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去甲斑蝥素联合ABT-737对宫颈癌细胞增殖及凋亡的影响
目的：研究去甲斑蝥素（norcantharidin，NCTD）联合ABT-737对宫颈癌细胞增殖及凋亡的影响。方法：采用四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测NCTD单药或联合ABT-737对宫颈癌细胞株HeLa、SiHa增殖的影响；采用流式细胞术分析NCTD联合ABT-737对宫颈癌细胞凋亡的影响。结果：NCTD单药能够显著抑制宫颈癌细胞株HeLa、SiHa的增殖，抑制作用呈剂量依赖性。 NCTD与ABT-737联用后抑制作用明显增强。1μmol/L ABT、60μmol/L NCTD及两药联用诱导HeLa细胞的凋亡率分别为（31.65±7.75）%、（40.34±14.52）%和（63.03±10.90）%，诱导SiHa细胞的凋亡率分别为（9.76±0.04）%、（22.04±3.03）%和（58.36±2.31）%。 NCTD、ABT两药联合的促凋亡作用比单药显著增强（P＜0.05）。结论：NCTD单药在体外能够明显抑制宫颈癌细胞HeLa、SiHa的增殖，与ABT-737联用后抑制增殖和促凋亡作用更加显著。
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育发产品中斑蝥素和氮芥及米诺地尔的液相色谱-联质谱测定法
目的 建立了育发产品中斑蝥素、氮芥和米诺地尔的液相色谱-串联质谱(LC-MS-MS)测定方法.方法 样品经直接稀释1000倍,以95％甲醇(含0.2％氨水)-5％乙腈为流动相进行等度洗脱,选用Waters symmetry C18(4.6 mm×250 mm,5 μm)色谱柱,正离子模式下质谱多反应监测(MRM)模式检测.结果 斑蝥素、氮芥和米诺地尔分别在5.00～500、5.00～1000和0.100～50.0 ng/ml的范围内,所得的回归方程均呈较好的线性关系(r≥0.999),检出限分别为2.0、3.4、0.04μg/g定量下限分别为6.4、11.0、0.10μg/g,回收率在94.5％～104.7％之间,RSD＜9％.结论 该方法灵敏度高,选择性强,适用于育发产品中斑蝥素、氮芥和米诺地尔的测定.
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液相串联质谱同时测定艾迪注射液中9种成分
目的 建立LC-MS法,同时测定艾迪注射液中斑蝥素,人参皂苷Rg1、Re、Rb1,异秦皮啶,紫丁香苷,芒柄花素,黄芪甲苷及绿原酸9种成分.方法 使用Waters Quattro Micro液质联用仪,色谱柱为Agilent Zorbax SB C18(100 mm×3.0 mm,3.5 μm)；流动相为乙腈-0.1％甲酸,梯度洗脱；柱温23℃；体积流量0.22 mL/min.结果 4个批次艾迪注射液中各成分平均质量浓度分别为(1.88±0.03)、(0.73±0.12)、(0.66±0.28)、(3.13±0.66)、(7.77±0.56)、(21.71±0.64)、(0.46±0.07)、(17.44±1.00)、(108.76±5.86) μg/mL.结论 建立的LC-MS方法,操作简单、快速、灵敏度高,可用于艾迪注射液的质量控制.
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斑蝥素对肺癌A549细胞周期阻滞作用机制的观察
细胞周期调控是当前肿瘤研究的热点[1].几乎所有癌基因、抑癌基因的生物学效应,终都归结到细胞周期的机制.癌基因、抑癌基因的变异,导致细胞周期失控、无限增殖,形成克隆群体-肿瘤[2].细胞周期的基础研究为探讨肿瘤发病机制,肿瘤靶向治疗开辟了新的途径.斑蝥素(Cantharidin,CTD)医治疾病已有2000多年的历史[3],近年来,对斑蝥素的研究主要集中于对其抗癌机制的探讨和新剂型的开发、研制衍生物[4].我们对斑蝥素作用于A549细胞后,细胞周期的改变与细胞周期相关调控因子的表达改变进行观察,探讨斑蝥素对A549细胞周期调控作用的分子机制.
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去甲斑蝥素体外肝细胞代谢产物的HPLC-MS分析
目的：建立去甲斑蝥素体外肝细胞代谢产物的HPLC-MS分析方法。方法去甲斑蝥素进行体外肝细胞代谢，透析得到代谢产物，并用HPLC-MS对产物进行鉴定，再通过半制备HPLC色谱仪分离纯化，后根据理化性质和波谱数据鉴定代谢物的结构。结果共分离得到7个化合物，对其中量较高的2个化合物进行结构鉴定，分别为去甲斑蝥素与谷氨酸结合物（1）、去甲斑蝥酸钠（2）。结论体外细胞代谢法由于反应条件相对单纯，易于控制，适合于制备去甲斑蝥素体外肝细胞代谢产物。
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去甲斑蝥素诱导胆管癌细胞凋亡及对bax、bcl-2、半胱天冬酶3和细胞色素C凋亡相关因子影响
目的 研究去甲斑蝥素对人胆管癌细胞株RBE细胞抗肿瘤作用及bax、bcl-2、活化半胱天冬酶3和细胞色素C转录及表达的影响,探讨其作用机制.方法 体外培养胆管癌RBE细胞,在不同浓度去甲斑蝥素中干预一定的时间,5-二苯基四氮唑溴盐[3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide,MTT]比色法检测去甲斑蝥素对胆管癌RBE细胞抑制作用,膜联蛋白/碘化丙啶(annexinV/PI)双染检测凋亡率,免疫印迹及实时定量聚合酶链反应检测bax、bcl-2、活化半胱天冬酶3、细胞色素C蛋白及mRNA表达的变化.结果 胆管癌RBE细胞经不同浓度的去甲斑蝥素作用后增殖明显受到抑制.AnnexinV-FITC/PI检测显示去甲斑蝥素能诱导RBE细胞凋亡,与对照组相比有更高的凋亡率,差异有统计学意义(P＜0.05).免疫印迹及实时定量聚合酶链反应检测显示bax、活化半胱天冬酶3和胞浆内细胞色素C转录和表达升高,bcl-2转录水平降低.结论 去甲斑蝥素对胆管癌RBE细胞的增殖具有明显的抑制作用,其可能通过增加bax、抑制bcl-2的转录和表达,释放细胞色素C激活半胱天冬酶3诱导RBE细胞凋亡.
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斑蝥酸钠对人食管癌细胞作用的体外实验研究
目的 观察不同浓度斑蝥酸钠对食管癌细胞Eca109的影响.方法 将斑蝥酸钠作用于经体外培养的人食管癌Eca109细胞,采用四氮唑蓝比色法进行体外细胞杀伤实验,测定斑蝥酸钠对Eca109细胞生长的抑制率与剂量效应、时间效应的关系;采用流式细胞术测定斑蝥酸钠处理后的Eca109细胞的细胞周期及凋亡率.结果 不同浓度斑蝥酸钠对Eca109细胞的生长有抑制作用,且随药物浓度升高其抑制作用增强,呈剂量效应关系.细胞周期分析提示斑蝥酸钠可将Eca109细胞阻滞于G2+M期,且与浓度相关.在G2+M期阻断作用过后,流式细胞仪可检测到凋亡峰.结论 斑蝥酸钠对人食管癌细胞系Eca109细胞的生长有明显的抑制作用,使细胞分裂阻滞于G2+M期,并诱导肿瘤细胞凋亡.
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斑蝥酸钠维生素B6注射液的应用新进展
恶性肿瘤已经成为当前威胁人类生命严重的常见病之一，其发病率和死亡率都呈逐年上升之势。斑蝥为芫箐科昆虫南方大斑蝥或黄黑小斑蝥的干燥蝥素，斑蝥素经过氢氧化钠水解生成斑蝥酸钠[1-3]。Wang等[4]报道斑蝥酸钠等抗癌作用可能与降低肿瘤细胞CAMP磷酸二酯活性提高癌细胞内CAMP水平有关。斑蝥酸钠维生素B6注射液以其较高的疗效、较低的毒副作用日益受到人们重视。现将其近年在非小细胞肺癌、肝癌、胃癌的研究进展综述如下。
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斑蝥中斑蝥素的提取工艺研究考察
目的:观察斑蝥中斑蝥素的佳提取工艺,为临床应用剂型研究提供科学数据.方法:采用L9(3)4正交试验设计考察溶剂浓度、乙醇溶剂用量、回流提取次数、回流提取时间,通过HPLC测定斑蝥素的含量,浸膏得率和评价指标等综合评价确定佳提取工艺.结果:方差分析可知,用75％的乙醇回流提取3次,每次加入10倍量,每次1.5h为提取斑蝥中斑蝥素的佳工艺,其中回流次数是主要影响因素.结论:提取方法简单可行,提取率满意.
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三种抗肿瘤中药有效成分对人脐静脉内皮细胞生长的影响
目的 探讨蜂毒素、去甲斑蝥素、蟾毒灵3种抗肿瘤中药提取物的抗血管生成作用,并检测其量效关系,比较其抑制血管生成所需浓度与抑瘤浓度的关系.方法 采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定3种药物在不同浓度、时间对人肝癌细胞ECV304生长的抑制作用,计算半数抑制浓度(IC50),观察量效、时效关系.结果 3种药物对ECV304细胞的生长有不同程度抑制作用(P＜0.05或P＜0.01),且呈浓度和时间的依赖性.蜂毒素在24、48和72 h抑制ECV304细胞的IC50分别为7.64、4.25和2.64 μg/ml,去甲斑蝥素为271.52、108.83和80.76 μg/ml,蟾毒灵为1.104、0.355和0.0905 μg/ml.结论 蜂毒素、去甲斑蝥素、蟾毒灵有明确的抑制血管内皮细胞增殖、抗血管生成的作用.
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毛细管气相色谱法测定参芪抑癌冻干粉中斑蝥素的含量
参芪抑癌冻干粉系由红参、黄芪、斑蝥等中药配制而成,临床用于肿瘤的治疗,中方斑蝥主含斑蝥素,为了控制本品的质量,有必要对方中斑蝥素进行含量测定.斑蝥素具有挥发性,但无C=C键和共轭结构,无强的生色团,故一般难以用高效液相色谱(HPLC)法测定,含量测定方法主要采用毛细管气相色谱(GC)法[1-5].为了合理安全地使用斑蝥的剂量,本研究对样品中斑蝥素的含量测定方法进行了研究,并制定了GC法测定斑蝥素含量的方法.结果平均回收率为98.70%,相对标准偏差(RSD)=1.5%,n=5,三批样品斑蝥素含量每瓶0.175～0.196 mg.该方法具有简便、快速、灵敏、专属性强的特点,是控制本品质量的有效方法.
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肝宁胶囊的质量标准研究
目的：对肝宁胶囊质量标准进行研究。方法：采用薄层色谱法对处方中的紫草进行定性鉴别；采用气相色谱法对处方中的斑蝥素进行含量测定。结果：在薄层色谱中可检出紫草的特征斑点；斑蝥素在0.0138μg～0.1242μg（r=0.9999）范围内线性关系良好，回收率为98.466%（RSD=1.92%，n=5）。结论：本方法简便可行、重复性好，能有效控制该制剂的质量。
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HPLC法测定碱制斑蝥中斑蝥素的含量
目的:建立高效液相法测定碱制斑蝥中斑蝥素含量的方法.方法:采用Agilent HC-C18 ODS色谱柱(4.6mm×250mm);流动相:甲醇-水(30:70);流速1.0mL/min;检测波长230nm,柱温:35℃.结果:碱制斑蝥中斑蝥素含量2%左右,远高于<中国药典>采用气相法测定斑蝥中斑螯素含量不得少于0.35%的规定.结论:本法简便、快速、精确、重现性好,斑蝥药材中可能本来就含有斑蝥酸盐.
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RP-HPLC法测定去甲斑蝥酸钠脂质体包封率
斑蝥是芫青科昆虫南方大斑蝥和黄黑小斑蝥的干燥虫体,用于肿瘤的治疗已有两千多年的历史,其主要成分是斑蝥素.其衍生物去甲斑蝥酸钠保留了斑蝥素抗肿瘤的活性,减轻了副作用,可用于肝癌等恶性肿瘤的治疗,是一个具有潜力的抗肿瘤中药[1].
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斑蝥素对A549细胞增殖抑制作用的研究
目的 研究斑蝥素对人肺癌A549细胞增殖的抑制作用和机制.方法 采用MTT法检测斑蝥素对A549细胞增殖的抑制作用;流式细胞仪分析A549细胞周期及斑蝥素对细胞周期的影响.结果 斑蝥素对A549细胞的增殖有抑制作用;其抑制作用机制为使A549细胞周期出现明显的G2/M期阻滞.结论 斑蝥素对人肺癌A549细胞的增殖有抑制作用.
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斑蝥素抑制人宫颈癌Hela细胞增殖的研究
目的:研究斑螯素(CTD)对人宫颈癌Hela细胞增殖的抑制作用和机制.方法:采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测CTD对Hela细胞增殖的抑制作用;流式细胞仪分析Hela细胞周期及CTD对细胞周期的影响.结果:CTD对Hela细胞24、48和72h的IC50值分别为3.2、2.5和1.4 μg/ml.CTD浓度为3.2 μg/ml时,细胞周期滞留在G2期.结论:CTD对Hela细胞的增殖有抑制作用;流式细胞仪显示细胞周期出现明显的G2/M期阻滞.
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斑蝥素通过MAPK途径对肺癌A549细胞周期阻滞及其分子机制的研究
目的:探讨斑蝥素对人肺癌A549细胞的周期阻滞作用及其分子机制.方法:采用MTT法检测斑蝥素对A549细胞的增殖抑制作用;流式细胞仪检测细胞周期;以蛋白印迹法分析斑蝥素作用后细胞周期蛋白B1(cyclinB1)、p34cdc2、phos-p34cdc2、p21、survivin、ERK1/ERK2、phos-ERK1/phos-ERK2等蛋白表达或活性的改变.结果:斑蝥素能抑制A549细胞的增殖;斑蝥素作用于A549细胞后引起G2/M期阻滞;斑蝥素处理后,p34cdc2、phos-p34cdc2表达量没有改变,cyclinB1、survivin蛋白表达量减少,p21蛋白表达量增加.ERK1/ERK2、phos-ERK1/phos-ERK2表达量降低.结论:斑蝥素通过调节cyclinB1、p21、survivin、ERK1/ERK2、phos-ERK1/phos-ERK2等蛋白表达或活性的改变引起G2/M期阻滞.
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小窝蛋白3在人结直肠癌组织中的表达及斑蝥素对其表达的抑制作用
目的:探讨小窝蛋白3 (CAV3)在人结直肠癌(CRC)组织中的表达及斑蝥素对于CAV3表达的影响,阐明斑蝥素防治结直肠癌的分子学机制.方法:取30例手术切除的CRC组织,同时取癌旁正常组织为正常对照组,通过HE染色和免疫组织化学法检测CAV3在人CRC组织中的阳性表达率.将人CRC HCT-116细胞分为对照组、氟尿嘧啶组和斑蝥素组,通过免疫组织化学染色和实时定量PCR法检测CAV3mRNA表达水平.结果:HE染色,与正常对照组比较,CRC组织中癌细胞核染色较深、排列紊乱.30例CRC组织中22例CAV3呈阳性表达,阳性表达率为70.3％;正常对照组呈阴性表达.免疫组织化学染色,与正常对照组比较,CRC组织中CAV3蛋白表达水平明显升高(P＜0.01);与对照组比较,氟尿嘧啶组和斑蝥素组HCT-116细胞中CAV3蛋白表达水平明显降低(P＜0.05).实时定量PCR法,与对照组比较,氟尿嘧啶组和斑蝥素组HCT-116细胞中CAV3 mRNA表达水平明显降低(P＜0.05).结论:CAV3蛋白在大多数人CRC组织中呈高表达,斑蝥素可能通过下调CAV3表达抑制CRC细胞生长.
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斑蝥素对HL-60细胞和QGY7703细胞的作用研究
采用MTT法和流氏细胞仪技术,研究了斑蝥素对HL-60细胞和QGY7703细胞的存活率和细胞周期分布影响.结果表明,斑蝥素对HL-60细胞的IC50是15.34μmol/L,对QGY7703细胞的IC50是18.54μmol/L.斑蝥素处理HL-60细胞和QGY7703细胞24h后,G2-M期细胞分布都有所增加,Gn-G1期细胞分布都有所降低:斑螯素处理HL-60细胞24h后,G0-G1期峰前有亚二倍体峰出现,说明斑蝥素在所用剂量下能够诱导HL-60细胞发生凋亡.
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斑蝥素及其衍生物的研究现状与应用
斑蝥素(Cantharidin)是一种可从昆虫斑蝥虫体提取或人工合成的具有抗肿瘤作用的药物,因其毒性强烈,受限于临床应用.人工合成的斑蝥素衍生物如去甲斑蝥素、斑蝥酸钠、去甲斑蝥酸钠、甲基斑蝥胺等,毒性低,疗效显著.本文对斑蝥素及其衍生物在抗肿瘤作用及分子机理方面的研究现状进行综述,为充分利用斑蝥素这一中药资源提供参考.
