0.05),21 d应激使杏仁核PICK1表达量出现升高趋势,逍遥散可显著降低其表达(P<0.05).结论:AMPA受体在短期重复应激和慢性应激状态下反应不同,海马和杏仁核反应相反,逍遥散对慢性应激状态下AMPA受体表达的调节作用较短期重复应激强.
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慢性束缚应激对健康大鼠血糖及血脂的影响
目的 观察慢性束缚应激模型大鼠血清甘油三酯、总胆固醇、低密度脂蛋白-胆固醇及血糖的变化规律.方法 健康雄性Wistar大鼠120只,随机分为束缚应激组及对照组,各60只,两组分别于1周、2周、4周、6周、8周时检测血清甘油三酯、总胆固醇、低密度脂蛋白-胆固醇、葡萄糖水平.结果 束缚应激组1周时,大鼠血清甘油三酯、总胆固醇、低密度脂蛋白.胆固醇、血糖水平与对照组相比均显著升高(P<0.05).束缚应激组大鼠除血糖与对照组相比表现为持续升高趋势外,甘油三酯、总胆固醇、低密度脂蛋白一胆固醇水平在慢性束缚应激第4周后均出现下降趋势,甚至低于对照组(P>0.05).结论 慢性束缚应激所引起的血清脂质水平改变呈各自不同的变化趋势,不同于急性应激.
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人卵巢上皮性癌荷瘤裸鼠不良心理应激模型的建立
目的:建立人卵巢上皮性癌荷瘤裸鼠不良心理应激模型,研究不良心理应激对荷瘤裸鼠肿瘤生长的影响.方法:首先采用瘤组织块接种法,建立人卵巢上皮性癌裸鼠皮下移植瘤模型,待肿瘤生长至接种后第12天,将肿瘤大小相近(约8mm)的12只裸鼠随机分为:荷瘤组和荷瘤+应激组,每组6只;荷瘤组自由供食物和水.荷瘤+应激组采用束缚方法给予应激,装置为50mL离心管(打孔3mm,通风良好),操作时依次将应激组小鼠放入离心管中,不挤压动物尾巴,放入管内动物可前后活动.8h后将动物放出,恢复自由供食物和水,每天10:00AM～6:00PM,应激5d/周,共2周;后观察两组裸鼠生存状态、体重,完成2周应激,结束后第二天,两组裸鼠同时眼眶取血,离心后吸取血清,采用酶联免疫吸附法(ELISA方法)检测两组裸鼠血清中皮质酮、去甲肾上腺素的含量.结果:1)荷瘤+应激组整体生长状态不良,进食及活动不佳,荷瘤+应激组裸鼠体重明显低于荷瘤组,两组比较,差异有显著性(P<0.05).不良心理应激使荷瘤裸鼠体重明显降低;2)荷瘤+应激组血清中皮质酮、去甲肾上腺素的含量明显高于荷瘤组,两组比较,差异有显著性(P<0.05).结论:采用束缚方法成功建立了人卵巢癌荷瘤裸鼠不良心理应激模型,该模型可用于研究不良心理应激对卵巢癌生长的影响.
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儿茶酚胺在束缚应激大鼠肺损伤中的作用
目的 研究儿茶酚胺(catecholamine,CA)在束缚应激大鼠肺损伤中的作用.方法 选取成年SD雄性大鼠15只,随机分为对照组、束缚应激组、束缚+酪氨酸羟化酶抑制剂(alpha-methyl-p-tyrosine,AMPT)组,每组5只.采用酶联免疫吸附测定法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测血浆中去甲肾上腺素(norepinephrine,NE)、肾上腺素(epinephrine,E)水平,苏木素-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色法观察肺组织病理形态学变化,ELISA法检测肺组织中白细胞介素1β(interleukin-1 beta,IL-1β)及白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)的浓度,二辛可酸法检测支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)中蛋白的含量.结果 束缚应激组、束缚+AMPT组血浆中NE、E水平显著高于对照组,束缚+AMPT组血浆中NE、E水平显著低于束缚应激组(P<0.05);束缚应激组、束缚+AMPT组肺组织中IL-1β、IL-6浓度和BALF中蛋白含量均显著高于对照组,束缚+AMPT组肺组织IL-1β、IL-6浓度和BALF中蛋白含量显著低于束缚应激组,差异有统计学意义(P<0.05).结论 束缚应激可致肺损伤,CA可能参与这一损伤过程,AMPT可明显减轻肺损伤.
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逍遥散对慢性束缚应激大鼠相关脑区NMDAR2A和NMDAR2BmRNA基因表达的调节作用
目的:观察海马及杏仁核N-甲基D-天冬氨酸(N-methyl-D-aspartic acid(NMDA)受体NMDAR2A(NR2A)和NMDAR2B(NR2B)的蛋白在束缚应激状态下的mRNA表达变化及道遥散的作用.方法:使用捆绑的方法制作束缚应激动物模型,并用逍遥散进行干预,分别于7天后和21天后检测模型大鼠海马CAI区、CA3区、齿状回(DG)、杏仁核NMDA受体NMDAR2A和NMDAR2B的蛋白mRNA表达的情况.结果:NR2AmRNA和NR2BmRNA在海马的CA1,CA3,DG和BLA都有不同程度的基因转录.NR2AmRNA在CA3,DG和BLA区,7天和21天模型组的表达均下调(P<0.05和P<0.01),在CA1区不明显.NR2BmRNA在CA1,CA3,DG和BLA区,21天模型组的表达均下调(P<0.05和P<0.01),在CA1和BLA区7天模型组表迭不变.逍遥散对CA3和DG区的NR2AmRNA和NR2BmRNA有明显的调节作用,在CA3和DG区7天和21天的表达均上调(P<0.05和P<0.01).而在CA1区对NR2AmRNA和NR2BmRNA没有调节作用.其中以CA3区和DG区的调节作用明显,这里可能是逍遥散的调节靶点.结论:逍遥散在海马和杏仁核区对慢性束缚应激引起的神经传递的改变有明显的双向调节作用,可以影响突触可塑性,以适应机体的功能,主要靶点在CA3和DC区.
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束缚应激模型大鼠体重及生化指标含量变化
目的 研究束缚应激条件下大鼠体重、行为及生化指标变化.方法 选择Wistar大鼠30只随机分为3组:正常对照组,束缚3周组和束缚5周组.监控大鼠体重变化,并采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测束缚应激大鼠血清皮质酮(CORT)、去甲肾上腺素(NE)、热休克蛋白70(HSP70)、IL-2和IL-4的含量变化.结果 束缚应激后,大鼠体重增长缓慢且有明显的行为变化,5种生化因子含量也均有明显的变化.与对照组相比,束缚3周和5周之后,CORT、NE、HSP70、IL-4含量分别升高了11.25％和46.65％、25.16％和39.09％、5.15％和13.49％、9.86％和18.69％(除束缚3周组HSP70外,其余均P＜0.05),且NE、CORT和IL-4含量升高具有时间依赖性；IL-2含量显著降低了15.43％和16.01％ (P ＜0.05),但不具有时间依赖性.结论 束缚应激可改变大鼠免疫功能及调节神经递质作用,CORT、NE、HSP70、IL-2和IL-4可作为重要的分子靶标.
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血清反应因子-早期即刻基因在慢性束缚应激模型大鼠内脏高敏感形成中的作用
目的:探讨血清反应因子(serum response factor,SRF)-早期即刻基因(immediate early gene,IEG)在慢性束缚应激模型大鼠内脏高敏感形成中的作用.方法:将18只大鼠随机分成不给予束缚对照组、束缚模型组1和束缚模型组2(无结肠直肠扩张),每组6只.用束缚前后结直肠扩张引起的腹壁回撤反射评分(AWR评分)3分时小扩张球囊压力(即痛阈)来评价大鼠内脏敏感性的变化,采用Western blot法检测各组SRF和IEG(c-fos和Arc)及SRF-IEG下游的突触变化相关蛋白的表达情况.结果:(1)模型组1束缚后痛阈显著低于束缚前和对照组(P<0.05).(2)模型组1和模型组2的SRF、c-fos和Arc表达比对照组显著增强(P<0.05),而2个模型组间差异无统计学意义(P>0.05).(3)2个模型组的突触素、PSD-95、NMDA-R1、p-CaMKⅡ4个因子表达比对照组显著增强(P<0.05),而2个模型组间差异无统计学意义(P>0.05).结论:SRF-IEG通路在慢性束缚应激所致大鼠内脏高敏感形成中发挥一定作用.
关键词： 束缚应激 内脏高敏感 血清反应因子(SRF) 早期即刻基因(IEG) -
束缚应激小鼠脾淋巴细胞功能的改变
目的:探讨束缚应激(IMS)对小鼠脾淋巴细胞功能的影响.方法:用MTT法检测细胞增殖,用流式细胞术检测膜IL-2受体(mIL-2R)和细胞增殖周期,用荧光指示剂Fura-2/AM检测细胞内[Ca2+],将IMS后的结果与正常组进行比较.结果:IMS后细胞增殖反应的低点在IMS结束后0,24h后接近正常.在IMS后0 h,mIL-2R较正常组显著降低,细胞增殖可能受阻于G2/M期,细胞内[Ca2+]显著增高(P＜0.05).结论:IMS可以引起淋巴细胞功能障碍,从而导致免疫抑制.
