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苦豆子总碱对SW480细胞株及裸鼠移植瘤的影响
目的:探讨苦豆子总碱( TASA)对SW480细胞株及裸鼠移植瘤的抑制作用及机制.方法:利用MTT法检测不同浓度TASA对SW480细胞的增殖抑制影响；Annexin V-FITC标记法检测SW480细胞凋亡；建立裸鼠移植性实体瘤SW480模型,观察TASA作用下移植性实体瘤的体积和质量,用荧光定量PCR法检测移植性实体瘤组织中Caspase-3、Caspase-9及BCL-2 mRNA的表达.结果:实验结果显示TASA对体外培养的SW480细胞增殖具有明显抑制作用,并可诱导其发生凋亡,其作用呈剂量和时间依赖性,48 h IC50=0.92 mg/mL;TASA高、低剂量组裸鼠移植性实体瘤SW480的体积和质量、BCL-2表达低于模型组,Caspase-3、Caspase-9表达则显著高于模型组,其抑瘤率分别达到57.3％、37.4％.结论:TASA对SW480细胞株及裸鼠移植瘤均有抑制作用,其机制可能与诱导凋亡有关.
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斑蝥酸钠对人胃癌裸鼠皮下移植瘤组织中血管生成作用的研究
目的:研究斑蝥酸钠对人胃癌裸鼠移植瘤组织中血管生成的影响.方法:采用人胃癌BGC823细胞株种植裸鼠皮下建立人胃癌移植瘤模型.应用免疫组化法测定斑蝥酸钠对移植瘤组织中血管内皮生长因子(VEGF)及肿瘤内微血管密度(MVD)表达的影响.结果:中、高剂量斑蝥酸钠治疗组VEGF表达积分极显著低于低剂量组和对照组(P<0.01),中剂量组与高剂量组、低剂量组与对照组之间VEGF表达积分无差异(P>0.05).中、高剂量斑蝥酸钠治疗组MVD极显著低于对照组和低剂量组(P<0.01),但中剂量组和高剂量组之间无显著性差异(P>0.05).结论:斑蝥酸钠可能通过下调肿瘤细胞分泌VEGF,抑制肿瘤血管生成而抑制肿瘤细胞生长.
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BH3－only 模拟物S1通过活化SIRT3分子扰乱卵巢癌细胞糖代谢的机制
癌细胞中葡萄糖代谢的方式为细胞的快速增殖提供了物质和能量基础。去乙酰化酶SIRT3在癌细胞葡萄糖代谢重排和凋亡调控的过程中发挥着重要的作用，有可能成为一个有效的癌症治疗靶点。在本研究中，我们发现BH3－only模拟物S1能够抑制卵巢癌SKOV3裸鼠移植瘤的生长，同时能够上调SIRT3的表达。为了探讨S1对卵巢癌细胞糖代谢的影响及其分子机制，通过检测SKOV3细胞在S1作用下线粒体氧耗率（ OCR）、胞外泌酸率（ ECAR）以及葡萄糖摄入能力的改变，我们发现S1能够损伤线粒体呼吸链和抑制葡萄糖摄取。通过siRNA干扰SIRT3的表达，能够逆转S1对葡萄糖摄入的抑制作用，同时还能缓解S1对SKOV3细胞增殖的抑制效应。合用糖酵解抑制剂2－DG能够加剧SIRT3的活化，同时进一步促进S1对SKOV3细胞增殖的抑制作用和细胞凋亡的发生。综上所述，S1在卵巢癌细胞中抑制细胞增殖作用，可能是通过活化SIRT3以及扰乱葡萄糖代谢来实现的。
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高效液相色谱法检测KB和KBv200细胞裸鼠移植瘤组织中阿霉素浓度
背景与目的:阿霉素是一种应用广泛的抗癌药物,肿瘤组织中阿霉素的浓度比血液浓度能更准确地反映其疗效.本研究采用肿瘤组织中阿霉素浓度的高效液相色谱检测法比较耐药KBv200细胞和敏感KB细胞裸鼠移植瘤组织中阿霉素的浓度.方法:建立KB、KBv200细胞裸鼠移植瘤模型,以高效液相色谱法检测肿瘤组织中阿霉素的浓度.色谱柱为反相BDS C18柱(250 mm×4.6 mm,ID 5μm),流动相:乙腈/0.02 mol/L磷酸二氢钾(1:2.4,V/V,pH 3.9);激发波长480nm,发射波长580 nm;流速:1.0 mL/min.结果:在所建立的色谱条件下.肿瘤组织中阿霉素的线性范围为29.3～7 500 ng/g,线性相关系数r=0.9998,低检测浓度为14 ng/g.在3 750、468.8和117.2ng/g三个浓度的萃取回收率分别为(99.35±7.65)%、(99.79±5.73)%和(103.67±6.76)%,方法回收率分别为(91.89±7.03)%、(94.94±5.18)%、(100.83±5.32)%.日内及日间RSD均小于4.2%.在阿霉索注射后第1、3、5 h,KBv200细胞裸鼠移植瘤组织中阿霉素的浓度分别为(139.32±54.68)、(260.00±126.11)和(173.26±13.88)ng/g,KB细胞裸鼠移植瘤组织中分别为(385.13±42.55)、(523.38±138.84)和(460.75±86.85)ng/g,在相同的时间点,KBv200细胞裸鼠移植瘤组织中阿霉素的浓度明显低于其敏感KB细胞株(P＜0.05).结论:采用高效液相色谱法测得耐药细胞肿瘤组织中抗癌药物的浓度低于相应的敏感细胞肿瘤组织.
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鼻咽癌细胞株裸鼠移植瘤中癌细胞的凋亡
目的:观察鼻咽癌细胞株CNE-1和CNE-2裸鼠移植瘤组织中肿瘤细胞凋亡的形态学特征,并探讨p53,bc1-2和bax在瘤细胞凋亡中所起的作用.方法:CNE-1和CNE-2鼻咽癌细胞株接种于裸鼠并在裸鼠体内连续传3代.在HE和TUNEL染色片中观察细胞株和各代移植瘤组织中癌细胞的凋亡;应用免疫组化法检测p53,bc1-2和bax基因的表达;抽提细胞株及各代移植瘤组织的DNA,以PCR-SSCP法检测p53基因第5～8外显子的改变.结果:在CNE-1和CNE-2移植瘤组织中有相当数量的瘤细胞发生凋亡,可见较大面积的"皱缩性坏死"区和众多的凋亡小体.PCR-SSCP显示p53基因第8外显子有改变,在细胞涂片和各代移植瘤组织中都有p53蛋白的积聚.3代移植瘤组织均有bax过表达,却无bc1-2表达.结论:CNE-1和CNE-2裸鼠移植瘤组织中肿瘤细胞死亡的主要途径是凋亡,表现为大量的"皱缩性坏死"和凋亡小体的形成;这种凋亡可能是非p53依赖性,由bax所介导的.
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鳖甲煎丸对HepG2裸鼠移植瘤的抑制作用及瘤体组织中β-catenin、Tbx3表达水平的影响
目的 通过研究鳖甲煎丸对人肝癌HepG2裸鼠移植瘤生长的抑制作用及Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白表达的影响,探讨鳖甲煎丸抗肝细胞癌的分子机制.方法 裸鼠成瘤实验观察鳖甲煎丸对人肝癌HepG2裸鼠移植瘤生长的抑制作用,免疫组织化学法检测人肝癌HepG2裸鼠移植瘤组织中PCNA的表达水平,TUNEL法检测人肝癌HepG2裸鼠移植瘤细胞凋亡,Westernblot检测人肝癌HepG2裸鼠移植瘤组织中β-catenin和Tbx3的表达水平.结果 鳖甲煎丸能够显著抑制人肝癌HepG2裸鼠移植瘤的生长(P＜0.05);和阴性对照(NC)组(5.5±0.90)相比,高剂量(H)组(22.9±1.22)、中剂量(M)组(14.7±0.50)移植瘤细胞凋亡率显著增加(P＜0.05);H(40.9±2.31)、M(53.5±2.41)、低剂量(L)组(62.3±1.80)与NC组(93.5±1.70)相比,PCNA阳性细胞比例显著降低(P＜0.05);同时,鳖甲煎丸能够抑制Wnt/β-catenin信号通路的信号分子β-catenin和Tbx3的表达.结论 鳖甲煎丸抗肝细胞癌的作用机制可能与抑制PCNA的表达以及调控Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白表达水平有关.
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贝伐单抗对荷耐顺铂人肺腺癌A549/DDP裸鼠皮下移植瘤生长的影响
目的 探讨贝伐单抗联合或不联合顺铂对耐顺铂肺腺癌A549/DDP移植瘤生长的抑制作用.方法 建立裸鼠移植瘤模型,随机分成空白对照组(A组)、单药贝伐单抗组(B组)、单药顺铂组(C组)、联合用药组(D组)和联合半剂量组(E组)5组,连续用药4周.观察肿瘤生长情况,计算抑瘤率;免疫组化法检测肿瘤组织微血管密度(MVD);RT-PCR分析各组经治疗后凋亡基因bcl-2及耐药基因(LRP、GST-Π)mRNA表达情况.结果 与空白对照组比较,经贝伐单抗治疗组(B、D、E组)抑瘤率分别为20.96%、51.67%、50.95%,联合用药组(D、E组)效果佳.经贝伐单抗治疗组微血管密度分别为18.6±1.14、13.6±1.14、14.4±0.55,联合用药组为显著,而单药顺铂组与对照组在抑瘤率和微血管密度表达上均无差异(P=0.632).经贝伐单抗治疗组bcl-2 mRNA表达较对照组有显著差异(P＜0.001),但三组之间无差异(P＞0.05);五组之间在LRP、GST-Π mRNA表达上无明显差异(P＞0.05).结论 贝伐单抗对荷A549/DDP裸鼠移植瘤有抑制作用,联合顺铂用药有显著协同作用,同时提高A549/DDP耐药细胞对顺铂的敏感性,其作用机制可能与抑制肿瘤微血管形成、诱导细胞凋亡增加有关.
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重组人血管抑素对荷人CNE-1鼻咽癌裸鼠抑制作用的初步研究
目的:观察重组人血管抑素(recombinant human angiostatin,rhAGN)对荷人CNE-1鼻咽癌皮下移植瘤生长的抑制作用.方法:建立CNE-1鼻咽癌裸鼠皮下移植瘤模型,皮下注射不同剂量rhAGN,治疗30 d后,观察肿瘤体积和重量变化,计算其抑瘤率.结果:rhAGN处理剂量为50 mg/(kg·d)、100 mg/(kg·d)和200mg/(kg·d)时,肿瘤体积分别为(4961±384)mm3、(2449±276)mm3和(488±52)mm3,与对照组相比,治疗组的体积和重量明显减小(P＜0.01,P＜0.001);其抑瘤率分别为32.3%、64.0%和83.2%.结论:rhAGN能显著抑制CNE-1鼻咽癌移植瘤的生长,且作用呈剂量依赖性.
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EGCG对人肝癌细胞株HepG2裸鼠移植瘤COX-2、VEGF和bFGF表达的调控
[目的]探讨表没食子儿茶素没食子酸脂EGCG对人肝癌细胞株HepG2裸鼠移植瘤生长和肿瘤血管生成的抑制作用及EGCG对移植瘤环氧合酶-2(COX-2)、血管内皮生长因子(VEGF)和碱性成纤维生长因子(bFGF)表达的调控.[方法]将肝癌细胞HepG2种植至裸鼠背部皮下,10d后开始用不同浓度EGCG治疗,38 d后处死.观测裸鼠移植瘤的体积和质量.并采用间接免疫流式细胞术和Western Blot法检测移植瘤COX-2、VEGF和bFGF的表达,用免疫组化法检测微血管密度(MVD).[结果]①生理盐水组切除的移植瘤平均体积和质量分别是(1174.6±793.5)mm3和(0.572 ± 0.138)g,EGCG 50 mg/kg组分别为(649.3±100.8)mm3和(0.340±0.066)g,两组比较差异有统计学意义(P＜0.05).EGCG 50 mg/kg组抑瘤率为40.56％.②生理盐水对照组和EGCG 50mg/kg组的MVD值分别为23.24±1.76和14.27±1.25,两组差异有统计学意义(P＜0.01)；间接免疫荧光流式细胞术和Western Blot检测结果提示EGCG呈浓度依赖性地抑制人肝癌细胞HepG2移植瘤中COX-2、VEGF和bFGF的表达.[结论]EGCG具有抑制人肝癌裸鼠移植瘤生长的作用；同时能抑制肝癌移植瘤内新生血管内皮细胞的生长,其机制可能与抑制COX-2的表达以及由此引起的VEGF和bFGF蛋白表达降低有关.
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藤黄酸对人结肠癌 SW480细胞裸鼠移植瘤生长及血管生成的影响
目的：探讨藤黄酸对人结肠癌SW480细胞裸鼠移植瘤生长和肿瘤血管生成的抑制作用及藤黄酸对血管内皮生长因子受体2（ VEGFR2）表达的影响，初步探讨藤黄酸抗结直肠癌的作用机制。方法建立人结肠癌SW480细胞裸鼠皮下移植瘤模型，15 d后开始用不同浓度藤黄酸治疗，28 d后处死，测定裸鼠移植瘤的体积和质量，计算其抑瘤率；HE染色观察肿瘤坏死、微血管形态的变化；提取组织中总RNA和蛋白，RT-PCR检测肿瘤组织中VEGFR2 mRNA水平，免疫组织化学法检测肿瘤组织中VEGFR2蛋白表达水平和肿瘤微血管密度（ MVD）。结果（1）对照组，藤黄酸低、中、高剂量组移植瘤体积分别为（691±67.2）、（481±62.9）、（377±37.0）、（190±67.9）mm3，瘤质量分别为（0.681±0.072）、（0.473±0.062）、（0.377±0.044）、（0.192±0.068）g，藤黄酸低、中、高剂量组瘤体积、瘤质量均低于对照组（均P＜0.05）；藤黄酸低、中、高剂量组抑瘤率分别为31％、45％、72％；（2） HE染色可见藤黄酸组肿瘤组织出现凝固性坏死，肿瘤新生血管闭锁；（3）与对照组相比，藤黄酸组VEGFR2 mR-NA表达丰度和蛋白水平明显降低，并呈显著量效关系；（4）对照组MVD明显高于藤黄酸组（ P＜0.05）。结论藤黄酸能够抑制人结肠癌SW480细胞裸鼠移植瘤的生长，能抑制结肠癌移植瘤内新生血管内皮细胞的生长，其机制可能与抑制VEGFR2的表达有关。
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5-氨基乙酰丙酸光动力治疗胰腺癌裸鼠移植瘤的实验研究
目的:探讨以5-氨基乙酰丙酸(5-ALA)作为光敏剂对胰腺癌裸鼠移植瘤进行光动力治疗的疗效.方法:将18只裸鼠随机分为3组,每组6只.A组为荷瘤对照组,不给任何治疗;B组行单纯激光照射,不予任何光敏剂;C组在瘤内注射5-ALA,剂量为30 mg/kg,2 h后进行肿瘤局部光动力治疗.结果:光动力治疗组(C组)肿瘤体积与对照组(A、B组)相比明显缩小,差异有显著性(P＜0.05).结论:5-ALA作为光敏剂对胰腺癌裸鼠移植瘤进行光动力治疗,能使肿瘤组织坏死,生长速度明显减慢.
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新城疫病毒疫苗和IL-15治疗3AO裸鼠移植瘤实验研究
目的 探讨新城疫病毒疫苗(ATV-NDV)和白细胞介素-15(IL-15)对3AO裸鼠皮下移植瘤的治疗作用及其机制.方法 建立3AO裸鼠皮下移植瘤模型,随机分为4组,每组10只.Ⅰ组注射ATV-NDV 0.2ml;Ⅱ组注射IL-15100μg/kg;Ⅲ组注射IL--15 100μg/kg加ATV-NDV0.2ml;Ⅳ组为对照组,腹腔注射生理盐水(ATV-NDV右侧下肢皮下注射,IL-15腹腔注射,按每只裸鼠0.2ml配制);观察各组裸鼠成瘤率、生存期和生存延长率及肿瘤生长曲线.流式细胞术(FCM)观察裸鼠移植瘤细胞凋亡率及细胞周期,双标记NK细胞群计数;测定裸鼠脾脏重量;移植瘤瘤体及各组裸鼠肝、脾、肾行常规病理学检查.结果 实验组与对照组之间,联合治疗组与单独治疗组之间相比:荷瘤裸鼠生存延长率.移植瘤细胞凋亡率,NK细胞群计数,裸鼠脾脏重量具有明显差异.病理学检查各治疗组中均可见肿瘤坏死,凋亡细胞.肿瘤细胞周围及肿瘤内有明显的淋巴细胞浸润.ATV-NDV治疗组脾脏有增生,肥大.IL-15治疗组脾脏有充血增生,肝脏有肝细胞水肿,嗜酸性变性,周围有浊肿.时照组裸鼠肝、脾、肾未见明显病理改变. 结论 ATV-NDV、IL-15时人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤具有明显抑制作用,IL-15对ATV-NDV有协同作用.其机制与ATV-NDV直接、特异地对肿瘤细胞产生细胞毒作用,提高了肿瘤抗原的免疫原性;IL-15增强NK细胞的细胞毒活性,诱导NK细胞及细胞因子产生有关.
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小叶莲提取物抗乳腺肿瘤活性研究
目的:研究小叶莲提取物抗乳腺肿瘤活性.方法:培养人乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB-231,每孔分别加入1、25、50、100μg/ml小叶莲乙醇提取物(X1)、乙酸乙酯提取物(X2)、正丁醇提取物(X3),6.25、12.5、25、50、100 μmol/L 8,2’-二异戊烯基槲皮素-3-甲醚(S1)、槲皮素(S2),测定各成分对癌细胞的抑制率.裸小鼠腋下注射MCF-7人乳腺癌细胞以复制荷瘤小鼠模型.模型小鼠分别灌胃给予等容生理盐水(模型组)、15 mg/kg环磷酰胺(环磷酰胺组)、500 mg/kgX1(X1组)、500 mg/kg X2(X2组)、500 mg/kgX3(X3组),每天1次,连续15d,测定小鼠体质量、瘤质量,计算瘤质量抑制率.模型小鼠分别灌胃给予等容生理盐水(模型组)、15mg/kg环磷酰胺(环磷酰胺组)、15 mg/kg S1(S1组)、15 mg/kg S2(S2组),每天1次,连续9d,测定小鼠瘤体积,计算瘤体积抑制率.结果:1、25、50、100 μg/ml X1、X2与12.5、25、50、100 μrnol/LS1、S2对MCF-7人乳腺癌细胞有较强抑制作用;各成分对MDA-MB-231细胞抑制作用均较弱.与模型组比较,X1组、X2组、X3组小鼠瘤质量抑制率升高,差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01).与模型组比较,S1组、S2组小鼠瘤质量抑制率、瘤体积抑制率升高,差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01).结论:小叶莲提取物有一定的抗乳腺肿瘤活性.
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肿节风注射液对裸鼠人胃癌SGC-7901移植瘤的抑制及诱导细胞凋亡作用研究
目的:研究肿节风注射液(ZJF)对裸鼠人胃癌SGC-7901移植瘤的抑制作用及诱导细胞凋亡作用.方法:建立裸鼠人胃癌SGC-7901移植瘤模型,分为空白、阳性对照和ZJF高、低剂量(3、1.5 g·kg-1)组.给予ZJF14 d后,测定胸腺、脾脏指教和外周红细胞、白细胞、血小板数目;计算抑瘤率;观察瘤组织超微细胞形态;检测细胞凋亡变化.结果:与空白组比较,胸腺、脾脏指数和外周血象都无显著变化;ZJF高、低剂量组对裸鼠人胃癌SGC-7901移植瘤的抑瘤率有极显著性差异,分别为42.8%、39.9%;给药后细胞形成一个或多个凋亡小体;ZJF高、低剂量组对瘤组织的凋亡率有极显著性差异,分别是(9.3±0.15)%、(8.18±0.08)%.结论:ZJF可促使细胞出现凋亡小体、诱导细胞凋亡,从而抑制裸鼠人胃癌SGC-7901移植瘤的生长,并对胸腺、脾脏、外周血象无显著影响.
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125I放射性粒子植入联合CIK细胞对人肝癌裸鼠移植瘤生长的抑制作用
目的:观察125I放射性粒子组织间植入联合细胞因子诱导的杀伤(cytokine-induced killer,CIK)细胞对人肝癌裸鼠移植瘤生长的抑制效应.方法:取健康人外周血单个核细胞,加入不同的细胞因子促进CIK细胞成熟,流式细胞仪检测CIK细胞表型,CD3+CD56+双阳性细胞达20％以上为达标;用人肝癌细胞株SMMC-7721建立裸鼠皮下移植瘤模型,随机分为125I放射性粒子组(A组)、CIK细胞组(B组)、125I粒子+CIK细胞组(C组),空白对照组(D组),分别加处理因素,每4d测量各组移植瘤体积,观察它们对裸鼠移植瘤生长的抑制作用.HE染色检测各组移植瘤病理变化,免疫组织化学技术检测各组Ki-67蛋白表达,TUNEL试剂盒检测各组移植瘤原位凋亡.结果:125I粒子放射性粒子植入联合CIK细胞静脉输入可明显抑制人肝癌裸鼠移植瘤的生长,C组瘤体积为(0.42±0.17)cm3,显著小于A组(1.23±0.83)cm3、B组(3.77±1.42) cm3和D组(6.62 ±0.53) cm3,各组瘤体积有显著性差异(F-155.706,P＜0.001)；C组抑瘤率为93.71％,显著高于A组(81.33％)和B组(43.06％).免疫组化染色发现各组移植瘤Ki-67蛋白表达的平均吸光度值分别为:C组(0.481±0.063)、A组(0.592±0.104)、B组(0.669±0.120)、D组(0.797±0.113),差异有统计学意义(F=24.334,P＜0.001).TUNEL法发现:C组凋亡的平均光吸光度值(0.859±0.067),显著高于A组(0.756±0.055)和B组(0.517±0.051),差异有显著统计学意义(F=318.373,P＜0.001),联合治疗明显抑制细胞增殖,促进肿瘤细胞凋亡.结论:125I放射性粒子永久植入联合CIK细胞免疫治疗在体内可显著抑制人肝癌裸鼠移植瘤的生长,抑制癌细胞增殖,诱导其凋亡,其疗效优于单一治疗方式,局部内放疗联合细胞免疫治疗可能有协同增效作用,有可能成为肝癌综合治疗的方法之一.
关键词： 肝癌 125I放射性粒子 细胞因子诱导的杀伤细胞 裸鼠移植瘤 -
乳腺癌残存细胞通过表达乳腺癌干细胞样特性促进裸鼠移植瘤的形成
目的 探讨化疗后乳腺癌残存细胞(drug surviving cells,DSCs)的干细胞样特性及其对裸鼠移植瘤的影响,阐明DSCs细胞的潜在生物学特性.方法 以0.5μg/mL浓度的多西紫杉醇(docetaxel,DTX)每周1次药物处理乳腺癌细胞MCF-7,分别获得处理4次后的DSCs,记为DSCs(1～4)组,未处理的MCF-7细胞为空白对照组.流式细胞仪检测空白对照组及DSCs(1 ～4)组中细胞周期分布.无血清悬浮培养法培养MCF-7细胞和DSCs(1 ～4)细胞,获得乳腺癌干细胞(breast cancer stem cells,BCSCs)微球体,荧光定量PCR和Western blot法分别检测MCF-7细胞和DSCs(1 ～4)细胞中乳腺癌干细胞标志物ALDH1、CD44、CD24及ABCG2mRNA和蛋白表达水平;采用裸鼠移植瘤实验比较MCF-7细胞及DSCs(1 ～4)细胞的成瘤时间、成瘤率及瘤体大小.结果 与MCF-7细胞相比,药物处理后得到的DSCs(2 ～4)细胞中处于静止期(G0/G1期)的细胞比例明显升高.DSCs(2 ～4)细胞形成乳腺癌干细胞微球体的能力更强,表达的干细胞标志物ALDH1、CD44+/CD24-和ABCG2显著增多,差异均有统计学意义(P ＜0.05);DSCs(2 ～4)细胞的成瘤能力更强,瘤体体积较MCF-7细胞明显升高(P＜0.05).DSCs(1)细胞与MCF-7细胞相比无明显差异.结论 经多西紫杉醇药物筛选后的DSCs表达乳腺癌干细胞样特性,促进裸鼠移植瘤的生成.
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肺癌A549裸鼠移植瘤模型高效建立方法的应用
目的:探讨裸鼠高效移植瘤模型的建立方法,为进行肿瘤的体内相关研究和抗癌药物的筛选提供实验基础.方法:肺癌A549细胞接种于裸鼠皮下,出瘤后制备单细胞悬液和组织块分别接种和塞入皮下,观察初次培养细胞成瘤组、二次单细胞悬液成瘤组和二次组织块成瘤组的出瘤率和移植瘤的生长情况,PI单染流式细胞仪检测细胞周期的变化,细胞毒实验采用MTT法.结果:3组中二次组织块成瘤组的出瘤率显著高于另外两组,细胞增殖块,移植瘤的变异小;细胞周期分析显示二次组织块成瘤组的细胞S和G2/M期比例增高,细胞增殖指数显著高于另外两组;但细胞毒MTT的实验结果显示3组肿瘤细胞对化疗药物顺铂的敏感性差异无显著性(P>0.05).结论:二次组织块成瘤可显著提高A549的成瘤率,且不影响肿瘤细胞对化疗药物的反应性,是一种高效的裸鼠移植瘤模型建立方法.
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消癌解毒方对肺癌A549细胞裸鼠移植瘤的抑制作用
目的:研究消癌解毒方对肺癌A549细胞裸鼠移植瘤的抑制作用并初步探讨其可能作用机制.方法:采用皮下接种肺癌A549细胞造成裸鼠移植瘤模型,待成瘤后将裸鼠随机分组并给予不同剂量的消癌解毒方,4周后肿瘤组织称重并测定裸鼠血清血管内皮生长因子(VEGF)含量.结果:给药组裸鼠肿瘤体积与模型对照组相比均增长较慢,4周后三组给药组裸鼠肿瘤重量均显著小于模型对照组(P＜0.05,P＜0.01),血清VEGF含量均显著低于模型对照组(P＜0.01).结论:消癌解毒方对肺癌裸鼠移植瘤模型肿瘤组织的生长有明显的抑制作用,通过降低血清VEGF含量可能是其作用机制.
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扶正抑瘤汤诱导肝癌HepG2细胞凋亡及自噬作用研究
目的:探讨扶正抑瘤汤对肝癌HepG2细胞的诱导凋亡及自噬的调控作用.方法:50只裸鼠分为5组,即生理盐水组,扶正抑瘤汤高(32g/kg)、中(16g/kg)、低(8g/kg)剂量组,5-Fu(17mg/kg)组,每组10只,建立人肝癌细胞HepG-2移植瘤裸鼠模型,待肿瘤体积长到约100 mm3时开始用药,扶正抑瘤汤灌胃给药(每日1次),5-Fu组(每周两次)和生理盐水对照组采用腹腔注射(每日1次),给药18天,于停药第2天各组处死裸鼠,剥离肿瘤称重,绘制肿瘤生长曲线,计算抑瘤率;留取肿瘤组织,Tunel染色检测扶正抑瘤汤对移植瘤细胞凋亡的作用;透射电镜(TEM)检测自噬体形成情况,Western blot检测自噬相关蛋白(Beclin l、Bnip3及LC3)表达变化.结果:扶正抑瘤汤高、中、低剂量组抑瘤率分别是49.9％,21.6％,8.2％,5-Fu组抑瘤率为74.2％,与对照组比较,扶正抑瘤汤高(32g/kg)、中剂量组(16g/kg)与5-Fu组均能抑制肿瘤生长,其中以高剂量组和5-Fu组效果佳;Tunel染色发现,与对照组比较,扶正抑瘤组和5-Fu组均可见到大量凋亡肿瘤细胞,其中以扶正抑瘤高剂量组诱导肿瘤细胞凋亡效果佳,扶正抑瘤汤中、低剂量组和对照组则无明显差异;电镜结果显示:扶正抑瘤组和5-Fu组均可见到大量自噬小体,随着药物浓度降低自噬小体减少,之间呈正相关,其中以高剂量组效果佳,对照组未发现自噬小体;Westen-blot检测结果显示:与对照组比较,扶正抑瘤组和5-Fu组均可使自噬相关蛋白Beelin l、Bnip3及LC3表达上调,且与药物的浓度呈相关性,其中以扶正抑瘤高剂量组效果佳.结论:扶正抑瘤汤对裸鼠肝癌转移瘤HepG2具有抑制肿瘤细胞生长,诱导肿瘤细胞凋亡的作用,并且可激活肝癌HepG2细胞Beclin 1、Bnip3及LC3蛋白的表达,从而诱导肿瘤细胞发生自噬,其中以药物高剂量组(32g/kg)效果佳.
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端粒酶核酶hTERT 5'RZ时辰治疗人肝癌裸鼠移植瘤
我们在既往的研究中,为探讨肝癌裸鼠移植瘤细胞DNA合成与端粒酶表达的生物节律,在时辰同步化裸鼠中构建了肝癌细胞SMMC-7721裸鼠移植瘤.继续在程控光照条件下饲养,于光照后3,6,9,12,15,18,21小时取样,用流式细胞仪测定各时期细胞DNA含量,细胞周期分布及端粒酶活性水平.结果,肝癌裸鼠移植瘤细胞DNA合成随昼夜节律变化,且伴随端粒酶活性的同步节律变化,均在光照后21小时达高峰,光照后9小时处于低谷;节律周期呈余弦分布.表明,肝癌裸鼠移植瘤的生长与端粒酶活性表达在静止相达高峰,为制定肿瘤时辰化疗方案提供了有价值的参考.
