条索状透明质酸在乳腺肿瘤细胞BT549化疗耐药中的作用

目的 观察透明质酸的新存在形式--条索状透明质酸在乳腺肿瘤细胞BT549表面的表达情况,探索该结构在BT549细胞耐受紫杉醇杀伤中的作用.方法 采用免疫细胞荧光技术观察BT549细胞表面条索状透明质酸的分布情况;分别用流式细胞术和RT-PCR检测透明质酸的条索状结构被破坏前后,紫杉醇诱导的肿瘤细胞凋亡、坏死率的改变以及凋亡相关基因c-jun mRNA表达的改变.结果 BT549细胞天然表达大量的条索状透明质酸,条索状结构被破坏后,紫杉醇诱导BT549细胞的凋亡和坏死率显著增高(P＜0.05),凋亡基因c-jun的表达水平也显著增高(P＜0.05).结论 乳腺肿瘤细胞BT-549高表达条索状结构的透明质酸,这种透明质酸的新存在形式可能在BT549细胞耐受紫杉醇的杀伤过程中起到一定的保护作用.

VLA-4与急性白血病化疗耐药

DAB2IP 基因调控吡柔比星治疗膀胱癌化疗耐药和肿瘤复发

非肌层浸润性膀胱癌(NMIBC)经过手术切除及术后膀胱灌注治疗后，仍有部分患者出现肿瘤复发。然而，目前尚未完全探明导致肿瘤化疗耐药和肿瘤复发的分子机制。

IκB激酶β小分子干扰RNA增敏人胶质瘤细胞替莫唑胺化疗的机制

目的 观察IκB激酶β(IKKβ)小干扰RNA(siRNA)对耐替莫唑胺(TMZ)的胶质瘤细胞凋亡的影响,探讨IKKβsiRNA增敏耐药细胞TMZ化疗的机制.方法 构建人胶质瘤耐药细胞株TR-U251和TR-LN229细胞,随机分为对照组、50 μmol/L IKKβ siRNA转染组、低浓度IC20 TMZ治疗组以及50 μmol/L IKKβ siRNA+ IC20 TMZ联合治疗组,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot法检测B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)、半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-3(Caspase-3)表达,以及干扰前后核转录因子-κB(NF-κB) p65、O6-甲基鸟嘌呤-DNA-甲基转移酶(MGMT)、Survivin蛋白表达水平.结果 TR-U251细胞凋亡率分别为:对照组(2.78±1.67)％、干扰组(11.92±3.06)％、120 μmol/L TMZ治疗组(8.18±2.24)％、联合治疗组(35.95±6.07)％;TR-LN229细胞凋亡率分别为:对照组(1.82±0.86)％、干扰组(9.78±4.13)％、60 μmol/L TMZ组(8.65±3.64)％、联合治疗组(28.30±4.97)％,两种细胞联合治疗组凋亡率较对照组和单独用药组均显著增加(P＜0.01),联合治疗组bcl-2水平均显著降低,Caspase-3水平均增加;IKKβ RNA干扰后NF-κB、MGMT及Survivin蛋白表达抑制.结论 IKKβ RNA干扰通过显著降低TR-U251与TR-LN229中NF-κB、MGMT及Survivin蛋白表达,增高TMZ化疗的凋亡率.

核转录因子-κB抑制蛋白激酶小分子干扰RNA增强人胶质瘤细胞替莫唑胺化疗敏感性

目的 观察核转录因子-κB抑制蛋白激酶(IKKβ)小干扰RNA(siRNA)对耐替莫唑胺(TMZ)的胶质瘤细胞株TR-U251和TR-LN229增殖的影响,探讨IKKβ干扰在耐药细胞TMZ化疗敏感性中的作用.方法 体外分步诱导法建立TMZ耐药细胞株TR-U251和TR-LN229,分别用25、50、100 μmol/L siRNA转染耐药细胞,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法鉴定IKKβ mRNA表达量；噻唑蓝(MTT)法测定50 μmol/L IKKβ siRNA干扰前后各组细胞TMZ半数抑制浓度(IC50)值并计算耐药指数；转染50 μmol/L IKKβ siRNA的耐药细胞分别联合或不联合IC20TMZ,MTT法检测细胞的增殖抑制率.结果 25 μmol/L IKKβ siRNA干扰效果弱,50μmol/L和100 μmol/L效果较强；进行50 μmol/L IKKβ siRNA干扰24 h,TR-U251干扰前后对TMZ耐药指数分别为5.92±0.66和0.45±0.07；TR-LN229干扰前后分别为6.58 ±0.29和0.22±0.10;50 μmol/L IKKβ siRNA单独作用TR-U251和TR-LN229细胞48 h增殖抑制率分别为(17.47±4.11)％、(5.90±2.81)％,120μmol/LTMZ单独作用TR-U251 48 h细胞增殖抑制率为(7.87±3.29)％,60 μmol/L TMZ单独作用TR-LN229 48 h细胞增殖率为(24.67±5.37)％,而IKKβ干扰与TMZ联合作用48 h,TR-U251和TR-LN229细胞增殖抑制率分别为(66.33±9.18)％、(75.30±6.01)％.结论 IKKβ RNA干扰显著降低TR-U251与TR-LN229对TMZ的耐药指数及增殖率,增加TMZ化疗的敏感性.

凋亡抑制蛋白2在胰腺癌中的表达及其与化疗耐药的关系

目的 观察细胞凋亡抑制蛋白2(c-IAP2)在胰腺癌组织中的表达,探讨c-IAP2表达与胰腺癌细胞对化疗药物耐药性的关系.方法 收集胰腺癌标本32例,应用免疫组织化学染色法观察c-IAP2在胰腺癌及癌旁正常胰腺组织中的表达;体外培养胰腺癌细胞PANC-1,间歇浓度递增法诱导胰腺癌细胞株PANC-1对吉西他滨(Gem)的耐药,噻唑蓝(MTT)检测处理前后细胞对Gem的药物敏感性,免疫荧光和免疫印迹检测c-IAP2蛋白表达水平.结果 c-IAP2在胰腺癌组织均有表达(32/32,100.0%)、癌旁正常胰腺组织(8/18,44.4%)中有表达,胰腺癌表达水平显著强于癌旁正常胰腺组织.c-IAP2的表达强度在不同分化程度的肿瘤组织中的差异有统计学意义(P<0.05).药物培养3个月后,PANC-1对Gem的半数有效浓度(IC50)由(6.03±0.27)mg/L升高至(41.60±1.14)mg/L(P<0.05),免疫荧光和免疫印迹结果显示耐药亚株c-LAP2蛋白表达水平较亲本株升高,差异有统计学意义(P<0.05).结论 C-IAP2在胰腺癌分化程度和对吉西他滨耐药过程中有一定作用.

缺氧诱导因子-1和凋亡信号调节激酶1在肝癌细胞SMMC-7721缺氧时化疗耐药形成中的作用

目的 研究不同氧气条件下肝癌细胞HIF-1和ASK1表达水平在化疗过程中的变化.方法 噻唑蓝(MTT)比色法检测肝癌细胞生长情况和药物中效浓度(IC50).逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot法检测HIF-1α和ASK1表达水平,比较氧气、化疗药物、HIF-1抑制等因素对他们表达的影响.结果 化疗对肝癌细胞常氧时抑制效果较缺氧时更明显,常氧和缺氧IC50存在明显差异.缺氧时两者表达水平均升高,HIF-1α在IC50缺氧组中翻译水平高,ASK1在IC50常氧组中翻译表达多.结论 HIF-1α可能在缺氧时通过对ASK1蛋白水平的抑制实现肝癌细胞化疗耐药形成.

磷酸酶基因上调BIU-87细胞中p53蛋白表达水平并增强其对化疗药物的敏感性

张力蛋白同源、第10号染色体丢失的磷酸酶基因(PTEN)失活是否参与了化疗耐药的形成,目前报道尚少.本研究通过脂质体介导法将野生型PTEN基因(WT-PTEN)与两种突变型PTEN基因:G129E-PTEN(无脂质磷酸酶活性而保留蛋白磷酸酶活性)、C124A-PTEN(无磷酸酶活性)分别导入携带野生型p53基因的人膀胱癌细胞株BIU-87,研究PTEN在膀胱癌细胞中的作用.

脑胶质瘤原代细胞药敏与O6-甲基鸟嘌呤-DNA-甲基转移酶表达的相关性研究

肿瘤细胞对化疗耐药的机制复杂,涉及因素众多,目前研究较为深入的是DNA修复酶,O6-甲基鸟嘌呤-DNA-甲基转移酶(MGMT)[1-3].我们采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫组织化学法对同一标本MGMT进行检测,并与药敏结果进行相关性分析,根据其相关性指导临床选择敏感性药物,提高化疗疗效.

去势抵抗性前列腺癌化疗耐药机制的研究进展

前列腺癌是老年男性常见的恶性肿瘤之一.化疗是治疗转移性去势抵抗性前列腺癌的有效方法,但多数患者在经过6～8个周期的全身化疗后会出现耐药,中位生存期不足1年.因此,阐明去势抵抗性前列腺癌与化疗耐药的相关机制显得十分重要.我们将围绕雄激素受体信号通路、微小RNA、肿瘤微环境、肿瘤干细胞以及相关分子事件,对前列腺癌化疗耐药的机制研究进展进行综述.

联合位点突变的乙型肝炎病毒x蛋白可通过上调多重耐药基因-1表达促进肝癌细胞化疗抵抗

目的 观察联合位点突变的乙型肝炎病毒x蛋白对肝癌耐药性的影响,探讨乙型肝炎病毒在肝癌耐药机制中的作用.方法 通过基因合成A1762T/G1764A/T1753A/T1768A位点联合突变后的乙型肝炎病毒x蛋白(HBx),慢病毒感染肝癌细胞株Huh7并构建稳定表达HBx蛋白的肝癌细胞,细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测转染后肝癌细胞对不同浓度化疗药物顺铂(15、30、60 mg/L)的耐药性,实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)及Western blot法分别检测转染后肝癌细胞多重耐药基因-1(MDR-1) mRNA及蛋白的表达.结果 经嘌呤毒素药物筛选后,可构建出稳定表达株,转染率达90％以上;在不同浓度顺铂(15、30、60 mg/L)作用下,转染后肝癌细胞存活率为84.6％、76.7％、98.6％,明显高于对照组(57.7％、72.8％、77.3％)和空载组(55.0％、70.6％、78.9％),差异有统计学意义(P＜0.05),而对照组细胞存活率与空载组比较,差异无统计学差异(P＞0.05).转染后细胞内MDR-1 mRNA表达明显高于对照组和空载组,差异有统计学意义(P＜0.05),MDR-1蛋白表达明显增高.结论 联合位点突变的乙型肝炎病毒x蛋白可通过上调肝癌细胞内MDR-1的表达提高其化疗抵抗性.

膜联蛋白A11对人胃癌细胞株SGC7901氟尿嘧啶耐药性的影响及机制

目的 观察膜联蛋白A11(ANXA11)对人胃癌细胞株SGC7901 5-氟尿嘧啶(5-Fu)耐药性影响.方法 检测人胃癌细胞株SCG7901、BGC823的ANXA11表达.将ANXA11-小干扰RNA(siRNA)及阴性对照序列瞬时转染入SGC7901细胞,应用细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测转染后各组细胞对不同剂量5-Fu(1、10、20、40、80 μg/ml)的药物敏感性改变.应用流式细胞术检测不同处理组凋亡率,应用定量聚合酶链反应(qPCR)、Western blot检测胸腺嘧啶脱氧核苷合成酶(TS)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)和bcl-2相关X蛋白(bax)表达的改变.结果 ANXA11 mRNA及蛋白表达量在SGC7901中显著高于BGC823(t=3.212,P=0.033;t=-10.768,P=0.000).转染组(转染ANXA11-siRNA)细胞的半数抑制剂量(IC50)及20％抑制剂量(IC20)值明显低于阴性、空白对照组(F =47.500,P=0.000;F =45.523,P=0.000).转染组、联合组凋亡率较阴性(转染NS-siRNA)、空白对照组(转染LipofectamineTM2000)显著升高(F=117.525,P=0.000),且联合组凋亡率较转染组明显升高(=9.004,P=0.000).转染组及联合组ANXA11蛋白表达较阴性、空白对照组显著降低(F=118.403,P=0.000).转染组及联合组bax的表达上调(F =35.608,P=0.000),而bcl-2、TS的表达降低(F=30.048,P=0.000;F=22.874,P=0.000).结论 抑制ANXA11表达能提高人胃癌细胞株SGC7901对5-Fu的敏感性,可能与抑制TS、bcl-2、上调bax的表达有关.

CD133与磷脂酰肌醇3激酶p85相互作用促进胃癌细胞化疗耐药

目的 构建稳定干扰及过表达CD133的胃癌细胞株,观察CD133分子对胃癌细胞化疗多药耐药能力的影响,并探讨其机制.方法 使用慢病毒在KATOⅢ及MKN45中分别构建稳定干扰及过表达CD133细胞株;Western blot验证干扰及过表达效率.使用细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测各组细胞对化疗药物5-氟尿嘧啶(5-Fu)和顺铂(DDP)的敏感性,采用Western blot法检测耐药相关蛋白P-糖蛋白(P-gp)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)、B细胞淋巴瘤/白血病之相关X蛋白(bax)的表达及磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)的激活,后利用免疫沉淀技术检测CD133与p85之间的相互作用情况.结果 与空载体组比较,干扰组或过表达组的CD133蛋白水平明显降低或升高.而相同药物浓度下,5-Fu和DDP对干扰组的抑制率明显高于对照组,其半数抑制浓度分别为[(54.0300±0.647 9)μmol/L比(133.3000±4.9180)μmol/L,P=0.005和(2.3120±0.223 6)μmol/L比(24.5900 ±2.1590)μmol/L,P=0.001];而对过表达组的抑制率明显低于对照组,其半数抑制浓度分别为[(8.1020±0.433 1)μmol/L比(2.2170±0.132 4) μmol/L,P=0.010和(24.487 0 ±2.132 0)μmol/L比(11.6200±1.5340)μmol/L,P=0.030].在稳定干扰CD133表达后,耐药相关因子P-gp、bcl-2和p-Akt的蛋白水平均显著降低,而促凋亡因子bax表达则显著升高;与之相反,过表达CD133后,P-gp、bcl-2和p-Akt的蛋白水平显著升高,而bax则明显降低.而用p85抗体进行免疫沉淀后,过表达组检测到CD133表达.结论 CD133能够显著促进胃癌细胞的化疗耐药能力;而这可能是通过与磷酸肌醇3激酶(PI3K)的亚基p85相互作用进而激活H3K/Akt信号通路实现的.

顺铂联合补中益气汤对A549/DDP荷瘤裸鼠移植瘤survivin蛋白表达的影响

目的 探讨顺铂联合补中益气汤对A549/DDP荷瘤裸鼠移植瘤survivin蛋白表达的影响.方法 30只BALB/c-nu裸小鼠随机分为5组,A:荷瘤对照组、B:顺铂组、C:顺铂联合低剂量补中益气汤组、D:顺铂联合中剂量补中益气汤组、E:顺铂联合高剂量补中益气汤组.25 d后处死全部裸小鼠.测量移植瘤体积、重量并计算药物抑瘤率;Real-time PCR法检测移植瘤组织survivin mRNA的表达;Western blot法检测移植瘤组织survivin蛋白的表达.结果 顺铂联合低、中、高剂量组均较荷瘤对照组、顺铂组移植瘤体积显著缩小,重量显著减轻,差异有统计学意义;顺铂抑瘤率随着补中益气汤的剂量增加而增大;顺铂组、顺铂联合低剂量组较荷瘤对照组移植瘤组织中survivin的基因和蛋白表达上调,而顺铂联合中、高剂量组较荷瘤对照组survivin的基因和蛋白表达下调,差异均有统计学意义;顺铂联合低、中、高剂量补中益气汤组较顺铂组移植瘤组织中survivin的基因和蛋白表达均下调,差异均有统计学意义.结论 顺铂联合补中益气汤可通过下调survivin的表达改善A549/DDP荷瘤裸鼠移植瘤对顺铂的耐药性.

GSK-3β及β-catenin的表达定位与肺腺癌顺铂耐药作用机制研究

目的 研究人肺腺癌细胞系A549和其顺铂耐药细胞系A549/DDP中GSK-3β及β-catenin的表达定位差异,以探讨其与肺腺癌顺铂耐药的作用机制.方法 MTT法检测A549和A549/DDP细胞对顺铂的IC50;免疫细胞荧光法检测顺铂处理前后两种细胞GSK-3β及β-catenin的定位表达.结果 顺铂对A549/DDP细胞的IC50值为(28.984±i.404)μtmol/L高于A549细胞的(5.888±0.338)μmol/L(t=27.696,P＜0.001);A549/DDP细胞中的GSK-3β表达主要在胞质,顺铂处理后GSK-3β定位在胞质和胞核;β-catenin表达主要在胞膜、胞质,顺铂处理后定位转移至胞核.而A549细胞中GSK-3β及β-catenin表达定位无变化.结论 肺腺癌顺铂耐药的机制可能与GSK-3β胞质和胞核共同定位、β-catenin核转移定位相关.

脑胶质瘤细胞化疗耐药中p38MAPK信号通路的作用

目的 探讨p38MAPK信号通路在脑胶质瘤细胞化疗耐药中的作用及相关机制.方法 在前期建立U251/TMZ胶质瘤耐药细胞株的基础上,用特异性阻断剂SB203580阻断耐药细胞株中p38MAPK信号通路,替莫唑胺作用下检测耐药株的细胞活性变化,同时检测MDR1、TopoⅡ、BCL-2等耐药相关基因的蛋白表达变化.结果 阻断通路后替莫唑胺作用下细胞的抑制率明显低于未阻断组,两组之间比较差异有统计学意义(P＜0.05),阻断后耐药细胞中BCL-2、MDR1的表达明显升高,TopoⅡ的表达明显降低,与未阻断的耐药细胞相比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 U251/TMZ胶质瘤耐药细胞中p38MAPK信号通路被阻断后细胞的耐药性增强,其机制可能与耐药株中耐药相关基因BCL-2、TopoⅡ、MDR1的表达变化有关.

乳腺癌耐药蛋白ABCG2对胰腺癌SW1990细胞耐药性影响的实验

目的 探讨吉西他滨诱导胰腺癌细胞SW1990中ABCG2的表达及其与化疗耐药的关系.方法 胰腺癌细胞SW1990用DMEM培养液常规培养,用0.82 mg/ml吉西他滨作用SW 1990细胞24、48和72 h后,使用流式细胞仪测其细胞凋亡率,Western blot检测ABCG2蛋白的表达,RT-PCR检测ABCG2 mRNA的表达,并且分析ABCG2表达水平与化疗耐药的关系.结果 0.82 mg/ml吉西他滨作用SW1990细胞24、48和72 h后,细胞凋亡率分别为(21.1±0.61)％、(13.4±2.17)％、(6.4土1.34)％,不同时间点两两相比P均＜0.05.0.82 mg/ml吉西他滨作用SW1990细胞24、48、72 h后与对照组相比,ABCG2 mRNA分别上升了(2.21士0.11)倍、(3.30士0.08)倍和(4.72±0.12)倍,蛋白上升了(2.17±0.14)倍、(3.61士0.09)倍和(4.98士0.13)倍,且组间比较P均＜0.05,有统计学意义.结论 吉西他滨能抑制胰腺癌细胞SW1990的增殖,但随着时间延长,药物抵抗逐渐增强,这可能与吉西他滨作用细胞后上调ABCG2的表达有关.

上调p38表达提高卵巢癌多细胞球体顺铂敏感性

目的 研究p38在卵巢癌多细胞球体化疗耐药中的作用.方法 构建p38正义真核表达栽体,稳定转染卵巢癌细胞并三维培养形成多细胞球体,RT-PCR及Western blot分析p38表达;CCK-8细胞毒性试验和流式细胞仪检测细胞凋亡率.结果 (1)多细胞球体p38表达低于单层细胞.(2)FACAS检测转染p38真核表达栽体的多细胞球体经顺铂作用后,细胞凋亡率高于转染空载体和未转染的多细胞球体;(3)CCK-8细胞毒性试验示转染p38真核表达载体的多细胞球体相对于转染空载体和未转染的细胞球体对顺铂敏感性更高.结论 p38介导顺铂对卵巢癌化疗耐药,上调p38表达,可提高卵巢癌多细胞球体对顺铂的敏感性.

卵巢上皮癌组织中hMSH2的表达及其与化疗耐药的关系

目的 检测不同化疗敏感程度的卵巢上皮癌组织中hMSH2基因的表达,分析其与化疗耐药及预后的关系.方法 80例新鲜卵巢上皮癌组织均由手术中取得,采用ATP-TCA技术检测卵巢癌组织对八种药物:紫杉醇、卡铂、拓泊替康、多西他赛、吉西他滨、环磷酰胺体内代谢产物、依托泊苷及博来霉素的体外敏感性.采用Real-time PCR及Westem blot法分别检测80例卵巢上皮癌组织中hMSH2基因mRNA和蛋白水平的表达情况.结果 对紫杉醇耐药的卵巢上皮癌组中,hMSH2基因在mRNA及蛋白水平的表达均明显高于敏感组(P＜0.01),在对卡铂、拓泊替康、多西他赛耐药组中hMSH2表达水平也明显高于敏感组(P＜0.05);hMSH2基因的相对表达值与卡铂、拓泊替康、多西他赛的敏感度系数有显著相关性(P≤0.05).早期卵巢癌患者组织的hMSH2表达水平明显低于晚期卵巢癌组织(P＜0.05).高、中分化卵巢癌组织hMSH2蛋白表达水平明显低于低分化卵巢癌组织(P=0.000).原发卵巢癌患者组织的hMSH2表达水平明显低于复发卵巢癌患者组织(P＜0.01).结论 hMSH2基因的高表达与卵巢癌化疗耐药及预后相关,化疗可能诱导hMSH2基因的高表达;下调hMSH2基因的表达或许是逆转肿瘤耐药的新途径.

S100A4在卵巢癌组织中的表达与铂类化疗耐药的关系

目的 探讨钙结合蛋白S100A4与卵巢癌铂美化疗耐药之间的关系.方法 应用免疫组织化学法检测60例卵巢上皮性癌组织中S100A4的表达情况；采用Weatem blot和实时荧光定量PCR法检测不同顺铂化疗敏感度的卵巢癌细胞A2780及CP70中S100A4的差异表达,MTT法测定顺铂对细胞的半数抑制浓度(IC50).结果 (1)S100A4在卵巢癌组织中呈胞核表达、单纯胞质表达及核浆共同表达.铂类化疗耐药组中S100A4阳性表达率为66.67％(16/24),高于敏感组33.33％ (12/36) (P＜0.05).(2)耐药株CP70中S100A4 mRNA和蛋白表达均显著高于敏感株A2780.(3)顺铂对A2780和CP70细胞的IC50分别为20.54μmol/ml和56.23 μmol/ml.结论 S100A4的高表达参与卵巢癌铂类化疗耐药过程.