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疱疹病毒VP16研究进展
疱疹病毒VP16蛋白是疱疹病毒重要的皮层蛋白,参与病毒立即早期基因转录的激活、病毒在宿主细胞内的装配与释放等过程,与许多病毒蛋白和宿主蛋白都存在蛋白相互作用,且部分疱疹病毒VP16具有去泛素活性以及帮助病毒抵御宿主免疫的功能.本文将以疱疹病毒VP16蛋白的结构特点为基础来阐述VP 16的功能及其复杂的相互作用,为深入研究疱疹病毒的成熟过程以及VP16涉及的相互作用提供参考.
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人巨细胞病毒潜伏感染机制研究新进展
人巨细胞病毒(HCMV)是疱疹病毒科β亚科中基因组大的DNA病毒,所编码的蛋白质超过227种,具有种属特异性[1].
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巨细胞病毒编码的趋化因子及其受体同源物
巨细胞病毒(CMV)属β疱疹病毒亚科,普遍存在于自然界.人巨细胞病毒(HCMV)是对人类具有致病性的CMV,在人群中的感染非常普遍,但大多数呈临床不显性感染或潜伏感染.CMV感染机体后,可调动多种机制逃逸正常机体的免疫监视,建立潜伏感染[1,2],这些机制包括下调MHC-Ⅰ和MHC-Ⅱ类基因的表达,编码MHC-Ⅰ同源物抑制NK细胞活性,以及编码趋化因子(chemokines,CKs)及其受体(chemokine receptors,CKPs)同源物干扰机体正常的免疫应答等.
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疱疹病毒UL26.5基因及其编码蛋白研究进展
疱疹病毒是一类具有相同形态学且有较大囊膜的双链DNA病毒,分为α、β和γ三类疱疹病毒亚科.成熟病毒粒子近似球形,直径120nm~200nm,主要山核心(core)、衣壳(capsid)、外膜(tegument)和囊膜(envelope)4部分组成.衣壳是疱疹病毒的重要组成部分,它在细胞核内装配并包装DNA,然后转移到细胞质中被膜成熟.正常衣壳的形成必须围绕一个由UL26.5蛋白和UL26支架蛋白组成的内部支架进行组装.
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流式细胞仪检测巨细胞病毒感染
巨细胞病毒(CMV)是巨细胞包涵体病的病原体, 是疱疹病毒家族的DNA病毒, 具有典型的疱疹病毒结构.人群中CMV感染非常广泛, 60%-90%的成人已有CMV抗体.
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手足口病患儿EV71、CoxA16及EBV和CMV的检测与临床意义
手足口病(hand foot and mouth disease,HFMD)是一种全球性的急性传染病,病原体以肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)和柯萨奇病毒A组16型(coxsackievirus,CoxA 16)为主.轻者预后良好,重症多合并神经系统疾病.EBV(Epstein-Barr virus,EBV)和巨细胞病毒(cytomegalovirus,CMV)是广泛分布的病原体,均属疱疹病毒,儿童免疫功能尚不成熟,容易感染EBV或CMV病原体,也可引发神经系统疾病[1-2].研究收集了临床确诊的HFMD患儿,分别检测患儿咽拭子EV71、CoxA16以及EBV和CMV病毒核酸.
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人类免疫缺陷病毒与疱疹病毒感染具有相关性
主要探讨人类免疫缺陷病毒(HIV)与疱疹病毒感染相关性,介绍艾滋病合并疱疹病毒感染防治方法.HIV感染导致的机体免疫功能低下是疱疹病毒感染和复发的主要原因,而疱疹病毒(除HHV-7外)又作为辅助因子增加HIV传播的可能性,促进艾滋病发病并影响预后.经典抗疱疹病毒药物对艾滋病合并疱疹病毒感染有效,天然抗病毒药物将成为研究热点.
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肠道淋巴瘤临床病理、免疫表型及与EB病毒相关性的研究
目的研究肠道非霍奇金淋巴瘤的临床病理、免疫表型及与EBV感染的相关性.方法应用多种抗体标记B淋巴细胞(CD20,CD79a,CD45RA,κ,λ,CD5,CD10,bcl-2,cyclin D1)和T淋巴细胞(CD3ε,CD8,CD45RO,CD56,Gram B,TIA),同时进行细胞增殖活性的检测(Ki-67)、免疫组织化学染色(SABC法)、EBV寡核苷酸探针(EBER)原位杂交.结果60例中,免疫组化证实B细胞性淋巴瘤48例(80%),T细胞性淋巴瘤12例(20%).EBV-EBER原位杂交40例中6例阳性表达,均为T细胞性淋巴瘤,阳性细胞占肿瘤细胞的30%~80%,34例B细胞性淋巴瘤EB病毒检测阴性.结论肠道淋巴瘤以B细胞淋巴瘤多发,并以惰性的黏膜相关性边缘区B细胞性淋巴瘤多发,与EBV无相关性.肠道T细胞性淋巴瘤侵袭性较强,且与EBV相关性较高.
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用免疫组化及原位杂交方法检测鼻咽癌EBV的比较
鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)是一种在我国南方地区发病率较高的头颈部恶性肿瘤,其病理分型95%属于非角化鳞癌.EB病毒属于疱疹病毒γ亚科嗜淋巴病毒属的DNA病毒,大量研究认为它与鼻咽癌特别是非角化型鼻咽癌关系密切.我们同时用免疫组化和原位杂交方法检测10例鼻咽癌石蜡切片中的EB病毒,观察和比较两种方法的检测结果,以及鼻咽癌与EB病毒感染的关系.
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SARS病毒包涵体3种染色方法比较
包涵体是病毒感染的依据,在常规HE染色中部分病毒包涵体(如巨细胞性病毒、传染性软疣)容易找到,部分病毒包涵体不易发现(如核内包涵体、疱疹病毒包涵体等).在光镜下若找不到确切的包涵体,做特殊染色就显得更为必要.新近发生的严重急性呼吸综合征(severe acute respiratory sgndrome,SARS),由于病因学尚有争议,有学者认为是冠状病毒,也有学者认为可能是衣原体变异或新型衣原体,故寻找病毒包涵体便成为关键.我们对1例SARS感染者尸解肺组织,通过几种不同的病毒染色方法进行比较,认为Macchiavell改良亚甲蓝碱性品红染色法染色较为理想,并认为染色过程中对分化的掌握至为重要.
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杭州市余杭区健康人群水痘带状疱疹病毒抗体流行率调查
为了解现阶段水痘带状疱疹病毒(VZV)抗体在人群中的流行率,为免疫对策和规划的制定提供科学依据,2004年10月对本区的健康人群进行了血清流行病学调查,现报告如下.
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结核病患者疱疹病毒感染及免疫功能状态的研究
目的 了解肺结核患者疱疹病毒感染及免疫功能状态,探讨红细胞免疫功能与T淋巴细胞亚群可能存在的相关性.方法 肺结核患者51例,健康体检者30例,采用金标免疫斑点渗滤法检测血浆单纯疱疹病毒(HSV)、EB病毒、人巨细胞病毒(HCMV)IgM和IgG抗体;酵母菌花环法检测红细胞受体花环率及红细胞免疫复合物花环率;SAP法检测其外周血CD3+T、CD4+T、CD8+T淋巴细胞百分率.结果 肺结核患者组HSV-IgM、EBV-IgM阳性率分别为88.24%和60.78%,健康对照组分别为66.67%和30.00%,差异均有统计学意义(P<0.05);肺结核患者组HSV-IgG、EBV-IgG、HCMV-IgM、HCMV-IgG阳性率为80.39%、41.18%、9.80%和39.22%,健康对照组为70.00%、26.70%、0和30.00%,差异均无统计学意义(P>0.05);肺结核患者红细胞C3b受体花环率低于健康对照组(P<0.01),IC花环率高于健康对照组(P<0.01),CD3+、CD4+T淋巴细胞百分率和CD4+/CD8+比值均低于健康对照组(P<0.01).结论 结核病患者存在HSV和EBV的活化感染,其疱疹病毒混合感染可能影响结核病的病情;结核病患者红细胞免疫功能与T淋巴细胞免疫功能均有所下降,可能影响结核病的病情和转归.红细胞免疫功能与T淋巴细胞免疫功能存在正相关.
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Kaposi肉瘤中人疱疹病毒8的检测及其临床病理学意义
目的了解Kaposi肉瘤与人疱疹病毒8(HHV8)或Kaposi肉瘤相关病毒的关系;建立适合于临床病理诊断的原位杂交方法.方法采用地高辛标记的单链HHV8 DNA探针,辅以增强探测敏感性的信号扩增系统(tyramide signal amplification)对14例甲醛固定石蜡包埋的Kaposi肉瘤组织标本进行了HHV8原位检测,为了比较,同时也采用了聚合酶链反应(PCR)检测技术.结果用原位杂交和PCR两种方法共发现10例(71%)Kaposi肉瘤组织中存在HHV8感染.其中8例在两种技术检测中均呈阳性. HHV8阳性信号见于肿瘤梭形细胞和内皮细胞,也见于各期病变(早中期的斑片和斑块病变,晚期的结节病变),以及原发,复发和(或)转移病变.所有阴性对照在两种方法中均呈阴性.结论 Kaposi肉瘤与HHV8存在密切关系;这种地高辛标记单链DNA探针,辅以信号扩增系统的原位杂交技术检测该病毒具有用于临床病理诊断的价值.
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Castleman病的病因和发病机制研究进展
Castleman病(Castleman′s disease, CD),又称巨大淋巴结增生症或血管淋巴性滤泡组织增生,是一种以不明原因淋巴结肿大为特征的慢性淋巴组织增生性疾病.临床上,按肿大淋巴结的分布分为局灶型(local Castleman′s disease, LCD)和多中心型(multicentric Castleman′s disease, MCD).病理学上,按组织学特征分为透明血管型(hyaline-vascular type, HV)、浆细胞型(plasma cell type, PC)和兼有二者特征的混合型.HV型约占80%~90%,常无症状,临床多呈局灶型;PC型约占10%~20%,部分伴有全身症状,临床多为多中心型.该病病因和发病机制不清,诊治困难.近年的病因和发病机制研究多集中于人类疱疹病毒8型(human herpesvirus 8, HHV8)感染、抗原呈递细胞功能异常及细胞因子调节异常等方面[1-3],现综述如下.
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EB病毒阳性T/NK细胞淋巴组织增殖性疾病的研究进展
Epstein-Barr病毒(EBV)属于疱疹病毒γ亚科,1964年由Epstein和Barr首次在Burkitt淋巴瘤细胞株中发现[1].EBV通过唾液传播,正常人群中感染率在90%以上,感染后终生携带EBV.EBV与多种疾病有关,有的仅有轻微症状,如同普通感冒;有的出现明显的全身性症状并呈自限性临床过程,如传染性单核细胞增多症(IM)[2];有的表现为长期反复发作的临床过程,并可进展为淋巴瘤,如慢性活动性EBV感染(CAEBV)[3];有的与肿瘤有明确关系,如Burkitt淋巴瘤、鼻型NK/T细胞淋巴瘤和霍奇金淋巴瘤等[1].
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单纯疱疹病毒1型对体外培养鸡胚端脑神经元活性的影响
目的观察单纯疱疹病毒1型(HSV-1)感染对体外原代培养鸡胚端脑神经元活性的影响.方法在Vero细胞(非洲绿猴肾细胞)上接种HSV-1,并利用空斑实验测定病毒滴度;以106 PFU/ml病毒吸附感染原代培养鸡胚端脑神经元,用倒置显微镜、透射电镜、MTT细胞活性分析、DNA琼脂糖凝胶电泳,观察HSV-1感染对细胞活性的影响.结果 HSV-1感染神经元24,48,72 h与同时正常细胞比较,活性分别下降25%,56%,97%.形态学及DNA电泳显示神经元主要以坏死的形式死亡.结论 HSV-1感染导致神经元活性下降.
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单纯疱疹病毒Ⅱ型小片段型特异基因的表达及其意义
目的为我国单纯疱疹病毒Ⅱ型的基因工程疫苗提供早期实验研究资料.方法采取PCR和蛋白质原核细胞表达方法.结果自我国病毒储备株中成功地克隆出了单纯疱疹病毒Ⅱ型小片段特异基因,并获得高效表达.采用该抗原包被,自生殖系统感染者恢复期血清中均能查到针对该重组抗原的IgG抗体.结论单纯疱疹病毒Ⅱ型小片段型特异基因的成功表达,为我国单纯疱疹病毒Ⅱ型感染者的特异性诊断和单纯疱疹病毒Ⅱ型疫苗的研究打下了基础.
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单纯疱疹病毒Ⅰ和Ⅱ型共同抗原gD在大肠埃希菌中的重组表达
目的克隆人单纯疱疹病毒Ⅰ、Ⅱ(HSV-Ⅰ、Ⅱ)型共同性抗原gD基因,构建重组表达载体pMAL-c2/gD,诱导融合蛋白MBP-gD的表达.方法提取病毒DNA,PCR扩增出gD基因,克隆于原核表达载体pMAL-c2并转化大肠埃希菌DH5α.PCR、双酶切及测序证实插入的gD基因序列正确后,IPTG诱导表达融合蛋白MBP-gD,并进行免疫学鉴定.结果构建的重组表达质粒pMAL-c2/gD在大肠埃希菌中能高效表达.经SDS-PAGE分析,表达产物约占菌体总蛋白35.5%,其中39%以可溶蛋白形式存在于胞质中,61%以包涵体形式存在.结论构建了pMAL-c\+2/gD表达质粒,Western blot证实,HSV-Ⅰ gD单克隆抗体DL6可特异识别表达的gD蛋白,该蛋白具有天然gD的抗原性.
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一组可提供AAV载体复制和包装功能的重组HSV-1
目的构建一组具有AAV载体复制和包装功能的重组HSV-1,从中选出功能较强者用于重组AAV的生产.方法采用一套含有HSV-1基因组的粘粒系统构建重组HSV-1.首先将2型腺病毒伴随病毒(AAV-2)rep基因的起始密码子ATG人工定点突变成ACG;然后将自身启动子控制下的AAV-2 rep(起始密码子突变或未突变)和cap基因分别插入粘粒上HSV-1的UL2基因或UL44基因,构建成重组粘粒cos6-rmc/ΔUL2、cos56-rc/ΔUL44 cos56-rmc/ΔUL44;将重组粘粒上的HSV-1片段分别与HSV-1的其余片段进行同源重组,得到3株重组HSV-1.连同过去报道的一株重组HSV-1一起,分别命名为HSV1-rc/ΔUL2、HSV1-rmc/ΔUL2、HSV1-rc/ΔUL44、HSV1-rmc/ΔUL44.结果 4 株重组HSV-1经PCR鉴定均含有rep基因,分别感染携带绿色荧光蛋白(GFP)基因的AAV载体细胞株后均能产生重组AAV.重组AAV可在BHK-21细胞中表达GFP.HSV1-rc/ΔUL2和HSV1-rmc/ΔUL2对AAV载体的包装能力明显强于HSV1-rc/ΔUL44和HSV1-rmc/ΔUL44.结论构建的4 株重组HSV-1均具有复制和包装重组AAV的能力.其中HSV1-rc/ΔUL2和HSV1-rmc/ΔUL2功能较强,有望用于重组AAV的大规模生产.
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免疫治疗EBV相关肿瘤的研究进展
Epstein-Barr病毒(EBV)属于疱疹病毒科γ亚科,具有噬B淋巴细胞的特性,能够在B淋巴细胞中建立起潜伏感染,刺激细胞的增生和转化.人群中有大于90%的感染率.