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APPswe/PS1dE9双转基因阿尔茨海默病模型小鼠的行为学及病理学特征研究
目的:探讨不同月龄APPswe/PS1 dE9双转基因小鼠行为学及病理学的变化特征,为合理运用该模型研究阿尔茨海默病提供可靠依据.方法:采用旷场实验、新物体辨别实验、Y迷宫以及Moms水迷宫等行为学实验方法观察不同月龄的APP/PS1转基因小鼠的运动、新物体辨别以及学习记忆能力的变化;通过免疫组织化学方法检测不同月龄转基因小鼠脑内Aβ含量及星形胶质细胞数量等病理特征的变化.结果:APPswe/PS1 dE9双转基因小鼠的运动能力随月龄增加逐渐下降,9月龄时对新物体的识别、工作记忆及空间学习记忆能力均出现明显损害.同时,该转基因小鼠的海马在6月龄时开始出现Aβ沉积和星形胶质细胞数量增加,9月龄时各种病理变化更为明显.结论:APPswe/PS1 dE9双转基因小鼠在6月龄时开始出现脑内病理改变,9月龄时各种认知行为发生明显异常.提示该转基因小鼠脑内病理改变可能早于行为异常,因此可根据实验目的选取相应月龄的动物.
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白花丹参根制剂对AD大鼠学习记忆和海马CA1区神经元凋亡的影响
目的:探讨白花丹参根制剂对Aβ1-40诱导的AD模型大鼠学习记忆能力及海马CA1区神经元凋亡的影响.方法:采用双侧海马微量注射凝聚状态Aβ1-40诱导AD大鼠模型.测定白花丹参根制剂干预前后AD模型大鼠学习记忆能力,海马CA1区Ach含量、ChAT和AchE活性,海马神经元凋亡率以及海马区Bax和Bcl-2蛋白表达的变化.结果:与正常组比较,模型组大鼠逃避潜伏期延长,穿越站台次数和第三象限游泳时间减少,大鼠海马CA1区神经内Ach含量减少,而ChAT和AchE活性升高,同时海马CA1区神经元凋亡率增加,Bax蛋白表达水平上调,Bcl-2蛋白表达水平下调,Bcl-2/Bax比值降低.与模型组比较,治疗组大鼠逃避潜伏期缩短,穿越站台次数明显和第三象限活动时间增加,大鼠海马CA1区神经内Ach含量升高,而ChAT和AchE活性降低,同时海马CA1区神经元凋亡率降低,Bax蛋白表达水平下调,Bcl-2蛋白表达水平上调,Bcl-2/Bax比值升高.结论:白花丹参根制剂可有效提高AD模型大鼠学习记忆能力,其机制可能与改善胆碱能系统的功能、上调Bcl-2和下调Bax蛋白表达水平有关.
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β淀粉样蛋白对培养海马神经元NMDA受体亚单位磷酸化及其亚细胞定位的影响
目的:探讨在β淀粉样蛋白(Aβ)突触毒性作用下,N-甲基-D-天(门)冬氨酸受体(NMDA)受体亚单位的磷酸化状态及其在细胞不同部位的表达与分布,推测其所诱导突触功能紊乱的作用机制.方法:原代培养的大鼠海马神经元加入Aβ(10 μmol/L)1h后,免疫荧光检测加药组和对照组近胞体段10μm树突上PY 1325NR2A和PY1472 NR2B总表达量及突触内表达量的变化.结果:Aβ作用1h后与对照组比较,PY1325 NR2A及PY1472 NR2B表达量均显著减少；突触内PY1325 NR2A的表达量显著增加,而PY1472 NR2B表达量没有明显变化.结论:NMDA受体亚单位的磷酸化参与Aβ的突触毒性作用,提示磷酸化后的NR2A、NR2B功能可能发生变化,即NR2A可能由保护作用变为毒性作用,而NR2B则相反.
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大鼠海马内注射β淀粉样蛋白1-40抑制铜蓝蛋白表达
目的:通过检测阿尔茨海默病(Alzheimer disease,AD)模型大鼠海马铜蓝蛋白(glycan-phosphatidylinositol ceruloplasmin,GPI-Cp)的变化,探讨AD时脑铁增高的机制.方法:取雄性(290±10)g SD大鼠,经海马内注射(amyloid beta-peptide 1-40,Aβ1-40)建立AD模型,于1、2、3和4周取各组大鼠脑组织,分离海马,用RT-PCR检测GPI-Cp mRNA表达情况,免疫组织化学染色检测GPI-Cp蛋白表达情况.结果:海马的星形胶质细胞、血管内皮细胞、室管膜细胞均有GPI-Cp的mRNA和蛋白表达;而海马的锥体细胞仅轻度表达,颗粒细胞不表达.注射Aβ1-40后,模型组海马GPI-Cp mRNA和蛋白表达均随着时间延长逐渐降低,具有统计学意义(P＜0.01).结论:海马内注射Aβ1-40可引起大鼠海马GPI-Cp表达减少,GPI-Cp表达减少可能是AD时脑铁增高的原因.
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NS398对Aβ肽损伤原代培养海马神经元的影响
目的:探讨Cox-2抑制剂NS398对损伤神经元的保护作用.方法:将原代培养的SD大鼠海马神经元随机分为空白对照组、Aβ肽细胞模型组和NS398实验组.以10 μmol/L Aβ25-35制作原代培养海马神经元损伤模型,以四氮唑溴盐(MTT)比色法检测细胞存活率,免疫细胞化学法检测Cox-2、Caspase-3的表达.结果:Aβ25-35细胞模型组神经元形态变化明显,细胞存活率明显下降,Cox-2和Caspase-3表达增强,与空白组比较有显著差异(P＜0.01).NS398使神经元细胞存活率明显提高并使Cox-2和Caspase-3表达减弱,与Aβ肽模型组比较具有显著性差异(P＜0.01).结论:Aβ25-35导致Cox-2和Caspase-3的表达增强,并使SD大鼠原代培养海马神经元变性、死亡.NS398可能通过抑制Cox-2和Caspase-3的表达保护原代培养海马神经元.
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促红细胞生成素对β淀粉样蛋白诱导大鼠海马损伤的保护作用以及对大鼠学习记忆的影响
目的:探讨促红细胞生成素(erythropoietin,EPO)对阿尔茨海默病(Alzheimer disease,AD)大鼠脑损伤的保护机制.方法:采用大鼠海马内注射β淀粉样蛋白制作AD模型.将SD大鼠随机分为正常对照组、生理盐水对照组及EPO处理组.Aβ1-40大鼠海马内注射造模,在生理盐水对照组大鼠行脑室立体定向注射生理盐水,EPO处理组则行脑室立体定向注射重组人促红细胞生成素(rHu-EPO).观察手术后7d海马CA1区细胞凋亡变化,及缺血造模后4周大鼠学习和记忆力的变化.结果:EPO处理组大鼠海马CA1区凋亡细胞较生理盐水对照组减少(P＜0.01),EPO处理组大鼠学习记忆能力明显高于生理盐水对照组(P＜0.05).结论:EPO可以抑制Aβ1-40诱导海马CA1区细胞凋亡,保护AD大鼠学习记忆功能.
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GST对转染APP695基因PC12细胞β淀粉样蛋白表达和形态功能的影响
目的:观察三羟基异黄酮( Genistein,GST)对APP695转染PC12细胞β淀粉样蛋白(Aβ)表达和形态功能的影响.方法:用pIRES2-EGFP空载体和pIRES2-EGFP/APP695 MT表达载体转染正常的PC12细胞,神经生长因子(nerve growth factor,NGF)诱导PC12细胞72 h后,放射免疫法测定Aβ的变化,激光共聚焦显微镜观察细胞形态学的变化,荧光分析法测定儿茶酚胺类(CA)分泌量.结果:APP695转染组与对照组比较Aβ生成量明显增加(P＜0.01),细胞突起数量少、突起长度较短,CA分泌量明显降低(P＜0.01)；GST干预组与APP695转染组比较Aβ生成量减少(P＜0.05),细胞突起数量增多、突起较长,CA分泌量明显增加(P＜0.01).结论:GST能减少APP695基因转染引起的PC12细胞Aβ的表达,改善细胞分化程度,提高CA的分泌量,对转染PC12细胞具有一定的保护作用.
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石菖蒲不同提取部位对β淀粉样蛋白致学习记忆障碍模型小鼠的影响
目的:探讨石菖蒲不同提取部位灌服对β淀粉样蛋白致学习记忆障碍模型小鼠的学习记忆能力和Aβ沉积的影响.方法:雄性NIH小鼠分为AD模型组、生理盐水模型组和正常对照组.AD模型组又分为生理盐水灌胃组、水提液灌胃组、去油水煎液灌胃组和挥发油灌胃组.共6组,每组6只.AD模型组小鼠双侧海马CA1区内注射Aββ1-42(2 μg/μl,2 μl/侧).模型制备后,进行第1次水迷宫测试,检测并比较各组小鼠的学习记忆能力.然后,每天1次的石菖蒲不同提取部位分别进行灌胃(0.2 g石菖蒲/10 g体重),连续3周,以生理盐水灌胃组为对照.灌胃结束后,进行第2次水迷宫测试,免疫组织化学检测Aβ在小鼠海马的沉积情况.结果:第1次水进宫检测显示,与生理盐水模型组和正常对照组模型小鼠比较,AD模型组逃避潜伏期明显延长,差异具有显著性(P＜0 05).第2次水迷宫检测表明,与生理盐水灌胃组相比,石菖蒲灌胃三组模型小鼠其逃避潜伏期均明显缩短(P＜0.05).其中挥发油灌胃组逃避潜伏期短,但与其它两组相比差异无显著性(P＞0.05).免疫组化染色结果显示,AD模型小鼠灌服后Aβ沉积明显减少(P＜0 01).但石菖蒲不同部位灌服组与生理盐水灌服组Aβ沉积相比,差异无显著性(P＞0.05)；石菖蒲三组之间比较,差异也无显著性(P＞0 05).结论:石菖蒲水溶性部位与挥发油部位一样含有改善学习记忆功能的药效成分,应引起研究者的重视；但这种改善功效是否与减少Aβ沉积有关,尚待进一步研究.
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β淀粉样蛋白对大鼠学习记忆功能及tau蛋白异常磷酸化的影响
为了探讨β淀粉样蛋白对大鼠学习记忆功能和tau蛋白异常磷酸化的影响,本文在海马注射Aβ25-35建立阿尔茨海黙病(AD)大鼠模型的基础上,通过行为学检测、HE染色、免疫组化和免疫蛋白印迹技术对动物的学习能力、组织的病理改变和tau( pS202)、tau(pT231)和tau-5的表达情况进行了分析.在行为学检测中,Aβ注射组大鼠在穿梭箱实验中的主动回避次数和被动回避次数减少,失败次数增多,而在Morris水迷宫测试中的逃避潜伏期和游泳距离延长.HE染色显示Aβ注射组大鼠海马CA1、CA3、齿状回的神经细胞数目减少;而免疫组化和免疫印迹结果显示注射组tau(pS202)阳性细胞明显增加,tau(pS202)、tau (pT231)和tau-5蛋白表达增加.以上结果提示海马内注射Aβ25-35可引起大鼠学习记忆功能下降,可能与神经细胞减少,tau蛋白异常磷酸化增多有关.
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β淀粉样蛋白在老年痴呆症突触活动改变中作用的研究进展
老年性痴呆,即阿尔茨海默症(Alzheimer' sdisease,AD)是一种常见的神经退行性疾病.临床上表现为渐进性记忆力衰退、认知能力下降和性格改变,并终完全失去自理能力.中国进入老龄化社会的进程正在加速,由于人口基数大,AD这种神经退行性病变的高发期即将到来.防治AD不仅是医学科技人员的重任,也是全社会的共同责任.β淀粉样蛋白(β-amyloid,Aβ)在AD发生发展中的作用已得到证实,本文对近年来Aβ淀粉样蛋白在AD中作用的近研究进展进行综述,以期对AD的早期临床诊治提供参考.
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维吾尔族正常眼压性青光眼患者血浆Aβ1-40及Aβ1-42的变化
目的:分析维吾尔族正常眼压性青光眼患者血浆β淀粉样蛋白(β amyloid protein,Aβ)1-40及Aβ1-42的变化.方法:维吾尔族正常眼压性青光眼患者37例,维吾尔族白内障对照组患者40例,汉族正常眼压性青光眼对照组患者40例.3组年龄、性别无显著性差异.采用ELISA法分别检测血浆Aβ1-40和Aβ1-42的含量.结果:维吾尔族正常眼压性青光眼组血浆Aβ1-40和Aβ1-42含量分别为(142.4±7.0)ng/L和(159.8±5.5)ng/L;维吾尔族白内障对照组含量为(120.3±5.3)ng/L和(101.6±6.5)ng/L;汉族正常眼压性青光眼对照组含量为(140.0±4.2)ng/L和(161.1±2.8)ng/L.维吾尔族两组的Aβ 1-40和Aβ1-42差异均有统计学意义(P＜0.05),维汉两组正常眼压性青光眼的Aβ1-40和Aβ1-42均无统计学差异(P＞0.05).结论:维吾尔族正常眼压性青光眼患者血浆Aβ1-40和Aβ1-42含量升高,但维汉两组无明显差异.
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侧脑室注射链脲霉素引起大鼠脑Aβ1-40和Aβ1-42表达增加
目的:探讨大鼠侧脑室注射链脲霉素(Streptozotocin,STZ)阻断脑内胰岛素信号传导与Aβ表达的关系.方法:24只SD大鼠随机等分为手术组和对照组(n=12),手术组双侧侧脑室注入STZ 3 mg/kg,第3日重复此剂量,对照组只手术操作但不注射药物.21 d后,采用免疫组化方法观测各组大鼠大脑皮层和海马区的Aβ1-40和Aβ1-42阳性表达.结果:与对照组相比,手术组皮层、海马Aβ1-40和Aβ1-42阳性细胞明显增多.结论:侧脑室注射STZ可以引起脑内Aβ表达增多,提示胰岛素/胰岛素受体系统障碍与阿尔茨海默病(AD)发病有密切关系.
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重组人BDNF对Alzheimer病模型神经元作用的实验研究
目的探讨重组人脑源性神经营养因子(rhBDNF)对正常原代培养海马神经元及Alzheimer病(AD)模型海马神经元的作用.方法预先加入rhBDNF并将20?μmol*L-1的Aβ25～35作用于培养的海马神经元,进行形态学观察、胆碱酯酶(ACHE)组织化学染色、激光共聚焦显微镜及MTT自动比色微量分析.结果实验对照组海马神经元存活率降至59.5%,与空白对照组有显著性差异(P<0.01).rhBDNF实验组海马神经元存活率达到65.7%～72.6%,各实验组与实验对照组有显著性差异(P<0.05),且50?ng*mL-1为rhBDNF适浓度.实验组胆碱能神经元数量增多,胞体直径及突起长度较对照组明显增大,其[Ca2+]i相对稳定.结论 rhBDNF对正常培养海马神经元有营养作用,能延长细胞生存时间;对AD模型海马神经元有保护作用,显著降低细胞死亡率,抑制了Aβ对神经元的毒性,有助于AD的防治.
关键词： Alzheimer病 β淀粉样蛋白 脑源性神经营养因子 海马神经元 -
川续断总皂甙对β-淀粉样蛋白诱导海马神经元凋亡的保护作用
目的研究川续断总皂甙(tSDA)和人参皂甙Rb1(GRb1)对β淀粉样蛋白(Aβ)介导引起的原代培养海马神经细胞凋亡的影响,旨在阐明tSDA抗Alzheimer病(AD)机理奠定基础.方法原代培养海马神经细胞,于培养第10天用tSDA和GRb1分别预先处理培养细胞24 h,然后再用35 μmol·L-1Aβ处理培养细胞24 h,采用生化分析和免疫荧光细胞化学双标技术观察神经细胞生存率和凋亡变化.结果用35 μmol·L-1Aβ 25～35处理海马神经细胞24 h后,神经细胞的存活率降至52.6%;当预先加入tSDA和GRb1后,Aβ毒性减小,神经细胞存活率增加了11%～15%.免疫荧光细胞化学双标检测表明凋亡细胞明显高于空白对照组达43.9%;当预先加入tSDA与GRb1,凋亡神经细胞分别降至16.6%、10.8%.结论 tSDA与GRb1有相类似功效,具有神经保护作用,对抗Aβ神经毒作用,提高细胞生存率,减少由Aβ诱导的神经细胞凋亡.
关键词： 川续断总皂甙 β淀粉样蛋白 细胞培养 细胞凋亡 Alzheimer病 -
人参益脑方联合丁苯酞对阿尔茨海默病患者的β淀粉样蛋白的影响
目的观察人参益脑方联合丁苯酞软胶囊治疗阿尔茨海默病（AD）的临床疗效。方法将100例AD患者随机分为研究组组和对照组各50例。观察组给予丁苯酞软胶囊和人参益脑方口服，对照组仅口服丁苯酞软胶囊。比较两组患者MMSE评分、ADL评分、中医症状评分及血清Aβ表达水平变化。结果治疗后研究组血清Aβ水平低于对照组，MMSE、ADL评分中医症状评分改善情况优于对照组。结论人参益脑方联合丁苯酞软胶囊能可降低AD患者血清Aβ水平，显著改善AD患者认知记忆能力。
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糖尿病与阿尔茨海默病相关性的研究进展
近年来,阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)和糖尿病已成为影响人们健康的两大主要疾病,许多研究证实二者有许多共同的发病基础,因此对两大疾病的相关性研究已成为国内外学者探讨的热点.AD的病因学和发病机制复杂,也没有客观的特异的早期诊断AD的生物学标志及有效的治疗措施,本文从胰岛素及胰岛素生物作用障碍等角度探讨糖尿病与AD的相互关系.
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一种酵母表达载体的构建及表达鉴定
目的:通过基因工程技术构建霍乱毒素B亚基(CTB)与人Aβ42的融合基因,并进行表达鉴定.方法:将融合基因克隆到酵母表达载体pYES2中,并将鉴定正确的重组载体通过乙酸锂转化法转入野生型酵母菌株INVSc1.筛选阳性转化株,并将其诱导表达,通过Western blot检测融合蛋白CTB-Aβ42.结果:成功构建了CTB-Aβ42融合基因的酵母表达载体,并且可以有效表达融合蛋白.结论:本研究为进一步研制有效的抗阿尔茨海默症药物提供了一种新思路,具有一定的理论和应用价值.
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天然药物对阿尔茨海默病干预的研究进展
阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease，AD）亦称老年性痴呆，是1906年由德国精神病学家 Alois Alzheimer 首次描述并命名。AD 为发生于老年期或老年前期得以慢性进行性不可逆记忆减退、认知障碍和人格改变为主要临床特征的大脑退行性疾病。随着人口老年化的进程，我国进入快速老龄化，60岁以上老年人已超过1亿，老年疾病的比例不断上升，据国际老年痴呆症协会（ADI）2013年公布的调查结果显示，全球有约4400万人患有痴呆。在中国，保守估计全国老年痴呆患病人数高达800万以上。阿尔茨海默病已成为继肿瘤、心血管疾病、脑卒中后居第4位的致死性疾病，成为老年医学所面临的为严峻的问题之一。尽管近十几年来生物化学、分子生物学、流行病学、遗传学等学科研究发展使我们更进一步认识 AD，但对 AD 的发病原因和发病机理还存在很多不明因素，一般认为 AD 是多基因遗传疾病，发病原因与年龄、性别、能量代谢障碍、免疫功能异常、内分泌、感染等遗传和环境因素有关［1］。国内外学者对 AD 的发病机制提出了多种学说，包括β淀粉样蛋白（Aβ）学说、Tau 蛋白学说、氧化应激学说、神经递质代谢障碍学说、细胞凋亡学说、基因突变学说等［2］，但尚无一种学说能完全解释其发病机制。
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氯胺酮联合电休克对抑郁样大鼠海马炎症及β淀粉样蛋白的影响
目的 探讨氯胺酮联合电休克对抑郁样大鼠海马炎症及可溶性β淀粉样蛋白的影响.方法 选取成年雄性SD大鼠48只,采用慢性不可预见性轻度应激建立大鼠抑郁模型.建模成功后将其随机分为4组,每组12只:抑郁组(D组)、电休克组(DE组)、氯胺酮联合电休克组(DKE组)和氯胺酮组(DK组).D组大鼠行伪电休克处理;DE组大鼠行电休克处理;DKE组大鼠腹腔注射氯胺酮100 mg/kg后行电休克处理;DK组大鼠腹腔注射氯胺酮100 mg/kg后行伪电休克处理.Morris水迷宫评价大鼠学习记忆能力,荧光定量PCR和ELISA分别检测海马炎性细胞因子和可溶性Aβ浓度.结果 电休克处理前,各组大鼠的逃避潜伏期、空间探索时间差异均无统计学意义(P>0.05);电休克处理后,与DE组相比,DKE组大鼠逃避潜伏期明显缩短、空间探索时间明显延长,海马IL-1β、TNF-α mRNA表达下调,Aβ1-40、Aβ1-42浓度降低,差异均具有统计学意义(P<0.05).结论 氯胺酮能够减轻抑郁大鼠电休克后学习记忆损伤,其机制与氯胺酮有效抑制电休克诱导的中枢炎症和降低海马β淀粉样蛋白水平有关.
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β淀粉样前体蛋白与弥漫性轴索损伤
弥漫性轴索损伤(diffuse axonal injury,DAI)后,β淀粉样前体蛋白(β-amyloid precursor protein,β-APP)在轴索内积聚,是轴索损伤的一个重要病理标志.许多研究通过β-APP的检测,对轴索损伤的程度进行评估.β-APP在病理状况下分解生成β淀粉样蛋白(amyloid betaprotein,Aβ),后者具有多方面的神经毒性作用.笔者现对β-APP的结构、功能、代谢和它在DAI后的表达、作用及其机制进行如下综述.
