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自噬在阿尔茨海默病中的作用及中药的干预作用
对近年来阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)与自噬相关性的研究及中药对自噬的调控作用进行介绍,对自噬的过程和相关分子机制、信号途径,自噬参与AD病理学表现的形成、神经元的缺失及与其他AD病理学表现,中药对自噬的影响,自噬在AD中的治疗意义进行总结.研究表明,自噬功能缺陷与多种神经退行性疾病密切相关,包括AD.集中介绍自噬在AD发生发展过程中的作用以及调控自噬在阻止或延缓AD发生,改善临床症状等方面的潜在治疗价值.在调节自噬,治疗AD等神经退行性疾病方面,关于中药的研究几乎处于空白状态.研究中药对神经细胞自噬的影响,通过调节自噬探讨中药治疗AD的潜在可能,并以此为基础,进行复方药物的选择,具有重要意义和极大的研究潜力.
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红景天苷对β淀粉样蛋白诱导SH-SY5Y细胞损伤的保护作用研究
目的:探讨红景天苷对β淀粉样蛋白(A β)所致SH-SY5Y细胞损伤的保护作用及其可能机制.方法:通过体外培养SH-SY5Y细胞,采用含A β 1-40的细胞培养基制备疾病模型,经A β 1-40作用24h后,不同浓度100和200μmol/L红景天苷干预,MTT法检测各组细胞存活率;流式细胞技术、TUNEL检测细胞内活性氧ROS及凋亡情况;ELISA检测细胞内AGEs含量;Western blot检测细胞内晚期糖基化终末产物受体RAGE、NF-κB(p-p65)、Bax和Bcl-2蛋白的表达变化.结果:红景天苷干预可明显改善Aβ1-40损伤后的细胞存活率,抑制Aβ1-40引起的细胞内ROS水平及细胞凋亡率升高;降低RAGE、NF-κB(p-p65)蛋白水平表达,逆转A β 1-40导致的细胞Bcl-2/Bax蛋白表达的比例下降.结论:红景天苷可以抑制Aβ1-40诱导SH-SY5Y细胞损伤及凋亡,其机制可能与调节RAGE、NF-κB(p-p65)及相关凋亡基因Bax和Bci-2的蛋白表达有关.
关键词： 红景天苷 β淀粉样蛋白 晚期糖基化终末产物受体 活性氧 -
头针对老年轻度认知功能障碍临床疗效及机制研究
目的:观察头针对老年轻度认知功能障碍(MCI)患者的临床疗效及机制研究.方法:采用前瞻性随机临床对照研究方法,将148例患者按随机数字表法分为对照组74例,治疗组74例.对照组予盐酸多奈哌齐片5mg,睡前口服;治疗组在对照组基础上给予头针(顶中线、额顶线、额中线、额旁1线、额旁2线)干预,留针180min,每日1次,1周5次,共治疗12周.通过比较蒙特利尔评估量表(MoCA)、简易精神状态评估量表 (MMSE)以及检测血清β淀粉样蛋白(Aβ)、S-100β、脑源性神经营养因子(BDNF)含量水平进行评价.结果:治疗8周、12周后,两组患者MoCA、MMSE量表评分均较治疗前显著提高(P<0.05),且在治疗12周后,治疗组MoCA、MMSE量表评分显著高于对照组(P<0.05).治疗8周、12周后,两组患者血清Aβ、S-100β含量均较治疗前显著降低(P<0.05),BDNF含量较治疗前显著升高(P<0.05),且治疗组优于同期对照组(P<0.05).结论:头针可能通过抑制血清Aβ、S-100β蛋白表达,上调血清BDNF蛋白表达,进而提高MoCA、MMSE量表得分,从而改善患者认知功能障碍.
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补肾方对β淀粉样蛋白所致大鼠海马神经元细胞毒作用的影响
目的:建立Aβ所致的神经细胞毒模型,探讨补肾方的药效及作用机理.方法:原代培养大鼠海马神经元.用25μmol/L聚集状态的Aβ1-42建立神经细胞毒模型.采用LDH释放量来检测神经元存活率,通过透射电镜、流式细胞计判断神经元凋亡,应用免疫细胞化学法研究凋亡相关基因(Bcl-2、Bax、c-Jun)的蛋白表达.结果:神经元经Aβ1-42处理后,LDH释放增加;电镜显示细胞体积缩小、染色质固缩、或浓聚成块状位于核周边、滑面内质网扩张;流式细胞计可见亚二倍体峰;Bcl-2的蛋白表达减少,而Bax与c-Jun表达增加补肾方使LDH释放减少,电镜下具有凋亡形态特征的细胞减少,流式细胞计显示凋亡率下降,Bcl-2蛋白表达增加,c-Jun表达减少,而Bax表达变化不明显.Tacrine组神经元存活率增加,但其它指标的变化不明显.结论:①补肾方对Aβ1-42神经细胞毒有保护作用,可提高细胞存活率,抑制凋亡.②其作用机制可能是通过提高bcl-2、降低c-Jun基因的蛋白表达而实现.③Tacrine对神经元存活率有提高作用.但抑制神经元凋亡的作用似不明显.补肾方对抑制Aβ所致神经元凋亡明显优于Tacrine.
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补肾活血方对阿尔茨海默病模型大鼠脑内胶质细胞的影响
全楷体目的:观察补肾活血中药黄芪三仙汤对AD大鼠脑内海马区胶质细胞的影响,探讨补肾活血中药治疗阿尔茨海默病(AD)的中枢免疫调节机制.方法:大鼠随机分组,于大鼠右侧Meynert核注入β-淀粉样蛋白(Aβ1-40)制成AD模型,4周后观察各组脑组织中神经胶质细胞超微结构变化.结果:模型组海马区可见神经胶质细胞增生,神经细胞变性.在变性神经细胞的周边和血管周围小胶质细胞增生活跃,脂褐素较多.治疗组和假手术组可见神经胶质细胞,数量较模型组明显减少.正常对照组可见少量脂褐素,其余超微结构基本正常.结论:黄芪三仙汤能明显抑制CNS的免疫炎性反应,抑制神经原变性、坏死,从而达到治疗AD的作用.
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加减地黄饮子对Aβ1-40所致AD大鼠学习记忆及抗氧化作用的影响
目的观察加减地黄饮子对实验性痴呆大鼠的防治作用.方法凝聚态Aβ1-40直接定向注射右侧海马CA区造成AD大鼠模型,以大鼠跳台实验检测各组大鼠学习记忆行为,测定脑组织中SOD活性、MDA及脂褐素含量,光镜观察海马病理变化.结果加减地黄饮子可以通过清除自由基,提高抗氧化能力,改善细胞的退化、变性程度,提高A β致痴呆鼠的学习记忆能力.结论加减地黄饮子通过降低自由基水平对老年性痴呆大鼠有一定的防治作用.
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参芪益智颗粒对5XFAD转基因小鼠学习记忆能力和脑内β淀粉样蛋白1-42含量的影响
目的：观察参芪益智颗粒对阿尔茨海默病5XFAD 转基因小鼠行为学和脑组织β淀粉样蛋白1-42（Aβ1-42）含量的影响，探讨其改善5XFAD小鼠学习记忆能力的作用机制。方法将4月龄C57BL?6野生型小鼠随机分为生理盐水对照组和中药对照组，同时将同月龄5XFAD小鼠随机分为模型组、参芪益智颗粒组和石杉碱甲组，每组15只，各给药组给予相应药物灌胃，连续60 d。给药结束后，采用筑巢实验、避暗实验和Morris水迷宫实验评价各组小鼠学习和记忆能力；免疫组化和免疫荧光方法观察各组小鼠皮层和海马组织老年斑块、Aβ1-42、小胶质细胞激活的标记物小胶质细胞/巨噬细胞特异性蛋白1及星形胶质细胞激活标记物胶质纤维酸性蛋白含量的变化。结果与生理盐水对照组比较，模型组小鼠筑巢实验得分明显降低，避暗实验步入潜入期明显缩短，水迷宫实验逃避潜伏期明显延长，脑内老年斑块明显增多，Aβ1-42含量明显升高，胶质细胞激活明显增强。参芪益智颗粒组小鼠上述指标均恢复或接近至野生型小鼠水平，与模型组小鼠比较差异有统计学意义（P＜0.05，P＜0.01）。结论参芪益智颗粒改善5XFAD小鼠学习和记忆能力的机制与减少脑内老年斑数量、抑制胶质细胞过度激活、减少脑内Aβ1-42的含量有关。
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地黄饮子对β淀粉样蛋白1-42致SH-SY5Y细胞线粒体损伤及细胞凋亡的影响
目的 探讨地黄饮子药物血清对β淀粉样蛋白(Aβ)1-42致SH-SY5Y细胞线粒体损伤及细胞凋亡的保护作用机制.方法 雄性SD大鼠以成人临床用药量20倍剂量地黄饮子灌胃给药,连续7d,提取大鼠血清灭活后,制备药物血清.SH-SY5Y细胞采用5μmol/L Aβ1-42及0、1.25％、2.5％、5％、10％ (V/V)等浓度药物血清共孵育.MTT法检测细胞存活率,PI/Annexin V双柒流式细胞术分析细胞凋亡率,Western blot检测Bcl2、Bax表达,ELISA检测caspase 3、caspase 9酶活性,JC-1法测定线粒体膜电位.结果 地黄饮子药物血清可显著提高Aβ1-42损伤SH-SY5Y细胞的存活率,减少细胞凋亡,上调抗凋亡蛋白Bcl2和下调促凋亡蛋白Bax表达,抑制Aβ142诱导caspase-3和caspase-9的激活,提高线粒体膜电位.结论 地黄饮子药物血清通过保护Aβ142导致的线粒体损伤,抑制依赖线粒体的细胞凋亡通路激活,减少细胞凋亡,提高细胞存活率.
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电针血清对β淀粉样蛋白损伤原代培养大鼠海马神经元的保护作用
目的观察电针血清对β淀粉样蛋白(Aβ)诱导的原代大鼠海马神经元的保护作用。方法通过Aβ1-40脑内注射建立阿尔茨海默病大鼠模型,予以电针治疗后,留取各组血清。Aβ25-35处理原代培养海马神经元建立体外神经元损伤模型,实验分为正常组、模型组和电针血清组,通过MTT法检测神经元的增殖,采用TUNEL染色法检测神经元的凋亡,通过免疫细胞化学染色检测Caspase-3的表达。结果 MTT检测结果发现,经Aβ处理后,细胞活力显著下降。而与模型组比较,电针血清组细胞增殖能力明显增强(P＜0.01)；TUNEL 染色结果显示,与模型组比较,电针血清组凋亡细胞数目明显减少(P＜0.01)；经Aβ处理48 h后,Caspase-3表达水平明显升高,电针血清组Caspase-3阳性细胞数目较模型组显著减少(P＜0.01)。结论电针血清能促进海马神经元的增殖,降低其 Caspase-3的表达,对抗Aβ的神经毒性,减少神经元的凋亡。
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中药及其有效成分抑制β淀粉样蛋白沉积及毒性研究进展
阿尔茨海默病(AD)的发病与β淀粉样蛋白(Aβ)的异常沉积存在极大关联，因此，人参、三七、郁金、五味子等中药通过减少Aβ的产生，调节Aβ转运，抑制Aβ聚集及对抗其神经毒性中的一个或多个环节，从而抑制Aβ的沉积及毒性，延缓AD病理改变，改善AD症状，达到有效防治AD的目的。迄今相关研究已取得不少成果。
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加味五子衍宗方总黄酮对大鼠海马锥体细胞VGCC通道的影响
目的:探讨加味五子衍宗方总黄酮成分对Aβ_(25-35)作用后的大鼠海马CA1区锥体神经元电压门控钙通道电流的作用.方法:应用全细胞膜片钳技术记录海马神经元I_(Ca)电流,采用内向电流的幅度作为观察指标,观察模型药物及干预药物对其的作用.采用出生7 d的乳鼠取海马后制成脑片,选取立体感强、状态好的锥体细胞形成全细胞膜片钳记录,从-50 mV到+50 mV范围(步进为5 mV)一系列去极化电压脉冲刺激(脉冲宽度500 ms),以激发出电压依赖性的内向钙离子电流.记录电流后加入Aβ_(25-35)后,再加入总黄酮进行干预.结果:Aβ_(25-35)淀粉蛋白可以通过增强I_(Ca)可引起胞内钙超载,正常幅度平均为-(157.1±19.9)pA,Aβ_(25-35)作用后增大为-(323.2±23.4)pA,125,250,500 mg·L~(-1)的总黄酮作用之后,分别下降为-(257.9±31.6),-(196.4±29.8),-(169.3±34.0)pA.结论:引起胞内钙离子超载可能是Aβ_(25-35)产生神经毒性作用的机制之一,加味五子衍宗方总黄酮成分可通过抑制钙离子内流对神经元起一定保护作用.
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芍药苷对Aβ25-35诱导PC12细胞损伤的保护作用
目的:研究芍药苷对Aβ25-35诱导的PC12细胞损伤的保护作用.方法:用Aβ25-35造成PC12细胞损伤模型,采用MTT比色法检测细胞存活率,Annexin-V/PI双染流式细胞计量法检测细胞凋亡,JC-1和Fluo-3荧光探针法分别观察线粒体膜电位和细胞内钙离子变化,Western印迹法检测Bcl-2,Bax和Caspase-3蛋白的表达水平,观察芍药苷对PC12细胞损伤的保护作用.结果:芍药苷可抑制Aβ25-35所诱导的PC12细胞毒性和凋亡,并呈剂量相关性,其保护作用可能是通过提高线粒体膜电位、降低Ca2+浓度；增加Bcl-2蛋白表达、降低Bax蛋白表达、抑制凋亡相关蛋白Caspase-3的激活而实现的.结论:芍药苷对Aβ25-35诱导PC12细胞损伤具有保护作用.
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PI3K/Akt通路在芍药苷抗Aβ25-35诱导PC12细胞凋亡中的作用
目的:研究PI3 K/Akt通路在芍药苷对PC12细胞神经保护中的作用.方法:芍药苷组(5,10,20 μmol·L-1)预处理30 min,然后加入Aβ25-35(20 μmol·L-1)共同作用24 h;抑制剂LY294002(10μmol·L-1)于芍药苷(10μmol·L-1)作用前预处理30 min.用MTT比色法检测细胞存活率,Annexin-V/PI双染检测细胞凋亡率,以及Western blot法检测p-Akt,Bax,Bcl-2,cleaved caspase-3蛋白表达.结果:芍药苷可抑制Aβ25-35所诱导的PC12细胞毒性和凋亡,其保护作用可能是通过上调Akt磷酸化水平,增加Bcl-2蛋白表达、降低Bax蛋白表达、抑制caspase-3等的激活而实现的;抑制剂LY294002可减弱上述芍药苷的保护作用.结论:芍药苷可通过激活PI3K/Akt信号通路对Aβ25-35诱导PC12细胞损伤具有保护作用.
关键词： β淀粉样蛋白 芍药苷 阿尔茨海默病 PI3K/Akt信号通路 -
中药对Aβ清除作用的研究进展
β淀粉样蛋白(β-amyloid peptide,Aβ)在脑组织中聚集和沉积,启动了阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)的病理过程.因此,促进Aβ清除,是防治阿尔茨海默病的重要靶点之一.研究证明一些中药复方及提取物能影响淀粉蛋白降解酶的活性,血脑屏障的转运及小胶质细胞的吞噬,促进Aβ清除,改善阿尔茨海默病动物模型的记忆和学习.该文综述了Aβ与阿尔茨海默病关系,Aβ清除机制以及中药对Aβ清除作用.
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还脑益聪方提取物对APP转基因小鼠脑组织Aβ生成相关因子和学习记忆行为的影响
目的 研究还脑益聪方提取物对β淀粉样前体蛋白(amyloid precursor protein,APP)转基因小鼠学习记忆能力以及脑组织海马CA1区(hippocampal-CA1 area,CA1)APP、淀粉样前体蛋白β位分解酶1(β-site APP-cleaving enzyme,BACE1)、早老素蛋白1(presenilin-1,PS-1)和β淀粉样蛋白(beta amyloid protein,Aβ)的影响,初步探讨还脑益聪方提取物治疗阿尔茨海默病(Alzheimer′s Disease,AD)的作用机制.方法 选用3月龄APP695V717I转基因小鼠模型,按数字表法随机分为模型组、盐酸多奈哌齐组、还脑益聪方提取物大剂量组和小剂量组,另设立正常对照组(C57BL/6J小鼠),每组15只.连续灌胃4个月后进行相关指标检测:采用Morris水迷宫观测APP转基因小鼠空间学习记忆行为,采用免疫组织化学法检测APP转基因小鼠海马CA1区APP、BACE1、PS-1和Aβ蛋白的表达水平.结果 与正常对照组小鼠比较,7月龄APP转基因模型小鼠在Morris水迷宫实验中穿越原平台位置次数、原平台所在第四象限游泳时间和游泳路程均显著减少(P <0.01);与模型组比较,7月龄盐酸多奈哌齐组、还脑益聪方提取物大、小剂量组小鼠在Morris水迷宫实验中穿越原平台位置次数、第四象限游泳时间和路程均显著增多(P <0.05).与正常对照组小鼠比较,7月龄模型组小鼠海马CA1区神经元APP、BACE1、PS-1和Aβ阳性表达显著增强(P <0.01).与模型组比较,7月龄各药物干预组小鼠APP、BACE1、PS-1和Aβ阳性表达显著减弱(P <0.01).结论 还脑益聪方提取物早期应用可明显改善APP转基因小鼠已下降的学习记忆能力,降低海马CA1区神经元APP、BACE1、PS-1和Aβ的表达,减少Aβ生成,延缓APP转基因小鼠大脑病理进程.
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基于“Aβ级联假说”的中药治疗阿尔茨海默病研究进展
阿尔茨海默病( Alzheimer's disease,AD)亦称老年性痴呆症,是一种常见的中枢神经系统退行性疾病,临床主要表现为进行性记忆力减退、认知功能障碍以及人格改变等症状.其主要病理学特征是老年斑、神经纤维缠结(neurofibrillary tangles,NFTs)和神经元丢失,其中老年斑的主要成分是β淀粉样蛋白(β-amyloid peptides,Aβ).目前,在AD发病机制的众多假说中,受关注的"Aβ级联假说"认为Aβ在AD发病过程中发挥核心作用[1],是各种原因诱发AD的共同通路,其引起的一系列神经毒性反应导致神经细胞功能紊乱和死亡,引发痴呆.因此减少Aβ在脑内的产生、促进A3清除、抑制Aβ聚集以及降低其神经毒性已成为治疗AD的主要措施之一.本文就Aβ在AD发病中的作用和近年来中药对其干预作用的研究概况综述如下.
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β淀粉样蛋白及代谢酶类在阿尔茨海默病和糖尿病模型小鼠脑内的表达
目的 观察阿尔茨海默病(AD)和糖尿病模型小鼠脑内β淀粉样蛋白(Aβ)及代谢相关酶类的表达情况,以便从分子水平找到糖尿病并发AD的实验室依据.方法 5月龄双转基因痴呆症模型小鼠(APP/PS1双转基因小鼠)、ob/ob T2DM肥胖模型小鼠和野生型C57BL/6J小鼠为对照,分别用免疫组化染色、ELISA和Western blot检测脑内老年斑(SP)、Aβ含量及Aβ代谢酶类的表达情况.结果 APP/PS1小鼠大脑皮质及海马均可见一定数量的SP;ob/ob小鼠大脑皮质内偶可见SP,而对照组未见SP.与对照小鼠相比,APP/PS1与ob/ob小鼠脑内Aβ40、 Aβ42的含量明显升高(P<0.05);但APP/PS1小鼠脑内Aβ水平显著高于ob/ob小鼠(P<0.05).APP在APP/PS1小鼠脑内的表达显著高于其他两组小鼠;在ob/ob小鼠脑内的表达要强于对照小鼠(P<0.05).Aβ生成的关键酶BACE1在APP/PS1与ob/ob小鼠脑内的表达显著高于对照小鼠(P<0.05),但其在APP/PS1小鼠脑内的表达要强于ob/ob小鼠(P<0.05).Aβ降解的关键酶IDE在APP/PS1与ob/ob小鼠脑内的表达显著低于对照小鼠(P<0.05),且在ob/ob小鼠脑内表达低.结论 Aβ生成与降解的异常以及其异常聚集沉积不仅发生在早期AD脑内,同时也发生在T2DM脑内,提示Aβ过表达可能是促进2型糖尿病并发AD的重要原因之一.
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Aβ1-42对SH-SY5Y细胞T514位点磷酸化CRMP2表达的影响
目的 探讨β淀粉样蛋白1-42(Aβ<,1-42>)对成神经瘤细胞SH-SY5Y轴突生长状态、细胞微管结构及T514位点磷酸化脑衰蛋白反应调节蛋白2(CRMP2)表达的影响.方法 用全反式维甲酸诱导SH-SY5Y细胞,细胞外给予聚集态Aβ<,1-42>越致细胞损伤;用MTT法检测细胞存活率;用细胞化学法测量细胞轴突长度;免疫荧光法观察细胞微管结构及T514位点磷酸化CRMP2的分布;Westen blot分析T514位点磷酸化CRMP2在细胞内的表达.结果 0.1与1 μmol/L聚集态Aβ<,1-42>使诱导后SH-SY5Y细胞存活率显著减低(P<0.01);以1 μmoL/L Aβ<,1-42>处理后,细胞轴突长度缩短(P<0.05).0.1和1 μmol/L Aβ<,1-42>处理后细胞微管结构模糊,T514位点磷酸化CRMP2在细胞内荧光分布面积扩大(P<0.05),强度增加(P<0.01);用0.1和1 μmol/L聚集态Aβ<,1-42>处理后细胞内T514位点磷酸化CRMF2表达量显著增加(P<0.01).结论 Aβ<,1-42>可增加SH-SY5Y细胞内T514位点磷酸化CRMP2的表达,损害微管结构,抑制轴突生长.
关键词： β淀粉样蛋白 脑衰蛋白反应调节蛋白2 SH-SY5Y细胞 全反式维甲酸 -
乙酰葛根素对Aβ25-35诱导BV-2小鼠小胶质细胞株caspase-8和caspase-3表达的影响
目的 观察乙酰葛根素对β淀粉样蛋白(Aβ25.35)诱导的BV-2小鼠小胶质细胞株caspase-8和caspase-3表达的影响.方法 将细胞分为对照组、模型组(采用凝聚态Aβ25-35刺激BV-2小鼠小胶质细胞株建立细胞模型)、乙酰葛根素低、中、高剂量干预组及caspase-8抑制剂(Z-IETD-fmk)组共6组.用Western blot检测caspase-8、caspase-3蛋白表达;实时荧光定量PCR(real-time PCR)检测caspase-8、caspase-3 mRNA表达.结果 与对照组相比,模型组caspase-8、caspase-3蛋白表达明显上调(P＜0.01),caspase-8、caspase-3基因表达明显增加(P＜0.01);与模型组相比,乙酰葛根素各剂量组均可不同程度地明显下调caspase-8、caspase-3蛋白表达(P＜0.01),明显抑制caspase-8、caspase-3基因表达(P＜0.01).结论 乙酰葛根素可剂量依赖性地抑制Aβ25-35诱导BV-2小鼠小胶质细胞株caspase-8、caspase-3的表达.
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人参皂苷降低β淀粉样蛋白诱导THP-1单核细胞ERK的磷酸化和细胞因子含量
目的观察人参皂苷对β-淀粉样蛋白(β-amyloid,Aβ)1-40诱导的THP-1单核细胞系表达细胞因子和磷酸化细胞外信号调节激酶(ERK)的影响.方法用Western blotting方法测定磷酸化ERK的表达,放射免疫法测定细胞培养上清液中的细胞因子IL-1β、IL-8和肿瘤坏死因子(TNF)-α的浓度.结果Aβ刺激组磷酸化ERK和细胞因子IL-1β、IL-8和TNF-α的表达明显高于对照组.人参皂苷(50、100和150 mg/L可减少Aβ诱导THP-1细胞磷酸化ERK和细胞因子IL-1β、IL-8和TNF-α的表达.与模型组比较,人参皂苷治疗组Aβ1-40诱导的THP-1细胞磷酸化ERK和细胞因子(IL-1β、IL-8和TNF-α)的表达明显降低.结论人参皂苷可抑制Aβ诱导的ERK磷酸化,进一步减少细胞因子的产生.
