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癌症患者不要盲目补充核酸
风靡全球的补充核酸的"基因食品"疗法,成了人们谈论的热点,老少皆宜,防治百病.不少癌症患者到癌症康复会咨询,癌症康复治疗是否需要服用核酸类保健品?针对这种情况,把国内外专家对核酸的看法总结如下,供癌症患者参考:
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2014年圣安东尼奥乳腺癌研讨会报道：乳腺癌循环核酸检测新进展
循环核酸( circulating nucleic acid)，是指循环血中游离于细胞外的机体内源性 DNA。循环核酸早由Mandel和Métais[1]于1947年发现，由于缺乏高灵敏性和高特异性的检测方法，有关血液中游离DNA与疾病相关性的研究在较长时期内进展缓慢。直到有效分离游离DNA技术、高通量测序和数字PCR的出现，使这一领域的研究在近些年得到了较为迅速的发展。尤其在发现循环核酸可真实反映肿瘤基因突变后，应用分子生物学手段对循环核酸的研究逐渐成为了国内外肿瘤学研究的热点。在2014年12月召开的第37届圣安东尼奥乳腺癌研讨会( SABCS)上，有关循环核酸的研究也是会议报道的热点之一。笔者选择其新研究进展与大家分享。
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血循环核酸作为肿瘤诊断生物标志物的研究进展
循环核酸(circulating nucleic acids,CNAs)是一种存在于动植物和人体液中的细胞外游离状态核酸,包括循环DNA、循环RNA以及新发现的微小RNA(miRNA).血液不同于其他体液,分布于全身各处,因此,血CNAs具有良好的临床应用前景.由于生理状况、疾病种类和病程的不同,CNAs在血清和血浆中存在的种类和数量也会发生变化.本文中,我们主要介绍了血CNAs的发现过程、分子结构、生物学特性、检测方法以及与肿瘤发生、发展关系等方面的研究进展.一、肿瘤患者血CNAs的发现1948年,法国科学家首次报道,在人血浆中可分离得到游离形式的核酸.由于当时人们认为,核酸需在完整细胞内传递生物遗传信息,因此,这一发现并未引起广泛关注.数十年后,植物学家Anker和Stroun发现,植物冠瘿肿瘤的转移是通过游离核酸来完成的.随后,人们证实,肿瘤患者血液中存在游离形式的DNA,血液中循环DNA不仅发生基因突变,还包括了微卫星改变、倒位、缺失和甲基化等.至此,CNAs在肿瘤诊断方面的研究有了快速发展.
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放射性同位素示踪技术在反义核酸研究中的应用
用放射性同位素标记反义核酸,可方便地对反义核酸的体内行为进行研究,或者进行反义显像和反义治疗.目前已有多种不同性质的放射性同位素被用于反义核酸标记,标记方法也不断得到完善.本文对常用于反义核酸标记的放射性同位素的特点及其标记方法进行综述,介绍其在反义治疗药物和反义显像研究中的应用情况,并评述了反义核酸同位素标记存在的问题和发展趋势.
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一种高性能磁性复合微球的制备及其在DNA提取中的应用
目的 研制一种分散性好、磁响应能力强的高性能Fe3O4@SiO2磁性复合微球,以配合核酸提取仪快速、自动分离纯化DNA.方法 通过透射电镜(TEM)、超导量子干涉磁强计(SQUID)对制备的磁性复合微球进行表征.利用紫外分光光度计、实时荧光定量PCR(real time fluorescence quantitative PCR,RQ-PCR)及电泳验证DNA提取效果.结果 制备的Fe3O4@SiO2磁性复合微球分散性良好,粒径均匀,且具有良好的超顺磁性和较高的饱和磁化强度.核酸提取实验表明,T100磁性复合微球可从鲑鱼精、乙肝病毒及质粒菌等样品中提取出高质量的DNA.结论 制备出一种高性能Fe3O4@SiO2磁性复合微球,可应用于核酸提取仪.
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抗埃博拉病毒疫苗和核酸类药物研究进展
埃博拉病毒（EBOV）致病性和传染性强，死亡率高，常在西非热带地区暴发流行。目前相应的抗病毒药物和疫苗正加紧研发。 EBOV疫苗依据抗原递送方式主要可分为3类，包括基于非复制性病毒载体的疫苗、基于复制性病毒载体的疫苗和基于病毒蛋白抗原的疫苗。ChAd3-ZEBOV和VSV-EBOV是具潜力的抗埃博拉疫苗。随着埃博拉病毒感染分子基础研究的深入，抗埃博拉病毒的核酸和核苷类似物药物也成为研究热点。
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致病微生物耐药性的核酸类体外诊断试剂盒现状
目前,致病菌耐药性的核酸类诊断试剂盒主要是以基因检测为标准.而目前研究显示,与细菌的耐药性有关的基因是:mecA基因、rpoB基因、Van A/B/C/D基因、inhA基因、ahpc基因、katG基因.前三者(mecA基因、rpoB基因、Van A/B/C/D基因)的作用已肯定.目前核酸类诊断试剂盒主要是检测这三种基因.
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2011年我国生化药物研究进展
目的 综述2011年我国生化药物的研究进展.方法 查阅国内文献,选择具有较大学术意义或实用价值的内容,并结合国际部分相关研究,按氨基酸、肽和蛋白质类、酶和辅酶类、糖类、脂质类及核酸类药物分别介绍并与国外现状进行比对.结果与结论 氨基酸、肽和蛋白质类、酶和辅酶类、糖类药物的研究相对较多,主要集中在如牛磺酸、超氧化物歧化酶及肝素类的药理作用及机制、分析检测和联合用药等方面.脂质类和核酸类药物研究相对较少,但其中氟尿嘧啶及其衍生物的研究始终是热点.
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以核酸为作用靶的药物研究
20世纪后半叶,以基因重组技术为基础带动的分子生物学和结构生物学的飞速发展,使人们对生命活动的基本规律和各种疾病的起因有了较深入的了解,同时也为药物的合理设计提供了大量的生物靶分子.据1998年牛津生物大分子晶体库的数据,已经明确结构的蛋白、多肽、病毒的晶体已经达到6 617个,从而为用计算机技术来设计新药结构以及利用计算机的小分子化合物库对这些靶分子的虚拟筛选奠定了基础.
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以DNA为靶的小分子药物研究中的分子识别
设计了不同系列的小分子,并以DNA三维空间结构的运动性为基础研究了它们之间的识别、结合作用.借助于生物量热、波谱、色谱及电泳技术鉴别它们与DNA的结合方式,从而建立了小分子与DNA嵌插结合的实验性判别标准.同时着重研究了柔性侧链、电性取代基对DNA嵌插及选择性结合的影响,总结出一些有意义的规律,如:(1)在嵌插平面上,无论是给电子还是拉电子基团的取代都可以增加π键的离域性和分子的极性,而使嵌插结合增强.(2)在刚性平面上引入特定长度的柔性侧链作为导向连接结构,可以增强DNA选择性结合的作用,这说明在抗癌药物设计中柔性侧链的引入可能对增大抗癌活性,降低毒性是有作用的.
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微小RNA-155在炎症性肠病中的表达及意义
目的 观察微小核糖核酸(microRNA)-155在炎症性肠病(IBD)患者组织及血浆中的表达,探讨其对该病的诊断价值及临床意义.方法 采用实时定量PCR检测20例克罗恩病(CD)患者、21例溃疡性结肠炎(UC)患者、18例IBP类型待定(IBDU)患者和作为对照的25名健康人、12例感染性肠炎患者、19例缺血性肠病患者的肠黏膜组织及血浆循环microRNA-155的表达,用受试者工作特征(ROC)曲线下面积分析其对IBD的诊断价值.结果 在CD组、UC组、IBDU组中,肠黏膜microRNA-155的表达均高于对照组,其中UC组的相对表达量高于CD组(35.4±3.0比18.6±5.9,P＜0.01),IBDU组的相对表达量高于CD组(23.0 ±3.7比18.6±5.9,P＜0.05),UC组的相对表达量高于IBDU组(35.4±3.0比23.0 ±3.7,P＜0.01).血浆中microRNA-155的表达在UC组、IBDU组中高于对照组,两者的相对表达量分别为55.6±2.5、48.1 ±6.2(P ＜0.05),而在CD组中的表达差异无统计学意义(P＞0.05).在肠黏膜组织中microRNA-155表达的ROC曲线下面积为0.83 (95％ CI:0.679 ～0.986,P＜0.01).肠黏膜组织中microRNA-155对IBD诊断的灵敏度为68.4％,特异度为78.6％.结论 microRNA-155的表达在IBD患者的组织及血浆中均不同程度的高于对照组,可作为IBD诊断的分子标志物,并提示miRNA-155可能参与了IBD的发生、发展过程.
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PET/CT显像在肝细胞肝癌诊断中的研究进展
肝细胞肝癌病死率很高,常规诊断发现时多是中晚期.PET/CT作为一种新型的影像学检查技术,为分子水平上的功能成像.近年来,PET/CT在肝细胞肝癌的诊断、预后及疗效判断方面取得了一定的进展,发挥越来越重要的作用.联合应用多种示踪剂可以提高PET/CT显像对肝细胞肝癌诊断的灵敏度和特异度.笔者就以上方面的进展作一综述.
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核酸及其类似物的常见放射性核素标记及显像
放射性核素标记的核酸及其类似物在基因标记显像和基因治疗药物开发等多方面具有重要意义.该文对常见的放射性核素标记核酸及其类似物的方法和动物显像进行综述,并评述其应用前景.
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从一根毛发中分别提取nDNA和mtDNA的简易方法
目的:探讨从1根脱落毛发中既获取核内基因组DNA(nDNA)又获取核外线粒体DNA(mtDNA)的简便可靠方法.方法:用含高浓度的二硫苏糖醇(DTT)的细胞裂解液裂解细胞,建立DTT-裂解液法及DTT-TKM法用于毛根、毛干部分的核酸提取,并对2种方法进行了比较.结果:2种方法均能从毛根及毛干中提取nDNA及mtDNA.DTY-TKM法适用于多根毛发的核酸提取.而DTT-裂解液法则不仅能提高毛囊DNA的提取量,而且能从少量毛干中提取到几乎不含nDNA的mtDNA.结论:DTT-裂解液法简便、经济、无创,更适于从1根毛发中分别提取nDNA及mtDNA.特别适用于血液等样本采集困难时对于遗传信息的获取,在法医学上亦具有一定的应用价值.
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基于中药核酸的以核酸为靶向的核酸类新药物研究
之前,我们提出了"中药生物化学"的概念,这无疑是一个全新的研究领域和方向.中药生物化学的研究不仅能够引导药物科学家基于新的模式发现全新的药物.
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鱿鱼肝脏中核酸的纯化工艺研究
采用离子交换层析,一步分离纯化鱿鱼肝脏中的核酸初抽提样品,层析条件:填料为DEAE-纤维素,色谱柱8 cm×1 cm,流速1 ml/min,260 n m紫外检测,收集以0.6 mol/L NaCl(pH 7.4 Tris-Cl缓冲液)为洗脱相时的洗脱液,得率为85%～89%,经透析、低压冷冻干燥,可获得纯度为87%～90%的核酸产品,可用于医药及食品工业.
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海洋生物废弃物核酸提取工艺研究(不同萃取液对提取率的影响)
应用多种萃取液体系,从海洋生物废弃物鱿鱼肝脏中提取核酸,针对传统有机溶剂提取工艺进行改进.改进后的工艺与原工艺比较,核酸提取量提高30%～60%,整体工艺得到简化,而且避免了有机物残留,显示出良好的应用前景.
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核酸对铅染毒大鼠DNA损伤的干预效应
目的:探讨抗氧化物质核酸对铅染毒大鼠淋巴细胞和肝细胞DNA损伤的干预效应.方法:实验于2003-03/05在哈尔滨医科大学公共卫生学院完成.选用32只纯种雄性健康3月龄Wistar大鼠,清洁级,32只大鼠随机分为4组,空白组、模型组、低剂量和高剂量核酸组各8只.空白组正常饮水,其余3组饮醋酸铅水溶液8g/L.空白组、模型组灌胃蒸馏水,低剂量和高剂量核酸组分别灌胃核酸200,700mg/kg,末次灌胃后24 h,尾部取抗凝血,分离淋巴细胞,制成细胞悬液,24 h内待测.5周后断头处死各组动物,取出肝脏,制成肝细胞悬液,24 h内待测.采用单细胞凝胶电泳技术(彗星细胞实验)对淋巴细胞和肝细胞DNA损伤进行观察,细胞中DNA损伤单链断裂时会出现拖尾的彗星细胞.每片随机观察30个细胞,计数彗星细胞百分率,用目镜测微尺测量彗星细胞尾长.结果:32只大鼠全部进入结果分析,无脱失.①淋巴细胞中彗星细胞百分率和尾长比较:模型组与核酸低、高剂量组大鼠淋巴细胞中彗星细胞百分率和尾长均显著高于空白组[(50.25±6.21)%,(41.25±6.96)%,(35.38±5.93)%,(6.88±1.13)%;(23.25±4.23)μm,(16.50±4.24)μm,(13.63±2.62)μm,(6.75±1.17)μm,(q=11.28～42.94,P＜0.01)].核酸低、高剂量组彗星细胞百分率及彗星细胞尾长均明显低于模型组(q=8.91～15.77,P＜0.01).②肝细胞中彗星细胞百分率和尾长比较:模型组与核酸低、高剂量组大鼠肝细胞彗星细胞百分率和尾长均明显高于空白组(56.25±6.71)%,(42.25±6.09)%,(39.25±7.17)%,(8.25±1.28)%;(27.63±4.98)μm,(19.25±3.54)μm,(18.50±5.48)μm,(7.88±0.99)μm,(q=14.07～45.24,P＜0.01).核酸低、高剂量组彗星细胞百分率和尾长也显著低于模型组(q=11.10～16.02,P＜0.01).结论:慢性铅染毒可导致大鼠淋巴细胞和肝细胞DNA损伤,饮食核酸能显著提高对淋巴细胞和肝细胞DNA损伤的修复作用.
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NgR特异性siRNA筛选及其表达载体构建
目的:将siRNA技术应用于NgR,筛选出高效的NgR(Nogo受体)特异性siRNA,并构建其表达载体.方法:2005-03/2006-03,在杭州新瑞佳生物制药有限公司、解放军第二军医大学神经生物教研室设计筛选NgR特异性siRNA,按照E1bashir等设计原则和siRNA的要求,设计、合成4对siRNA,转染体外培养大鼠原代皮层和海马细胞,筛选出基因高沉默效率的NgR特异性siRNA;2004-03/2005-03上海生工生物工程公司将获得的高沉默效率siRNA设计成带有BamH Ⅰ、Hind Ⅲ酶切粘性末端、终止识别序列和LOOP环的发卡式RNA,并将其克隆入载体pRNAT-U6.1/Neo,构建NgR特异性siRNA表达载体,然后进行酶切鉴定及基因测序.结果:①4对NgR特异siRNA中,siRNA199下调NgR mRNA的表达水平效率高,转染72 h效果显著(96.04%).NgR特异性siRNA199序列为:5'-CCGAAUCUCUUACGUGCCATT-3'.②将该序列的发卡式RNA成功克隆入载体pRNAT-U6.1/Neo,构建成NgR特异性siRNA199表达载体,酶切鉴定及基因测序表明设计序列完全相符,目的基因序列准确无误.结论:NgR特异性siRNA199及其表达载体构建成功,为进一步合成病毒载体及观察NgR特异性RNA干扰抑制大鼠NgR mRNA表达对脊髓损伤的修复作用奠定了基础.
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慢性乙型肝炎核苷(酸)类似物经治患者再治疗策略
核苷(酸)类似物在慢性乙型肝炎的临床治疗中的应用日益广泛,恰当处理核苷(酸)类似物经治患者的停药后复发及其再治疗、合理把握再治疗方案备受关注.核苷(酸)类似物经治患者可分为正在治疗和经治复发两大类.对于正在治疗的经治患者目前按照路线图的概念来进行管理；而对于经治复发的患者根据其初始治疗的不同应答情况可采用优化治疗及联合治疗的策略进行管理.
