首页 > 文献资料
-
99Tcm-TP1093的制备及其在健康动物体内的生物分布及动力学特点
目的 制备标记率符合显像要求的99Tcm-TP1093,探讨其在健康动物体内的生物分布及动力学特点.方法 化学合成G(D) AGG-Aba-ATAQSAYG-NH2(TP1093)；氯化亚锡还原法99Tcm标记TP1093,纸层析测定标记率,计算比活度；体外稳定性实验、血清蛋白结合实验及脂/水分配实验鉴定99Tcm-TP1093的理化性质；研究标记多肽在健康家兔体内的示踪动力学和正常小鼠体内生物分布；健康家兔99Tcm-TP1093显像,观察体内放射性动态分布变化,利用感兴趣区(region of interest,ROI)技术分析重要组织器官的时间-放射曲线(time-activity curve,TAC).结果 99Tcm-TP1093的标记率为(97.23±0.87)％,比活度为(15.91±0.62) TBq/mmol.标记多肽室温放置4h,其放射化学纯度为(93.34±0.91)％.标记多肽与血清蛋白无明显结合,脂/水分配系数lgP=-(1.68±0.09).标记多肽在健康家兔体内的动力学过程符合权重为1/c的二室模型,t1/2α为(2.689 ±0.541) min,t1/2β为(69.156±20.342) min,总清除率(CL)为(5.029±4.381)mL/kg.小鼠体内分布和健康家兔显像示:血液放射性清除迅速,软组织放射性消退快；胃区呈放射性缺损,甲状腺区未见异常放射性浓聚,脑呈低放射性分布；体内放射性主要经泌尿系统排泄,少量通过肝胆系统分泌.结论 99Tcm-TP1093标记方法简便,标记率与比活度高,可制备成一步法冻干药盒,具有良好的稳定性、体内生物分布及动力学性质.
-
TMP线性二联体多肽的筛选及其对辐射损伤小鼠血小板减少症的救治作用
目的 筛选具有显著促进巨核细胞增殖、分化和血小板生成活性的血小板生成素模拟肽(TMP)二联体线性多肽,并观察其对血小板减少症的救治作用.方法 设计合成系列TMP二联体线性多肽,其中两个头尾串联的TMP之间设置不同长度的连接肽,CCK-8法检测并筛选促巨核细胞增殖活性强的TMP二联体多肽,Western blot分析TMP二联体多肽激活STAT5和ERK1/2磷酸化情况,流式细胞术分析小鼠骨髓来源Sca+-Ⅰ细胞经TMP二联体多肽处理后巨核细胞标志分子CD41、CD61的表达变化.BALB/c小鼠用5 Gyγ射线全身一次性照射后皮下注射TMP二联体多肽,每天1次,连续用药7d,分析外周血血小板水平变化和骨髓造血组织病理改变.结果 连接肽长度和氨基酸组成可显著影响TMP二联体多肽的促巨核细胞增殖活性,其中由1个脯氨酸(P)和8个甘氨酸(G8)连接的TMP二联体活性较为突出.TMP-PG8-TMP多肽处理能够显著促进巨核细胞中STAT5和ERK1/2的磷酸化,该多肽连续作用14 d能够较IL-3对照组显著上调Sca+-Ⅰ细胞CD41、CD61的双阳性表达率[(83.26±5.38)％vs(15.70±2.12)％,P＜0.01].此外,体内应用该多肽能够较辐照对照显著提高急性辐射损伤小鼠外周血血小板低值水平(164.8×109/L vs 53.0×109/L),并使血小板水平提前4d恢复.结论 通过筛选连接肽终获得具有显著促巨核细胞增殖和血小板生成活性的TMP二联体线性多肽.
-
131I标记VEGFR-3高亲和融合多肽对荷人卵巢癌裸鼠靶向治疗的实验研究
目的 观察131I标记血管内皮生长因子受体-3(vascular endothelial growth factor receptor-3,VEGFR-3)高亲和融合多肽(phage-SHSWHWLPNLRHYAS)对荷人卵巢癌小鼠移植瘤的靶向治疗作用.方法 用Iodogen法合成131I-多肽及131I-单抗,体外分别与人淋巴管内皮细胞(LEC)共培养,MTT法检测其对LEC细胞生长的抑制作用;体内44只裸鼠经皮下接种卵巢癌细胞株,成瘤后2周,将20只荷瘤小鼠按随机数字表法分成4组,每组5只.分别经尾静脉注射,Ⅰ组:多肽4.4 μg/只,Ⅱ组:131I-多肽7.4 MBq/只,Ⅲ组:131I-单抗7.4 MBq/只,Ⅳ组:生理盐水0.2 ml作为对照组.干预后每周测量1次小鼠肿瘤的长径及短径,观察4周.余24只荷瘤鼠瘤体达1 cm后行SPECT显像.结果 体外131I多肽组对LEC细胞的生长抑制率在72 h达到高,131I单抗组对LEC细胞的生长抑制率在96 h达到高;72 h及96 h 131I多肽组与131I单抗组及多肽组比较抑制率差异均有统计学意义(P<0.05);体内4周治疗结束时,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组小鼠肿瘤的体积分别为(723±164)、(291±68)、(457±88)、(792±112) mm3,其中Ⅱ、Ⅲ组与Ⅳ组肿瘤体积相比差异有统计学意义(P<0.05),而Ⅰ组治疗结束时肿瘤体积与Ⅳ组比较差异无统计学意义(P＞0.05),Ⅱ、Ⅲ组的抑瘤率分别为63%和44%.结论 131I标记高亲和融合多肽对荷人卵巢癌小鼠移植瘤的生长具有显著抑制作用.
关键词： 卵巢癌 血管内皮生长因子受体-3 多肽 131I 放射免疫治疗 -
~(99)Tc~m标记VEGFR-3高亲和融合多肽在荷人卵巢癌裸鼠体内的分布和显像研究
目的 研究~(99)Tc~m标记VEGFR-3高亲和融合肽(phage-SHSWHWLPNLRHYAS)在荷人卵巢癌裸鼠体内分布和放射免疫定位显像.方法 用NHS-MAG3为双功能鳌合剂,固相法合成多肽.~(99)Tc~m预亚锡直接标记法进行标记,纸层析法测定标记率.经尾静脉注射于荷瘤鼠体内,取不同时相进行SPECT显像,测定标记物在体内的分布情况并进行分析.结果 融合多肽的~(99)Tc~m标记率为95.27%,放射化学纯度为96%,放射性浓度24.6 MBq/ml.经鼠尾静脉注射后1 h,植瘤部位开始出现放射性浓集,肾脏、肝脏及膀胱组织也可见显像;注射后3 h肿瘤显像清晰,每克组织注射百分剂量率(%ID/g)为(30.20±6.89).其余大部分脏器的T/NT值均达高,高为肌肉(13.13);注射后4 h肿瘤部位显像逐渐消退.对照组裸鼠的肿瘤部位始终未见显像.结论 筛选获得的VEGFR-3高亲和融合肽能够靶向荷瘤鼠体内肿瘤组织,实现肿瘤的靶向受体显像.
-
运用噬菌体展示随机肽库筛选与内毒素结合的高亲和性多肽
目的 从噬菌体展示随机肽库中筛选与内毒素结合的多肽序列,并进行鉴定.方法 以内毒素脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)为靶分子对噬菌体展示随机十二肽库进行4轮亲和筛选,获得与LPS结合的噬菌体克隆,应用结合实验和克隆斑抑制实验进一步确证.挑选结合力强的克隆进行DNA测序,推导出呈现的多肽序列,应用生物信息学软件进行多肽序列分析和同源性分析.结果 经4轮亲和筛选从噬菌体展示随机十二肽库中筛选获得了86个克隆,挑选12个结合力强的克隆进行DNA序列测序及生物信息学分析,结合本项目组的噬菌体展示随机七肽库筛选结果推导出呈现的多肽序列为HWQWPHWSPPP(命名为P11肽).检索相关数据库发现此肽序列未被申请专利,体内约908种蛋白与其结构相匹配,其中包含有与LPS相互作用的位点.结论 通过对噬菌体展示随机肽库的淘选,获得与LPS结合的高亲和性多肽,为进一步以这些多肽为先导物进行定向进化研究提供了实验依据和结构基础.
-
99Tcm标记VPAC1配体TP1724及其在动物体内分布与显像研究
目的 制备同位素99Tcm标记血管活性肠肽受体(vasoactive intestinal peptide receptor,VIPR)结合肽TP1724(标记率＞90％),鉴定其理化性质,并探讨其在正常动物体内的生物分布特点、示踪动力学及显像表现.方法 制备G(D) AGG-Aba-VP2 (TP1724);99Tcm间接标记TP1724(SnCl2·2H2O还原法),纸层析法测定标记率和比活度;稳定性实验(体外)、人血浆蛋白结合实验、半胱氨酸置换实验及脂/水分配实验等鉴定标记多肽的理化性质;35只正常小鼠分成7组,每只尾静脉注射3.7 MBq99Tcm-TP1724后于不同时间处死,收集9种组织器官并称取质量、分别测定各种组织器官的放射性,换算为％ ID/g(每克组织百分注射剂量);9只健康家兔各静脉注射37 MBq 99Tcm-TP1724后不同时间取血,测定血液放射性并换算为kBq/L,经DAS 3.1.6软件处理判断佳房室模型,并得出动力学参数;5只健康家兔分别静脉注射37 MBq 99Tcm-TP1724,SPECT动态显像观察体内放射性分布变化.结果 99 Tcm-TP1724的标记率(96.57±0.71)％,比活度(25.52±0.29) TBq/mmol.室温下隔绝空气放置4h,放化纯度为(93.64±2.25)％;Sephadex G-50柱层析示,99Tcm-TP1724血浆蛋白结合率约为6.61％;99Tcm-TP1724与不同浓度半胱氨酸37℃温育1h后,未结合99Tcm含量无明显变化;脂/水分配系数lg P为-(1.99 ±0.02).99Tcm-TP1724在健康家兔体内的动力学符合权重为1的二室模型,分布半衰期t1/2α为(2.64±1.32) min,消除半衰期t1/2β为(78.36±13.38) min.体内生物分布和/或动态显像示:血液放射性清除迅速;颈部及胃区未见异常放射性聚集,脑部显示低放射性分布;放射性大部分通过肾脏排泄,少量经肝胆分泌.结论 99Tcm-TP1724标记方法简便、标记率和比活度高、稳定性好、体内动力学性质优良.
-
抗CAⅨ蛋白多糖区多肽的合成及其寻靶能力
目的 合成能够与碳酸酐酶9(carbonic anhydraseⅨ,CAⅨ)蛋白多糖区特异性结合的多肽分子(proteoglycan-like region peptide,PGLR-P1),并初步探讨其在体外的寻靶能力.方法 通过化学固相合成法合成多肽分子,对其纯度和相对分子质量进行分析,并初步探讨其与CAⅨ蛋白、表达CAⅨ的肿瘤细胞和相应移植瘤组织的结合能力以及携载多肽的靶向纳米泡的体外寻靶能力.结果 合成的多肽分子纯度高于98％,相对分子质量(1 722.2±0.4),其能与CaⅨ蛋白、表达CaⅨ的肿瘤细胞及相应移植瘤组织发生特异性靶向结合,且携载多肽的靶向纳米泡特异性靶向结合CaⅨ表达阳性的肿瘤细胞.结论 化学合成的多肽分子PGLR-P1在分子、细胞和组织水平均能与CaⅨ蛋白发生特异性结合.
-
放射性核素示踪法对多肽VEGF125-136在家兔体内的药代动力学研究
目的 探讨VEGF125-136在家兔体内的药代动力学.方法 采用放射性核素99Tcm对VEGF125-136进行间接标记.测定6 只家兔静脉注射37 MBq 99Tcm-VEGF125-136后不同时间血浆中药物的放射性浓度,用DAS软件编制放射性浓度-时间曲线,并计算药代动力学参数.结果 99Tcm-VEGF125-136的放射化学纯度大于97%,99Tcm-VEGF125-136在家兔体内的代谢符合三室模型,快分布相半衰期(t1/2α)为(5.327±2.351) min,慢分布相半衰期(t1/2β)为(26.446±6.502) min,消除相半衰期(t1/2γ)为(304.41±216.811) min,转运速率常数K10、K12、K21 、K31 及K13分别为(0.047±0.034)、(40.65±68.54)、(0.111±0.058)、(0.111±0.058) min-1及(0.002±0.004) min-1,清除率(CL)为(4.00±1.00) ml/min.结论 VEGF125-136在家兔体内的药代动力学符合三室模型,且血液清除快而周边血管丰富的组织停留时间相对较长.
-
p65结合肽与p65的亲和力检测及其对NF-κB DNA结合活性抑制作用的鉴定
目的检测NF-κB p65亚基结合肽与p65间相互作用的亲和常数,以及其对NF-κB DNA结合活性的抑制效应.方法借助于生物传感器技术分析NF-κBp65亚基结合肽与p65相互作用的动力学,同时应用竞争性ELISA鉴定结合多肽对NF-κB DNA结合活性的抑制效应.结果生物传感器技术分析结果表明5条p65结合肽均能与p65发生相互作用,相互作用的亲和常数分别为GST-BPT1:2.67×10-7mol/L、GST-BPT2:9.02×10-6mol/L、GST-BPT3:1.07×10-6mol/L、GST-BPT4:8.03×10-6mol/L、GST-BPT5:9.83×10-7mol/L.竞争性ELISA检测结果表明5条p65结合肽均能在一定程度上抑制NF-κB与其顺式作用元件κB基序的结合,且这种抑制效应随多肽浓度的增加而增强.结论酵母双杂交筛选获得的5条p65结合多肽与p65间确实存在相互作用,且5条结合肽对NF-κBDNA结合活性均有一定的抑制效应,由此提示以这些多肽为先导物设计和开发靶向NF-κB的抗炎多肽药物将成为可能.
-
VEGF受体3亲和肽亲和特性研究
目的通过测定人源VEGF受体3(VEGFR3)亲和肽(WHGSLKQNLWWY)及VEGF-D与VEGFR3的功能性亲和常数,鉴定亲和肽的亲和特性.方法通过戊二醛耦联法包被多肽,确定佳多肽包被浓度,佳多肽与VEGFR3结合反应时间以及包被系数后,采用非竞争性ELISA固项法,得到多肽及VEGF-D与VEGFR3的结合反应曲线,计算多肽及VEGF-D与VEGFR3的亲和常数.结果多肽及VEGF-D与VEGFR3的功能性亲和常数分别为(1.42±1.45)×107mol/L-1和(1.03±1.16)×108mol/L-1.结论该多肽与VEGFR3亲合能力较强,为今后开发以该多肽为基础的靶向治疗药物提供了理论依据.
关键词： 酶联免疫吸附测定 多肽 亲和力 卵巢癌 血管内皮生长因子受体3 -
99Tcm-RGD-4CK在健康家兔体内的示踪动力学研究
目的 探讨99Tcm-RGD-4CK在健康日本大耳兔体内的示踪动力学.方法 采用预锡化法99Tcm直接标记RGD-4CK.静脉注射99Tcm-RGD-4CK 37 MBq(0.5 ml),在注射后1.5～240 min时间内分10个时相点采血并称重,测定血样品放射性计数,结果经参考源衰减校正,后换算为kBq/ml血液.血样放射性活度数据应用DAS软件处理,结合αvβ3受体在正常体内实际表达情况进行室模型判断,并得出相应的示踪动力学参数.结果 99Tcm-RGD-4CK的标记率为(96.86±1.24)%,比活度为(13.01±0.17)TBq/mmol.99Tcm-RGD-4CK在正常家兔体内符合二室模型示踪动力学过程(权重数为1/C).分布相半衰期(T1/2α)为(4.19±2.17)min,消除相半衰期(T1/2β)为(69.32±0.00)min,转运速率常数K10、K12与K21分别为(0.013±0.002)、(0.138±0.139)、(0.095±0.063)/min,清除率(CL)为(2.00±1.00)ml/min.结论 99Tcm-RGD-4CK制备方法简便,标记率高,无需分离纯化而直接应用;99Tcm-RGD-4CK在正常家兔体内的示踪动力学符合权重数为1/C的二室模型.
-
多肽、蛋白质类药物新型给药系统的研究进展
近年来,随着生物技术的发展,多肽、蛋白质类药物已成为生物技术新药(new biotechnology drug)的主要品种.与传统的化学合成药物相比,其优点受到了广泛的关注,即与体内正常生理物质十分接近,更易为机体吸收,其药理活性高、针对性强、毒性低.但由于多肽、蛋白质类药物(1)分子质量大、稳定性差、易被胃肠道中的蛋白水解酶降解;(2)生物半衰期短、生物膜渗透性差、生物利用度不高、不易通过生物屏障等,故其给药系统的研究一直是药剂学领域的一个热点.
-
G蛋白偶联受体的二聚化及其意义
G蛋白偶联受体(G protein couple receptors,GPCRs)是一个超大的膜受体家族,可以被不同的配体所激活,如激素、多肽、氨基酸、光粒子等.通过与这些配体结合,它们可以介导许多的信号传导,通过激活细胞内的G蛋白,从而激活不同的细胞内通路,产生不同的生物学效应.在对GPCRs的研究初期,普遍认为它们是以单体形式存在并发挥作用的,但后来大量证据表明,绝大多数GPCRs存在二聚化甚至更高的聚合形式,并以此形成基本的功能单位.二聚化可以发生在同受体、相似家族受体或不同家族受体分子之间,其作用可以体现在受体信号传导通路中的诸多环节,如与配体的结合、受体的激活、失敏及运输等.
-
浅析细胞因子的药学意义
临床医学机体的免疫细胞和非免疫细胞能合成和分泌的一组多肽或低分子量蛋白质,称为细胞因子.包括干扰素(IFN)、白细胞介素(IL)、肿瘤坏死因子(TNF)、集落刺激因子(CSF)、转化生长因子(TGF)等.它们与靶细胞特异受体结合,调整细胞增殖、分化和功能活性,在神经内分泌免疫调节网络中起重要作用,在异常情况下也会导致病理反应.
-
蜈蚣酶解工艺优化及抗肿瘤活性研究
目的:优化蜈蚣酶解工艺并探究酶解液产物体外抗肿瘤活性.方法:采用胰蛋白酶进行酶解,以水解度为指标,在单因素实验基础上,通过响应面法优化酶解工艺.结果:蜈蚣的佳酶解条件为酶解温度49.6℃,酶解pH为7.62,酶解时间7小时,加酶量3000U.在优条件下,平均水解度为17.77％.体外抗肿瘤试验表明蜈蚣酶解液产物具有较优增殖抑制效果,对肺腺癌A549细胞株、乳腺癌MCF-7细胞株及喉癌Hep-2细胞株的IC50值分别为1.822mg/ml、1.142mg/ml和1.404mg/ml.结论:此工艺稳定可行,可应用于蜈蚣酶解工艺的优化;其抗肿瘤效果优良.
-
抗TRPC6多肽单克隆抗体的制备与鉴定
目的 制备抗TRPC6多肽单克降抗体,并对其免疫学和生物学特性进行鉴定.方法 采用TRPC6多肽偶联血蓝蛋白(KLH)为抗原,免疫Balb/c小鼠,取血清效价高者脾细胞与Ag8.653骨髓瘤细胞进行融合.采用间接ELISA法筛选阳性杂交瘤细胞,以及测定单克隆抗体的特性、效价及其相对亲和力；采用单克隆抗体亚类检测试剂盒鉴定Ig亚型；并经有限稀释法克隆化培养获得杂交瘤细胞株；采用秋水仙素阻断法鉴定杂交瘤细胞株染色体.结果 获得3株能稳定分泌抗TRPC6多肽的单克隆抗体,分别命名为A2、F11和H8;抗体Ig亚类均为IgG1型,染色体均在89±7条的范围内；相对亲和力结果F11为6μg/ml,A2、H8为12.5μg/ml.结论 抗TRPC6多肽单克隆抗体的成功制备,为TRPC6的免疫学检测方法的建立奠定基础.
-
CD14抑制肽对内毒素诱导U937细胞表达TNF-α的影响
目的 观察CD14抑制肽(CD14 inhibitory peptide,CD14-IP)对内毒素诱导的U937细胞表达TNF-α的影响.方法 U937细胞用佛波脂(PMA)诱导成熟后分5组:正常对照组、LPS组、高剂量抑制肽组、中剂量抑制肽组和低剂量抑制肽组.LPS组给予终浓度为100 ng/mL的LPS和100 ng/mL的LBP,高、中和低剂量抑制肽组除给予LPS和LBP外,分别给予终浓度为10 μg/mL、1.0 μg/mL和0.1 μg/mL的CD14-IP.ELISA测定细胞培养上清NNF-α的浓度.进一步观察不同时间应用CD14-IP(1.0 μg/mL)对LPS诱导U937细胞TNF-α和NTF-α mRNA表达的影响.用RT-PCR测定细胞TNF-α mRNA的表达.结果 LPS组和抑制肽各组TNF-α浓度较正常组明显增高(P<0.05),高、中剂量抑制肽组TNF-α水平比LPS组明显降低(P<0.05),高、中剂量抑制肽组之间TNF-α浓度无明显差别(P>0.05),低剂量抑制肽组TNF-α浓度与LPS组无统计学差异(P>0.05).不同时间应用CD14-IP时,CD14-IP早期应用对TNF-α和TNF-α mRNA的表达抑制作用显著.结论 CD14-IP能显著减少LPS诱导的U937细胞TNF-α和TNF-α mRNA的表达,早期应用效果较好,可能对LPS所致急性肺损伤有保护作用.
-
噬菌体呈现的多聚多肽3A8诱导Jurkat细胞的凋亡效应
目的检测噬菌体呈现的多肽3A8诱导Fas+Jurkat细胞的凋亡效应.方法噬菌体表面呈现的多肽3A8与Fas+Jurkat细胞共孵育,通过Annexin-V检测细胞膜磷脂磷脂酰丝氨酸的翻转;流式细胞仪检测经处理的Jurkat细胞DNA含量;透射电镜观察细胞形态是否出现典型的凋亡特征.结果Annexin-V检测到经3A8处理的Jurkat细胞有32.64%的细胞膜磷脂磷脂酰丝氨酸发生了翻转.处理细胞经PI染色流式细胞仪分析,发现25.41%的Jurkat细胞发生凋亡,明显高于未经处理的对照组.透射电镜镜下观察到凋亡细胞不同时期的形态.结论噬菌体呈现的多肽3A8与Jurkat细胞结合,可诱导细胞凋亡.
-
一种能与Fas结合的融合型九肽生物学活性分析
目的鉴定从噬菌体随机肽库筛选所获得的融合型多肽3A8的生物学活性.方法制备融合型多肽3A8,经纯化,采用ELISA检测融合型多肽3A8对Fas.Fc的特异性结合;细胞ELISA检测3A8能否与Jurkat细胞表面天然Fas受体结合;3H-TdR掺入法检测3A8对Jurkat细胞增殖的影响;流式细胞仪检测细胞凋亡.结果ELISA结果显示融合型多肽能与Fas.Fc特异性结合,呈浓度剂量依赖关系.细胞ELISA实验证实3A8能与Jurkat细胞表面Fas受体结合.3H-TdR掺入法检测发现3A8可抑制Jurkat细胞增殖,抑制率为50%.经3A8处理细胞经PI染色流式细胞仪分析,发现25.41%的Jurkat细胞发生凋亡,明显高于未经处理的对照组.结论从噬菌体随机肽库获得的融合型多肽3A8能与Jurkat细胞表面受体Fas结合,诱导细胞凋亡.
-
GST Pull-down实验鉴定NF-κB相互作用多肽
目的体外鉴定NF-κB相互作用多肽与p50和p65间的相互作用.方法首先构建GST-作用多肽融合蛋白的原核表达载体pET-42a/polypeptide及NF-κB50和p65亚基保守结构域的原核表达载体pET22b/p50和pET22b/p65,并在大肠杆菌E.coli BL-21中诱导表达,后进行GST pull-down实验验证多肽与NF-κBp50和p65的结合效应.结果经诱导表达获得了可溶性的GST-多肽融合蛋白和具有DNA结合活性的p50、p65蛋白,GST pull-down实验证实3条多肽与p50发生特异地相互作用.结论证实3条多肽在体外能与p50发生物理性的相互作用,这为获得靶向NF-κB的功能拮抗多肽工作奠定了基础.
