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肿瘤分子靶向药物耐药性研究进展
目的：综述肿瘤分子靶向药物的作用靶点、耐药机制和逆转措施。方法：应用Pubmed和CNKI期刊全文数据库检索系统，以“肿瘤”、“耐药性”、“靶向药物”和“逆转耐药”为关键词进行检索。纳入标准：①靶向药物的分子靶点；②靶向耐药的机制；③逆转靶向药物的耐药性，共筛选出相关文献32篇。结果：靶向药物的分子靶点以细胞膜受体和细胞内激酶为主，其耐药机制主要包括细胞信号转导、基因突变、肿瘤干细胞、肿瘤微环境、肿瘤细胞代谢和上皮-间质转化等。个体化用药、联合用药、改善肿瘤微环境以及研发新药等措施有望逆转靶向耐药。结论：靶向药物的分子靶点多样，耐药机制复杂，应该积极采取措施加以预防和逆转。
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地昔帕明逆转人脑胶质瘤耐药细胞U251/TR对替莫唑胺的耐药作用
目的探讨抗抑郁药地昔帕明（DMI）对人脑胶质瘤耐药细胞（U251/TR）对替莫唑胺（TMZ）耐药作用的影响及其机制。方法 DMI 20~80μmol·L-1或TMZ 0.5~10 mmol·L-1处理U251/TR细胞24 h，用CCK-8法测定DMI和TMZ对U251/TR细胞增殖抑制的半数有效量（IC50）。CCK-8检测TMZ（1和2 mmol·L-1）和DMI （20，30和40μmol·L-1）联合或单独处理U251/TR细胞24 h对细胞增殖抑制的影响，用金正均法计算Q值来评价两种药物的协同效应。TMZ（1 mmol· L-1）和DMI（30μmol·L-1）联合或单独处理U251/TR细胞24 h，以Hoechst33258染色观察细胞核形态，发光法检测胱天蛋白酶3活性；实时定量PCR和Western蛋白印迹法检测C/EBP同源蛋白（CHOP）的表达；小干扰RNA（siRNA）沉默CHOP的表达后，观察TMZ （1 mmol · L-1）和 DMI（30μmol · L-1）联合给药对U251/TR增殖抑制的影响。结果 DMI或TMZ单用对U251/TR细胞增殖均有明显的抑制作用，并且呈浓度依赖性（r 2=0.983，0.982，P<0.05），IC50分别为（33.6±0.5）μmol· L-1和（2.5±0.6）mmol· L-1。TMZ（1和2 mmol·L-1）和DMI（20，30和40μmol·L-1）联合给药能24 h对U251/TR细胞的增殖抑制率明显强于单独给药，以金正均法计算联合给药的Q值均>1.15，证实TMZ和DMI联合给药具有协同效应。同时，DMI 30μmol·L-1和TMZ 1 mmol·L-1联和应用可诱导U251/TR细胞凋亡，主要表现为细胞核固缩、染色质沉积和胱天蛋白酶3的激活。这种凋亡诱导作用明显好于单独给药的效果（P<0.05）。DMI 和TMZ联合应用能显著激活细胞内质网应激标志蛋白CHOP的表达（P<0.05）。以siRNA沉默CHOP表达后，DMI逆转TMZ耐药的作用明显减弱，联合给药组细胞生存率由51.8%升至62.2%（P<0.05）。结论 DMI能逆转人脑胶质瘤细胞U251/TR对TMZ的耐药性，其机制可能与激活CHOP表达有关。
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羽苔素E体外抗真菌活性及逆转氟康唑耐药的初步研究
目的 评价白色念珠茵对羽苔素E的体外敏感性,并观察羽苔素E和氟康唑合用对白念敏感株和耐药株的联合抗真菌作用.方法 采用微量稀释法,测定15株白念敏感株和4株白念耐药株对羽苔素E的敏感性,以低抑菌浓度(MIC)表示.同时观察羽苔素E与氟康唑合用对白念敏感株和耐药株的联合抗真菌作用.结果 羽苔素E对敏感株的MIC值为16 mg·L-1,对耐药株的MIC值与敏感株基本一致.羽苔素E与氟康唑合用,对敏感株和耐药株分别表现出相加和协同的抗真菌活性,并明显减少氟康唑的用量.结论 羽苔素E具有中等的抗真菌活性,与氟康唑合用对耐药菌株表现出协同的抗真菌作用,提示羽苔素E有较好的抗真菌作用并有逆转氟康唑耐药的潜力.
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GMBP42在胃癌多药耐药中的逆转作用及机制研究
目的 探讨GMBP42在胃癌多药耐药中的逆转作用及其分子机制.方法 通过MTT实验检测GMBP42对胃癌多药耐药细胞SGC7901/VCR增殖的影响.体外药物敏感实验测定GMBP42致耐药细胞对化疗药物半数抑制浓度值(IC50)的影响.流式细胞仪检测GMBP42对阿霉素引起耐药细胞凋亡的影响.蛋白免疫印迹法(Western blot)检测GMBP42作用耐药细胞不同时间后MDR1(P-gp)、Bcl-2和Bax蛋白的表达水平.结果 MTT实验显示,GMBP42本身不影响耐药细胞的增殖.体外药物敏感实验显示:GMBP42组与对照组相比,SGC7901/VCR细胞对化疗药物IC50值均降低(P＜0.05).流式细胞检测表明:在相同剂量阿霉素作用下,GMBP42组中SGC7901/VCR凋亡率显著高于对照组(P＜ 0.05).Western blot结果显示:GMBP42组与对照组相比,与SGC7901/VCR细胞作用12h后MDR1 (P-gp)和Bel-2蛋白的表达水平明显降低,Bax蛋白的表达水平明显升高.结论 GMBP42对耐药细胞的增殖本身无影响,可降低部分化疗药物IC50值,促进细胞凋亡.此作用可能与改变凋亡相关蛋白,上调Bax和下调Bel-2的表达,降低耐药相关膜分子MDR1 (P-gp)的表达有关.
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逆转ATP结合盒转运蛋白参与耐药的研究进展
ATP结合盒(ABC)转运蛋白超家族利用水解ATP的能量将药物泵出细胞外,其功能和表达的改变参与了几乎所有肿瘤多药耐药的形成.研究通过作用于跨膜转运蛋白而逆转肿瘤多药耐药已经成为目前的热点,虽然一系列临床实验的失败使逆转耐药的研究遇到了挫折,但是研究仍在推进.在此基础上,本文主要论述了以ABC转运蛋白为代表的跨膜转运蛋白在肿瘤多药耐药及逆转耐药方面的研究进展,并展望未来研究的方向.
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肿瘤及肿瘤基质细胞释放的外泌体对肿瘤耐药产生的影响
恶性肿瘤疾病对人类生命健康的影响程度日益升高,不仅早期筛查诊断难度较高,并且治疗预后效果往往较差.目前,国内外临床均将化疗作为患者的主要治疗手段,但治疗过程中不断出现的药物耐药问题对患者及医务人员均造成了严重困扰.国外研究已对肿瘤耐药与外泌体进行了相关研究,认为该物质对耐药传递形成了重要影响,其外泌体中可携带耐药相关分子不断在肿瘤细胞中进行传递与作用,并且能够外排相关介导药物,通过对其实施处理可为逆转耐药起到积极作用.
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耐药性卵巢癌的治疗
卵巢癌目前仍然是严重威胁女性生命的恶性肿瘤之一.因之难以早期发现,超过70%的患者诊断时已属于晚期.其规范治疗手段为肿瘤细胞减灭术后辅以多疗程联合化疗.多数(60%～75%)患者对初期治疗有反应而使其近期生存显著提高.但绝大多数患者终将复发并对化疗药物失去反应,即化疗耐药,这是终影响卵巢癌患者长期生存的重要原因.因而,研究肿瘤产生耐药的机制,并在临床上预防耐药、对抗耐药并尝试逆转耐药就成为当前卵巢癌治疗中的热点和难题,成为提高卵巢癌的治疗率、改善卵巢癌患者生存的重要目标之一.
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靶向Twist基因逆转卵巢癌耐药细胞化疗敏感性的研究
目的 探讨载体表达的小干扰RNA(siRNA)影响卵巢癌耐药细胞株Twist基因的表达、促进凋亡并逆转其阿霉素耐药的可行性.方法 体外构建Twist小发卡状RNA(shRNA)的表达质粒,脂质体法介导将其转染入SKOV3/ADM细胞.采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测Twist mRNA的表达;使用免疫细胞化学法(ICC)检测Twist蛋白的表达;使用四甲基偶氮唑蓝法(MTT)测定各组细胞对阿霉素的半数抑制浓度(IC50);流式细胞术检测其对卵巢癌细胞凋亡的影响.结果 Twist shRNA转染组细胞Twist mRNA 的表达与其他两组相比明显减弱,Twist蛋白表达明显下调,差异均有统计学意义(P<0.01);阿霉素敏感性比正常对照组提高了约2.5倍;流式细胞仪显示阿霉素作用24 h后,特异性转染组细胞周期分布发生明显改变,G0/G1期细胞比例增多,而S期细胞比例减少,凋亡率显著升高,差异有统计学意义(P<0.05).结论 针对TWIST合成的siRNA能够有效地抑制TWIST mRNA和蛋白的表达,促进卵巢癌耐药细胞凋亡并能恢复其对阿霉素的敏感性.应用RNAi技术,能够逆转卵巢癌细胞对化疗药物的耐药性.
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甲基莲心碱、红霉素逆转K562/AO2细胞多药耐药及其机制的研究
多药耐药(multidrug resistance,MDR)是当今肿瘤治疗的一大难点,中药复方拮新康有逆转耐药,增加化疗效果的作用[1],其有效成分甲基莲心碱(Nef)可增加肿瘤细胞内抗癌药物浓度逆转MDR [2].大环内酯类抗生素红霉素(EM)体外有逆转MDR的作用[3].为探讨Nef、EM逆转白血病细胞MDR的机制,我们以多药耐药细胞株K562/A02为研究对象,分别采用MTT法,免疫组化SABC法,RT-PCR法研究Nef、EM对K562/A02细胞增殖及Pgp/mdrl基因表达的影响.
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K562/A02耐药细胞NF-κB活性测定及葛根素部分逆转耐药效应的初步研究
白血病细胞的多药耐药(MDR)的产生是导致化疗失败的主要原因.目前发现MDR的产生机制是多因素的,且有不同的耐药表型.核转录因子Kappa B(NF-κB)在细胞增殖和凋亡中起关键调控作用.为明确NF-κB是否与细胞MDR产生有关及葛根素是否通过抑制NF-κB活性而逆转耐药,我们观察了慢性粒细胞白血病急变细胞株K562及其耐药细胞株K562/A02的NF-κB活性,P糖蛋白(P-gp)、耐药相关蛋白(MRP)表达情况,以及葛根素干预前后NF-κB活性,P-gp、MRP表达的变化,为揭示白血病细胞耐药机制,寻求有效的逆转耐药药物提供实验依据.
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晚期胃癌应用阿帕替尼病例报告1例
患者男,70岁.2013年6月13日于北京协和医院行全胃切除胃癌根治术(D2)与食管空肠Roux-en-Y吻合术.术后病理示:胃贲门中低分化腺癌,累及胃壁全层,紧邻浆膜面,累及食管,距离食管断端近距离<0.4 cm,淋巴结转移癌(第6组0/5、胃小弯侧9/18、胃大弯侧0/9),免疫组织化学检测HER-2 (+).临床诊断:胃中低分化腺癌(pT3N3M0,ⅢB).术后先后给予紫杉醇联合替吉奥方案3个疗程、单药希罗达方案2个疗程,因不良反应不耐受,停止治疗并观察.2015年3月CT示:胃癌术后局部模糊不均,强化软组织密度影较前明显,腹膜后淋巴结较前增大.胃镜病理示:(吻合口)中低分化腺癌.临床评价疾病进展(progressive disease,PD),肿瘤无进展生存期(progression free survival,PFS)为20个月.
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表观遗传学修饰与肿瘤耐药关系的研究进展
本文就DNA甲基化和组蛋白乙酰化与恶性肿瘤耐药的关系及其在逆转耐药中的作用方面的研究进展述之如下.1 DNA甲基化和组蛋白乙酰化1.1 DNA甲基化DNA甲基化是指在DNA复制以后,在DNA甲基化酶的作用下,将S-腺苷甲硫氨酸分子上的甲基转移到DNA分子中胞胞嘧啶残基的第5位碳原子上,随着甲基向DNA分子的引入,改变了DNA分子的构象,直接或通过序列特异性甲基化蛋白、甲基化结合蛋白间接影响转录因子与基因调控区的结合.
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不同温度热疗对人胃癌耐药细胞株SGC7901/DDP的影响
目的 观察热疗对人胃癌耐药细胞株SGC7901/DDP的影响,为临床上应用热疗及热化疗联合治疗耐药胃癌提供理论依据.方法 采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测不同温度热疗、热化疗对SGC7901/DDP细胞的抑制作用;流式细胞仪及反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)分别检测热疗、热化疗对细胞GST-π蛋白及mRNA表达的影响.结果 不同温度热疗处理SGC7901/DDP细胞后对顺铂的敏感性均有提高,以43 ℃时佳;43 ℃热疗2 h处理前后此细胞的IC50值分别为(11.7±0.6)μg/mL及(7.2±0.7)μg/mL.耐药逆转倍数RF为1.63倍;热疗后尤其是热化疗后SGC7901/DDP细胞GST-π蛋白及mRNA表达明显下降(P<0.01).结论 热疗能提高人胃癌耐药细胞株SGC7901/DDP对顺铂的敏感性,热化疗可能更大限度地抑制SGC7901/DDP细胞增殖;热疗部分逆转其耐药机制可能与下调GST-π蛋白及mRNA表达有关.
关键词： 胃肿瘤 热疗 SGC7901/DDP 逆转耐药 GST-π -
核糖核苷酸还原酶小亚基M2在肿瘤中表达及意义的研究进展
核糖核苷酸还原酶(Ribonucleotide Reductase.RR)在DNA合成、修复及细胞增殖中起关键作用,近来被认为是癌症治疗的重要靶点.RR包含3个亚单位,分别是大亚基RRM1、小亚基RRM2和小亚基p53R2.RRM2亚基不仅和DNA的合成密切相关,对恶性肿瘤生物学行为、转移潜能和肿瘤耐药的产生都具有影响.在绒癌、胰腺癌、膀胱癌、胃癌、直肠癌、乳腺癌等多种人体癌组织中发现RRM2的表达水平有异常升高的情况,抑制RRM2的高表达,可以降低RR酶的活性,抑制癌细胞的生长,增加肿瘤细胞凋亡,抑制肿瘤转移和逆转耐药.针对RRM2在肿瘤中高表达的抗肿瘤药物主要有:3-AP、吉西他滨、RRM2的小干扰RNA、RRM2反义寡核苷酸及RRM2的反义cDNA,通过对RRM2的深入研究将有助于在基因水平及分子水平上揭示肿瘤的发生、发展、浸润和转移的机制,为肿瘤的治疗提供一个新的策略.
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顺铂联合热疗对人胃癌耐药细胞增殖及耐药相关基因Survivin表达的影响
目的 通过体外实验观察顺铂联合热疗对人胃癌耐药细胞增殖及多药耐药基因Survivin表达的影响.方法 选取人胃癌SGC7901/DDP细胞系进行体外培养.应用流式细胞术(FCM)检测对照组、化疗组、热疗组及热化疗组SGC7901/DDP细胞增殖的情况,并用FCM法半定量检测各组细胞中Survivin蛋白表达的变化；采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法半定量检测4组SGC7901/DDP细胞中Survivin mRNA表达的变化.结果 热疗及顺铂联合热疗都可以降低人胃癌耐药细胞SGC7901/DDP的增殖水平,并且顺铂联合热疗作用效果明显.单纯热疗及顺铂联合热疗作用后,SGC7901/DDP细胞中Survivin蛋白及mRNA的表达明显下降,并且并顺铂联合热疗作用后下降明显.结论 热疗、顺铂联合热疗能够抑制人胃癌耐药细胞株SGC7901/DDP的增殖,并可诱导该细胞凋亡,抑制细胞周期诱导细胞凋亡是其抗肿瘤作用机制之一；下调Survivin蛋白及mR-NA的表达可能是热疗逆转人胃癌耐药细胞株SGC7901/DDP多药耐药性的机制之一.
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中药抗菌成分及其抗菌机制的研究进展
近年来,随着临床中遇到的耐药菌株不断增加,加之抗生素的不合理使用,中药抗菌药物成为了医学领域研究的热点.本文通过查阅分析国内外有关中药抗菌研究的文献,从中药抗菌活性成分、中药抗菌机制和中药逆转细菌耐药机制三方面进行综述,为进一步研究中药抗菌作用提供理论依据.
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DC-CIK对K562/A多药耐药基因mdr1表达的影响
目的:体外观察树突状细胞(dendritic cell,DC)联合细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine inducedkiller,CIK)对K562/A细胞株多药耐药基因mdr1表达的影响.方法:采集健康人的外周血,分离出单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC),在体外加入多种细胞因子经诱导生成DC及CIK细胞,以流式细胞仪检测其表面标志,将DC细胞内加入K562/A细胞裂解物致敏后,再与CIK细胞混合培养48小时.将致敏后的DC-CIK细胞与K562/A及K562分组培养后以荧光定量PCR检测其mdr1基因表达的情况,PBMC作为对照组.结果:RT-PCR中可见K562/A+DC-CIK组中mdr1 mRNA表达较K562/A明显降低,经荧光定量PCR观察到K562/A内mdr1 mRNA表达为K562的10.27倍、K562/A/PBMC略低于未处理的K562/A (P＞0.05),K562/A/DC-CIK细胞中mdr1 mRNA含量较K562/A、K562/A/PBMC少(P＜0.05).DC-CIK细胞与细胞株混合培养后,mdr1基因表达较混合培养前明显降低.结论:实验数据显示DC-CIK可使耐药细胞株内mdr1基因表达下调.但K562与DC-CIK混合培养后该基因降低不明显,提示该基因在细胞中存在着基础表达,意义在于维持细胞内稳态.目前针对逆转白血病耐药的研究较少,需要多进行相关研究以拓宽细胞免疫治疗在逆转耐药领域的应用.DC-CIK是具有发展潜力的抗肿瘤方法.本实验将为下一阶段研究逆转耐药的机制提供依据,DC-CIK细胞免疫疗法有望成为逆转肿瘤耐药的新方法.
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抗肿瘤多药耐药纳米粒的制备及其对MCF-7/ADR细胞的体外评价
目的:肿瘤的多药耐药现象会显著降低肿瘤细胞内药物浓度,本研究通过制备抗肿瘤多药耐药的靶向给药系统来逆转肿瘤的耐药性以提升细胞对药物的敏感性,从而降低该现象对癌症治疗的阻碍.方法:本文使用乳化溶剂挥发法制备以含姜黄素两亲性嵌段共聚物载体、以紫杉醇和磁性粒为核心的抗肿瘤多药耐药纳米粒,使用透射电镜和动态粒径散射仪等对纳米粒进行表征和磁响应性测试后,使用MTT法测定纳米粒对肿瘤耐药细胞MCF-7/ADR的抑制率以探究给药系统的耐药逆转性能.结果:制备的抗肿瘤多耐药纳米粒粒径为105 nm左右,磁响应性良好.所制得载紫杉醇纳米粒包封率为74.74％,载药率为12.40％.纳米粒可以通过磁场和生物素受体介导作用促进肿瘤细胞对粒子的内化,以增加抗癌药物的蓄积.与游离紫杉醇相比,逆转细胞耐药指数达8.5.结论:纳米系统在维持自身稳定性同时,能够凭借协同作用和靶向作用较大程度提升药物对耐药肿瘤细胞的杀伤效果.
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中药逆转乳腺癌多药耐药的研究概况及展望
综述近年中药逆转乳腺癌多药耐药的研究概况.目前中药逆转乳腺癌多药耐药研究较多的中药单体及提取物有姜黄、人参、苦参等,中药复方有复方紫龙金、逆转胶囊、疏肝益肾方等;复方研究少、体内研究少、机制探讨不够深入是目前中药逆转乳腺癌多药耐药面临的主要问题.
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CYP3A5基因反义寡核苷酸转染K562/A02细胞逆转耐药的研究
目的:探讨针对细胞色素P450 3A亚家族多肽5(CYP3A5)耐药机制进行反义寡核苷酸逆转耐药.方法:CYP3A5基因反义寡核苷酸转染K562/A02细胞后,RT-PCR方法检测反义寡核苷酸对CYP3A5基因转录的特异性阻断,MTT法测定不同处理组柔红霉素IC50值.结果:针对CYP3A5基因的反义寡核苷酸转染K562/A02细胞48 h后明显抑制CYP3A5基因的转录,而正义、错义寡核苷酸处理组则无明显改变.转染针对CYP3A5基因的反义寡核苷酸,可使柔红霉素对K562/A02细胞的IC50值由(7.728±3.625)mg/L降至(2.494±1.674)mg/L,增敏3.10倍,差异有显著性(P＜0.05),而正义、错义寡核苷酸处理组IC50值与对照组相比则无明显差异.结论:针对CYP3A5基因的反义寡核苷酸可显著逆转K562/A02细胞的耐药性.
关键词： CYP3A5基因 反义寡核苷酸 K562/A02细胞 转染 逆转耐药
